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rna聚合酶和反转录酶分别作用于什么部位?是磷酸二酯键吗还是什么,要准确的!

2023-06-29 07:14:01
共1条回复
阳光下的日耳曼尼亚

都作用于五碳糖与磷酸基之间,使之形成磷酸二酯键是的

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逆转录酶的三个功能

逆转录酶的三个功能:1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性;2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性;3、RNaseh活性。RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。RNaseH活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNaseH从RNA5′端水解掉RNA分子。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。扩展资料:转录时,细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA,通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比,转录有很多相同或相似之处,亦有其自己的特点。转录中,一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说,以特定的DNA片段作为模板,以DNA依赖的RNA合成酶作为催化剂,合成前体mRNA。在体内,转录是基因表达的第一阶段,并且是基因调节的主要阶段。转录可产生DNA复制的引物,在反转录病毒感染中也起到重要作用。通常情况下,细胞内的转录应由DNA到RNA的,所得RNA为信使RNA(mRNA)供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要实现自身扩增,必须具有DNA,因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。逆转录酶可用RT—PCR,将RNA转变为DNA后扩增,以获得RNA的序列。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。参考资料来源:百度百科——反转录酶
2023-06-28 21:40:301

什么是反转录酶?

反转录酶(reverse:transcriptase)即依赖于RNA的DNA聚合酶,来自鸟类骨髓母细胞瘤病毒(avian:myeloblastosis:virus,AMV)或鼠白血病病毒(murine:leukosis:virus,MulV),具有5′→3′DNA合成活性和很强的RNAase:H活性,但是无3′→5′外切活性。反转录酶能以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)。
2023-06-28 21:40:372

反转录酶的作用是

正确答案:C解析:反转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA的酶。分子生物学常用工具酶常见的主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、反转录酶、核酸酶等。C正确,故选C。
2023-06-28 21:40:441

下列有关反转录酶的叙述,错误的

【答案】:C反转录酶也称逆转录酶,全称为依赖RNA的DNA聚合酶,催化的是反转录过程。反转录是指 在宿主细胞中,反转录病毒从单链RNA合成双链DNA(cDNA)的过程,它包括3步:①以病毒单链RNA 为模板,催化dNTP聚合生成DNA互补链,产物是RNA-DNA杂化双链,这是RNA指导的DNA合成反应, 此为反转录作用;②杂化双链中的RNA被反转录酶水解。③剩下的单链DNA再作模板,由反转录酶催 化合成第二条DNA互补链,这是指导的合成反应。DNA的合成方向是5" →3",在催化DNA 合成开始时需要有引物,此引物为存在于病毒颗粒中的tRNA(C错).因反转录酶可以催化RNA水解 (第②步反应),因此具有RNA酶(RNase)的活性。在催化第③步反应时,反转录酶没有3" →5"核酸外切 酶活性,因此它无校对功能,故反转录的错误率较高。
2023-06-28 21:40:511

反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗?

逆转录酶有三种活性:RNA或DNA作模板的dNTP聚合活性和RNase活性. ①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程. ②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子. ③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子. 逆转录酶本身具有DNA聚合酶活性,应该不需要另加DNA聚合酶了
2023-06-28 21:40:591

反转录酶的合成方向

5"-3"方向合成。反转录酶(也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶,该酶以RNA为模板,以dNTP为底物,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3"-OH末端上,根据碱基配对的原则,按5"-3"方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA。
2023-06-28 21:41:071

一些关于反转录酶的问题

反转录酶(Reverse transcripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子,当以mRNA为模板时,先合成单链DNA(ssDNA),再在反转录酶和DNA聚合酶Ⅰ作用下,以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA(dsDNA),再由核酸酶S1切成二条单链的双链DNA。因此,反转录酶可用来把任何基因的mRNA反转录成cDNA拷贝,然后可大量扩增插入载体后的cDNA。也可用来标记cDNA作为放射性的分子探针。 M-MLV RT)
2023-06-28 21:41:141

反转录酶的作用是什么?

反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
2023-06-28 21:41:221

反转录酶加多了有影响吗

有。反转录酶加多了会导致小片段产物(小于500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。反转录酶(reversetranscriptase,也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。
2023-06-28 21:41:291

反转录酶AMV使用说明(Promega)

1、产品简介 Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase (AMV RT,AMV 逆转录酶) 催化以DNA、RNA 或RNA-DNA 杂交体为模板的DNA 聚合反应。它需要引物(DNA 引物比RNA 引物效率更高)以及Mg2+ 或Mn2+。该酶具有固有的RNase H 活性,非离子表面活性剂和氢硫根化合物可在体外增加该酶的活性。 **2、特点 ** 3、应用 1)cDNA第一链和第二链的合成 2)引物延伸和RNA测序 3)RT-PCR (使用Taq DNA 聚合酶时,50μl PCR扩增体系加10μl 包含AMV RT和提供的AMV RT缓冲液的RT反应液。如果使用的是GoTaq DNA 聚合酶或者PCR Master Mix,50l PCR扩增体系加25?l的RT反应液)。 4、使用方法 1)以使用2g的RNA为例。首先准备无核酸酶的离心管,将模板RNA加入到管内,然后加入引物,引物加入比为0.5g/g RNA,总体积不得大于11?l。最好不要改变引物模板比。70℃加热5min,冰浴5min,短暂离心收集至管底。 2)将下列成分加入到上述退火后的引物-模板混合物中。 AMV RT 5×Reaction Buffer 5l dNTP mix 2.5l RNasin Ribonuclease Inhibitor 25units Sodium pyrophosphate,40mm(预热到42℃) 2.5l AMV RT 200units 无核酸水至最后体积 25l 3)轻弹混匀,从中取出5l加入到另一含有2-5[-32P]dCTP的试管中。剩余的20l先不要标记。注意:[-32P]dCTP配制时间不超过一周。 4)若使用的是Oligo(dT)引物则在42℃孵育60分钟,若使用的是随机六聚体引物则在37℃孵育60分钟。 5)将两管溶液分为标记的和未标记两种,放在冰上,添加95l的50mM EDTA溶液到标记管中(示踪者),总体积为100l,示踪管可用于核素掺入实验以及凝胶分析实验。 6)利用未标记管中的第一链产物进行第二链的合成反应(参照文献4、5)。 5、随酶提供的物品 dNTP mix 10mM 5×Reaction Buffer 6、参考文献 1. Kacian, D.L.(1977) Methods for assaying reverse transcriptase. Meth. Virol. 6 ,143. 2. Krug,M.S.and Berger,S.L.(1987) First-strand cDNA synthesis primed with Oligo(dT).Meth. Enzymol. 152, 316-25. 3. Mierendorf, R.C. and Pfeffer, D.(1987) Sequencing of RNA transcripts synthesized in vitro from plasmids containing bacteriophage promoters. Meth. Enzymol. 152, 563–6. 4. Universal RiboClone cDNA Synthesis System Technical Manual #TM038, Promega Corporation. 5. Sambrook, J. Fritsch, E.F. and Maniatis,T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 8.64.
2023-06-28 21:41:351

人有反转录酶吗,有什么作用

没有,人类细胞中没有反转录酶。反转录酶也叫逆转录酶,又称为依赖RNA的DNA聚合酶。反转录酶是一类只存在于部分RNA病毒中、具有逆转录活性、能以单链RNA为模板合成DNA的酶。由逆转录酶催化逆转录合成的DNA称为互补DNA(cDNA)。通常情况下,细胞内的转录是以DNA为模板合成RNA的,所得RNA为信使RNA(mRNA)供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要实现自身的扩增,必须具有DNA,因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。人类是DNA生物(除部分RNA病毒外,所有生物都是DNA生物),本身就以DNA为遗传物质,所以不需要反转录酶。
2023-06-28 21:41:554

反转录酶放了-80

反转录要-80度的原因是RNA样本高温容易降解。根据查询相关信息显示,RNA样本高温容易降解且必须要冻于-80℃,且不要超过3个月,反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程。
2023-06-28 21:42:021

什么是逆转录酶?

逆转录酶(reversetranscriptase)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年很多研究者从一些致癌RNA病毒中发现这种酶,该酶催化以单链RNA为模板生成双链DNA的反应。由于这一反应中的遗传信息的流动方向正好与绝大多数生物转录生成方向(即DNA模板转录生成RNA的方向)相反,所以此反应称为逆转录作用。逆转录酶具有三种酶活性:①RNA指导的DNA合成反应;②DNA指导的DNA合成的反应;③RNA的水解的反应。基因工程中有两种商品化的逆转录酶:一种来自纯化的禽成髓细胞瘤病毒(avianmyoblastosisvirus,AMV)提取的;另一种是Moloney鼠白血病病毒(moloneymurineleukemiavirus,Mo-MLV)克隆的逆转录酶编码基因在大肠杆菌的表达产物。这两种逆转录酶有一些区别,禽源逆转录酸在42℃(鸡的正常体温)能有效发挥作用,而鼠源逆转录酶在42℃时则迅速失活。禽源逆转录酶能更有效地拷贝较复杂的mRNA。禽源逆转录酶和鼠源逆转录酶均属多功能酶,它们的共同性质是:①具有RNA指导的DNA聚合酶活性,可以RNA为模板,以寡聚脱氧核糖核苷酸为引物,合成互补的DNA(cDNA);②具有DNA指导的DNA聚合酶活性,但不具DNA聚合酶那样的3′→5′外切酶活性;③具有RNaseH活性,即从5′或3端连续地降解RNA:DNA杂种双链中的RNA部分。在基因工程中,逆转录酶的主要用途是:①将真核基因的mRNA转录成cDNA,构建cDNA文库,进行克隆实验;②对具有5′突出端的DNA片段的3′端进行填补(补平反应)和标记,制备探针;③代替Klenow大片段,用于DNA序列测定。
2023-06-28 21:42:107

反转录酶的质量控制

1.切口酶:在与200单位酶37oC保温60分钟后,超螺旋质粒保留在90%以上。2.DNase测定:200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于1%。3.RNase测定:200单位酶与50ng3H-RNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于3%。4.第一链cDNA的反应:在标准化的反应中,200单位酶催化从1mg1.2kbRNA或1mg7.5kbRNA将同位素掺入到cDNA中,通过放射自显影,对于1.2kb的RNA,产物cDNA是单一的、全长的条带。对于7.5kb的RNA产物有部分是全长的条带。用这二种RNA放射性转换到cDNA中有12%。5.RNaseH活性:200单位酶与polyA:polydT37oC保温60分钟,释放出的放射性要低于1%。6.物理纯度:在SDS-PAGE上>90%纯。储存缓冲液:20mMTris-HClpH7.5;200mMNaCl;0.1mMEDTA;1mMDTT;0.01%NP-40(一种去垢剂)和50%甘油。反应缓冲液:250mMTris-HClpH8.3;375mMKCl;15mMMgCl2;50mMDTT(以Part#M531A供应)。
2023-06-28 21:42:241

反转录酶具有哪些酶活性?(  )

【答案】:A、B反转录酶是一种多功能酶,具有依赖于RNA的DNA聚合酶活性、依赖于DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH活性。
2023-06-28 21:42:371

hiv病毒逆转录酶怎么来

RNA 指导的 DNA 聚合酶,是以 RNA 为模板合成DNA的酶.这种酶是 1970 年美国科学家特明 (H.M.Temin) 和巴尔的摩 (D.Baltimore) 分别于动物致癌 RNA 病毒中发现,他们并因此获得 1975 年度诺贝尔生理学或医学奖.当 RNA 致癌病毒,如鸟类劳氏肉瘤病毒 (Rous sara virus) 进入宿主细胞后,其逆转录酶先催化合成与病毒 RNA 互补的 DNA 单链,继而复制出双螺旋 DNA,并经另一种病毒酶的作用整合到宿主的染色体 DNA 中,此整合的 DNA 可能潜伏(不表达)数代,待遇适合的条件时被激活,利用宿主的酶系统转录成相应的 RNA,其中一部分作为病毒的遗传物质,另一部分则作为 mRNA 翻译成病毒特有的蛋白质.最后,RNA 和蛋白质被组装成新的病毒粒子.在一定的条件下,整合的 DNA 也可使细胞转化成癌细胞.含有逆转录酶的病毒叫做反转录病毒,逆转录酶催化的反应叫反转录 (reverse transcription).在这个过程中,遗传信息流动的方向是从 RNA 到 DNA,正好与转录过程相反,故称反转录.病毒逆转录酶含 Zn2+,以脱氧核苷三磷酸为底物,从 5"- 到 3"- 合成 DNA,反应需要引物.这个酶在许多方面与 DNA 聚合酶相似.目前已发现不少动物反转录病毒,近年来也发现了几种人类反转录病毒.艾滋病毒也是一种反转录病毒.有的逆转录酶已提纯,可作为合成某些特定 RNA 的互补 DNA 的工具酶,也可用于 DNA 的序列分析和克隆重组 DNA.逆转录酶具有3种酶活力(是一种多功能酶):①它可利用RNA为模板合成互补DNA链,形成RNA-DNA杂化分子(RNA指导的DNA聚合酶活性); ②它以新合成的DNA为模板合成另一条互补DNA链,形成DNA双链分子(DNA指导的DNA聚合酶活性); ③具有核糖核酸酶活性,专门水解RNA-DNA杂化分子中的RNA链.
2023-06-28 21:42:441

逆转录需要什么酶

逆转录的过程是需要逆转录酶催化的。该逆转录酶也称依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA(complementaryDNA,cDNA)。逆转录酶存在于一些RNA病毒中,可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒(HIV)也是一种RNA病毒,含有逆转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有逆转录酶,推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。逆转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3"-末端上,按5"→3"方向,合成一条与RNA模板互补的cDNA单链,它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。
2023-06-28 21:42:521

人体内有逆转录酶么?

人体是没有逆转录酶的,逆转录酶存在于rna病毒。当rna病毒颗粒进入宿主细胞后,在脱衣酶的作用下,壳体裂解,释放出rna,首先以病毒rna分子为模板,在逆转录酶(病毒自身携带)的催化作用下,反转录出病毒的dna分子,这种病毒dna能与宿主细胞染色体的dna链整合,又以整合在细胞dna上的病毒dna为模板,转录新的病毒rna与病毒mrna,后者与核糖体结合,翻译出各种病毒蛋白,最后组装成新的子代病毒。这里面所有的原料都是利用的宿主的。我不明白你在这里说端粒酶的意思是什么?(端粒酶是一种核糖核蛋白复合物,具有反转录酶的性质,并不是逆转录酶,只是有其性质而已,端粒酶人体细胞里有的)
2023-06-28 21:43:076

RNA通过逆转录酶逆转录成DNA的过程是怎样的

转录过程包括启动、延伸和终止。启动RNA聚合酶正确识别DNA模板上的启动子并形成由酶、DNA和核苷三磷酸(NTP)构成的三元起始复合物,转录即自此开始。DNA模板上的启动区域常含有TATAATG顺序,称普里布诺(Pribnow)盒或P盒。复合物中的核苷三磷酸一般为GTP,少数为ATP,因而原始转录产物的5′端通常为三磷酸鸟苷(pppG)或腺苷三磷酸(pppA)。真核DNA上的转录启动区域也有类似原核DNA的启动区结构,和在-30bp(即在酶和DNA结合点的上游30核苷酸处,常以-30表示,bp为碱基对的简写)附近也含有TATA结构,称霍格内斯(Hogness)盒或TATA盒。第一个核苷三磷酸与第二个核苷三磷酸缩合生成3′-5′磷酸二酯键后,则启动阶段结束,进入延伸阶段。延伸σ亚基脱离酶分子,留下的核心酶与DNA的结合变松,因而较容易继续往前移动。核心酶无模板专一性,能转录模板上的任何顺序,包括在转录后加工时待切除的居间顺序。脱离核心酶的σ亚基还可与另外的核心酶结合,参与另一转录过程。随着转录不断延伸,DNA双链顺次地被打开,并接受新来的碱基配对,合成新的磷酸二酯键后,核心酶向前移去,已使用过的模板重新关闭起来,恢复原来的双链结构。一般合成的RNA链对DNA模板具有高度的忠实性。RNA合成的速度,原核为25~50个核苷酸/秒,真核为45~100个核苷酸/秒。终止转录的终止包括停止延伸及释放RNA聚合酶和合成的RNA。在原核生物基因或操纵子的末端通常有一段终止序列即终止子;RNA合成就在这里终止。原核细胞转录终止需要一种终止因子ρ(四个亚基构成的蛋白质)的帮助。真核生物DNA上也可能有转录终止的信号。已知真核DNA转录单元的3′端均含富有AT的序列〔如AATAA(A)或ATTAA(A)等〕,在相隔0~30bp之后又出现TTTT顺序(通常是3~5个T),这些结构可能与转录终止或者与3′端添加多聚A顺序有关。
2023-06-28 21:43:232

反转录常用的两种酶

目前常用的反转录酶主要有两种:一种是来源于禽成髓细胞性白血病病毒(avianmyeloblastosisvirus,AMV)的AMV反转录酶,另一种是来源于莫洛尼鼠白血病病毒(moloneymurineleukemiavirus,MoMLV)的MOMLV反转录酶。
2023-06-28 21:43:421

反转录酶是逆转录酶吗

反转录酶就是逆转录酶..只是翻译不一样而以..... 英文名称:Reverse transcripatase 由于其执行的功能相当于转录的逆过程,所以有翻译为逆转录酶.而其催化进行的过程是转录的反方向,是从RNA到DNA,所以也有翻译为反转录酶的.其实这两个名称都是指一样的东西
2023-06-28 21:43:501

RNA复制酶,逆转录酶存在于病毒中还是在宿主细胞中合成

RNA复制酶在宿主细胞中合成,逆转录酶是病毒中合成的。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库,从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法。病毒RNA进入宿主细胞后,可进行复制,即在RNA指导的RNA聚合酶催化进行RNA合成反应。RNA复制酶催化的合成反应是以RNA为模板,由5′向3′方向进行RNA链的合成。RNA复制酶缺乏校对功能的内切酶活性,因此RNA复制的错误率较高,RNA复制酶只是特异地对病毒的RNA起作用,而宿主细胞的RNA一般并不进行复制。扩展资料:多反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。1、RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。2、RNaseH活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNaseH从RNA5′端水解掉RNA分子。3、DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。参考资料来源:百度百科-逆转录酶参考资料来源:百度百科-RNA复制酶
2023-06-28 21:44:201

反转录酶的注意事项

反转录酶在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:1、RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。2、引物的选择OligodT选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。随机引物适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。特异性引物特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。
2023-06-28 21:44:271

求问哪些酶的化学本质是RNA

1、端粒酶:是一种由催化蛋白和RNA模板组成的酶,在细胞中负责端粒的延长的一种酶,是基本的核蛋白逆转录酶,可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端。 2、核酶:主要指一类具有催化功能的RNA,亦称RNA催化剂。自然界中已发现多种核酶,目前主要有四种核酶能用于反式切割靶RNA:四膜虫自身剪接内含子、大肠杆菌RNase P、锤头状核酶和发夹状核酶。 3、逆转录酶:是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
2023-06-28 21:44:411

反转录酶的形成哪种化学键?

反转录酶把RNA变成DNA,形成的是磷酸二酯键。
2023-06-28 21:44:492

反转录聚合酶链式反应

聚合酶链式反应跟反转录是有一定的关系的,反转录聚合酶链式反应可以用来截取DNA的片段,因此反转录聚合酶链式反应在生物学领域上是有很大的帮助的,因为DNA跟人体许许多多方面都有关,那么我们来具体说下反转录聚合酶链式反应吧。 反转录聚合酶链式反应技术 反转录聚合酶链式反应技术比较先进,那么反转录聚合酶链式反应技术是什么呢? 反转录聚合酶链式反应技术从嗜热栖热菌HB8中分离得到Tth耐热DNA聚合酶,此酶还具有反转录酶活性,95摄氏度时该酶的半衰期为20分钟具有5—3外切酶活性,无3—5外切酶活性,利用Tth耐热DNA聚合酶同时具有反转录酶的特点,可以简化RT-PCR,并且比Taq聚合酶反应敏感度高100倍。所以更优越。Tth聚合酶作用温度高,可消除RNA的二级结构对反转录反应的影响,增加TthDNA聚合酶的反转录的活性,可增加RT-PCR反应灵敏性。 反转录过程由反转录酶催化,该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA(cDNA)。反转录酶存在于一些RNA病毒中,可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒(HIV)也是一种RNA病毒,含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶,推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。 反转录聚合酶链式反应的局限性 有些条件下不适合做反转录聚合酶链式反应,那么反转录聚合酶链式反应的局限性是什么呢? 反转录聚合酶链式反应需要从许多酶中选择限制酶,或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列,而在YAC或Cosmid中的未知功能序列中有时也会有这些序列,这样,通过反转录聚合酶链式反应得到的探针就有可能与多个基因序列杂交。 而利用反转录聚合酶链式反应可对未知序列扩增后进行分析,探索邻接已知DNA片段的序列,并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆,建立全长的DNA探针。适用于基因游走、转位因子和已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。 反转录聚合酶链式反应是什么 反转录聚合酶链式反应是聚合酶链式反应的一种,具体反转录聚合酶链式反应是什么呢? 反转录聚合酶链式反应是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段,而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段。实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切,然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接,再用一对反向的引物进行PCR,其扩增产物将含有两引物外未知序列,从而对未知序进行分析研究。 反转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3′桹H末端上,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA,它与RNA模板形成RNADNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。 反转录聚合酶链式反应操作过程 反转录聚合酶链式反应操作有一定讲究,那么反转录聚合酶链式反应操作过程什么样呢? 反转录聚合酶链式反应用T4连接酶在稀DNA浓度下环化更容易形成单环。在一些实验中,为产生对反转录聚合酶链式反应大小适当的DNA片段需要两种内切酶,但这样所产生的片段末端则不适于连接,环化前需用Klenow或噬菌体T4DNA聚合酶修理(钝化)。连接前,需用酚或热变性使内切酶失活。 反转录聚合酶链式反应用传统的缓冲液和其他提供者推荐的条件裂解DNA。反向PCR所扩增的片段的大小由PCR扩增片段的大小决定,目前,PCR扩增的实际上限为3-4kb。在许多情况下,首先需要进行Southern杂交来确定内切酶用以产生大小适于环化及反向PCR的片段的末端段。能裂解核心区的内切酶使反向PCR只能扩增引物所定模板(依赖于引物)的上游或上游区,而不裂解核心区的酶则使两上边侧序列都扩增,并带有由内切酶和环化类型决定的接点(例如,互补突头连接与钝头连接)。
2023-06-28 21:44:551

关于逆转录酶

楼上不要误人子弟了,病毒感染细胞只有核酸进入到细胞内,外壳不会进去,逆转录酶基因只是病毒基因中的很小一部分,还有很多编码外壳蛋白等等,在病毒壳内空间很小不会留有逆转录酶的空间,所以只有核酸进入,病毒分为正链DNA 负链DNA 正链RNA 负链RNA 双链DNA 双链RNA 双链缺口DNA 推荐你复习一下生物化学与分子生物学的转录翻译过程,国外的《病毒学原理》,不要跟我说我的名词不对,翻译过来大概是那个意思而且我是医学专业只有双链DNA的正链才可以转录出mRNA,因为细胞核内酶的限制,而且正常真核细胞不会有逆转录酶,但是又有人说人类基因组8%是病毒基因gene
2023-06-28 21:45:032

怎么确定反转录完的CDNA中还有没有GDNA污染

对于新手来说购买反转录试剂盒是比较理想的,买一个kit看看说明书操作就可以了。推荐两款kit TAKARA和HaiGene,这两款试剂盒都能对RNA样品中的gDNA有效去除,因此对RNA质量的要求不高。TAKARA的RR047A操作方便,反转录温度为37℃,对于大多数试验来讲是满足要求的。HaiGene的D0401操作要多一个步骤,但其反转录温度是55℃(耐高温的反转录酶),提高了反转录温度使得高GC含量、复杂模板、长mRNA的模板都能有效反转录,因此其反转录效率更高,更能够获得样本中基因的真实表达量。如果后续试验是RealTime PCR、ORF克隆、高GC含量、或者你的待研究基因结构复杂程度未知,还是选用耐高温的反转录酶更理想。对于反转录高手来说,直接购买反转录酶、再购买Rnase Inhibitor自己配制反转录体系就可以了。对于样本量大的课题组来讲,相对还是比较经济的。选择反转录酶时仅需要考虑是否需要耐高温的酶,来克服目的基因的复杂结构就可以了。PROMEGA、TAKARA、HaiGene、 TRANSGEN等品牌的反转录酶性价比还都是不错的。Life、NEB的也不错,银子足的也可考虑,不一一解释了。
2023-06-28 21:45:341

逆转录酶的具体作用是什么 逆转录酶的具体作用介绍

1、DNA聚合酶活性,以RNA为模板,催化脱氧核糖核苷三磷酸聚合成DNA的过程。 2、DNA指导的DNA聚合酶活性,以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以脱氧核糖核苷三磷酸为底物,再合成第二条DNA分子 3、具有酶催化消化信使RNA的能力。 4、逆转录酶:又称为依赖RNA的DNA聚合酶。
2023-06-28 21:45:411

反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗

逆转录酶有三种活性:RNA或DNA作模板的dNTP聚合活性和RNase活性.①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程.②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子.③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子.逆转录酶本身具有DNA聚合酶活性不需要另加DNA聚合酶了
2023-06-28 21:45:551

反转录酶在室温放多久会失活

超过30分钟。根据相关资料查询得知,反转录酶属于RNA酶家族,其活性受到温度、pH、离子强度等因素的影响,反转录酶在室温下存放时间不应超过30分钟,否则会失活,且要在-20℃或更低的温度下储存,避免多次冻融,以确保其活性和稳定性。
2023-06-28 21:46:021

有一条mRNA 我想要获得它的互补单链DNA 我该用RNA聚合酶还是反转录酶 为什么RNA聚合

肯定要用反转录酶.RNA聚合酶合成的原料是核糖核苷酸不能合成一条DNA单链
2023-06-28 21:46:091

为什么说端粒酶是反转录酶

为什么说端粒酶是反转录酶只要是细胞,就得走向衰老,现代研究表明,细胞的衰老和端粒的变短有关系。端粒就是DNA,随着细胞分裂次数的增多,端粒在不断变短,端粒酶就是组织端粒变短的。然而正常细胞中,端粒酶的活性受抑制,端粒酶是怎么染端粒变长的呢?实际上端粒酶是由RNA组成的,可以根据碱基互补配对逆转形成DNA,使得变短的端粒变长。所以说端粒酶可以逆转录形成端粒,使端粒不减短!
2023-06-28 21:46:171

逆转录酶是什么时候被发现的?

逆转录酶(反转录酶):1970年,Temin等人和Baltimore等人同时各自发现了逆转录酶,修正了传统的中心法则,使真核基因的制备成为可能。Temin等于1975年因发现逆转录酶而获诺贝尔生理学与医学奖。具备了以上的理论与技术基础,基因工程诞生的条件已经成熟。1972年,Berg等发表了题为“将新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法”的论文,标志着基因工程技术的诞生,为此他获得了1980年诺贝尔化学奖。1973年,斯坦福大学的Cohen等人成功地进行了另一个体外重组DNA实验并实现了细菌间性状的转移。1973年Jacbon等人首次提出基因可以人工重组,并能在细菌中复制。从此以后,基因工程作为一个新兴的研究领域得到了迅速的发展,无论是基础研究还是应用研究,均取得了喜人的成果。
2023-06-28 21:46:232

关于逆转录酶

楼上不要误人子弟了,病毒感染细胞只有核酸进入到细胞内,外壳不会进去,逆转录酶基因只是病毒基因中的很小一部分,还有很多编码外壳蛋白等等,在病毒壳内空间很小不会留有逆转录酶的空间,所以只有核酸进入,病毒分为正链DNA 负链DNA 正链RNA 负链RNA 双链DNA 双链RNA 双链缺口DNA 推荐你复习一下生物化学与分子生物学的转录翻译过程,国外的《病毒学原理》,不要跟我说我的名词不对,翻译过来大概是那个意思而且我是医学专业只有双链DNA的正链才可以转录出mRNA,因为细胞核内酶的限制,而且正常真核细胞不会有逆转录酶,但是又有人说人类基因组8%是病毒基因gene
2023-06-28 21:46:322

mrna需要逆转录酶吗

mrna需要逆转录酶,逆转录就是从mRNA到cDNA的过程,这个过程必须要用到逆转录酶,其是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
2023-06-28 21:46:381

反转录酶放-20有活性吗

反转录酶放-20有活性吗?您好,反转录酶放-20是有活性的,具有DNA聚合酶活性。
2023-06-28 21:46:452

反转录酶的作用是

【答案】:C反转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA的酶。分子生物学常用工具酶常见的主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、反转录酶、核酸酶等。C正确,故选C。
2023-06-28 21:47:091

逆转录酶的功能

逆转录酶的三个功能:1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性;2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性;3、RNaseh活性。RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。扩展资料:转录时,细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA,通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比,转录有很多相同或相似之处,亦有其自己的特点。转录中,一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说,以特定的DNA片段作为模板,以DNA依赖的RNA合成酶作为催化剂,合成前体mRNA。在体内,转录是基因表达的第一阶段,并且是基因调节的主要阶段。转录可产生DNA复制的引物,在反转录病毒感染中也起到重要作用。通常情况下,细胞内的转录应由DNA到RNA的,所得RNA为信使RNA(mRNA)供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要实现自身扩增,必须具有DNA,因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。逆转录酶可用RT—PCR,将RNA转变为DNA后扩增,以获得RNA的序列。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。参考资料来源:百度百科——反转录酶
2023-06-28 21:47:192

逆转录酶的作用

  逆转录酶的三个作用:   1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性;   2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性;   3、RNaseh活性。   RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。   RNaseH活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNaseH从RNA5端水解掉RNA分子。   DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
2023-06-28 21:47:321

反转录酶有什么特点?

反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→MRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
2023-06-28 21:47:381

逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?

反转录酶跟逆转录酶是同样的概念,只是翻译不一样而已。反转录酶:(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性:DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
2023-06-28 21:47:461

反转录酶的作用是什么?

反转录酶(Reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。多反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性 。①RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。除此之外,有些反转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库(cDNa library),从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法
2023-06-28 21:47:543

反转录酶的作用是什么?

反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
2023-06-28 21:48:021

逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?

反转录酶跟逆转录酶是同样的概念,只是翻译不一样而已。反转录酶:(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性:DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
2023-06-28 21:48:091

反转录的反转录酶与反转录过程

反转录过程由反转录酶催化,该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA(cDNA)。反转录酶存在于一些RNA病毒中,可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒(HIV)也是一种RNA病毒,含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶,推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。除此之外,有些反转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库(cDNA library),从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法。反转录的简要过程表示如下:反转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3′桹H末端上,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA(complementary DNA, cDNA),它与RNA模板形成RNADNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。
2023-06-28 21:48:161

反转录酶合成方向

反转录酶合成方向为5"→3"mRNA。转录过程包括RNA聚合酶与模板DNA结合,起始点由σ因子识别。转录起始,通常由pppG开始:5"-3"方向延长RNA链。链的终止,有特殊的终止信号区。
2023-06-28 21:48:281

以mRNA为模板合成cDNA的酶是什么

  以mRNA为模板合成cDNA酶的是反转录酶。  反转录酶(也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶,该酶以RNA为模板,以dNTP为底物,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3"-OH末端上,根据碱基配对的原则,按5"-3"方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA(complementaryDNA,CDNA)。  逆转录酶(M-MLV)从MoloneyMurineLeukemiaVirus分离出来,可用于合成第一链cDNA、制作cDNA探针、RNA转录、测序和RNA的逆转录反应。本酶是通过点突变使RNaseH活性缺失,所以它具有的DNA聚合酶的活性与野生型相同,同时其延伸能力也有显著提高。逆转录酶(M-MLV)一个活性单位定义为在37℃,10min条件下,使1nmol的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。
2023-06-28 21:48:461

hiv病毒逆转录酶怎么来

RNA 指导的 DNA 聚合酶,是以 RNA 为模板合成DNA的酶。这种酶是 1970 年美国科学家特明 (H. M. Temin) 和巴尔的摩 (D. Baltimore) 分别于动物致癌 RNA 病毒中发现,他们并因此获得 1975 年度诺贝尔生理学或医学奖。当 RNA 致癌病毒,如鸟类劳氏肉瘤病毒 (Rous sarcoma virus) 进入宿主细胞后,其逆转录酶先催化合成与病毒 RNA 互补的 DNA 单链,继而复制出双螺旋 DNA,并经另一种病毒酶的作用整合到宿主的染色体 DNA 中,此整合的 DNA 可能潜伏(不表达)数代,待遇适合的条件时被激活,利用宿主的酶系统转录成相应的 RNA,其中一部分作为病毒的遗传物质,另一部分则作为 mRNA 翻译成病毒特有的蛋白质。最后,RNA 和蛋白质被组装成新的病毒粒子。在一定的条件下,整合的 DNA 也可使细胞转化成癌细胞。 含有逆转录酶的病毒叫做反转录病毒,逆转录酶催化的反应叫反转录 (reverse transcription)。在这个过程中,遗传信息流动的方向是从 RNA 到 DNA,正好与转录过程相反,故称反转录。病毒逆转录酶含 Zn2+,以脱氧核苷三磷酸为底物,从 5"- 到 3"- 合成 DNA,反应需要引物。这个酶在许多方面与 DNA 聚合酶相似。目前已发现不少动物反转录病毒,近年来也发现了几种人类反转录病毒。艾滋病毒也是一种反转录病毒。有的逆转录酶已提纯,可作为合成某些特定 RNA 的互补 DNA 的工具酶,也可用于 DNA 的序列分析和克隆重组 DNA。 逆转录酶具有3种酶活力(是一种多功能酶): ①它可利用RNA为模板合成互补DNA链,形成RNA-DNA杂化分子(RNA指导的DNA聚合酶活性); ②它以新合成的DNA为模板合成另一条互补DNA链,形成DNA双链分子(DNA指导的DNA聚合酶活性); ③具有核糖核酸酶活性,专门水解RNA-DNA杂化分子中的RNA链。
2023-06-28 21:48:532

RNA复制酶,逆转录酶存在于病毒中还是在宿主细胞中合成

RNA复制酶在宿主细胞中合成,逆转录酶是病毒中合成的。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库,从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法。病毒RNA进入宿主细胞后,可进行复制,即在RNA指导的RNA聚合酶催化进行RNA合成反应。RNA复制酶催化的合成反应是以RNA为模板,由5′向3′方向进行RNA链的合成。RNA复制酶缺乏校对功能的内切酶活性,因此RNA复制的错误率较高,RNA复制酶只是特异地对病毒的RNA起作用,而宿主细胞的RNA一般并不进行复制。扩展资料:多反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性 。1、RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。2、RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。3、DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。参考资料来源:百度百科-逆转录酶参考资料来源:百度百科-RNA复制酶
2023-06-28 21:49:015