菌种按常规接种后放在干燥、遮光、恒温环境中培养。室内温度以20℃20℃-24℃为适,不宜超过30℃,不低于8℃。松茸母种分离后20天左右,菌丝萌发出纯白色绒毛状的菌丝,70天左右长成3-5.5厘米直径的菌落。松茸母种识别,在PDA培养基上,松茸菌丝为纯白色,菌落表面气生菌丝扭结,形成毛刺状。母种因基质配方不同菌丝表现有差异。当蛋白陈含量为0.1%,菌丝仍为纯白色,菌落表面气生菌丝呈绒毛状,且不发生扭结。当蛋白陈含量为0.2%,菌落中央明显隆起,呈草帽状;表面气生菌丝长而多分枝,且旺盛致密。随着蛋白脉含量的增加,菌落中央隆起越高,草帽状菌落外沿越来越窄,隆起部位颜色越来越深,气生菌丝逐渐变短。当蛋白脉含量达1. 6%时,菌落呈半球形,颜色为浅黄褐色,组织化程度高,酷似松茸菌盖,半球直径可达1520毫米。解剖观察,质地致密多汁,有浓郁的松茸香味。松茸采用孢子分离后得到的菌种,其变异很大。其原因是由于单孢子是不出菇的,在多孢菌落中,不亲和、不交配和不孕菌丝大量存在,并与结实性菌丝交织混杂,挑选菌丝时的盲目性和风险性很大,常有栽培后不出菇或出菇率下降等现象。解决这一现象的方法有二:一是做好尖端菌丝的反复提纯工作;二是进行多次的出菇鉴定。