聚丙烯酰胺与丙烯酰胺的区别

甲叉双丙烯酰胺加少了会降低对小分子量的片段的分辨率。根据查询相关公开信息：甲叉双丙烯酰胺加少浓缩胶如果再低的话应该很难凝吧，但是从原理上应该也不太影响浓缩效果。甲叉双丙烯酰胺：是一种交联剂，可以将丙烯酰胺单体连接起来，形成聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶，主要用于分离蛋白质。

英文名：Bis-acrylamide英文别名 BIS; BISACRYLAMIDE; BIS(ACRYLAMIDO)METHANE; DIACRYLAMIDOMETHANE; MBA; METHYLENEBISACRYLAMIDE; napp; n,n"-methylenebis(2-propenamide); N, N-METHYLENE-BIS-ACRYLAMIDE; N,N"-METHYLENEBIS(ACRYLAMIDE)-HG; N,N"-METHYLENEDIACRYLAMIDE; N,N"-METHYLENESBISACRYLAMIDE; Acrylamide, N,N"-methylenebis-; Methylenediacrylamide; n,n"-methylenebis-2-propenamid; n,n"-methylenebis-acrylamid; N,N"-Methylidenebis[acrylamide]CAS号：110-26-9分子式：(H2C=CHCONH)2CH2分子量：154.17结构式：

起交联作用,为了把单体丙烯酰胺交联起来 化学聚合以过硫酸铵（APS）为催化剂,以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂 TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构.

是一样的！我们实验室用于丙烯酰胺交联的就是你说的那个“bis-acrylamide”，也就是N，N"-甲叉基双丙烯酰胺

甲叉双丙烯酰胺易挥发。甲叉双丙烯酰胺是是一种白色晶体粉末，无味，吸湿性极小，很容易就挥发。遇高温或强光则自交联，微溶于水、乙醇。

蛋白电泳所用丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺单体都毒性理论说配制凝胶形聚丙烯酰胺凝胶安全直接用手碰触没关系即使交联凝胶能保证没任何单体存要注意防护所配置凝胶储备液候要戴手套戴口罩制胶应手套保护防止皮肤接触工作台及清理实验室穿着实验服必要量物试验研究表明丙烯酰胺主要引起神经毒性；外殖、发育毒性神经毒性作用主要周围神经退行性变化脑涉及习、记忆其认知功能部位退行性变；殖毒性作用表现雄性鼠精数目力降及形态改变育能力降甲叉双丙烯酰胺强烈神经毒素末稍神经系统强破坏性间高浓度丙烯酰胺环境工作手指颤等症状另外配胶使用硫酸铵定毒性皮肤粘膜刺激性腐蚀性吸入引起、喉炎、气短咳嗽等眼、皮肤接触引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤口服引起腹痛、恶呕吐期皮肤接触引起变应性皮炎TEMED粘膜呼吸道组织及皮肤破坏作用：强神经毒性

本品因有取代基丙烯酰胺，因此具有一定的毒性。能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。应避免与人体长时间直接接触。误触应用清水洗净。在分子试验中它经常与丙烯酰胺组合使用，以配制聚丙烯酰胺凝胶的时候居多。

甲叉双丙烯酰胺：是一种交联剂，可以将丙烯酰胺单体连接起来，形成聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶，主要用于分离蛋白质。葡聚糖凝胶：用于不同大小蛋白质或多肽的分离。丙烯葡聚糖凝胶：用于分离球蛋白。

这个反应的方程式并不重要。因为这是一个聚合反应，了解其反应的原理和目的比反应方程式要有意义得多：1）首先，这两个化合物是不会自动反应的，需要引发剂的引发；2）在引发剂引发反应后，所进行的是聚合反应。反应所生成的物质是交联高分子化合物。其中甲叉双丙烯酰胺是交联剂。3）反应所生成的物质可以是水凝胶，或用于制备高吸水性树脂。

1、PAGE胶电泳缓冲液配置1）丙烯酰胺单体贮液：14.55g丙烯酰胺加上0.45g N，N"-甲叉双丙烯酰胺，先用40mL双蒸水搅拌溶解，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀至50mL，过滤。用棕色瓶4°C保存备用。2)浓缩胶缓冲液贮液(0.5mol/L Tris-HCl，pH6.8)：3.03gTris溶解在40mL双蒸水中，用4mol/L盐酸调pH6.8。再用双蒸水稀至50mL。保存在4°C备用。3)分离胶缓冲液贮液(1.5mol/L Tris-HCl，pH8.9)：18.16gTris溶解在80mL双蒸水中，用4mol/L盐酸调pH8.9。再用双蒸水稀至100mL，保存在4°C备用。4)10%（AP）过硫酸铵：0.1g过硫酸铵溶入1.0mL双蒸水，使用前新鲜配制。5)电极缓冲液(0.025mol/L Tris，0.2mol/L甘氨酸，pH8.3)：15.14gTris加上72.07g甘氨酸，用双蒸水稀释到5L。可在室温保存一个月。6）样品缓冲液（0.1mol/L Tris-HCl，pH6.8）：2ml浓缩胶缓冲液贮液加上1mL87%甘油、0.1mg溴酚蓝，用双蒸水稀释至10mL，可在-20°C保存6个月。2、Native-PAGE配方 分离胶： 双蒸水 6.6ml 30%丙烯酰胺溶液 8.0ml 1.5mol/L Tris(pH8.8) 5.0ml 10%过硫酸铵溶液 (W/V) 200μl TEMED 15μl 浓缩胶： 双蒸水 6.8ml 30%丙烯酰胺溶液 1.7ml 0.5 mol/ LTris(pH6.8) 1.25ml 10%过硫酸铵溶液 (W/V) 100μl TEMED 10μl 3、Native-PAGE电泳将玻璃板、胶垫、梳子用双蒸水洗干净，用酒精棉球擦拭，将电泳槽安装好，配制分离胶(12%)和浓缩胶(5%)如表1。过硫酸铵和TEMED最后加入，加入后聚合即开始，应立即混匀倒入两块玻璃板之间。分离胶倒入两块玻璃板间，应该留下适合的高度，使点样孔前端离分离胶有2.5cm左右的距离，在胶顶部缓缓加入约0.5cm高的双蒸水，待分离胶聚合完全后，倾去上层的双蒸水，用双蒸水清洗凝胶顶层，用吸水纸吸去残余的水滴。将浓缩胶倒入玻璃板夹层，插上梳子，待浓缩胶聚合完全后，拔去梳子，立即用双蒸水清洗点样孔。加入电极缓冲液，将样品用微量进样器点入点样孔底部，200伏电泳。当溴酚蓝到达分离胶时，电压改为250伏，继续电泳至溴酚蓝到达凝胶底部。将凝胶剥下，浸泡在100ml的底物液中，染色1小时，待胶带显色后立即照相。然后将凝胶进行常规的考马斯亮蓝染色。

丙烯酰胺在丙烯酰胺凝胶为主要材料。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O8，简称AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。丙烯酰胺凝胶用途用于酸相对分子质量的测定。用于油田注水井调整吸水剖面，将本品与引发剂等混合注入注水井高渗透层带，聚合成高粘度的聚合物。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点： ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N"甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。 ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一 般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。 ③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 ④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双 丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝 胶。 在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂和 另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺 成为自由基，发动聚合反应，加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。常用的引发剂 和加速剂的配伍如下表： 聚合反应催化剂配伍 引 发 剂 加 速 剂 （NH4)2S2O8 TEMED (NH4)2S2O8DMAPN 核 黄 素 TEMED 注：(NH4)2S2O8，过硫酸胺 TEMED：N，N，N，N";四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴 用过硫酸铵引发的反应称化学聚合反应；用核黄素引发，需要强光照射反应液， 称光聚合反应。 聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响： 1、大气中氧能淬灭自由基，使聚合反应终止，所以在聚合过程中要使反应液与空气 隔绝。 2、某些材料如有机玻璃，能抑制聚合反应。 3、某些化学药物可以减慢反应速度，如赤血盐。 4、温度高聚合快，温度低聚合慢。 以上几点在制备凝胶时必须加以注意。 凝胶的筛孔，机械强度及透明度等很大程度上由凝胶的浓度和交联决定。每100亳升 凝胶溶液中含有单体和交联剂的总克数称凝胶浓度，常用T%表达；凝胶溶液中交联剂 占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示，可用下式计算： 公 式 a：丙烯酰胺克数； b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升） 凝胶浓度过高时，凝胶硬而脆，容易破碎；凝胶浓度太低时，凝胶稀软，不易操作。 交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。 聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不防止对流减低扩散的能力，而且因为它具有三 度空间网状结构，某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大 小和形状，这是凝胶的分子筛作用。由于这种分子筛作用，这里的凝胶并不仅是单纯 的支持物，因此，在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外，还必须注意与凝胶本 身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）。可通过下式计算来选择适当的凝胶网 孔。 公 式 式中：P为网孔平均直径，C为多聚体浓度，d为该多聚体分子直径（若不是卷曲的分 子应为5A），K为常数，K值取决于涨胶的几何构型，假如多聚体的链是以近似于直角 交联的，则约为1.5根据此式，我们可以通过多聚体浓度C近似地计算出网孔直径，例 如已知多聚体浓度为5%，其网孔平均直径应为： 公 式 这样的计算是粗略的，与实际情况有一定距离，有人测定了总浓度（T）为20%的丙烯酰胺液，在六种不同比例的双丙烯酰胺存在 下，聚合后的网孔大小，发现孔径与总浓度有关，总浓度愈大，孔径相应变小，机械 强度增强，与总浓度不变时，甲叉双丙烯酰胺（Bis)的浓度在5%时孔径最小，高于或 低于此值时，聚合体孔径都相对变大，凝胶孔径在凝胶电泳中是一个重要的参数，它 往往决定了电泳的分离效果。经过不断的实践，得到了如表3所示的经验值，在一般情况下，大多数生物体内的蛋白质采用7.5%浓 度的凝胶，所得电泳结果往往是满意的，因此称由此浓度组成的凝胶为“标准凝 胶”。 对那些用于重要研究的凝胶，最好是通过采用10%的一系列凝胶浓度梯进行预先试验，以选出最适凝胶浓度。

主要用于分离蛋白质或者核酸，不同浓度的分辨率不一样，比如一定高浓度的胶可以分离质量分数为1000和1100的，而浓度降低后就难以实现1000与1100的分离。化学聚合以过硫酸铵（APS）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。扩展资料：在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，由于加入了变性剂——蛋白质变性剂常为SDS（SDS-PAGE），核酸变性剂常为尿素、甲酰胺等，故其分离仅依据于分子量大小。发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子表面活性剂和强还原剂（SDS，即十二烷基硫酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。SDS是阴离子去表面活性剂，作为变性剂和助溶试剂。能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链。参考资料来源：百度百科-SDS-PAGE

聚丙烯酰胺分解后对植物有害吗？　　之前已经给大家讲到了聚丙烯酰胺没有毒性，但是很多人还是对聚丙烯酰胺怀有恐惧感，原因就是在处理水的过程中，人类但是蔬菜、水果等植物受到危害，具有影响全人类身体健康的安全隐患，那么聚丙烯酰胺分解后对植物有害处没？　　聚丙烯酰胺本身及其水解体没有毒性，但是聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺两种物质聚合后的高分子有机产物，可以看出来，聚丙烯酰胺虽然没有毒性，但是并不代表着其合成聚丙烯酰胺的物质没有毒性，更何况丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺都是神经毒剂。另外，如果反应条件存在偏差，那么反应物质就会因反映不完全而产生剩余，那么聚丙烯酰胺就带有这种物质，可见不纯的聚丙烯酰胺是具有毒性的。　　在者，聚丙烯酰胺在水解过程中，会生成残留的单体丙烯酰胺，而单体丙烯酰胺具有较强的毒性，一旦中毒之后，破坏人体的神经系统，影响生殖和正常发育，整个人身体全身无力，运动失调，头晕混淆，眼前一片漆黑，这就是中毒的气象。　　聚丙烯酰胺分解后对植物有害吗?今年5月份就在一些蔬菜、土豆、番茄、玉米、大米等植物里面就检测到了聚丙烯酰胺，植物里产生聚丙烯酰胺来源于碳水化合物经过高温的暴晒而生成，而且其聚丙烯酰胺成份含量远远高于世界卫生组织规定的为0.5%---0.05%，高的吓人，这也就是为什么大家不喜欢吃日本生产的食品，原因就在这。　　如何避免受聚丙烯酰胺的毒害？　　　1、多吃富含纤维的食物，如各类谷物、水果蔬菜等，还要多吃低脂肪食品，最重要的是烹调过程要尽量简单化，尽可能避免温度过高、时间过长。　　　2、尽量避免过度烹饪食品温度过高或加热时间太长，但应保证做熟，以确保杀灭食品中的微生物，避免导致食源性疾病。　　3、提倡平衡膳食，减少油炸和高脂肪食品的摄入，多吃水果和蔬菜。　　4、提倡相关部门，对生产食物加工的企业进行全面的严格监督，保证食品的安全性，同时尽可能的减少食品中丙烯酰胺的可能途径。

聚丙烯酰胺（PAGE）是由丙烯酰胺聚合形成的高分子,这个聚合反应是自由基聚合，需要有引发剂产生自由基将反应引发过硫酸铵就是引发剂，而TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。过硫酸铵作为氧化剂和漂白剂，被广泛地用于蓄电池工业；它还用作聚合的引发剂、纤维工业的脱浆剂；并可用作金属及半导体材料表面处理剂、印刷线路的刻蚀剂；还广泛用于石油开采的油层压裂，面粉和淀粉加工业、油脂工业， 在照相工业上用来除去海波。扩展资料：浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。过硫酸铵检定和测定锰，用作氧化剂。漂白剂。照相还原剂和阻滞剂。电池去极剂。用于可溶性淀粉的制备。用作醋酸乙烯、丙烯酸酯等烯类单体乳液聚合的引发剂，价格便宜，所得乳液耐水性较好。还用作脲醛树脂的固化剂，固化速度最快。亦用作淀粉胶黏剂的助氧化剂，与淀粉成分中的蛋白质反应提高粘接性，参考用量为淀粉的0.2%～0.4%。也用作金属铜表面处理剂。参考资料来源：百度百科——过硫酸铵参考资料来源：百度百科——TEMED

1、浓缩胶的作用：有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带，在电泳的时候可以看到样品被压成一条线。2、分离胶的作用：有分离分子的作用，为电荷效用和分子筛效用。当样品从浓缩胶进入分离胶时，由于蛋白的分子量不一样，其在分离胶中的泳动速度不一样，这样就能够分离目的蛋白，蛋白越大，所对应的分离胶浓度应该越小，比如90k以上的蛋白一般用6%的分离胶来分离。扩展资料：分离胶和浓缩胶因为浓度不一样导致孔径不一样，蛋白在其中的泳动速度不一样。浓缩胶的浓度通常为3.9%，浓度比较小；浓缩胶中的孔隙较大，起到的作用是为了让蛋白质混合物在进入分离胶之前都到达同一起跑线，以便在分离胶中更好的分开，因此一定要充分跑完浓缩胶之后再调电压。分离胶的浓度从6%-15%不等，当样品从浓缩胶进入分离胶时，由于蛋白的分子量不一样，小分子的物质容易通过， 阻力小，迁移速度快；大分子的则受到较大 的阻力而被滞后。这样就能够分离目的蛋白。参考资料来源：百度百科-浓缩胶参考资料来源：百度百科-分离胶

1、醋酸纤维素薄膜电泳 ：醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物,它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成.醋酸纤维素膜薄是一种细密而又薄的微孔膜.醋酸纤维素膜对样品的吸附性较小,因此,少量的样品,甚至大分子物质都能得以较高的分辨率.又由于醋酸纤维素薄膜亲水性较小,故电渗作用也较小,并且它所容纳的缓冲液也较少,因此电流的大部分由样品传导,可以加速样品分离,大大节约电泳时间.醋酸纤维素具有操作简单、快速、价廉、定量容易等优点,尤其较纸电泳分辨力强、区带清晰、灵敏度高和便于保存、照相等,目前醋酸纤维素薄膜电泳己取代纸电泳而被广泛应用于科学实验、生化产品分析和临床化验,如分析检测血浆蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎儿甲种球蛋白、体液、脊髓液、脱氢酶、多肽、核酸及其他生物大分子,为心血管疾病、肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据,因而已成为医学和临床检验的常规技术.2、 琼脂糖凝胶电泳 ：琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳,其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用.琼脂糖凝胶具有网络结构,直接参与带电颗粒的分离过程,在电泳中,物质分子通过空隙时会受到阻力,大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大地提高了分辨能力.琼脂糖系天然的琼脂加工制得,天然琼脂是一种多聚糖,主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成.琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷.而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象.所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定,为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据.与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术,用于分离和检测抗原.可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰,如引入化学基团羟乙基,则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化,被称为低熔点琼脂糖.该温度低于DNA的熔点,而且凝胶强度又无明显改变.以此为支持物进行电泳,称为低熔点琼脂糖凝胶电泳,主要应用于DNA研究.如DNA鉴定,DNA限制性内切酶图谱制作等,为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段.3、聚丙烯酰胺凝胶电泳 ：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N,N"-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE).应用范围广,可用于蛋白质、酶、核酸等生物大分子的分离、定性、定量及少量的制备,还可测定分子量、等电点等. 4、等电聚焦电泳 ：等电聚焦电泳是利用具有pH梯度的电泳介质来分离等电点(pI)不同的蛋白质的电泳技术.这是六十年代后期才发展起来的新技术,基本原理是在制备聚丙烯胺胶凝胶时,在胶的混合液中加入载体两性电解质(商品名Ampholine).这种载体两性电解质是一系列含有不同比例氨基及羧基的氨羧酸混合物,其分子量在300～1000范围内,它们在pH2.5～11.0之间具有依次递变但相距很近的等电点,并且在水溶液中能够充分溶解.含有载体两性电解质的凝胶,当通以直流电时,载体两性电解质即形成一个从正极到负极连续增加的pH梯度.如果把蛋白质加人此体系中进行电泳时,不同的蛋白质即移动并聚焦于相当其等电点的位置.好的载体两性电解质应具有以下特点：在等电点处有足够的缓冲能力,不易被样品等改变其pH梯度；必须有均匀的足够高的电导,以便使一定的电流通过；分子量不宜太大,便于快速形成梯度并从被分离的高分子物质中除去；不与被分离物质发生化学反应或使之变性等.Ampholine是一种常用的载体两性电解质.要取得满意的等电聚焦电泳分离结果,除有好的载体两性电解质外,还应有抗对流的措施,使已分离的蛋白质区带不致发生再混合.要消除这种现象,办法之一加入抗对流介质,用得最多的抗对流支持介质是聚丙烯酰胺凝胶. 等电聚焦电泳与其它区带电泳比较具有更高的分辨率,等电点仅差0.01pH的物质即可分开；具有更好的浓缩效应,很稀的样品也可进行分离,并且可直接测出蛋白质的等电点.所以此技术在高分子物质的分离、提纯和鉴定中的应用日益广泛.但是等电聚焦电泳技术要求有稳定的pH梯度和使用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质易发生沉淀.

包埋法、交联法对细胞、酶的固定化操作及其比较一． 实验目的通过用聚丙烯酰胺包埋法和明胶——戊二醛交联法两种方法固定枯草杆菌菌体和细胞色素C，掌握细胞和酶的一些固定方法，并对它们进行固定效果的比较，了解这些固定方法的特点。二．实验原理 酶的固定化技术是用物理或化学的方法将水溶性的酶与固态的水不溶性载体结合，使之成为一种不溶于水的仍具有酶活性的物质。固定化酶的优点在于：1）可以反复使用；2）易与产物分离，便于产物的纯化处理，提高产物的产量和质量；3）多数情况下，比水溶性的酶稳定；4）适于装柱使用，有利于生产的连续化。细胞的固定是将产酶的微生物细胞直接固定在固态的水不溶性载体上，省去了细胞破碎以及酶提取等复杂的步骤。但要求所固定的微生物能让底物和产物易透过细胞膜并且细胞内不存在产物的分解系统。所以，要固定的细胞应该是有选择性的。本实验主要是学习固定的方法，并通过比较了解这些方法的特点。丙烯酰胺在一定条件下经催化可形成凝胶，把酶或细胞包埋在凝胶的网络空隙中，形成不溶性的酶的载体。明胶是一种惰性蛋白，当与细胞或酶蛋白混合后，就把酶或细胞包埋在明胶联成的网架之中。由于菌体细胞或酶蛋白的表面都有蛋白质游离氨基，当加入双功能团试剂戊二醛以后，戊二醛即和蛋白质游离氨基形成Schiff碱，因此，在明胶表面与菌体或酶蛋白表面之间发生错综复杂的交联，从而使酶或细胞固定化。三．主要仪器与试剂仪器：灭菌锅，摇床，冰箱，离心机，水浴锅，紫外-可见分光光度计等。试剂：蛋白胨，牛肉膏，明胶，戊二醛，丙烯酰胺（Acr），过硫酸铵（AP），甲叉双丙烯酰胺（Bis），四甲基乙二胺（TEMED），过氧化氢，邻苯二胺，细胞色素C等。四．操作步骤1．枯草杆菌细胞的培养 在超净台上将已灭菌的培养液（见实验二十七）5ml移置已灭菌的试管中，接种纯的枯草芽孢杆菌。在37℃摇床快速振荡培养8-10小时（培养液较混浊为止）。离心收集菌体，加3ml蒸馏水轻搅使菌细胞悬浮。2. 丙烯酰胺凝胶固定细胞色素C和菌细胞取50ml烧杯三只，各加入3ml 29%Acr-1%Bis混合液，2ml水。轻搅匀后，于1号烧杯中加入1ml菌细胞悬浮液、2号烧杯中加入1ml 0.13%细胞色素C液和在3号烧杯中加入水1ml作为对照，然后都加入10％过硫酸铵液70μl和TEMED8μl，轻搅匀后待凝。将凝固后的凝胶用水浸泡5分钟，其中换水3次。把凝胶放置滤纸上，用滤纸轻吸干，观察凝胶颜色。（可能的话，将包含菌细胞的凝胶切成较薄的薄片与对照一起在显微镜下观察）。将这几种凝胶切成小颗粒，分别取约0.5克放置于有滤纸的漏斗中，用水淋洗数次后移置试管中，各加入20mmol/L邻苯二胺4ml浸泡2分钟后加入10%过氧化氢0.04ml，混匀反应30秒，倒出上清液，以水为空白测定428nm处的吸光值，分析测定结果并解释。3. 明胶包埋—戊二醛交联法制备固定化细胞色素C和固定化菌细胞取50ml烧杯二只，各加入明胶1克，水4ml，于80℃水浴熔化，冷却至60℃左右分别加入2ml菌细胞悬浮液或0.13%的细胞色素C液，在搅动下迅速加入25%的戊二醛0.5ml，置于—20℃，三天后取出融化，观察比较。

利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳的支持物来分离蛋白质、核酸等大分子化合物的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。聚丙烯酰胺单体(Acr)与交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂过硫酸铵或维生素B2作用下聚合交联而形成三维网状结构凝胶。在催化过程中同时加入四甲基乙二胺作为加速剂。聚丙烯酰胺凝胶不但可以作为电泳支持物，同时具有分子筛的特点，其分子筛效应的孔径可由不同浓度的凝胶进行控制，因而其分辨率和敏感性很高。

你是说的在SDS-PAGE里面吧，浓缩胶的浓度比较低（5%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺），里面的孔径也比较大，所有的蛋白都能够在进入分离胶之前在同一水平线上（因为在你加样的时候蛋白是分布在加样孔中的，不在同一水平线上，就像运动员都不在起跑线上一样，无法比较）。分离胶的胶浓度比较大（>10%），里面胶孔径也比较小，这样施加电压的时候小的蛋白可以穿过孔跑到下面去，而分子量大的蛋白就可能被拦住，就跑的慢。通过这种方式以分子量大小的区别来分离蛋白质。如果你对sds-page详细的原理有兴趣或者不清楚的地方欢迎追问~

一般的方法：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量[原理] 十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量，是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。用这种方法测定蛋白质的分子量具有快速灵便，设备简单等优点。 蛋白质的电泳迁移率在一般的电泳方法中，主要取决于它在某PH下所带的净电荷量、分子大小（即分子量）和形状的差异性，而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对大多数蛋白质，主要取决于它们的分子量，与原有的电荷量和形状无关。 SDS是一种阴离子表面活性剂，在一定的条件下，它能打开蛋白质氢键和疏水键，并按比例地结合到这些蛋白质分子上形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物，每克蛋白质一般结合1.4克SDS。SDS与蛋白质的定比结合使蛋白质-SDS复合物均带上相同的负电荷，其量远远超过蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了蛋白质间原有的电荷差异。在水溶液中，蛋白质-SDS复合物具有相同的构象，近似雪茄烟形的长椭园棒（短轴均为1.8nm，长轴则随蛋白质的分子量成正比变化），克服了蛋白质间原有的形状差异。这样蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率不再受原有电荷和形状的影响，而只是蛋白质分子量的函数。蛋白质分子量与电泳迁移率间的关系可用下式表示：lgMr = K – bm式中 Mr为分子量；K为常数；b为斜率；m为迁移率。 因此，用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质的lgMr～迁移率的图中的位置，就能得知分子量。用本法测得的分子量，除单链蛋白质外，均不是天然蛋白质的完整分子量，而是组成这些蛋白质的亚基或肽链的分子量。本法对一些电荷异常，或构象异常，或带有大辅基的蛋白质不适用，如组蛋白F1和某些糖蛋白等。对一些结构蛋白如胶原蛋白等也不适用。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳按照凝胶电泳系统中的缓冲液、pH值和凝胶孔径的差异可分为SDS-连续系统电泳和 SDS-不连续系统电泳两类；按照所制成的凝胶形状和电泳方式又可以分为SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直管型电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳两类。本实验采用SDS-不连续垂直板型操作方法。通过实验使学生掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板式电泳的原理及技术，包括制胶、灌胶、加样、剥胶及固定染色等，学会用这些方法测定蛋白质分子量。[方法与步骤]一、加样液的制备 1、标准蛋白质加样液的制备 称取细胞色素，胰凝乳蛋白酶原，胃蛋白酶，卵白蛋白，牛血清白蛋白各0.5～1mg，置小离心管（Eppendorf管）中，加入样品溶解液1mL，充分溶解，如有不溶物应离心除去。沸水浴热处理3min，冷却备用。2、待测蛋白质加样液的制备根据待测蛋白质样品存在的状况而定。（1）固体待测蛋白样品，如为无盐的纯蛋白质固体制剂，加样液的制备方法同标准蛋白质加样液的制备；如为含盐的纯蛋白质固体制剂，应先加水充分溶解，对透析缓冲液透析 12～16h，然后吸取0.5mL（蛋白浓度应为0.5～1mg/mL），置Eppendorf管中，并加入等体积浓样品溶解液，沸水浴热处理3min，冷却备用。（2）液体待测蛋白样品，如为无盐的纯蛋白质液体制剂，则加入等体积浓样品溶解液，然后热处理；如为含盐的液体制剂，则需先透析。二、凝胶的制备1、凝胶板的准备（1）洗板将洗洁精用温水稀释后，用它浸透海绵擦洗玻板，然后用自来水洗净，再用酒精将板擦干。（2）安装制胶板制胶前将玻板与塑料嵌条和凹型陶瓷板的边缘对齐，下沿用密封胶带封口，用塑料夹子或铁夹子将两端夹好，注意要确保密封，安放在固定架上。2、分离胶和浓缩胶溶液的配制组 分分离胶/mL浓缩胶/mL凝胶贮备液2.50.26分离胶缓冲液（pH8.8）1.9—浓缩胶缓冲液（pH6.8）—0.510%SDS0.0750.02TEMED0.0260.02双蒸水3.051.2210％过硫酸铵0.0130.02总体积7.62注意：①最后加入10%过硫酸铵溶液，混合制成凝胶液，迅速灌制凝胶。②丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺均为神经毒剂，对皮肤有刺激作用。因此必须小心操作，不得吸入和接触皮肤，聚合完全聚丙烯酰胺凝胶无毒。3、制分离胶将制胶板垂直放好，插上与相应厚度的样品梳，在梳子下缘线1cm处做标记，卸下样品梳。将配好的分离胶溶液缓慢加入制胶板之间，直至液面达到标记处。用滴管贴近胶液界面小心而又缓慢地覆盖厚度约0.5cm的正丁醇层，以防止溶液蒸发并保证胶面平整。4、制浓缩胶分离胶聚合后，倒去正丁醇，用蒸馏水冲洗分离胶胶面两次，用滤纸吸去残液。用滴管将浓缩胶溶液加在分离胶面上，充满制胶板，插入样品梳。（三）电泳1、安装电泳槽浓缩胶聚合后，除去梳子、密封胶带以及六个铁夹。将制胶扳、电泳糟内芯、另一对制胶板依次放入槽内。两制胶板的凹型陶瓷板均应与电泳槽内芯接触。然后插入楔型板以固定两套制胶板。如果每次电泳只用一块胶板，必须用提供的有机玻璃板代替另一套制胶板。2、加样在内外水槽加注缓冲液，使内外槽的水位均超过凹形板的缺口但低于塑料板的上沿。用微量加样器在梳井内加样。3、电泳盖好上盖，在80V～100V的电压下电泳约3h，至溴酚蓝指示的电泳前沿到达制胶板的下缘止，关掉电源。然后拔掉楔形板，取下制胶扳。（四）染色、脱色用刀片或薄板将白塑料板与陶瓷板轻轻撬开，用刀片沿分离胶与浓缩胶的交接处，将分离胶切下，并在分离胶的左上角切掉一小角，以标记样品顺序。然后手戴橡胶手套将分离胶小心移入染色器皿中。在染色器皿中加入100mL考马氏亮蓝染液（含0.25%考马氏亮蓝R-250，30％乙醇，10％乙酸的水溶液），加盖，在摇床上染色2h。将染液倒回贮存瓶（可反复使用）。在染色皿中加入100mL脱色液（10％乙酸，30％乙醇），振荡脱色至蛋白条带清晰。[结果和计算]1、凝胶脱尽底色后，色带清晰显出。按实样描下或摄下电泳图谱。2、根据各蛋白迁移距离和染料迁移距离的比值，求出各蛋白的相对迁移率mr，然后作出lgMr～mr关系图，从图中找出未知蛋白mr对应的分子量。

丙烯酰胺凝胶凝固需要多长时间？ 正常胶应该在30分钟到1个小时就凝固了按29:1混和丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺配制成30％的储备胶这个30%的 Acr - Bis 保质期是有限的。

为什么s-100那条线 流速横坐标的时候再上 而样品体积横坐标的时候在下根据我的理解，因为这两个测试分辨率的上样样品是不一样的，一个写的是混合蛋白的样品，一个写的是单纯的卵白蛋白。所以这两个测试图之间没什么关联。只能说明S-100在不同流速时对三个混合蛋白的分辨率高于S-300，而在不同上样体积时对卵白蛋白分辨率低于S-300。这个填料的100、200、300指代什么Sephacryl是一种合成柱料，是由烯丙基葡聚与N,N-甲叉二丙烯酰胺共价交联形成的高机械强度的疏水性填料，葡聚糖的组成比例决定了填料孔洞的不同。所以-100，-200，-300在不同的分子量范围时选择性不同，也就是分辨率不同。具体来说，S-100适合分子量1000~10000的球蛋白。S-200适合分子量5000~25000的球蛋白，S-300适合分子量10000~1500000的球蛋白。

　　山东省泰和水处理有限公司（原枣庄市泰和化工厂）位于山东省南部—枣庄市市中区。　　公司始建于1998年，是水处理剂（水处理药剂）专业生产商。生产多个系列，数十个品种的水处理剂（水处理药剂），年产水处理剂两万多吨，是国内较大的水处理剂专业生产厂，也是国内水处理药剂品种最全的厂家之一。　　公司建有合成和应用实验室，有一支专业的研发队伍，通过数年的努力，现已形成了包括阻垢剂、缓蚀剂、杀菌灭藻剂、消毒剂、清洗剂、预膜剂、螯合剂、分散剂等从单体到复合药剂门类齐全的水处理剂产品体系。广泛应于工业循环水系统，锅炉及采暖水系统，反渗透膜用药剂（膜阻垢剂、膜分散剂、膜杀菌剂等）。　　除常规液体产品外，公司利用给国外客户开发高纯产品的技术，开发并生产了有机膦系列晶体（固体）产品，并成为我们的优势产品，晶体产品有高纯和普通工业品，有酸性晶体和固体钠盐，以满足不同领域的需要。以TH-3100为代表的高性能聚合物产品性能已达到或超过了国外同类产品性能，批量出口三年以上。与多家跨国公司有着较紧密的合作关系。　　产 品 目 录　　一、有机膦系列阻垢缓蚀剂、螯合剂　　(1) 氨基三甲叉膦酸 ATMP　　(2) 羟基乙叉二膦酸 HEDP　　(3) 乙二胺四甲叉膦酸钠EDTMPS　　(4) 乙二胺四甲叉膦酸 EDTMPA　　(5) 二乙烯三胺五甲叉膦酸 DTPMP　　(6) 2-膦酸丁烷-1,2,4-三羧酸 PBTCA　　(7) 多元醇磷酸酯 PAPE　　(8) 2-羟基膦酰基乙酸 HPAA　　(9) 己二胺四甲叉膦酸HDTMPA　　(10) 多氨基多醚基甲叉膦酸 PAPEMP　　(11) 双1，6亚己基三胺五甲叉膦酸BHMTPMPA　　(12) 高效溶锌剂　　二、有机膦酸盐　　(13) 氨基三甲叉膦酸四钠 ATMP.Na4　　(14) 氨基三甲叉膦酸五钠 ATMP.Na5　　(15) 氨基三甲叉膦酸钾 ATMP.Kx　　(16) 羟基乙叉二膦酸钠HEDP.Na　　(17) 羟基乙叉二膦酸二钠HEDP.Na2　　(18) 羟基乙叉二膦酸四钠HEDP.Na4　　(19) 羟基乙叉二膦酸钾HEDP.Kx　　(20) 乙二胺四甲叉膦酸五钠EDTMP.Na5　　(21) 二乙烯三胺五甲叉膦酸五钠DTPMP.Na5　　(22) 二乙烯三胺五亚甲基膦酸七钠DTPMP.Na7　　(23) 二乙烯三胺五甲叉膦酸钠DTPMP.Nax　　(24) 2-膦酸丁烷-1,2,4-三羧酸四钠PBTCA.Na4　　(25) 己二胺四甲叉膦酸钾盐 HMDTMPA　　(26) 双1，6亚己基三胺五甲叉膦酸钠BHMTPh.PN（Nax）　　三、聚羧酸类阻垢分散剂、水性专用分散剂　　(27) 聚丙烯酸PAA　　(28) 聚丙烯酸钠PAAS　　(29) 水解聚马来酸酐HPMA　　(30) 马来酸-丙烯酸共聚物MA-AA　　(31) 丙烯酸-2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸共聚物AA/AMPS　　(32) 丙烯酸-丙烯酸羟丙酯共聚物T-225　　(33) TH-241 丙烯酸-丙烯酸酯-膦酸-磺酸盐四元共聚物　　(34) TH-613 丙烯酸-丙烯酸酯-磺酸盐三元共聚物　　(35) 膦酰基羧酸共聚物POCA　　(36) TH-1100聚丙烯酸盐　　(37) TH-2000改性聚羧酸盐　　(38) TH-3100羧酸盐-磺酸盐-非离子三元共聚物　　(39) TH-904水性分散剂　　(40) 聚环氧琥珀酸（钠）PESA　　(41) 聚天冬氨酸（钠） PASP　　四、杀菌灭藻剂、粘泥剥离剂　　(42) 十二烷基二甲基苄基氯化铵1227　　(43) 异噻唑啉酮　　(44) 稳定性二氧化氯溶液ClO2　　(45) 杀菌剂 优氯净　　(46) TH-401复合型杀菌剂　　(47) TH-402复合型杀菌剂　　(48) TH-406高效复合杀菌剂　　(49) TH-409高效粘泥剥离剂　　五、复合专用阻垢缓蚀剂、清洗预膜剂　　(50) TH-503型锅炉专用缓蚀阻垢剂　　(51) TH-503B型高效锅炉除垢剂　　(52) TH-504型高效采暖水专用缓蚀阻垢剂　　(53) TH-601型钢铁厂专用缓蚀阻垢剂　　(54) TH-604型电厂专用缓蚀阻垢剂　　(55) TH-607型油田回注水专用阻垢剂　　(56) TH-607B型钡锶专用阻垢剂　　(57) TH-610型高效灰水阻垢剂　　(58) TH-619B 型缓蚀阻垢剂　　(59) TH-628型缓蚀阻垢剂　　(60) TH-682型低硬度水缓蚀阻垢剂　　(61) TH-701型不停车中性清洗预膜剂　　(62) TH-706清洗除油剂　　(63) TH-707高效预膜剂　　六、铜及盐酸酸洗缓蚀剂　　(64) 苯骈三氮唑（BTA）　　(65) 巯基苯骈噻唑（MBT）　　(66) 甲基苯骈三氮唑（TTA）　　(67) 盐酸酸洗缓蚀剂　　七、反渗透药剂、反渗透阻垢剂、反渗透清洗剂、反渗透杀菌剂　　(68) TH-0100型反渗透阻垢剂、分散剂　　(69) TH-150型反渗透阻垢剂、分散剂　　(70) TH-200型反渗透阻垢剂、分散剂　　(71) TH-191反渗透阻垢剂、分散剂　　(72) THR-2000反渗透阻垢剂、分散剂　　(73) THASD-200反渗透阻垢剂、分散剂　　(74) TH-260反渗透清洗剂（酸性）　　(75) TH-261反渗透清洗剂（碱性）　　(76) 反渗透膜专用杀菌剂TH-410　　(77) 反渗透膜专用杀菌剂TH-416　　http://www.th-chem.com　　http://www.thchem.cn　　http://www.thwater.com　　http://www.thwater.net　　http://www.thwater.ws　　http://www.thwater.us　　http://www.thwater.co.uk　　http://www.taihewater.com　　http://www.taihe-water.com　　http://www.shuichuliji.com　　http://www.shuichuliyaoji.net.cn　　http://www.th-water-treatment.com　　http://www.watertreatmentchemical.tw　　http://www.watertreatmentchemical.us　　http://www.watertreatmentchemical.hk　　http://www.watertreatmentchemical.in　　http://www.watertreatmentchemical.ru

聚丙烯酰胺一般是无毒的，它是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合后的产物，但是也要注意，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺都是神经毒剂，聚丙烯酰胺里面可能会含有没有聚合的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，所以使用时要小心，不过好的护手霜里面含量应该是很小的，不用担心。

过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂，在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。AP是过硫酸铵，用于产生自由基,自由基引发丙烯酰胺聚合；TEMED是N,N,N",N"-四甲基乙二胺，用于催化APS产生自由基。扩展资料：化学工业用作制造过硫酸盐和双氧水的原料,有机高分子聚合时的助聚剂、氯乙烯单体聚合时的引发剂。油脂、肥皂业用作漂白剂。还用于金属板蚀割时的腐蚀剂及石油工业采油等方面。食品级用作小麦改质剂、啤酒酵母防霉剂。用作醋酸乙烯、丙烯酸酯等烯类单体乳液聚合的引发剂，价格便宜，所得乳液耐水性较好。还用作脲醛树脂的固化剂，固化速度最快。亦用作淀粉胶黏剂的助氧化剂，与淀粉成分中的蛋白质反应提高粘接性，参考用量为淀粉的0.2%～0.4%。也用作金属铜表面处理剂。参考资料来源：百度百科-过硫酸铵

APL胶是AP：乙丙橡胶，英文名称：PS：聚苯乙烯 英文名称:Polystyrene 是一种热塑性树脂，由于其价格低廉且易加工成型。过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂，在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。APL材料AP：乙丙橡胶英文名称：PS：聚苯乙烯英文名称：Polystyrene是一种热塑性树脂，由于其价格低廉且易加工成型。AP材料是指材料的安全性通过了毒物学专家的检测，证明产品成分中不包含足够量对人体造成伤害或有毒作用的原料，不会对人体造成急性或慢性的伤害，AP标签正在取代原有的无毒标签CP和HL，带有AP标签和性能认证证书的产品被认证为满足ACMI和其他标准机构制定的材料、工艺、质量和颜色的特殊标准。

有害的，首先制胶中使用丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺具有神经毒性作用，人体吸收后可致基因突变。裂解液含PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤。过硫酸铵对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性。甲醇有较强的毒性，对人体的神经系统和血液系统影响大。DAB有较强的致癌性。 这只是我自己的看法，呵呵。

SDS-PAGE是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术.聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成.催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法.化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂,以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂.在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构. PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应.不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳.不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成.浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1.分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1.电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液.2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素. SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构.而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂.在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异. 所以,聚丙烯酰胺为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否,与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液选择tris－HCL系统,AP提供自由基,TEMED是催化剂,催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基硫酸钠（SDS）为阳离子去污剂,作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠.

聚丙烯酰胺凝胶电泳　作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 　　而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。 编辑本段作用　　SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 　　SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。 　　浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。 　　此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。 　　聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis） 聚丙烯酰氨凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。 　　PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 编辑本段过程　　蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小 和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白 质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量， 因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改 变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A(1A=10的负十次方米），这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不 再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

毒性不明，正在研究中因为饮用水也在使用PAM，当然是食品级的了，可见毒性不是很大有文献说PAM对皮肤会有伤害另外，聚丙烯酰胺是用丙烯酰胺+双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成,但总残存少量单体的丙烯酰胺、双丙烯酰胺，而这两者都是可经皮吸收的有毒物质。

￥5.9百度文库VIP限时优惠 现在开通,立享6亿+VIP内容立即获取(完整)羟甲基丙烯酰胺 中华文苑产品一：产品名称：N―羟甲基丙烯酰胺水溶液(NMA—48)英文名 N—Methylol Acrylamide分子式 ：CH2CHCONHCH2OH分子量：101。1一、产品说明 NMA是一种特殊的单体,其分子结构中含有两个官能团，即乙烯基和羟甲基.通过乳液聚合或溶液聚合第 1 页希思黎全能乳液-赋活润泽，重焕肌肤光泽臻选多种植物精粹成分，令肌肤维稳强韧，回复平衡状态，缓解外界刺激，增强肌肤抵抗力，柔润滋润肌肤。点击立即咨询，了解更多详情咨询法国希思黎中国官网 广告NMA可与多种乙烯基单体进行共聚，得到热塑性聚合物。这种聚合物的大分子链上有羟甲基侧基,在一定条件下会发生自交联,因此不需要另外加入交联剂便可以得到交联结构的聚合物。NMA共聚物的交联，在常温干燥时即可进行，添加催化剂或加热可提高交联速度，多种物质被发现能有效地促进交联.NMA中的羟甲基能进行许多反应，如在一定条件下可与丙烯酰胺、醇、酚、对苯二酚及磷酸等反应，有些反应已被有效地利用。第 2 页 本公司根据客户的不同需要，生产了N-羟甲基丙烯酰胺48%水溶液（普通型）、超低游离醛N-羟甲基丙烯酰胺48％水溶液（超低醛型）二种型号的单体。其中普通型使用方便、经济，超低醛型适合于对游离甲醛要求高的产品。二、规格及特性项 目NMA-48普通型超低醛型外观无色或淡黄色透明液体无色或淡黄色透明液体颜色，Pt-Co<50<50含量（溴化法）,％48±248±2游离甲醛，%<2.0〈0。35水分,%50-5450-54阻聚剂(MEHQ)50ppm50ppmPH值6.0—8.06。0-8.0比重(25℃）1。101。10第 3 页三、用途 NMA是一种重要的化工原料, 广泛应用于各种合成高聚物中, 如涂料、粘合剂、造纸助剂等。NMA在化学工业和科学研究中具有巨大的应用潜力.四、包装 NMA水溶液为塑料桶包装,每桶净重200KG或1000KG。五、贮存与使用第 4 页 于阴凉处保存,远离热源，避免强光照射。热和光会引发NMA聚合，尤其是在有酸或金属杂质存在的情况下。 NMA水溶液在低于–10℃时，会产生结晶，可用温水浴慢慢加热使结晶溶解，这并不影响NMA质量和性能,贮存温度超过28℃以上的情况应尽力避免. 即使在理想的贮存条件下，NMA最好不要超过三个月的贮存期. 当桶内NMA溶液可能受到外来物第 5 页质污染时，不应该打开盖子。抽取或盛装NMA溶液的器具必须清洁，避免受杂质污染，取完一次用量后应迅速拧紧盖子。六、安全与卫生 本品不燃不爆,有毒，切勿吞服及吸入，接触皮肤后立即用水冲洗.产品二：产品名称：固体N-羟甲基丙烯酰胺（NMA—98）分子式 :CH2CHCONHCH2OH第 6 页分子量：101。1一、产品性质：本品极易溶于水，在亲水性溶剂中有一定溶解性。溶于热的丙烯酸、甲基丙烯酸及其脂类，而不溶于烃类等疏水溶剂。二、产品用途：本品是交联型丙烯酸树脂的重要交联剂和改性剂，具有良好的交联性能。它既能与其它单位共聚,有能起横向交联作用。一般使用量为10％左右。可广泛应用与丙烯酸类水溶剂料、印花粘合剂、喷胶棉粘合剂、无纺布粘合剂第 7 页、织物除水涂层胶、静电植绒粘合剂、皮革涂饰剂，羊毛织物、防缩耐磨整理剂、金属表面处理涂料、纸制品的不干胶、纸张增强剂等等。三、质量标准:项 目NMA98外观白色晶体含量（溴化法)≥97％游离甲醛≤0.5%总醛量≥29％ 水分 ≤0.1％ 水溶性合格第 8 页四、注意事项1、 运输：在运输途中应装于篷布车厢中，防止日晒雨淋,夏季更要注必须在晚间气温低的情况下进行运输，以免受高温发生聚合变质.2、 贮存：应贮存在温度不超过25℃，干燥、避光、通风干净的库房内，贮存期为六个月，不准放在室外和阳光直射的地方。产品三：产品名称：N，N"－亚甲基双丙烯第 9 页酰胺 又名：甲撑双丙烯酰胺、N,N"—甲叉基双丙烯酰胺 英文名： N，N"－Methylene bisacrylamide (MBA） 第 10 页一、产品说明 MBA系丙烯酰胺衍生物，其分子结构为: 分子量154。17,外观为白色或浅黄色粉末状晶体;毒性低，小白鼠经口LD50为390mg/kg，对皮肤无刺激，无神经毒性;溶于水及乙醇、丙酮等有机溶剂。MBA具有两个相同且非常活泼的反应性官能团，可与丙烯酸、苯乙烯、醋酸乙烯酯、乙烯等乙烯基单体发生聚合反应，在医药、造纸、电子、日用化工、涂料、粘合剂和水处理等方面具有广第 11 页泛的用途。　二、规格及特性外观白色晶体含量≥99％水分≤0。5%水不溶物≤0。5%三、用途 广泛应用于离子交换树脂、高吸水树脂、粘合剂、涂料、增稠剂、堵漏剂、合成纤维、保温材料及感光材料等。 四、贮存与包装 于阴凉处密封贮第 12 页存，远离热源，避免强光照射。纸箱包装，内衬聚乙烯袋，每箱10kg.产品四：产品名称：丙烯酰胺水溶液 英文名 Acrylamide (AM)一、产品说明 分子式:CH2=CHCONH2 分子量：71．08第 13 页结晶点：8-13℃沸 点:99—104℃ 丙烯酰胺纯品为白色片状结晶体，水溶液为无色或淡黄色透明液体，易溶于水、丙酮、乙醇，不溶于苯。放阴暗处较稳定，在熔点或紫外光照射下易聚合。 本公司丙烯酰胺系采用微生物法生产，与传统的化学法工艺相比，产品纯度高，铜离子含量极低，特别适用于制造高聚合度、分子量分布比较整齐的聚合物。二、技术指标项目30％水溶液50％水溶液外观无色或淡黄色透明液体无色或淡黄色透明液体含量，％30±150±1PH值6-86-8色度，Hazen≤3080阻聚剂（MEHQ）, ppm30100第 14 页三、用途 AM是一种重要的化工原料，主要用于生产各种均聚、共聚及改性的聚丙烯酰胺，其聚合物或共聚物可用做絮凝剂，钻井泥浆处理剂、堵水剂、选矿剂、织物处理剂、纸力增强剂和水处理剂等.四、包装 200KG、1000KG塑料桶包装或专用槽罐车。第 15 页五、注意事项：(1）丙烯酰胺水溶液应避免高温和暴晒，防止发生自聚。（2)丙烯酰胺水溶液有毒，应避免人体直接接触.产品五：产品名称：丙烯酰胺晶体分子式：CH2CHCONH物理特性：白色、晶体。无臭、有毒。比重1.122（20/4）熔点：84－85℃沸点：125℃溶于水和乙醇，微溶于第 16 页苯和甲苯。一、技术指标:项目指标外观白色结晶体含量≥％98阻聚剂040%溶液电导率(us/cm）8—1240%溶液PH（试纸)5。5-7.5第 17 页二、生产方法：丙烯酰胺水溶液在低温下结晶、过滤、干燥。三、主要用途：其聚合物或共聚物可用做絮凝剂,钻井泥浆处理剂，堵水剂，选矿剂等.四、包装规格：每袋25Kg,有聚乙烯内衬袋。保质期：12个月。五、注意事项：(1)本品毒性较大，应避免人体直接接触。(2)本品易升华，应注意密封保存。聚丙烯酰胺一、产品特性第 18 页造纸污水用聚丙烯酰胺是根据造纸污水的特点专门研制的一种产品，具有适用性强，用量少等特点。使用本产品后，出水浊度低,COD值低，能达到很好的絮凝效果。二、质量指标产品型号外观固含量(％）离子度分子量溶解时间AA2518白色颗粒≥89高中高≤50minC7800白色颗粒≥89低高≤50minC7850白色颗粒≥89低高≤50minC7801白色颗粒≥89中低高≤50minC7600白色颗粒≥89低中≤50minC7650白色颗粒≥89低中≤50minC7601白色颗粒≥89中低中≤50min第 19 页三、应用领域1、用于造纸污水处理,可用于气浮或沉淀工段中.2、用于各类造纸污泥脱水. 四、使用说明1、单独使用时应配制成稀溶液，一般使用浓度为0。1－0.3%（指固含量)。应使用中性、低硬度的水溶解，水中不应含有悬浮性物质和无机盐。 2、应根据处理工艺选择适宜的产第 20 页品，投料量应根据被处理水的浓度或污泥的含水率来确定。 3、认真选择投放点和搅拌速度,既要保证聚丙烯酰胺稀溶液分散均匀,又要避免絮体的破碎。 4、与溶液接触的设备最好用不锈钢、塑料、玻璃钢或表面涂树脂的碳钢制造。5、配成溶液后应尽快使用。五、产品包装使用衬聚乙烯塑料的包装袋包装,第 21 页每袋25公斤或根据用户需求.保质期2年。　六、注意事项干粉产品容易吸潮,保存时注意防潮防湿。应存于通风、干燥库房，防潮湿、雨淋，勿裸露于空气中和日照下。产品六：产品名称:防腐杀菌剂一、产品说明第 22 页 本产品与国外商品名称“KATHON CG”（卡松和凯松)系防腐剂相同,其活性成份为（A）2—甲基-4—异噻唑啉-3-酮和（B）5—氯-2—甲基-4-异噻唑啉—3-酮，不含任何重金属，能穿透生物的细胞壁进入细胞内部，并与细胞的核酸(RNA和DNA）上碱基结合，从而可以抑制微生物的再生，此机理保证了产品的高效性和广谱性,且微生物难以产生抗药性，是一种不含甲醛及甲醛释放物、高效、广谱、低毒的环保型工业用防腐杀菌剂。第 23 页二、技术指标项目防腐杀菌剂外观浅蓝色透明液体有效成份含量,%1。5—2。5氯比（A：B）1：2。6-3。5pH值（1%水溶液）3-5溶解性溶于水、低分子醇、乙二醇等第 24 页三、产品应用 用于水性涂料、油墨、粘合剂，纺织助剂，金属切削液，洗涤剂，工业循环水等。四、特点 1、杀菌、抑菌，高效、广谱; 2、与水混溶性好，使用方便; 3、不燃、毒性低； 4、不含甲醛或甲醛释放物;第 25 页 5、环境中易分解、不积累.五、使用方法及用量 该产品是一种液体产品，可直接添加到物料中，在室温下混合均匀即可.根据产品组成及应用环境的具体情况，其添加量大致为0.05-0。3%。六、包装规格 25kg塑料桶包装,也可根据用户要求进行包装。七、保质期第 26 页 本品在避光和常温下保质期为一年。八、注意事项 1、本品指定为Ⅱ类腐蚀性化学品，应避免与皮肤直接接触，切勿溅放眼内！一旦接触，应立即用大量清水冲洗，不可延误！人工操作时应配戴防护眼镜和防酸手套； 2、本品贮存过程中不可与还原性金属接触，如金属铁、铝等，以免导致产品分解；第 27 页 3、本品在强碱性介质（PH〉9.5）中稳定性差，不宜使用.产品七：产品名称：纸张干强剂一﹑产品概述 本品是两性聚丙烯酰胺类纸张干强剂，是在日本技术的基础上改进研发的最新产品。其作用机理为:纸张干强剂由于引进特殊阳离子结构,形成网状的高分子结构,从而增加了纤维与纤维的相交面积中氢键结合第 28 页的数量 ，纸张干强剂中长链聚合物在结合面积内可以变形，增加了结合键的韧性，通过化学作用形成架桥能力使纤维与纤维相互牵连有效地提高纸张强度，同时达到一定的助留助滤效果，减少细小纤维的流失，降低白水浓度. 本品可应用于各类包装用纸和文化用纸的生产过程,可显著增加纸和纸板的干强度，改善纸张的物理性能，节约优等浆的用量，提高生产效率，降低成本，增加经济效益。第 29 页百度文库 搜索n-羟甲基丙烯酰胺生产出来的丙烯酸乳液需要过高温吗继续阅读本文档APP内免费读全文免费读(完整)羟甲基丙...全文APP打印导出为WORD导出为PDF发送至微信版权说明：应版权方要求与设置，本文档不支持阅读全文，请购买后查看全文相关文档丙烯酰胺一、丙烯酰胺：分子式： 丙烯酰胺为一种白色晶体化学物质，是生产聚丙烯酰胺的原料。易溶于水， 乙醇、乙醚、丙酮本品易聚合和共聚；在酸碱环境中可水解成丙烯酸。 二、丙烯酰胺三个主要来源途径 1、直接从氨基酸生成7720阅读 优质内容免费获取全文(完整)羟甲基丙烯酰胺1000阅读免费获取全文羟甲基丙烯酰胺6440阅读 热度文档免费获取全文N-羟甲基丙烯酰胺2759阅读查看更多为您精选(完整)羟甲基丙烯酰胺会员文档391篇邻苯二甲酸二辛酯PPT(完整版)1000人阅读(完整)羟甲基丙烯酰胺1815人阅读热门TOP羟甲基丙烯酰胺6440人阅读N-羟甲基丙烯酰胺2845人阅读立即开通VIP(完整)羟甲基丙烯酰胺_丙烯酸乳液水性聚碳聚氨酯乳液树脂-免费拿样(完整)羟甲基丙烯酰胺，丙烯酸乳液-一款阴离子单组份聚碳聚氨酯乳液树脂，沸水浇淋不发白，不起泡，耐水耐磨耐碱。手感滑爽。适用于高耐性要求的软质基材表面涂层，如:革面涂层，面料涂层，水性光油等。yihuagong99.com广告(完整)羟甲基丙烯酰胺_丙烯酸乳液丙烯酸乳液银排树脂-免费拿样(完整)羟甲基丙烯酰胺，丙烯酸乳液-专门生产无溶剂环保无甲醛的银粉漆树脂，干燥快附着力强，耐水性好，柔韧性强。环保无人为添加溶剂，无甲醛及甲醛释放物。适用于3C，家电漆等领域。yihuagong99.com广告(完整)羟甲基丙烯酰胺_阳离子聚丙烯酰胺乳液-厂家直发-无中间商赚差价-现货(完整)羟甲基丙烯酰胺，阳离子聚丙烯酰胺乳液聚丙烯酰胺厂家直供，几十种型号，各类污水均可快速净化，阳离子聚丙烯酰胺乳液，免费邮寄样品试用，技术员到厂技术跟踪指导操作，，点击直销出厂报价web.ddoubloc.com广告基于你的浏览为你整理资料合集n-羟甲基丙烯酰胺生产出来的丙烯酸乳液需要过高温吗文件夹羟甲基丙烯酰胺 - 百度文库4.1分 7440阅读 热度TOPNMA N-methylol acrylamide N-羟甲基丙烯酰胺 - 百度文库2.9分 2527阅读 值得一读N-羟甲基丙烯酰胺 - 百度文库4.1分 2204阅读剩余19篇精选文档APP内一键获取全部合集2045人已获取工具收藏 APP获取全文获取文档下一篇

n,n′-亚甲基双丙烯酰胺；旧称甲叉基双丙烯酰胺。白色或微黄色结晶或粉末。工业品熔点180～185℃。表观密度1.24g/cm3(30℃)。部分溶于水,溶于丙酮,微溶于苯。对皮肤有刺激性。水和丙酮的溶度参数差多了，极性也有差异，你用别的溶剂或混合溶剂试试，也可以试试加热（加阻聚剂防止自聚）。

temed打翻了怎么办？转眼间，到了一个毕业的季节。年初的时候，我在一所二本大学读大四，信心满满出来找实习。但事与愿违，学了四年生物，才知道找个实习都这么难：本科学历，成绩不好，人际关系太少。最后我去了南京一家生物公司做实验员实习。这份工作其实真的没有什么技术含量，我每天的任务就是做Western Blot实验和利用SDS-PAGE进行蛋白染色：每天我都要配几十块胶、做十几种样本的Western。因为这家公司是做抗体的，Western Blot就成了必不可少的质检环节。所以，公司雇了好多像我一样的实验员，天天在重复这些劳动。过了不久，我就对这份工作十分失望：天天配胶跑Western Blot，这也太TM无聊了吧！于是我开始混日子的生活，白天玩手机，晚上打游戏，做实验也是应付了事。现在回想起来，如果一直这么下去，我这辈子可能也就这样了。直到后来，一次意外事故彻底改变了我的命运。那天我手头的活特别多，所以同事们都去食堂吃午饭了，只有我留在实验室加班配胶。本来我的工作态度就不是特别积极，正好赶上在跟女朋友闹分手，更加心不在焉。在配胶的时候，我随手把一瓶TEMED放在了桌子边上 - 不料，我拿移液器的时候忘了这事，一下子把这瓶TEMED打翻在地上了。一股浓重的鱼腥味扑面而来，我当场就慌了：我还在实习期，犯这种低级错误肯定要被领导扣分，影响我正式签约可就完蛋了。于是我决定掩盖自己的“罪行”。我迅速拿了一个袋子，把碎玻璃收进去，然后用吸水纸把地面擦干净，全部带到外面的垃圾桶扔掉。最后又从仓库拿了一瓶新的TEMED摆上。但这个味道实在是去不掉，我只能喷点酒精掩盖一下，然后打开通风机猛抽一阵。因为过于慌乱，我在处理时没带口罩，当场被熏的肺不舒服。虽然早就听老师说这东西有毒，但我也没在意那么多，以为透透气就好了。下午的时候，我还对自己的“机智”非常得意，根本没人发现这件事。但是很快，我就付出了惨重代价。我很快就觉得头晕眼花，四肢无力，眼睛居然也开始疼。我坚持了一会，发现自己根本站不住了。趁着自己还有点力气，我赶紧去跟领导请假，打车火速赶往医院。肌电图检查结果出来之后，我吓了一跳：神经损伤？不会植物人了吧！医生很严肃的告诉我，四甲基乙二胺（TEMED），是一种很强的神经毒剂（跟刺杀金正男的毒剂是一个类型的。。。），对黏膜、上呼吸道、眼睛和皮肤的组织有极大的破坏作用，还会对神经系统造成很大影响，重度中毒很可能会瘫痪！可以说这次多亏我带了手套，不然小命难保了。没办法，我最后在医院里躺了3天，回家休养了两个星期。这次惊心动魄的事故，彻底改变了我。在家养病期间，我开始反省自己：这种混日子、不上进的生活不能再继续下去了。我甚至意识到，自己连配胶的成分都没有关注过，只是照着protocol机械操作。SDS-PAGE实验里哪些东西有毒性，我居然没有概念。我查阅了各种资料，发现配胶过程中竟然充满了这么多危险试剂：丙烯酰胺-甲叉丙烯酰胺（Arc-Bis）：中等毒性，神经毒剂。低浓度接触数月数年后，渐出现头痛头晕疲劳，嗜睡，手指剌痛，麻木感，常伴有两手掌发红，脱屑，手掌足心多汗。过硫酸铵（APS）：对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性.吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽等.眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤.口服引起腹痛、恶心和呕吐.长期皮肤接触可引起变应性皮炎.。SDS：对粘膜和上呼吸道有刺激作用,对眼和皮肤有刺激作用.可引起呼吸系统过敏性反应。TEMED：不用多说了，非常强的神经毒剂，我就是中了它的毒。（大家千万要注意带着口罩操作实验，防止误吸）DTT二硫苏糖醇：可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。另外，万万没想到的是自己经常做的蛋白染色过程中，考马斯亮蓝g250也是有毒的：接触会腐蚀皮肤，吸入会损伤黏膜。

[实验九　血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳] 【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。【实验原理】1．聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶，由丙烯酰胺（Acrylam [蛋白质 血清 电泳 酰胺 聚丙烯 凝胶 缓冲液 电泳]【实验目的】1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程。3.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳的特点和应用范围。【实验原理】1．聚丙烯酰胺凝胶的聚合原理聚丙烯酰胺凝胶(PAG)是一种人工合成的凝胶，由丙烯酰胺（Acrylamide简写为Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（N，N1-methylene-bisacrylamide，简写Bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）的作用下，聚合成含有酰胺基侧链的脂肪族长链，相邻的两个链通过甲叉桥交联形成就具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶。为了加速聚合，在合成凝胶时还加入四甲基乙二胺作为加速剂。<img alt="实验九　血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳" 实验九　血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳" src="http://img100.bbioo.com/2012/0508/162801/1592.jpeg" border="0" />聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。用它作电泳支持物，对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少，也与分子大小有关。凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%，此浓度称为标准凝胶浓度。如果改变总胶浓度，也应相应改变Acr和Bis的比例。2．不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值，孔径大小是否相同等，可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳（page）。连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同，不连续系统则不同。不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。上层为样品胶，中间为浓缩胶，这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶，应用Tris-HCl缓冲液，其pH6.7。下层是分离胶，此层凝胶总浓度为7.5%，是小孔胶，也用Tris-HCl缓冲液，pH8.9。上下电泳槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3。由于凝胶的孔径和缓冲液的pH值不同，产生浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，使电泳的灵敏度、分辨率提高。（1）浓缩效应：无论哪种电泳方式，要想得到良好的分离效果，电泳开始前必须使样品中各种成分同处于同一起跑线上。样品加入后颗粒分散，不能从同一起点开始电泳，但样品通过浓缩胶被浓缩成高浓度的样品薄层，使颗粒同时开始电泳。其机理是样品胶及浓缩胶的Tris-HCl缓冲液pH=6.7，电泳时，HCl全部电离为Cl-，而电泳槽内Tris-甘氨酸缓冲液pH=8.3，甘氨酸等电点pI=6.0，电泳时，甘氨酸仅极少部分电离为甘氨酸负离子（Gly-），一般血清蛋白质点约pI=5.0，也解离为蛋白质负离子（Pr-），其解离度比HCl小，比甘氨酸大。通电后，这三种离子同时向正极泳动，有效泳动率是Cl- ＞Pr- ＞Gly-，电泳时开始时，Cl-泳动最快（称快离子），很快超过Pr-，泳动到最前面，Gly-泳动最慢（称慢离子），泳动到最后，Pr-介于其间，被浓缩成一个狭小的样品薄层。这种浓缩作用可使蛋白质浓缩数百倍。血清蛋白在纸上电泳和醋酸纤维素薄膜电泳上仅可分成5～7个组分。而在聚丙烯酰胺凝胶电泳上则可以分为20～30个成分。（2）电荷效应：蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的样品薄层，进入分离胶。由于各种蛋白质分子的等电点不同，在同一pH的缓冲液中所带有效电荷不同，因而泳动率也不同，因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个圆盘状的蛋白质区带。（3）分子筛效应：各种蛋白质分子由于分子大小和构象不同，因而通过一定孔径的分离胶时所受的摩擦力不同，受阻滞的程度不同，表现的泳动率的不同而被分开。即使蛋白质所带的净电荷相似，也会由于分子筛效应被分开。【器材和试剂】1． 器材电泳仪、圆盘电泳槽、微量加样器、注射器、50ml小烧杯2． 试剂（1）30%丙烯酰胺储存液：丙烯酰胺30.0g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加水至100ml，棕色瓶4℃保存。（2）催化剂（10％过硫酸铵）：过硫酸铵1g 加水至10ml，临用前现配。（3）加速剂：四甲基乙二胺 (TEMED）（4）分离胶缓冲液（pH8.8）：取三羟甲基氨基甲烷（Tris ）36.3g，加入1 mol /L HCl 48ml ，再加蒸馏水至100ml， 4℃保存。（5）浓缩胶缓冲液（pH6.8）：取6.0g Tris，用1 mol /L HCl 48 ml，再加蒸馏水至1000ml，4℃保存。（6）电泳缓冲液（pH8.3）：取28.8g甘氨酸，6.0g Tris，分别溶解后，加蒸馏水到100ml ，4℃保存。(7)染色液：考马斯亮蓝R-2500.46g、甲醇（可用无水乙醇代替）110ml、28ml冰乙酸，TritonX-100 1ml,溶解后补足水至总体积400ml。（8）脱色液（30%甲醇、7%乙酸）：甲醇（可用无水乙醇代替）110ml，冰乙酸28ml，TritonX-100 8ml,补足水至400ml。（9）保存液 : 7%冰醋酸。（10）样品稀释液：浓缩胶缓冲液25 ml加入蔗糖10g及0.05％溴酚蓝5ml，最后加水至100ml。【操作步骤】1．凝胶柱的制备（1）取两端已有金钢砂磨平的10cm×0.6cm 的玻璃管。在距一端7cm和7.5cm处，各划一条线。插入橡皮垫中，垂直安放于试管架中。（2）按下表配制分离胶，迅速用滴管将其沿管壁加入玻璃管内，至7 cm画线处。分离胶(ml)浓缩胶(ml)30%丙烯酰胺2.501.00分离胶缓冲液(pH8.8)1.25—浓缩胶缓冲液(pH6.8)—1.25蒸馏水6.207.65TEMED0.050.0510%过硫酸铵0.050.05总体积1010丙烯酰胺浓度（g%）7.53.0（3）随即用5ml注射器经针头沿玻璃管壁加入蒸馏水约0.5cm高度，加水时要缓慢，尽量减少凝胶表面的震动与混合。静置，待凝胶聚合后(约20min)，去除水相，然后用吸水纸吸干残余的液体。（4）按上表配制浓缩胶，立即用滴管沿凝胶管壁加至7.5cm处，并随即沿管壁缓慢加入蒸馏水约0.5cm高度，静置20分钟。2．样品配制正常入血清0.3ml，加入样品稀释液1.7ml，轻摇混匀。3．电泳（1）将上述制备好的凝胶管分别插入上电泳槽的橡胶塞孔中，高出槽底。（2）下电泳槽加入10倍稀释的电泳缓冲液，随后放入带凝胶管的上电泳槽。（3）加样：用微量注射器取样品液加30μl ，沿管壁慢慢加在浓缩胶面上，再用缓冲液沿管壁缓慢加在样品液上（防止与样品液混合稀释），直到加满玻璃管，在电泳槽先加入少量缓冲液，检查一下是否漏水，如不漏水，加入适量缓冲液，然后将带电极的盖放好。（4）电冰：将上层电极糟的电极接在电泳仪的负极、下层电极糟的电极接在电泳仪的正极、接好电源。调节电流为lmA /管。待示踪剂进入分离胶时，调节电流为3mA/管。当示踪剂移至距玻璃管下口时，停止电泳。4．剥胶取下凝胶管，用带有10cm 长针头的注射器，内装蒸馏水做润滑剂，沿管壁插入管内，边注入水边旋转玻璃管。直至胶柱与管壁分开。然后用吸耳球轻轻在胶管的一端加压，使凝胶从玻璃管中缓慢滑出。5．固定将胶柱移入12.5%的三氯乙酸溶液中，固定10min。向装有凝胶柱的试管中加入染色液，6.染色与脱色将固定后的凝胶柱移入染色液， 60℃水浴中染色10～20min，随后移入脱色液中，60℃脱色30～60min。7.保存将脱色后的凝胶柱移入7%冰乙酸溶液中，密封保存，观察结果, 记录血清蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳可分多少区带。【注意事项】1．Acr和Bis都是神经性毒剂，对皮肤有刺激作用、但在形成凝胶后则无毒，操作时应尽量避免接触皮肤，并注意洗手。2．蛋白加样量要合适。加样量太少，条带不清晰；加样量太多则泳道超载，条带过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。3．过硫酸铵的主要作用是提供自由基引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合反应，故一定要新鲜，贮存过久的过硫酸铵商品不能使用。此外，10%过硫酸铵必须现用现配，4℃冰箱贮存不超过48h。4.灌制凝胶时，应避免产生汽泡，因为汽泡会影响电泳分离效果。5.刚灌注分离胶混合溶液后，应在分离胶液面上加1～2cm高的水层，以阻隔空气。胶液面上加水层时要特别小心，缓缓叠加，以免冲坏凝胶的胶面。

1. 丙烯酰胺贮液（30%丙烯酰胺，交联度2.6%）：，30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙烯酰胺溶于H2O，定容至100ml，滤去不溶物后存于棕色瓶，4℃可保存数月。（全班公用）（另一配方为29.1g 丙烯酰胺和0.9g 甲叉双丙烯酰胺溶于H2O，定容至100ml，交联度为3.0%）。2. 两性电解质Amphline（40%）的加入量为：50ml /ml 胶液。3. 过硫酸胺：配成1mg/ml的浓度，当天配制，配100ml全班公用。胶液中的加入量为0.5mg/ml胶液。4. TEMED：胶液中的加入量为1ml/ml胶液。5. 蛋白质样品：选用两种等电点相差较大的蛋白质，每根垂直管中每种蛋白质的加样量控制在<100mg。蛋白质样品配制成各为5mg/ml的浓度。配2.5ml全班公用。6. 固定液：10%的三氯乙酸，每组配50ml。7. 阳极电极液：0.1M H3PO43.4ml 浓磷酸（85%）加H2O至500ml，每个电泳槽用500ml。8. 阴极电极液：0.5M NaOH2g NaOH 加H2O溶解至500ml，每个电泳槽用500ml。

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，Nuf0a2，Nuf0a2—四甲基乙二胺(N，N，Nuf0a2，Nuf0a2—tetramethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O8，简称AP)或核黄素(ribofavin即vita min B2，C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。

29：1的应该是用的比较多的。

起交联作用，为了把单体丙烯酰胺交联起来化学聚合以过硫酸铵（APS）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

甲叉双丙烯酰胺：是一种交联剂，可以将丙烯酰胺单体连接起来，形成聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶，主要用于分离蛋白质。葡聚糖凝胶：用于不同大小蛋白质或多肽的分离。丙烯葡聚糖凝胶：用于分离球蛋白。

英文名称：N,N"-methylene diacrylamide化学名称：N，N"-亚甲基双丙烯酰胺也称作　甲叉双丙烯酰胺简称：MBA

　　聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis）　　聚丙烯酰氨凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。　　PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。　　SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 　　浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

temed是诊断试剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂，在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。TEMED是N，N，N"，N"-四甲基乙二胺，用于催化APS产生自由基。化学工业用作制造过硫酸盐和双氧水的原料，有机高分子聚合时的助聚剂、氯乙烯单体聚合时的引发剂。油脂、肥皂业用作漂白剂。还用于金属板蚀割时的腐蚀剂及石油工业采油等方面。食品级用作小麦改质剂、啤酒酵母防霉剂。

聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本信息：聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成，催化聚合的常用方法有两种，化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵为催化剂，以四甲基乙二胺为加速剂，在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应，不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性。带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳，不连续体系由电极缓冲液，浓缩胶及分离胶所组成，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点： ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N"甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。 ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一 般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。 ③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 ④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双 丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝 胶。 在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂和 另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺 成为自由基，发动聚合反应，加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。常用的引发剂 和加速剂的配伍如下表： 聚合反应催化剂配伍 引 发 剂 加 速 剂 （NH4)2S2O8 TEMED (NH4)2S2O8DMAPN 核 黄 素 TEMED 注：(NH4)2S2O8，过硫酸胺 TEMED：N，N，N，N";四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴 用过硫酸铵引发的反应称化学聚合反应；用核黄素引发，需要强光照射反应液， 称光聚合反应。 聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响： 1、大气中氧能淬灭自由基，使聚合反应终止，所以在聚合过程中要使反应液与空气 隔绝。 2、某些材料如有机玻璃，能抑制聚合反应。 3、某些化学药物可以减慢反应速度，如赤血盐。 4、温度高聚合快，温度低聚合慢。 以上几点在制备凝胶时必须加以注意。 凝胶的筛孔，机械强度及透明度等很大程度上由凝胶的浓度和交联决定。每100亳升 凝胶溶液中含有单体和交联剂的总克数称凝胶浓度，常用T%表达；凝胶溶液中交联剂 占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示，可用下式计算： 公 式 a：丙烯酰胺克数； b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升） 凝胶浓度过高时，凝胶硬而脆，容易破碎；凝胶浓度太低时，凝胶稀软，不易操作。 交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。 聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不防止对流减低扩散的能力，而且因为它具有三 度空间网状结构，某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大 小和形状，这是凝胶的分子筛作用。由于这种分子筛作用，这里的凝胶并不仅是单纯 的支持物，因此，在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外，还必须注意与凝胶本 身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）。可通过下式计算来选择适当的凝胶网 孔。 公 式 式中：P为网孔平均直径，C为多聚体浓度，d为该多聚体分子直径（若不是卷曲的分 子应为5A），K为常数，K值取决于涨胶的几何构型，假如多聚体的链是以近似于直角 交联的，则约为1.5根据此式，我们可以通过多聚体浓度C近似地计算出网孔直径，例 如已知多聚体浓度为5%，其网孔平均直径应为： 公 式 这样的计算是粗略的，与实际情况有一定距离，有人测定了总浓度（T）为20%的丙烯酰胺液，在六种不同比例的双丙烯酰胺存在 下，聚合后的网孔大小，发现孔径与总浓度有关，总浓度愈大，孔径相应变小，机械 强度增强，与总浓度不变时，甲叉双丙烯酰胺（Bis)的浓度在5%时孔径最小，高于或 低于此值时，聚合体孔径都相对变大，凝胶孔径在凝胶电泳中是一个重要的参数，它 往往决定了电泳的分离效果。经过不断的实践，得到了如表3所示的经验值，在一般情况下，大多数生物体内的蛋白质采用7.5%浓 度的凝胶，所得电泳结果往往是满意的，因此称由此浓度组成的凝胶为“标准凝 胶”。 对那些用于重要研究的凝胶，最好是通过采用10%的一系列凝胶浓度梯进行预先试验，以选出最适凝胶浓度。 表3不同分子量范围的蛋白质和核酸在凝胶电泳 中所选用的凝胶浓度百分率 物 质分子量范围适用的凝胶浓度（%） 蛋白质<10 1-4×104 4×10-1×105 1-5×105 >5×10520-30 15-20 10-15 5-10 2-5 核酸<104 104-105 105-2×10610-20 5-10 2-3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续的和不连续的两类，前者指整个电泳系统中所用缓冲 液，pH值和凝胶网孔都是相同的，后者是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液，pH值和孔径，不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨 能力。 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小 和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大 小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂 十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙 醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白 质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量， 因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改 变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物 的短轴长度都不一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不 再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小，因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。(http://www.ebiotrade.com/)

聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法.在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离. 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点： ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N"甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子.凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物,没有或很少带有离子的侧基,因而电渗作用比较小,不易和样品相互作用. ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,在聚合前可调节单体的浓度比,形成 不同程度交链结构,其空隙度可在一个较广的范围内变化,可以根据要分离物质分子 的大小,选择合适的凝胶成分,使之既有适宜的空隙度,又有比较好的机械性质.一 般说来,含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶,机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物 质,1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶,而分子量特别大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝胶,大孔胶易碎,小孔胶则难从管中取出,因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺,以改进凝胶的机械性能. ③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定.凝胶无色透明,易观察,可用检测仪直接测定. ④丙烯酰胺是比较纯的化合物,可以精制,减少污染.合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺.丙烯酰胺称单体,甲撑双 丙烯酰胺称交联剂,在水溶液中,单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝 胶. 在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中,需要有催化剂参加,催化剂包括引发剂和 另速剂两部分.引发剂在凝胶形成中提供始自由基,通过自由基的传递,使丙烯酰胺 成为自由基,发动聚合反应,加速剂则可加快引发剂放自由基的速度.常用的引发剂 和加速剂的配伍如下表： 聚合反应催化剂配伍 引 发 剂 加 速 剂 （NH4)2S2O8 TEMED (NH4)2S2O8DMAPN 核 黄 素 TEMED 注：(NH4)2S2O8,过硫酸胺 TEMED：N,N,N,N";四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴 用过硫酸铵引发的反应称化学聚合反应；用核黄素引发,需要强光照射反应液,称光聚合反应.聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响： 1、大气中氧能淬灭自由基,使聚合反应终止,所以在聚合过程中要使反应液与空气 隔绝.2、某些材料如有机玻璃,能抑制聚合反应. 3、某些化学药物可以减慢反应速度,如赤血盐.4、温度高聚合快,温度低聚合慢.以上几点在制备凝胶时必须加以注意. 凝胶的筛孔,机械强度及透明度等很大程度上由凝胶的浓度和交联决定.每100亳升 凝胶溶液中含有单体和交联剂的总克数称凝胶浓度,常用T%表达；凝胶溶液中交联剂 占单体和交联体总量的百分数称为交联度,常用C%表示,可用下式计算： 公 式 a：丙烯酰胺克数； b：甲撑双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升） 凝胶浓度过高时,凝胶硬而脆,容易破碎；凝胶浓度太低时,凝胶稀软,不易操作. 交联度过高,胶不透明并缺乏弹性；交联度过低,凝胶呈糊状.聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度,它不防止对流减低扩散的能力,而且因为它具有三 度空间网状结构,某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大 小和形状,这是凝胶的分子筛作用.由于这种分子筛作用,这里的凝胶并不仅是单纯 的支持物,因此,在电泳过程中除了注意电泳的基本原理以外,还必须注意与凝胶本 身有关的各种性质（网孔的大小和形状等）.可通过下式计算来选择适当的凝胶网 孔. 公 式 式中：P为网孔平均直径,C为多聚体浓度,d为该多聚体分子直径（若不是卷曲的分 子应为5A）,K为常数,K值取决于涨胶的几何构型,假如多聚体的链是以近似于直角 交联的,则约为1.5根据此式,我们可以通过多聚体浓度C近似地计算出网孔直径,例 如已知多聚体浓度为5%,其网孔平均直径应为： 公 式 这样的计算是粗略的,与实际情况有一定距离,有人测定了总浓度（T）为20%的丙烯酰胺液,在六种不同比例的双丙烯酰胺存在 下,聚合后的网孔大小,发现孔径与总浓度有关,总浓度愈大,孔径相应变小,机械 强度增强,与总浓度不变时,甲叉双丙烯酰胺（Bis)的浓度在5%时孔径最小,高于或 低于此值时,聚合体孔径都相对变大,凝胶孔径在凝胶电泳中是一个重要的参数,它 往往决定了电泳的分离效果.经过不断的实践,得到了如表3所示的经验值,在一般情况下,大多数生物体内的蛋白质采用7.5%浓 度的凝胶,所得电泳结果往往是满意的,因此称由此浓度组成的凝胶为“标准凝 胶”. 对那些用于重要研究的凝胶,最好是通过采用10%的一系列凝胶浓度梯进行预先试验,以选出最适凝胶浓度. 表3不同分子量范围的蛋白质和核酸在凝胶电泳 中所选用的凝胶浓度百分率 物 质分子量范围适用的凝胶浓度（%） 蛋白质5×10520-30 15-20 10-15 5-10 2-5 核酸

聚丙烯酰胺一般是无毒的，它是丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合后的产物，但是也要注意，丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺都是神经毒剂，聚丙烯酰胺里面可能会含有没有聚合的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，所以使用时要小心，防护好

SDS-PAGE是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。其中四甲基乙二胺（TEMED）作为加速剂能催化过硫酸铵产生自由基。过硫酸铵（APS）作为催化剂产生自由基，从而引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。其中SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。之所以会有分离胶和浓缩胶之分，浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为分子筛效用。浓缩胶的pH是6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数解离为负离子，在电场中移动速度很慢。酸性蛋白质在此pH下解离为负离子，三类离子的迁移速率为Cl>一般蛋白质>Gly，电泳开始后，Cl离子泳动快，在其后留下一个低离子浓度区。Gly在电场中移动很慢，造成移动离子的缺乏，于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区，在高压区内所有的负离子都会加速移动，当移到Cl离子区域时，高电压消失，蛋白质的移动速度慢下来，当以上稳定状态建立后，蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层，按照电荷大小排列，但是由于目标蛋白都带有负电荷，所以位于同一的起点。从浓缩胶进入分离胶后，胶的pH升高，Gly的离解度增大，泳动率上升，又因为它分子小，故超过所有的蛋白质分子，紧跟在Cl离子后，Cl离子迁移后，低离子浓度不再存在，形成了恒定的电场强度，因此，蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质，分子大小和形状，分离胶的孔径有一定大小，对不同相对质量的蛋白质来说，通过时收到的滞阻作用不同，即使静电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。步骤：1.配胶，有分离胶和浓缩胶之分，胶浓度随你蛋白的大小变化而变化，一般12%，一般需要两个小时，需要提前准备。短期可以充水放置于4℃冰箱。2.将蛋白加入5X的SDS-loading， 100℃加热10min，以充分变性蛋白。3.上样，一般10μL。4.浓缩胶一般80V 30min 进入分离胶后可140V 30min。5.结束后可用于考染或者western blot。最后的最后 提醒一下自己：丙烯酰胺-甲叉丙烯酰胺（Arc-Bis）：中等毒性，神经毒剂。低浓度接触数月数年后，渐出现头痛头晕疲劳，嗜睡，手指剌痛，麻木感，常伴有两手掌发红，脱屑，手掌足心多汗。过硫酸铵（APS）：对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性.吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽等.眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤.口服引起腹痛、恶心和呕吐.长期皮肤接触可引起变应性皮炎.。SDS：对粘膜和上呼吸道有刺激作用,对眼和皮肤有刺激作用.可引起呼吸系统过敏性反应。TEMED：强神经毒剂记得带上手套和口罩！

①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N"甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。 ②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成 不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子 的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。 ④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。

蛋白电泳所用的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体都是有毒性的，理论上说，配制成凝胶后形成的聚丙烯酰胺凝胶但是安全的，直接用手碰触也没有关系。但是即使是交联好的凝胶也不能保证没有任何单体分子的存在，因此，还是要注意防护。所以在配置凝胶储备液的时候要戴手套，最好也戴口罩，在制胶时也应有手套保护防止皮肤接触。工作台及时清理，在实验室穿着实验服也是必要的。大量的动物试验研究表明丙烯酰胺主要引起神经毒性；此外，为生殖、发育毒性。神经毒性作用主要为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变；生殖毒性作用表现为雄性大鼠精子数目和活力下降及形态改变和生育能力下降。甲叉双丙烯酰胺，是强烈的神经毒素，对末稍神经系统有很强的破坏性。如果长时间在高浓度的丙烯酰胺环境下工作，会有手指颤动等症状。另外在配胶中使用的过硫酸铵也有一定毒性，对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性。吸入后引起、喉炎、气短和咳嗽等。眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤。口服引起腹痛、恶心和呕吐。长期皮肤接触可引起变应性皮炎。TEMED对粘膜和上呼吸道组织及皮肤有很大的破坏作用：强神经毒性。