目的基因与质粒重组

重组质粒的组成要含有目的基因，标记基因，启动子，终止子，复制原点。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

一、构成不同基因表达载体：构成包括启动子、终止子、标记基因、目的基因。重组质粒：构成包括目的基因片段、质粒、酶。二、对象不同基因表达载体：基因表达载体的对象通常是活细胞。重组质粒：重组质粒的对象通常是细菌。三、原理不同基因表达载体：将不同来源的基因在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞。重组质粒：用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 在体外使两者相连接, 得到重组质粒。扩展资料一、基因表达载体分为两大类：1、病毒载体病毒载体主要包括慢病毒、腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等。2、非病毒载体非病毒载体主要包括裸露DNA、脂质体、纳米载体等。二、基因表达载体的过程过程包括：过表达质粒选择、目的基因获取、引物设计、过表达质粒构建。在进行基因过表达过程中，可以选择不同的过表达载体。过表达载体与克隆载体比较而言，加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。参考资料来源：百度百科-基因表达载体百度百科-重组质粒

先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒。质粒是目的基因的运载体，在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后，用限制性内切酶将质粒切开，使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端。它们的碱基恰好配对，氢键自动结合，再用DNA连接酶将切口补上，重组质粒就形成了。扩展资料有两种情况可使杂交后代出现新的基因组合的个体（重组体）：（1）非连锁基因的自由组合。例如纯合的非糯红米水稻品种与糯性白米水稻品种杂交，子二代有四种类型的植株，其中非糯红米和糯性白米的植株分别与两亲本的性状相同，称为亲本组合；另有非糯白米和糯性红米两种植株则是两亲本所没有的重新组合，即重组体。（2）连锁基因的交换。例如，已知玉米种子的有色对无色为显性，饱满对凹陷为显性，用纯种有色饱满玉米与无色凹陷玉米杂交，子一代种子均为有色饱满，以F1与双隐性（无色凹陷）亲本回交，结果也出现四种类型，其中有色饱满和无色凹陷为亲本组合，约占96%；有色凹陷和无色饱满为新组合（重组体），约占4%，后者就是同源染色体的非姊妹染色单体上部分基因发生了交换的结果。

重组质粒：有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接.---（重组质粒是一个种动作，方法，不是一个名词）AB就是“重组的质粒”，是用重组质粒的方法弄成的BB没有质粒，不是“重组的质粒”AA没有目的基因，不是“重组的质粒”

您好,我就为大家解答关于重组质粒的构建步骤是，重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！1、目的基因是以生... 您好,我就为大家解答关于重组质粒的构建步骤是，重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！ 1、目的基因是以生物基因组DNA为模板，设计引物，PCR出来的。 2、目的产物的序列正确后，就可以构建重组载体。 3、主要方法就是酶切目的产物，连接目标载体，转化大肠杆菌感受态，最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。

基因重组是基因的重新组合，可发生在减一后期，四分体时期，以及基因工程导入基因。重组dna是dna，就是通过基因工程技术接上了新基因的dna重组质粒是质粒，是接上了目的基因的质粒。基因重组是理论名字，重组质粒是基因工程技术的中间物，是载体。重组dna是结果。

质粒载体 即，在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因，以质粒为载体，将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞，进行重组、筛选、扩增的过程。重组质粒有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接就是重组质粒，重组质粒是一个种动作，方法，也是一个名词。简单地说，重组质粒包括了质粒载体

含义不同。重组质粒是一种动作，方法。目的基因的重组质粒是名词，表示一种物质。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。

目的基因就是我们利用限制性内切酶获得的一段特定长度的DNA片段，这个片段可能是具有一定抗性、或者是控制一个优良性状的遗传信息等。重组质粒则是“体外将目的片段和经切割目的片段相同的限制性内切酶切割后的载体质粒连接后的重组质粒”，即目的片段+载体质粒片段。（因为DNA片段不能单独存在，一般都是保存于质粒中，所以要想两个不同的片段连接起来，必须用相同的内切酶对载体质粒、含目的DNA的质粒进行酶切后，二者才能连接。所以目的DNA只是个DNA片段，重组质粒是质粒，二者不同，原理如上~~~忘采纳~

重组质粒指的是目的基因和载体（有的也称运载体）结合后的产物，也叫重组DNA分子，学名是：基因表达载体。望采纳

方便研究。重组质粒的连接，可以把特定的基因序列插入到工程质粒中，构建成功后可以进行下一步研究，如基因对宿主的影响等，去目的是方便研究。有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接就是重组质粒，重组质粒是一个种动作，方法，也是一个名词。

限制性核酸内切酶 和 DNA连接酶. 构建重组质粒, 首先,需要把原来完整的质粒切开,就必须要用限制性核酸内切酶； 然后,需要把目的基因片段连接到切开的质粒上,并把重组质粒重新连接好,就必须要用DNA连接酶.

有些情况下，由于实验的需求，我们必须给重组质粒更换载体，为了使其标记颜色改变或者抗性改变或者其他，最简单的方法就是使用内切酶切下质粒中目标片段后，顺便用同样的内切酶切下新的载体，（这里要注意，新载体上有没有对应的酶切位点及其会不会切掉比较重要的组成部分）连接后使用。 目的：给 over expression的瞬时表达质粒（pflag-cMV），原载体为绿色荧光，换为红色荧光。 重组质粒：10ul； 5 μL 10x cut smart buffer 1 μL Cla1 1 μL kpn1 ddH2O补至50 μL 5 μg cheey载体 5 μL 10x cut smart buffer 1 μL Cla1 1 μL Kpn1 ddH2O补至50 μL 37度酶切过夜（菌落培养箱） 然后跑胶纯化，胶回收， DNA需要使用纯化试剂盒直接纯化，质粒需要电泳跑胶纯化（胶中的质粒必须在曝光仪器上观看，紫外容易导致突变） 质粒酶切的时候会出现单链断裂等情况，所以我们需要跑胶，进行胶回收，纯化。质粒需要用50ul水溶解，DNA片段需要使用20ul的水溶解。 将退火产物与线性化质粒进行T4连接酶连接，连接过夜。 15ul 目标DNA片段（如果使用20ul，则14ul就可以） 2ul 线性化质粒（如果使用50ul，3ul质粒） 2μL 10x NEB T4 DNA ligase buffer 1μL NEB T4 DNA连接酶 （16度 连接过夜） cheery 每个样品挑5个克隆 、ep管中加10uldd水 挑入克隆捶打混匀。取出八连管： mix ：10ul Flag-R：1ul ; mCheery-F：1ul ; 克隆混合液：3ul ; 程序 pcr：95 3min 95 15s 56 15s 72 90s 72 10min 4 持续 2-4 30个循环 完成后看切的条带大小，一般跑胶，在皮曝光机器下看，与自己目的蛋白一样大小的kb带出现则提示连接成功。注意marker的选择。 然后将剩余7ul的克隆混合液加入amp的lb培养基800ul的样子 在摇床中摇 。 跑完胶后发现正确的条带后，将摇床上正确条带的菌群，转移到15ml的摇菌管，摇菌过夜。 ？？

（1）用限制酶将质粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来． （2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中． （3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca 2+ 处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞． （4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌． （5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图： 故答案为： （1）限制酶 DNA连接酶 （2）脱氧核苷酸 氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞） Ca 2+ （4）2 （5）E 如下图所示（两点全圈出给分）． （1）限制酶 DNA连接酶 （2）氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒导入大肠杆菌（受体细胞） Ca 2+ （4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2 （5）E

重组质粒连接成功的常见方法，一般采用著名的限制性内切酶切割和酶联检测等。具体步骤如下：1.限制性内切酶切割：首先，用限制性内切酶对连接产物进行切割。如果连接成功，那么切割后可以得到预期长度的DNA片段；如果连接失败，那么你将得到不同于预期长度的DNA片段。2.电泳分析：将上述DNA片段通过电泳分析。如果连接成功，那么你将会看到预期长度的DNA条带出现；如果连接失败，那么你将会看到长度不正确或轻微多余的DNA条带出现。3.酶联检测：可以通过变性凝胶电泳、Southern blotting等方法来验证连接情况的准确性和可靠性。需要指出的是，在重组质粒连接

重组质粒的连接的目的主要用于获得含有目的基因连接的重组子。利于目的基因进入受体细胞，利于目的基因在受体细胞内稳定存在和表达。它对肿瘤的诊断和治疗具有非常重要的意义，特别是恶心肿瘤共同表达的特异抗原性与肿瘤的发生、浸润和转移关系密切，能被作为肿瘤发生、发展和预后的指标。

你问的第二个问题有点模糊啊，不明白“所有的情况”指的到底是那些情况。不过，可以先回答你第一个问题，答案是，有些质粒的确可以将基因整合进宿主的基因组中。例如，大肠杆菌有一种质粒叫做f质粒（fplasmid），又称f因子、致育因子或性因子，是大肠杆菌等细菌决定性别并有转移能力的质粒。其基因组含有与质粒复制和转移有关的许多基因，其中近1/3是tra区，另外有orit（转移起始点）、oris（复制起始点）、inc（不相容群）、rep（复制功能）和一些转座因子，后者可整合到宿主核染色体上的一定部位，并导致各种hfr菌株的产生。

1、质粒与目的基因连接得到2种重组质粒。 2、如果是双酶切，而且两个酶切位点不能形成自连，那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒。 3、如果是单酶切，或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶，那么插入目的基因能获得两种重组质粒。

两者有一定的联系，但更多的是区别。基本上，现在所有的工程质粒，在使用时，都会插入外源片段，成为重组质粒（事实上，工程质粒本身就是重组而来）。融合蛋白，是指2个或多个蛋白的基因片段经拼接后表达，形成包含上述蛋白片段的蛋白。融合蛋白的表达一般都是要先构建重组质粒，再转入合适的表达体系（如细菌、酵母、细胞或组织中），表达产物就是融合蛋白。但还有很多的重组质粒，未必是用来表达融合蛋白的，比如，有些蛋白不需加标签，有些质粒只是为了转录出RNA，等等。个人见解，欢迎继续讨论，祝愉快！

质粒存在细菌和真菌里,当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因,培养后植入发酵菌细胞中.发酵后就可以提取产物. 质粒上原有的基因也会表达,重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白.三者混合在一起,要进行筛选（筛选方法自然很多）得到目的蛋白质.

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。　　外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种： 　　1、带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是最容易克隆的DNA片段，一般情况下,常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切位点的载体，从而将外源片段定向地克隆到载体上。也可在PCR扩增时，在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。　　2、带有相同的粘性末端 用相同的酶或同尾酶处理可得到这样的末端。 由于质粒载体也必须用同一种酶消化，亦得到同样的两个相同粘性末端，因此在连接反应中外源片段和质粒载体DNA均可能发生自身环化或几个分子串连形成寡聚物, 而且正反两种连接方向都可能有。所以，必须仔细调整连接反应中两种DNA的浓度, 以便使正确的连接产物的数量达到最高水平。还可将载体DNA的5"磷酸基团用碱性磷酸酯酶去掉, 最大限度地抑制质粒DNA的自身环化。带5"端磷酸的外源DNA片段可以有效地与去磷酸化的载体相连, 产生一个带有两个缺口的开环分子,在转入E. coli受体菌后的扩增过程中缺口可自动修复。 　　3、带有平末端 是由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生，或由DNA聚合酶补平所致。由于平端的连接效率比粘性末端要低得多，故在其连接反应中，T4 DNA连接酶的浓度和外源DNA及载体DNA浓度均要高得多。通常还需加入低浓度的聚乙二醇(PEG 8000)以促进DNA分子凝聚成聚集体的物质以提高转化效率。　　特殊情况下，外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配,则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3"凹端,使不相匹配的末端转变为互补末端或转为平末端后再进行连接。

一种是和普通质粒一样游离存在于受体细胞的细胞质内另外一种是插入受体细胞基因组，以前病毒形式存在。

是区分重组质粒与普通质粒吗？如果是，最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交另外还有种方法，当普通质粒上有两个或以上的标记基因，而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以如：普通质粒，抗青霉素也抗四环素，但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因，那么，双抗的就是导入普通质粒，只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒，都不抗的没有导入质粒。

是质粒在细菌中复制扩增所必需的元件。

大体分为一下几步： 1.设计目的片段引物（含限制性酶切位点，要求：表达载体上有而目的片段上没有的酶切位点） 2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接，通过蓝白斑筛选，提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切，回收目的片段 4.目的片段与表达载体连接 5.转化到DH5a等克隆菌株，通过抗生素筛选，鉴定表达重组质粒。 6.测序检测 7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株 8.表达

启动子和终止子是帮助外源DNA表达的，就是控制转录过程的，要想进行复制，需要的是复制原点

恩

1、完全切开是指DNA的两条链都断了2、连接后接口处会出现以下情况：－G>GATCX-—CCTAG>Y->代表双链的连接部位。只有当X为C时（Y为G）才能被II切。所以切开的概率是1／4，切不开的概率是3/4。3、重组质粒中的目的基因的两侧都会出现上述情况，所以酶Ⅱ切重组质粒会出现下列几种情况：只有目的基因右侧切开，左侧未开，概率是1/4*3/4=3/16只有目的基因左侧切开，右侧未开，概率是3/4*1/4=3/16目的基因左右两侧同时切开，概率是1/4*1/4=1/16目的基因左右两侧都未切开，概率是3/4*1/4=9/16前三种情况都是完全切开，所以重组质粒能够被限切酶Ⅱ完全切割开的概率是7/16这个题的概率计算，思路有点类似遗传病那‘家族中有甲乙两种遗传病，问某后代患病的概率是多少"，后代只患甲病、只患乙病和同时患甲乙病都是患病

重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。在国内先进的实验中，也大都是由实验员搞定。但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。在这里将我的心得分享于大家，这也是我本人几年来一线工作时的经验积累，以期能为谷友提供借鉴，让大家在实验中少走弯路。所涉及内容如下： 1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明上述问题同时，本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。 一、克隆基因的酶切位点问题 1、克隆位点选择的问题。首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析，列出其所含酶切位点清单。然后对照质粒多克隆位点，所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。这是常识，不赘述。 2、保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。 一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN段上。如NdeI就属这类，需要加入至少6个保护碱基，常用的HindIII也要三个。

重组质粒的组成要含有目的基因，标记基因，启动子，终止子，复制原点。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

是区分重组质粒与普通质粒吗？如果是，最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交另外还有种方法，当普通质粒上有两个或以上的标记基因，而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以如：普通质粒，抗青霉素也抗四环素，但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因，那么，双抗的就是导入普通质粒，只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒，都不抗的没有导入质粒。

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

两者有一定的联系，但更多的是区别。基本上，现在所有的工程质粒，在使用时，都会插入外源片段，成为重组质粒（事实上，工程质粒本身就是重组而来）。融合蛋白，是指2个或多个蛋白的基因片段经拼接后表达，形成包含上述蛋白片段的蛋白。融合蛋白的表达一般都是要先构建重组质粒，再转入合适的表达体系（如细菌、酵母、细胞或组织中），表达产物就是融合蛋白。但还有很多的重组质粒，未必是用来表达融合蛋白的，比如，有些蛋白不需加标签，有些质粒只是为了转录出RNA，等等。个人见解，欢迎继续讨论，祝愉快！

外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：1、带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是最容易克隆的DNA片段，一般情况下,常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切位点的载体，从而将外源片段定向地克隆到载体上。也可在PCR扩增时，在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。 外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配,则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3"凹端,使不相匹配的末端转变为互补末端或转为平末端后再进行连接。

省略构建重组质粒，会影响目的基因的翻译。翻译是蛋白质生物合成（基因表达中的一部分，基因表达还包括转录）过程中的第二步（转录为第一步），翻译是根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由DNA通过转录而生成）中“碱基的排列顺序”（核苷酸序列）解码，并生成对应的特定氨基酸序列的过程。但也有许多转录生成的RNA，如转运RNA（tRNA）、核糖体RNA（rRNA）和小核RNA（snRNA）等并不被翻译为氨基酸序列。翻译过程需要的原料：mRNA、tRNA、20种氨基酸、能量、酶、核糖体。翻译的过程大致可分作三个阶段：起始、延长、终止。翻译主要在细胞质内的核糖体中进行，氨基酸分子在氨基酰-tRNA合成酶的催化作用下与特定的转运RNA结合并被带到核糖体上。生成的多肽链（即氨基酸链）需要通过正确折叠形成蛋白质，许多蛋白质在翻译结束后还需要在内质网上进行翻译后修饰才能具有真正的生物学活性。游离的碱基以mRNA为直接模板，tRNA为氨基酸运载体，核蛋白体为装配场所，共同协调完成蛋白质生物合成的过程。在翻译过程中mRNA上的每个三联体密码子对应tRNA上的一个三联体反密码子，且这个反密码子只对应一个氨基酸，但是一个氨基酸可有多组密码子（密码子具有简并性）来表示。一个激活的tRNA进入核糖体的A位（A位用于接受氨基酸，可记忆为Accept）与mRNA相配，肽酰转移酶在邻近的氨基酸间建立一个肽键，此后在P位（peptidyl-tRNA site，即肽酰基位点，也叫做“供点”）上的氨基酸离开它的tRNA与A位上的tRNA结合，核糖体则相对于mRNA向前滑动，原来在A位上的tRNA移动到P位上，原来在P位上的空的tRNA移动到E位（释放位点，记忆为Emission）上，然后在下一个tRNA进入A位之前被释放。当核糖体沿着mRNA分子移动到A位出现终止密码子时，没有相应的氨酰tRNA与之对应，一种释放因子(Release Factor，RF)与终止密码子及核糖体A位结合，另一种释放因子随之结合，改变肽酰转移酶的特异性，催化P位肽酰tRNA水解，从而使肽链从核糖体上释放。希望我能帮助你解疑释惑。

LZ您好答案是都不是，完全没有质粒会游离于细胞核之外，也就是不可能进入细胞核与受体染色体发生整合有点类似线粒体或者叶绿体，在有性遗传上遵循母系细胞质遗传，而不满足分离和自由组合！

是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。扩展资料：蓝白斑筛选原理一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

将人的胰岛素基因送到大肠杆菌细胞中，使得大肠杆菌自身可以合成胰岛素。科学家们把人的胰岛素基因送到大肠杆菌的细胞里，让胰岛素基因和大肠杆菌的遗传物质相结合。人的胰岛素基因在大肠杆菌的细胞里指挥着大肠杆菌生产出了人的胰岛素。随着大肠杆菌的繁殖，胰岛素基因也一代代的传了下去，后代的大肠杆菌也能生产胰岛素。这种带上了人工给予的新的遗传性状的细菌，被称为基因工程菌。带有人的胰岛素基因的基因工程菌放到大型的发酵罐里，给它提供合适的条件和营养物质，进行人工培养，可以大量繁殖，生产出大量的人胰岛素。大肠杆菌就成为生产胰岛素的“活工厂”。1981年人胰岛素基因产品已投入市场，解决了胰岛素药源不足的问题。扩展资料进行基因工程的方法流程为：1、提取目的基因获取目的基因是实施基因工程的第一步。如植物的抗病（抗病毒 抗细菌）基因，种子的贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因干扰素基因等，都是目的基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。鸟枪法的具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。2、目的基因与运载体结合基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体，首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）。3、将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因的片段与运载体在生物体外连接形成重组DNA分子后，下一步是将重组DNA分子引入受体细胞中进行扩增。基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌，枯草杆菌，土壤农杆菌，酵母菌和动植物细胞等。4、目的基因的检测和表达目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。以上步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。参考资料来源：百度百科-基因工程菌

优势与传统的灭活疫苗、亚单位疫苗和基因工程疫苗相比，核酸疫苗具有如下优点：1 免疫保护力增强接种后蛋白质在宿主细胞内表达，直接与组织相容性复合物MHCI或II类分子结合，同时引起细胞和体液免疫，对慢性病毒感染性疾病等依赖细胞免疫清除病原的疾病的预防更加有效。2 制备简单，省时省力核酸疫苗作为一种重组质粒，易在工程菌内大量扩增，提纯方法简单，且可将编码不同抗原基因的多种重组质粒联合应用，制备多价核酸疫苗，这样可大大减少人力、物力、财力以及多次接种带来的应激反应。3 同种异株交叉保护这是基因疫苗的最大优点之一。在制备基因疫苗时，可通过对基因表达载体所携带的靶基因进行改造，从而选择抗原决定簇。4 应用较安全接种核酸疫苗后，蛋白质抗原在宿主细胞内表达，无因毒力返祖或残留毒力病毒颗粒而引发疫病的危险，也不会引起对机体的不良反应。5 产生持久免疫应答免疫具有持久性，一次接种可获得长期免疫力，无需反复多次加强免疫。Wolff等报道，在注射后19个月仍可检测到外源基因相当数量的表达。6 贮存、运输方便核酸疫苗的质粒DNA稳定性好，便于贮存和运输，无须冷藏。7 可用于防治肿瘤CTL应答也是机体杀死癌变细胞的有效清除途径。若能找到在细胞恶性转化过程中的关键蛋白，就能制备肿瘤的CTL疫苗。该基因疫苗接种后，可诱发机体产生CTL免疫应答，对细胞的恶变进行免疫监视，对癌变的细胞产生免疫应答，从而为癌症的预防和免疫治疗提供强有力的新式武器。潜在危险1 质粒DNA可能诱导自身免疫反应，但是人和动物的许多试验表明质粒DNA诱发自身免疫性疾病的可能性较小。目前已有一项DNA疫苗的接种研究表明，免疫动物血清中未检测到抗DNA抗体。但在DNA疫苗的临床试验中。应对接种者进行抗DNA抗体检测。2 持续表达外源抗原可能产生一些不良后果。质粒长期过高水平地表达外源抗原，可能导致机体对该抗原的免疫耐受或麻醉。在成年动物，尚未见到因DNA疫苗接种而诱发免疫耐受的例子。但新生动物的免疫系统尚未成熟，可能将外源抗原认为自己成分而形成耐受。另外，持续低水平表达的抗原可能会被血中的中和抗体清除，不能引起足够的免疫应答，从而使疫苗的预防作用得不到充分的体现。3 肌肉注射质粒后，仅有很少部分被肌细胞所摄取，反复用PCR技术检查血中质粒，结果为阴性，揭示肌注后逸入血流的疫苗质粒数量是微不足道的，质粒去向如何尚待进一步阐明。4 影响核酸疫苗诱发机体免疫应答的因素很多，目前已知的主要有载体设计、核酸疫苗的导入方法、佐剂及辅助因子会对其免疫效果有影响。另外年龄和性别因素、肌注剂量和体积、预先注射蔗糖溶液等都会对肌注质粒DNA表达有影响。5外源DNA注入体内后，可能整合到宿主基因组上，使宿主细胞抑癌基因失活或癌基因活化，使宿主细胞转化成癌细胞，这也许是核酸疫苗的诸多安全性问题中最值得深入研究的地方。Whalen等认为：通常用于实验核酸免疫的剂量（100ug质粒）相当于1013拷贝，当注入肌肉后，绝大部分被降解和清除，但此问题仍待进一步研究证明。

你这题不是难，而是说不清。所以没人来答。基本原理肯定是碱基互补配对，就是说，先用限制性酶把环形质粒切两刀，切去一个片段，再把你的片段连进去就行了。具体操作时，也得用同种限制酶切目的基因片段，这样，它就能连进质粒中，形成完整环形质粒了。至于为什么要用同种限制性酶，是因为：同种酶切出来的豁口才能很好地匹配。

质粒上存在好几个基因，有你的目的基因和标记基因。一般都是标记基因都是有的，目的是为了筛选含有你的目标质粒的菌。标记基因一般都是抗性基因，用相应的抗生素去筛选。

引物相当于质粒、噬菌体的基因等基因载体，用于将目的基因一同带入细胞内。同载体限制酶全称限制性核酸内切酶，用于剪切特定的碱基对序列。目的基因即想要得到的性状对应的基因。重组质粒即载体基因与目的基因结合后形成的。PCR技术是模拟体内DNA的天然复制过程，在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术，主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。

显微注射只是一种技术手段不决定你要注射什么东西。我们还可以注射整个细胞核呢。。。是否导入质粒，要看你的实验原理和目的了，如果直接导入目的基因可达到你目的就不要用质粒，毕竟外源质粒进入细胞对细胞带来负担。但一般只导入基因片段是很难使其稳定存在于细胞内（会被降解掉）并重组进入染色体的，都得借用质粒（重组质粒）进行。

质粒存在细菌和真菌里，当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因，培养后植入发酵菌细胞中。发酵后就可以提取产物。质粒上原有的基因也会表达，重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白。三者混合在一起，要进行筛选（筛选方法自然很多）得到目的蛋白质。

为什么不可以？你的疑问在哪里？基因和质粒其实都是DNA，相同的化学本质，只是序列不同所以叫法不同而已。不同DNA可以通过其他人所说方法连接成一条更长的DNA分子，所以目的基因和质粒自然也可以重组成一条更长的DNA。质粒是环状的，所以要先切开，再将线性的目的基因连上去，再重新连接成一个环状的分子，即更大的质粒。质粒的特点是可以在细菌里面自我复制，方便后续的对目的基因的操作。

为什么用同一种限制酶处理质粒和外源DNA形成方式很多（1）质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团．（2）DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以磷酸基团和五碳糖相连．由题目可知，SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C．（3）用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是目的基因与抗性基因被破坏．（4）将游离末端重新结合形成DNA使用的是连接酶，获得的环状DNA可能有：原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状；目的基因与切割质粒形成重组质粒．（5）如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRⅠ酶切割的优点是：避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化．（6）导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素的培养基培养．

构建载体是基因工程的一个概念有：目的基因，启动子，终止子，标记基因，复制原点主要结构构成便于目的基因转化成功

（1）质粒上含有两个SmaⅠ限制酶的切割位点，所以用SmaⅠ限制酶处理图甲所示的质粒会得到2个DNA片段；图乙所示的外源DNA含有一个AluⅠ限制酶的切割位点，所以用AluⅠ处理外源DNA会形成两个黏性末端，增加2个游离的磷酸基团．（2）外源DNA含有四个酶切位点，即SmaⅠ、AluⅠ、PstⅠ和HindⅢ酶，其中AluⅠ酶的切割位点位于目的基因上，所以不能用此酶切割；用SmaⅠ酶切割会将质粒上两个标记基因均破坏，所以不能用SmaⅠ酶切割；应选用 PstⅠ和HindⅢ酶同时酶切质粒和含目的基因的外源DNA，这样可以避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接，也便于筛选需要．如果是用PCR技术扩增目的基因，设计引物是关键，但在扩增时退火温度一般为55～60℃，对于（A+T）%＞50%，一般用55℃；（A+T）%≤50%时一般用60℃，原因是G与C之间是三个氢键，所以C和G比例越高，DNA越稳定．（3）用 PstⅠ和HindⅢ酶同时酶切质粒，会破坏氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能抗四环素，但不能抗癌变青霉素．为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌，首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含四环素的培养基中，然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含氯霉素培养基上，以筛选获得含重组质粒的细菌．在含四环素培养基中能生长繁殖，而在含氯霉素培养基中不能生长繁殖的是导入了重组质粒的大肠杆菌．（4）因为大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体，不能对多肽链进行折叠、组装与修饰，所以在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性．故答案为：（1）2　2　（2）PstⅠ和HindⅢ酶　G与C（之间是三个氢键）比例越高越稳定（3）四环素　氯霉素　重组质粒（或目的基因）　（4）大肠杆菌细胞内缺乏内质网与高尔基体（或大肠杆菌缺乏生物膜系统），不能对多肽链进行折叠、组装与修饰

基因重组 是基因的重新组合，可发生在减一后期，四分体时期，以及基因工程导入基因。重组DNA 是DNA，就是通过基因工程技术接上了新基因的DNA重组质粒 是质粒，是接上了目的基因的质粒。基因重组是理论名字，重组质粒是基因工程技术的中间物，是载体。重组DNA 是结果。