描述M13丝状单链噬菌体克隆载体的应用步骤？
M13丝状单链噬菌体克隆载体是一种常用于分子克隆和DNA测序等实验中的工具，其应用步骤通常包括以下几个方面：插入DNA序列：首先需要将待克隆的DNA片段插入到M13载体的多克隆位点（Multiple Cloning Site, MCS）中。这可以通过限制性内切酶切割目标DNA和载体DNA，利用DNA连接酶将两者连接起来完成。转化大肠杆菌细胞：将已经成功构建的M13载体转化到大肠杆菌（E. coli）等适宜的宿主细胞中。转化方法通常包括化学法、电穿孔法等不同方式。鉴定正向克隆子：通过蓝白斑筛选（Blue-White Screening）等方法，鉴定哪些大肠杆菌细胞成功地含有了带有目标DNA的M13载体，并筛选出正向克隆子进行后续研究。提取纯化DNA：从大肠杆菌菌落中提取目标DNA，通常使用类似碱裂解法、酚/氯仿提取法等标准的DNA提取方法。序列分析：对纯化得到的DNA进行Sanger测序等检测手段的分析，以确认插入DNA序列的正确性和质量。总而言��，M13丝状单链噬菌体克隆载体的应用步骤涉及DNA插入、细胞转化、筛选、DNA提取和测序等环节，需要在实验过程中精确操作和严格控制各项参数，以保证实验结果的可靠性。
基因工程中常用哪两类克隆载体？举例说明理想质粒载体应具备什么条件？
克隆载体（CloningVector）：通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒，噬菌粒，酵母人工染色体。
克隆用宿主菌与克隆载体一样吗
一样。克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
克隆载体只能在原核生物中作用么？不能在真核生物中作用么
克隆载体可以在真核生物中作用，但是克隆速度比较慢，因为真核生物分裂速度很慢。原核生物分裂速度快，所以克隆载体一般用于原核生物，表达载体才用于真核生物。
如何利用克隆载体提取已知序列
如何利用克隆载体提取已知序列：克隆载体目前最常用的表达系统，一般在大肠杆菌中做，也有在酵母，乳酸菌或者真核细胞里面做。大肠杆菌是工程菌，易操作，不会存在质粒转不进去的情况。因为酵母，乳酸菌等细胞内部一般都存在限制修饰系统，不是所有的工程质粒都能应用，所以必须找对应的质粒和配套的工程菌株。大肠就不一样，随便搞。克隆质粒非常非常多，一般选实验室有的，或容易得到的。表达载体也很多，pET系列，pGEX系列，pCold系列等；表达菌也很多，一般BL21系列就足够了，当然有特殊要求的可以在试试其他菌。
简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理
T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A，这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端。基于这个原理，常规的线性T－克隆载体（PUC18和PUC19等）在其3"末端添加一个T，这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆，并不需要添加任何特异性的粘性末端位点。这个就是T克隆的原理了。
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为：①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为：①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
基因工程中常用哪两类克隆载体？举例说明理想质粒载体应具备什么条件？
质粒载体、噬菌体载体 理想质粒载体条件：1. 具有复制起始点2. 具有两种以上易被检测的选择性标记3. 在选择标记上具有多种限制酶的单一切点4. 具有尽可能小的相对分子质量5. 应属于松弛复制型6. 应为非传递性质粒理想值粒载体例子：（一） pBR22质粒载体：1. 相对分子质量较小2. 具有一个复制起始点，属松弛复制性载体3. 含四环素抗性和氨苄青霉素抗性基因，便于作为选择性标记4. 有24种单一限制酶识别位点，有利于检测重组转化子（二） pUC质粒载体1. 具有很小的相对分子质量和很高的拷贝数2. 适合用于组织化学方法检测重组体3. 具有多克隆位点MCS区段。可使具两种不同粘性末端的多种外源DNA片段无需借助其它操作而直接定向克隆到pUC质粒载体上。
质粒克隆载体通常用于保存和扩增什么目的dna
小于2kb目的基因。质粒的不相容性：两种质粒在同一宿主细胞中不能共存的现象。dna就是基因。用于保存和扩增小于2kb目的基因。
在基因工程实验中采用puc18质粒作为克隆载体的优点是什么?
1 松弛质粒,可在宿主菌中大量存在,有利于增加克隆数量. 2 具有多克隆位点,便于插入外源基因 3 具有抗生素抗性基因,便于筛选转化子. 4 具有lacZ基因,可进行蓝白斑筛选,便于筛选重组子.
DNA克隆载体有哪些重要结构元件
DNA克隆载体有哪些重要结构元件 表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因 常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。 表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），是目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
基因克隆载体的功能和应具备的条件是什么
一、载体的功能1.运送外源基因高效转入受体细胞2.为外源基因提供复制能力或整合能力3.为外源基因的扩增或表达提供条件二、载体应具备的条件1.具有对受体细胞的可转移性2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3.长度尽可能小，以提高其载装能力4.具有多种单一的酶切位点5.具有合适的选择性标记附图：
DNA克隆载体有哪些重要结构元件
克隆载体主要包括质粒载体和噬菌体载体. 质粒载体需要：1. 起始位点；2. 两种遗传性标记,如Amp或LacZ；3. 多克隆位点（MCS）. 噬菌体载体,这里主要说伽马噬菌体载体,其需要：1. 起始位点；2,复制外壳蛋白的基因；3,互补单链粘性末端（COS位点）；4,阻遏蛋白；5,酶切位点.
YAC克隆载体必须具备的特征有？
YAC有端粒、着丝粒、多克隆位点、复制起始点和标记基因。能自主复制，在宿主中稳定存在。
简述克隆载体及基本元件
载体:质粒(细菌基质中常见的一中能够自我复制的环状DNA)/噬菌体的衍生物/病毒.目的基因:目的基因.工具酶:限制性核酸内切酶和DNA连接酶.能源:ATP.其他:用于载体上的启动子.中止子和抗性等的标记基因. 唔～～就这些了吧 谢谢
克隆载体与表达载体的区别
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
克隆载体的优点
具有独立自主复制能力，携带有某些遗传特性有用于筛选，含有多种限制性核酸内切酶单一作用位点，插入外源性DNA后并不影响载体本身的复制。克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体携带有某些遗传特性有用于筛选，含有多种限制性核酸内切酶单一作用位点等优点。
克隆载体和表达载体的区别在哪里？
克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒，比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力，利于基因的保存和扩增，而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子，因为不重于表达。表达载体是基因克隆结束后，为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达，有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞，并且有各种各样，如诱导等可控的表达调控方式。
克隆载体和表达载体的区别
1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。
克隆载体分子量大小的意义
1、载体本身的分子量都小，可容纳较大的外源基因片段。2、克隆载体的分子量小不会造成载体DNA分子的断裂。3、分子量相对较小，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数。
表达载体和克隆载体有什么不同?
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expressionvectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来，这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
克隆载体与表达载体有哪区别？它们分别都有哪些常见的类型？谢谢！
克隆载体：大多是高拷贝的载体，一般是原核细菌，将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接，再导入原核细菌内，质粒会在原核细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定被大量复制。 表达载体就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），是目的基因能够表达的载体。 克隆载体目的在于复制足够多的目标质粒，所以常带有较强的自我复制元件，如复制起始位点等，往往在菌体内存在多拷贝，所以抽质粒会抽出一大堆。但不具备表达元件。而表达质粒有复杂的构成，为的是控制目标蛋白的表达，如各种启动子（T7），调节子（LacZ）等，而且以pET为代表的表达载体在菌体内都是低拷贝的，防止渗漏表达。 是否含有表达系统元件，即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。 …………………… …………………… 表达载体 http://product.bio1000.com/100019/
克隆载体名词解释
克隆的解释兴隆 ， 昌盛 。《南齐书·褚渊王俭传赞》：“民誉不爽，家称克隆。”《北史·周纪下论》：“ 呜呼 ！以 文皇 之经启鸿基， 武皇 之克隆景业，未逾二纪，不祀忽诸。” 词语分解 克的解释 克 （④克） è 能够：克勤克俭。 战胜，攻下：攻克。克复（战胜 敌人 并收回失地）。 制伏：克服。 克制 。克己奉公。以柔克刚。 严格限定： 克日 。克期。克扣。 消化 ：克食。 公制重量单位或质量单位：一克等于 隆的解释 隆 ó 盛大，厚， 程度 深：隆冬。 隆重 （恘 ）。 兴（塶 ）盛：兴隆。 隆盛 （坣 ）。 高，高起： 隆起 。隆穹。隆准（高鼻梁）。 尊崇：隆师。 姓。 部首 ：阝。
基因工程中的克隆载体与表达载体有什么不同
克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒，比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力，利于基因的保存和扩增，而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子，因为不重于表达。表达载体是基因克隆结束后，为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达，有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞，并且有各种各样，如诱导等可控的表达调控方式。
克隆载体和表达载体的区别？
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
基因克隆载体连接步骤
基因克隆的步骤：1、获取目的基因；2、将目的基因与载体连接；3、重组体载入受体细胞；4、重组体的筛选、克隆。具体到载体连接这一步，将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了。
怎样在克隆载体上添加启动子和终止子
表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因 常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。 表达载体（Expressionvectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
构建cdna为什么是克隆载体
因为mRNA的结构。构建cdna是克隆载体是因为mRNA的结构，是经体外反转录合成互补。cdna是指互补(有时称拷贝)DNA，特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。
表达载体和克隆载体的区别是什么啊？
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
DNA克隆载体有哪些重要结构元件
克隆载体主要包括质粒载体和噬菌体载体。质粒载体需要：1. 起始位点；2. 两种遗传性标记，如Amp或LacZ；3. 多克隆位点（MCS）。噬菌体载体，这里主要说伽马噬菌体载体，其需要：1. 起始位点；2，复制外壳蛋白的基因；3，互补单链粘性末端（COS位点）；4，阻遏蛋白；5，酶切位点。
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为：①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
什么是克隆载体，什么是表达载体？
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
克隆载体和表达载体的区别是什么？
克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒，比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力，利于基因的保存和扩增，而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子，因为不重于表达。表达载体是基因克隆结束后，为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达，有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞，并且有各种各样，如诱导等可控的表达调控方式。
表达载体和克隆载体一样吗?有什么区别?实验室常用有哪些？
1.不一样2.载体的分类按功能分成：（1）克隆载体: 都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（2）表达载体 :具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。3各自特点克隆载体：大多是高拷贝的载体，一般是原核细菌，将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接，再导入原核细菌内，质粒会在原核细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定被大量复制。克隆载体只是为了保存基因片段，这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作。表达载体：有的是高拷贝的，有的是低拷贝的，各有各的用处，是一些用于工程生产的细菌，被导入的目标基因会在此类细菌中得到表达，生产出我们需要的产物，导入的基因是由克隆载体产出的。表达载体具有较高的蛋白质表达效率，一般因为具有强的启动子。4.区别标识 是否含有表达系统元件，即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。
克隆载体与表达载体有什么不同？
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
表达载体和克隆载体的区别是什么？
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
实验室常用克隆载体和表达载体有哪些？
现在表达载体用得最多的就是pET载体，该载体带有组氨酸标签，上面的基本元件也比较全，而且还可以根据自己的需要加或减序列克隆载体则如楼上所说以TA载体为主
基因克隆载体连接步骤
基因克隆的步骤：1、获取目的基因；2、将目的基因与载体连接；3、重组体载入受体细胞；4、重组体的筛选、克隆。具体到载体连接这一步，将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了。
表达载体和克隆载体一样吗?有什么区别?实验室常用有哪些?
1.不一样 2.载体的分类 按功能分成： （1）克隆载体:都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增.它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体. （2）表达载体 :具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体. 3各自特点 克隆载体：大多是高拷贝的载体,一般是原核细菌,将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接,再导入原核细菌内,质粒会在原核细菌内大量复制,形成大量的基因克隆,被克隆的基因不一定会表达,但一定被大量复制.克隆载体只是为了保存基因片段,这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作. 表达载体：有的是高拷贝的,有的是低拷贝的,各有各的用处,是一些用于工程生产的细菌,被导入的目标基因会在此类细菌中得到表达,生产出我们需要的产物,导入的基因是由克隆载体产出的.表达载体具有较高的蛋白质表达效率,一般因为具有强的启动子. 4.区别标识 是否含有表达系统元件,即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号,这是用来区别克隆载体和表达载体的标志.
质粒作为克隆载体的条件及性质是什么
克隆载体是能够通过限制性内切酶,将目的DNA片段整合进去,并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质.将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖.常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体。对载体的要求：①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力.②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好.③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制.这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点.④容易从宿主细胞中分离纯化出来,这才便于重组操作.⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。
表达载体和克隆载体的区别是什么？
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
基因克隆载体需要有哪几个条件？
用人工方法取得目的基因的适宜载体，即质粒（一种环状双链DNA）或病毒。基因克隆载体必须具备三个条件，具有能使外源DNA片段插入的克隆位点；能携带外源DNA进入受体细胞，或游离在细胞质中进行自我复制，或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制而复制；必须具有选择标记，以便筛选承载外源DNA的受体细胞。目前原核受体细胞的载体主要有细菌质粒（松弛型）和λ噬菌体两类，真核细胞受体的载体主要有SV40病毒（用于动物转化）和Ti质粒（用于植物转化）。
克隆载体和什么载体一样啊？
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
什么是克隆载体？克隆载体必须满足那些基本条件？
克隆载体是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。 通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒，噬菌粒，酵母人工染色体。 对载体的要求：①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。④容易从宿主细胞中分离纯化出来，这才便于重组操作。⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。
表达载体和克隆载体有什么不同?
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
克隆载体和表达载体的定义
克隆载体(Cloning vector )：携带插入外源片段的质粒或噬菌体，从而产生更多物质或蛋白质产物。(这是为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。)其中，为使插入的外源DNA序列可转录、进而翻译成多肽链而设计的克隆载体又称表达载体。
基因克隆载体通常是由什么改造而来的
基因克隆载体通常是由DNA改造而来的。载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。介绍基因克隆技术包括了一系列技术，它大约建立于70年代初期。美国斯坦福大学的伯格（P.Berg）等人于1972年把一种猿猴病毒的DNA与λ噬菌体DNA用同一种限制性内切酶切割后，再用DNA连接酶把这两种DNA分子连接起来，于是产生了一种新的重组DNA分子，从此产生了基因克隆技术。1973年，科恩（S.Cohen）等人把一段外源DNA片段与质粒DNA连接起来，构成了一个重组质粒，并将该重组质粒转入大肠杆菌，第一次完整地建立起了基因克隆体系。
克隆载体的定义是什么?
就是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。常见的有质粒，病毒，噬菌体等。
病毒克隆载体是怎样形成的？
病毒主要由DNA（或RNA）和外壳蛋白组成，经包装后成为病毒颗粒。通过感染，病毒颗粒进入宿主细胞，利用宿主细胞的合成系统进行DNA（或RNA）复制和外壳蛋白的合成，实现病毒颗粒的增殖。人们利用这些性质构建了一系列分别适用于不同生物的病毒克隆载体。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体，由此构建的载体则称为噬菌体载体。下面仅简单介绍几种常用的病毒（噬菌体）克隆载体。
什么是T-克隆载体和U-克隆载体？
在PCR反应中，emphasis：role=italicTaqemphasis酶通常会在延伸的PCR产物3′末端加上一个非配对的碱基A。根据这一特性研制出了一种线性质粒，其5′端各带一个不配对的碱基T。采用这样的质粒可将PCR产物以TA配对连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为T-克隆载体，它的出现使PCR产物的克隆更加简便快捷。如pGEM-3Z4Z载体由pUC1819增加了一些功能片段改造而来，大小为2.74kb。与pUC1819相比，在多克隆位点的两端添加了噬菌体的转录启动子，如Sp6和T7噬菌体的启动子（link：xlinkhref=i010801图4-8link），便于克隆片段的测序。pGEM-3Z和pGEM-4Z的差别在于二者互换了两个启动子的位置。脱氧胸腺嘧啶核苷（T）容易与其他碱基发生非特异性配对，而且T-克隆载体也容易同反应系统中残留的引物或不完整的PCR扩增片段连接。相比之下，UA配对具有更高的特异性。因此研制出一种5′端带一个不配对碱基U的线性质粒，即U-克隆载体。
基因克隆载体连接步骤 具体、详细的操作。包括连接载体和片段的量如何确定之类的。
基因克隆的步骤： 1、获取目的基因； 2、将目的基因与载体连接； 3、重组体载入受体细胞； 4、重组体的筛选、克隆. 具体到载体连接这一步,将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了.
可用来进行基因克隆载体改造的改造的生物材料有 哪些
载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞,使之传代、扩增、表达的工具.载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等.载体具有能自我复制；有可选择的,便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征.质粒存在于多种细菌,是染色体（核）以外的独立遗传因子,由双链环状DNA组成,几乎完全裸露,很少有蛋白质结合.质粒有严紧型和松弛型之分.严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制,一个细胞可复制1-5个质粒.而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制,一个细胞可复制30-50个质粒,如果用氯霉素可阻止蛋白质合成,使质粒有效利用原料,复制更多的质粒.质粒经过改造品种繁多,常用的有pBR322、pUC系列等.这些质粒都含有多个基本基因,如复制起动区（复制原点Ori）,便于复制扩增；抗抗生素标记（抗氨芐青霉素Apr、抗四环素Tcr等）或大肠埃希菌部分乳糖操纵子（E.coliLacZ）等,便于基因重组体的筛选；基因发动子（乳糖操纵子Lac、色氨酸操纵子Trp等）和转录终止序列,便于插入的外源基因转录、翻译表达.质粒上还有许多限制性内切酶的切点,即基因插入位点,又叫基因重组位点,基因克隆位点.常用噬菌体载体有单链噬菌体M13系统；双链噬菌体系统.噬菌体应和相应的宿主细胞配合使用.以上载体各有特点,便于选择,灵活应用.
基因工程中动物病毒克隆载体有哪些
质粒载体、噬菌体载体 理想质粒载体条件：1. 具有复制起始点2. 具有两种以上易被检测的选择性标记3. 在选择标记上具有多种限制酶的单一切点4. 具有尽可能小的相对分子质量5. 应属于松弛复制型6. 应为非传递性质粒理想值粒载体例子：（一） pBR22质粒载体：1. 相对分子质量较小2. 具有一个复制起始点，属松弛复制性载体3. 含四环素抗性和氨苄青霉素抗性基因，便于作为选择性标记4. 有24种单一限制酶识别位点，有利于检测重组转化子（二） pUC质粒载体1. 具有很小的相对分子质量和很高的拷贝数2. 适合用于组织化学方法检测重组体3. 具有多克隆位点MCS区段。可使具两种不同粘性末端的多种外源DNA片段无需借助其它操作而直接定向克隆到pUC质粒载体上。
质粒作为克隆载体的条件及性质是什么
条件应该是，与细胞质细胞核要有高度的关联融合性，否则细胞排斥会导致基因移植失败；性质在于，质粒拥有DNA，可以方便将目标基因导入质粒DNA，同时又可以在靶细胞得到表达。
在遗传学上，克隆载体、表达载体、克隆宿主、表达宿主如何准确定义？
1.就是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。 常见的有质粒，病毒，噬菌体等2..就是用来连接植入基因的DNA链.3.人工克隆的受精卵所在发育的那个母体.4.就是用来表达植入基因的个体.
分别阐述克隆载体和表达载体（各5种）及其特点和用途
克隆载体基本上均来自微生物，主要有三大类:原核生物克隆载体，真核生物克隆载体和人工染色体等。
表达载体和克隆载体的定义和区别在哪里？融合性表达载体有哪些？请至少举2个例子详细介绍
表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
为什么要先构建克隆载体再用表达载体
构建克隆载体是大量扩增DNA片段，用以测序、酶切和改造等对DNA实施的后续操作，构建表达载体是大量得到翻译产物——蛋白质。为什么要先构建克隆载体，再用表达载体，我猜是因为：①得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。②测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。
克隆载体与表达载体的区别
克隆载体一般是原核细菌将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接在导入原核细菌内质粒会在原核细菌内大量复制形成大量的基因克隆被克隆的基因不一定会表达但一定被大量复制而表达载体是一些用于工程生产的细菌他们被导入目标基因这些目标基因会在此类细菌中得到表达生产出我们需要的产物导入的基因是有克隆载体产出的
基因克隆载体的功能和应具备的条件是什么
一、载体的功能1.运送外源基因高效转入受体细胞2.为外源基因 提供复制能力或整合能力3.为外源基因的扩增或表达提供条件二、载体应具备的条件1.具有对受体细胞的可转移性2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3.长度尽可能小，以提高其载装能力4.具有多种单一的酶切位点5. 具有合适的选择性标记附图：
基因克隆载体的功能和应具备的条件是什么
一、载体的功能 1.运送外源基因高效转入受体细胞 2.为外源基因 提供复制能力或整合能力 3.为外源基因的扩增或表达提供条件 二、载体应具备的条件 1.具有对受体细胞的可转移性 2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点 3.长度尽可能小,以提高其载装能力 4.具有多种单一的酶切位点5. 具有合适的选择性标记附图：
什么是克隆载体什么又是表达载体？
克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒，比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力，利于基因的保存和扩增，而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子，因为不重于表达。表达载体是基因克隆结束后，为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达，有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞，并且有各种各样，如诱导等可控的表达调控方式。
什么是质粒克隆载体？
质粒（plasmid）是一种寄生于细菌细胞内、独立于染色体外的裸露DNA分子，一个质粒就是一个DNA分子。在宿主细胞内，质粒一般以超螺旋DNA的形式存在。分子大小差异也很大，小的不足2kb，大的可达100kb以上，多数在10kb左右。在许多细菌、乳酸杆菌、蓝藻、酵母等生物中均发现含有质粒，并构建了相应的质粒载体。质粒载体是以质粒DNA分子为基础构建而成的克隆载体，含有质粒的复制起始位点，能够按质粒复制的形式进行复制。
人工染色体克隆载体有哪些作用？
人工染色体载体实际上是一种“穿梭”载体，含有质粒载体所必备的第一受体（大肠杆菌）内源质粒复制起始位点（ori），还含有第二受体（如酵母菌）染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因。这样的载体与目的DNA片段重组后，在第一受体细胞内按质粒复制形式进行高拷贝复制，再转入第二受体细胞，按染色体DNA复制的形式进行复制和传递。筛选第一受体的转化子，一般采用抗菌素抗性选择标记；而筛选第二受体的转化子，常用与受体互补的营养缺陷型。与其他的克隆载体相比，人工染色体载体的特点是能容纳长达1000kb甚至3000kb的外源DNA片段，主要用于构建基因组文库，也可用于基因治疗和基因功能鉴定。目前常用的人造染色体载体有细菌人造染色体（BAC）和酵母人造染色体（YAC）。
克隆载体转入受体细胞的方法
先加到运载体上，再导入受体细胞。克隆载体是采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，转入受体细胞的方法是先加到运载体上，再导入受体细胞。在载体上插入合适大小的外源DNA片段。
常用的克隆载体有哪些？
1. 质粒型载体—环状dsDNA分子，自主复制 2. 病毒型载体—环状、线状、ss-和ds-DNA分子，形成病毒颗粒 3.混合型载体—具质粒和病毒特性，特性的转换依赖于宿主细胞生物学特性
基因克隆载体连接步骤
基因克隆的步骤：1、获取目的基因；2、将目的基因与载体连接；3、重组体载入受体细胞；4、重组体的筛选、克隆。具体到载体连接这一步，将酶切后的载体与目的片段加入相应的连接体系中就可以了。
表达载体和克隆载体一样吗?有什么区别?实验室常用有哪些？
1.不一样2.载体的分类按功能分成：（1）克隆载体:都有一个松弛的复制子，能带动外源基因，在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段（基因）的载体。（2）表达载体:具有克隆载体的基本元件（ori,Ampr,Mcs等）还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。3各自特点克隆载体：大多是高拷贝的载体，一般是原核细菌，将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接，再导入原核细菌内，质粒会在原核细菌内大量复制，形成大量的基因克隆，被克隆的基因不一定会表达，但一定被大量复制。克隆载体只是为了保存基因片段，这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作。表达载体：有的是高拷贝的，有的是低拷贝的，各有各的用处，是一些用于工程生产的细菌，被导入的目标基因会在此类细菌中得到表达，生产出我们需要的产物，导入的基因是由克隆载体产出的。表达载体具有较高的蛋白质表达效率，一般因为具有强的启动子。4.区别标识是否含有表达系统元件，即启动子--核糖体结合位点--克隆位点--转录终止信号，这是用来区别克隆载体和表达载体的标志。
噬菌体克隆载体是怎样构成的？
（1）λ噬菌体克隆载体：λ噬菌体由DNA（λDNA）和外壳蛋白组成，对大肠杆菌具有很高的感染能力。λDNA在噬菌体中以线状双链DNA分子存在，全长48502bp。其左右两端各有12个核苷酸组成的5′凸出黏性末端（cohesive：end），而且两者的核苷酸序列互补，进入宿主细胞后，黏性末端连接成为环状DNA分子。把此末端称为emphasis：role=italiccosemphasis位点（cohesive：end：site）。并且λDNA上约有20kb的区域，约占总长度13的区段对λ噬菌体的生长不是绝对需要的，可以缺失或被外源DNA片段取代，这就是用λDNA构建克隆载体的依据。构建λ噬菌体克隆载体的策略是：①用合适的限制性内切核酸酶切去λDNA上的部分或全部非必需区，相应保留这种酶的1个或2个识别位点作为克隆位点，并用点突变或甲基化酶处理等方法使必需区内的这种酶的识别序列失效，避免外源DNA片段插入必需区；②若有必要可在非必需区插入选择标记基因；③构建的λDNA载体不应小于36.4kb。（2）λ噬菌体载体的主要类型：λ噬菌体载体分两类，即插入型载体和置换型载体。通过特定的酶切位点允许外源DNA片段插入的载体称为插入型载体（insertion：vectors）。由于λ噬菌体对所包装的DNA有大小的限制，因此一般插入型载体设计为可插入6kb外源DNA片段，最大11kb。允许外源DNA片段替换非必须DNA片段的载体，称为置换型载体。一般情况下，置换型载体克隆外源片段的大小范围是923kb，故而该载体主要用来构建基因组文库。λ-DNA作为载体的优点：①λ-DNA可在体外包装成噬菌体颗粒，能高效转染大肠杆菌；②λ-DNA载体的装载能力最大为25kb，超过质粒的装载量；③重组λ-DNA分子的提取和筛选较为方便；④λ-DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段，但不适合表达外源基因。（3）λ噬菌体载体的主要应用：λ噬菌体载体属于克隆载体，主要用于克隆DNA片段、构建cDNA文库和基因组文库，并从中筛选目标基因，也可用在大容量载体（如黏粒）中增殖的外源DNA片段和亚克隆。λ噬菌体载体克隆外源DNA片段的原理与质粒载体的工作原理是类似的，只是在形式上有许多差别。载体和外源DNA片段经过酶切以后，外源DNA片段插入到载体的适当位置，或置换载体的填充片段。这种连接后的重组DNA仍保留增殖性能，但由于分子量太大，不能像重组质粒DNA那样可通过转化方法进入大肠杆菌。一般可通过提取λ噬菌体的蛋白质外壳，将在体外重组的噬菌体DNA进行包装，形成噬菌体颗粒。这样的噬菌体颗粒保留对大肠杆菌的感染能力，从而可将被包装的重组噬菌体DNA注射到宿主菌中，通过宿主菌的裂解生长，可增殖重组噬菌体。在构建基因文库时，不同的重组噬菌体DNA经过裂解生长过程最终形成大量的噬菌斑，这些噬菌斑的集合，就构成了基因文库，用λ噬菌体载体构建基因文库时，文库是以噬菌斑的形式存在的，而质粒载体构建的文库是以菌落的形式存在的。λ噬菌体载体用转导法可使1μg重组DNA分子获得10superscript6superscript个以上的噬菌斑，适合用于建立cDNA基因文库，也可用于克隆外源目的基因。
怎么构建克隆载体和表达载体?
首先根据你的实验需要选择相应的载体 其次分析你的基因序列以及载体序列上的酶切位点,切记在载体上所选择的酶切位点要和你的基因序列上相一致,并且这两个酶切位点在你的基因序列中并不存在,否则会将基因切断 再次就是对基因和载体进行酶切了,基因要是直接用带有酶切位点的引物进行PCR的话就不用再酶切了.酶切之后进行连接,一般都有连接试剂盒的. 最后的重组质粒要转化至大肠杆菌中进行扩增,然后提取这个质粒进行酶切鉴定.
什么是基因克隆载体？
单独一个包含启动子、编码区和终止子的基因，或者组成基因的某个元件，一般是不容易进入受体细胞的。即使采用理化方法进入细胞后，也不容易在受体细胞内稳定维持。把能够承载外源基因，并将其带入受体细胞（host：cell）得以稳定维持的DNA分子称为基因克隆载体（gene：cloning：vector）。作为基因克隆载体一般应该具备以下条件：（1）在克隆载体合适的位置必须含有允许外源DNA片段插入的克隆位点，并且这样的克隆位点应尽可能的多。作为克隆位点的限制性内切核酸酶的识别序列一般在克隆载体上只有一个。为了便于多种类型末端的DNA片段的克隆，克隆载体中往往组装一个含多种限制性内切核酸酶识别序列的多克隆位点（MCS）连杆。（2）克隆载体能携带外源DNA片段（基因），容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好，或能停留在细胞质中进行自我复制；或能整合到染色体DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA中，随这些DNA同步复制。（3）克隆载体必须含有供选择转化子的标记基因，如根据转化子抗药性升降进行筛选的氨苄青霉素抗性基因（apsuperscriptrsuperscript或ampsuperscriptrsuperscript）、氯霉素抗性基因（cmsuperscriptrsuperscript）、卡那霉素抗性基因（kmsuperscriptrsuperscript或kansuperscriptrsuperscript）、链霉素抗性基因（smsuperscriptsuperscriptsm}}r）、四环素抗性基因（tcsuperscriptrsuperscript或tetsuperscriptrsuperscript）等，根据转化于蓝白颜色进行筛选的β-半乳糖苷酶基因（emphasis：role=italiclacZemphasis），以及表达产物容易观察和检测的报告基因emphasis：role=italicgusemphasis（β-葡萄糖苷酸酶基因）、emphasis：role=italicgfpemphasis（绿色荧光蛋白基因）等。（4）克隆载体必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物的细胞，尤其是人的细胞。（5）容易插入外来核酸片段，容易从宿主细胞中分离纯化出来，便于重组操作。克隆载体在基因工程中占有十分重要的地位。目的基因能否有效转入受体细胞，并在其中维持和高效表达，在很大程度上取决于克隆载体。目前已构建和应用的基因克隆载体不下几千种，根据构建克隆载体所用的DNA来源可分为质粒载体、病毒或噬菌体载体、质粒DNA与病毒或噬菌体DNA组成的载体以及质粒DNA与染色体DNA片段组成的载体等。
克隆载体的必要条件是哪些?
用人工方法取得目的基因的适宜载体，即质粒（一种环状双链DNA）或病毒。基因克隆载体必须具备三个条件，具有能使外源DNA片段插入的克隆位点；能携带外源DNA进入受体细胞，或游离在细胞质中进行自我复制，或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制而复制；必须具有选择标记，以便筛选承载外源DNA的受体细胞。目前原核受体细胞的载体主要有细菌质粒（松弛型）和λ噬菌体两类，真核细胞受体的载体主要有SV40病毒（用于动物转化）和Ti质粒（用于植物转化）。(1)具有自主复制的能力； (2)携带易于筛选的选择标记； (3)含有多种限制酶的单一识别序列，以供外源基因的插入； (4)除保留必要序列外，载体应尽可能小，便于导入细胞和进行繁殖； (5)使用安全，应只存在的宿主，在体内不进行重组，不发生转移，不产生有害性状，并且不能离开工程宿主自由扩散。
表达载体和克隆载体有哪些区别？
表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。扩展资料：克隆载体对载体的要求：1、能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。2、容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。3、容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。4、容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。5、有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。参考资料来源：百度百科——表达载体参考资料来源：百度百科——克隆载体
克隆载体与表达载体的区别
一、原理不同1、克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。二、要求不同1、克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。2、表达载体：常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。三、组成部分不同1、克隆载体：病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体：目的基因、启动子、终止子、标记基因。参考资料来源：百度百科-表达载体 百度百科-克隆载体
说明构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞
你问的这个问题比较难回答, 将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接,然后引入寄主细胞,再筛选获得重组的克隆,按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类. cDNA克隆是以mRNA为原材料,经体外反转录合成互补的DNA(cDNA),再与载体DNA分子连接引入寄主细胞.每一cDNA反映一种mRNA的结构,cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布.特点是： ①有些生物,如RNA病毒没有DNA,只能用cDNA克隆； ②cDNA克隆易筛选,因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆,而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息； ③cDNA能在细菌中表达.cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息,只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息. 1.方法： (1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA. (2)载体DNA的选择： ①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1-200千碱基对(kb).在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备.质粒DNA可通过转化引入寄主菌.在细胞中有两种状态,一是“紧密型”；二是“松驰型”.此外还应具有分子量小,易转化,有一至多个选择标记的特点.质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段,适用于构建原核生物基因文库,cDNA库和次级克隆. ②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链,长约49kb,约含50个基因,其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的,分布在噬菌体DNA两端.中间是非必需区,进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子.λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库. M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌,但不裂解寄主菌.M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主制复,制备方法同质粒.寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体,又能方便地制备单链DNA,用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交. ③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子.是噬菌体－质粒混合物.此类载体分子容量大,可携带45kb的外源DNA片段.也能象一般质粒一样携带小片段DNA,直接转化寄主菌.这类载体常被用来构建高等生物基因文库. (3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一,方法有：①粘性末端连接,DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端,用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端.在连接酶的作用下可恢复原样,有些限制性内切酶虽然识别不同顺序,却能产生相同末端.②平头末端连接,用物理方法制备的DNA往往是平头末端,有些酶也可产生平头末端.平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来,但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接.④人工接头分子连接,在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段,经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端. 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率.以λ或Cos质粒为载体时,形成线性多连体DNA分子,载体与DNA片段的比率高些为佳.以质粒为载体时,形成环状分子,比率常为1∶1. (4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大,转化困难.②转导,病毒类侵染宿主菌的过程称为转导,一般转导的效率比转化高.
说明构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞
你问的这个问题比较难回答，以下希望对你有帮助 将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接，然后引入寄主细胞，再筛选获得重组的克隆，按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类。 cDNA克隆是以mRNA为原材料，经体外反转录合成互补的DNA(cDNA)，再与载体DNA分子连接引入寄主细胞。每一cDNA反映一种mRNA的结构，cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布。特点是：①有些生物，如RNA病毒没有DNA，只能用cDNA克隆；②cDNA克隆易筛选，因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆，而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息；③cDNA能在细菌中表达。cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息，只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息。1.方法：(1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。(2)载体DNA的选择：①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松驰型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段，适用于构建原核生物基因文库，cDNA库和次级克隆。②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链，长约49kb，约含50个基因，其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌体DNA两端。中间是非必需区，进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库。 M13噬菌体是一种独特的载体系统，它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌，但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子，象质粒一样自主制复，制备方法同质粒。寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体，又能方便地制备单链DNA，用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。是噬菌体－质粒混合物。此类载体分子容量大，可携带45kb的外源DNA片段。也能象一般质粒一样携带小片段DNA，直接转化寄主菌。这类载体常被用来构建高等生物基因文库。(3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有：①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。②平头末端连接，用物理方法制备的DNA往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来，但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接。④人工接头分子连接，在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段，经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率。以λ或Cos质粒为载体时，形成线性多连体DNA分子，载体与DNA片段的比率高些为佳。以质粒为载体时，形成环状分子，比率常为1∶1。(4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染，方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA低，原因是连接效率不高，有许多DNA分子无转化能力，而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大，转化困难。②转导，病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。