用凯氏定氮法测定微生物的含氮量,微生物是否需要消煮

一、蒸汽发生器水面已经达到水位，但是无蒸汽产生，而且加热状态指示灯不亮 主要原因可能是15A保险管烧断，因此需要换一新的15A保险管。 二、加不上酸碱液 这主要是由于桶中酸碱液太少，导致吸管离开酸碱液面因此需要增加酸碱液。 三、酉麦碱桶没有气压 主要是由加气管路或桶盖密封不严造成的，要仔细检查各管接口处和桶盖并封紧漏气处还可能是由于电磁气泵漏气.那必须更换电磁气泵。 四、碱桶内有气压，但加不上碱液 这是由于电磁阀断电不能开启，必须停机待修；也可能是电磁阀、管路有堵塞，需要疏通电磁阀和管路。 五、自动工作状态不能继续工作，突然停止 这是由于周围有电场对计算机产生干扰，按复位键或关机后再重新开机就可以。 六、测定值不稳定或过高 可能是蒸汽发生器不干净，将蒸汽发生器内的水排空，换新水后再作测定或者是消煮管内液体过多，有碱液冲到蒸馏系统中，这时可以空蒸蒸馏系统后再作测定。

1、首先在冷凝管下端放置个锥形瓶接收冷凝水。2、其次凯氏定氮仪从定氮球发烫开始计时。3、最后连续蒸煮5min，然后移开煤气灯，既可解决全自动凯式定氮仪冷凝水超温问题。

影响样品分析结果。空白跑成了样品意味着你的仪器在进行空白测试时，出现了样品才应有的结果，由于空白被错误地转化为样品，空白结果不准确。这会导致样品分析结果不正确。

因为氮仪即凯式定氮仪、又叫蛋白质测定仪、是依据经典(凯氏定氮)方法设计的自动测氮蒸馏系统。目前国际国内的凯式定氮仪的工作原理大同小异都是依据凯式定氮法测氮的、主要区别就是他们的自动化程度和工艺的先进程度了、因此凯式定氮仪动化一般是按照自动化程度分为手动定氮仪、半自动定氮仪和全自动定氮仪(也有的分为半自动定氮仪、自动定氮仪、全自动定氮仪，都是一样的)、手动定氮仪顾名思义就是靠手动操作的、只不过是把以前做实验的瓶瓶罐罐集中到一台仪器上了、使劳动效率和工作的安全系数提高了很多、也节省了大量的劳动时间、半自动定氮仪可以自动加碱自动蒸馏自动回收液体比手动更方便了一点、也更安全了、毕竟避免了碱接触

好的全自动定氮仪采用颜色法的，价格都在十几万，而较差的一般采用比色法的，较便宜5-6万就可以了。但准确性较差，像光度计一样：比色时要关闭小观察窗。

将含有蛋白质的待测样品同浓硫酸一起加热消化，使氮变成氨，同时形成氨盐，在消化液中加入过量的碱,再加热将氨蒸馏出来,并收集于硼酸溶液中，zui后用酸碱滴定法测定其总氮量。 1.1 消化 样品中含氮有机物与浓硫酸和催化剂一起加热消化.使蛋白质分解,分解的胺基氨与过量的硫酸结合生成硫酸胺留在溶液中，其主要反应式为： RCH.NH2COOH+H2SO4 ->CO2+SO2+NH3+H2O2NH3+H2SO4->（NH4）2SO4　另外，催化剂硫酸铜在有机物全部消化后，溶液显清澈透明的蓝绿色，可用它来指示消化终点。此外，硫酸铜还可用做下一步蒸馏时碱性反应的指示剂。 过氧化氢，为氧化剂，有助于有机物消化，同时可以消除消化过程中的气泡现象。 1.2 蒸馏　消化终了后所有蛋白质的氨态氮都转化成铵盐形式，硫酸铵在碱性条件下进行蒸馏，将释放出来的氨用硼酸溶液吸收，生成四硼酸氢铵．其反应式：　　（NH4）2SO4+2NaOH ->Na2SO4+2NH3+2H2O NH3+4H3BO3 ->NH4HB4O7+5H2O

常规饲料分析中用凯氏定氮法可测定饲料中粗纤维的含量。饲料中粗蛋白质是一个非常重要的营养元素，对于测定则显得尤为重要，本实验参照《GBT6432饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法》，选取几种有代表性的饲料样品并加入色氨酸作为标准验证样品，使用全自动凯氏定氮仪对样品中的粗蛋白进行测定。

全自动凯式定氮仪主要特点如下：定氮仪NAI-DTY型是按照GB/T 19227-2008研制的新型定氮仪，它具有消解时间短、分析速度快、取样量少、操作步骤简单，以及测量结果准确等优点。1. 凯氏定氮仪，采用微电脑进行过程控制，包括手动模式和自动模式，可根据您的需要自行设定和切换：自动模式下：一次完成加碱、加硼酸、蒸馏，氨气吸收整个过程，加硼酸和加碱的体积以及蒸馏和吸收过程的时间都可以自行设定。人工模式下：加硼，加碱和蒸馏吸收三个过程可以单独人工操作，体积，时间自行控制，满足专业用户需求。2.大屏幕点阵式液晶显示，全中文菜单，触摸式按钮，操作简洁方便。3.自动式蒸馏控制、自动加水、自动水位控制、自动停水和水压过低报警。4.各种安全保护：消化管安全门装置，蒸汽发生器缺水报警。5.可存储操作程序6.仪器外壳采用特制喷塑钢板，工作区域采用ABS防腐板及不锈钢底板。7.防化学试剂腐蚀和机械损坏表面，耐酸耐碱。8.水位检测，低水位报警，自动断电。9.标配里不含消化炉，消化炉为选配，建议选择C型那艾消化炉。

阿尔瓦仪器生产的全自动凯氏定氮仪不错，三年质保

上海沛欧仪器公司的SKD-2000全自动凯氏定氮仪。全自动凯氏定氮仪SKD-2000指标1.测定范围：0.1-200mg氮 2.蒸馏时间：4-8分钟/样品3.蒸馏能力：15~30ml/分钟可调4.滴定精度：0.15%，可以无限量的滴定，而无需注射泵的回抽。5.重现性：RSD 0.5%6.回收率：>99.5% 7.数据存储：1000批（软件可无限制储存）8.试剂泵体积：0-150ml，1ml/级9.延迟时间：0-1800s(适合检测硝态氮）

额，苏州江东精密仪器有限公司 一台K9860全自动凯氏定氮仪 产品报价：72000性能特点◎人体工程学设计：细微之处尽显海能智慧，人体工程学设计让操作更加舒适。◎多种安全保障设计：多重安全装置，全面保护操作人员的安全。◎优质材料选择品质保证基础：采用优质防腐蚀材料，减少维护费用，提高仪器寿命。◎高精度柱塞式滴定系统，精度可高达2.4μL/步。◎选用专利隔膜式气泵，经久耐用使用寿命更长久。◎全自动设计：参数设置后，仪器自动完成加硼酸、加碱、蒸馏、滴定、结果计算及输出打印等程序，无须人为干预。◎官方认可的认证方法：滴定方法符合AOAC、EPA、Din、ISO等认证方法，滴定采用官方认可的颜色滴定法。◎专为中国市场设计的高性价比配置：针对中国市场设计，功能实用齐全，价格适宜。◎全密封管道系统：全密闭紧凑型设计，确保蒸馏过程无任何泄露损失。◎蒸馏、滴定连续完成：实验过程一次完成，节约宝贵的时间。◎全内置溶液桶设计：内置式溶液桶一体化设计，使操作环境更整洁。溶液桶倾斜式放置，放置简单，溶液吸收彻底。◎多语言版本软件：内含简体中文语言版本，更符合您的语言习惯。技术指标◎测定范围：0.1-200 mgN(毫克氮)◎测定速度：< 8分钟/样品◎重复精度：±0.5% (CV)◎滴定精度: 2.4μL/步◎操作模式：全自动◎可测样品量：固体 < 5g 液体 < 15 ml◎氮回收率：优于99.5%◎蒸馏过程耗水量(15℃时)：1.5 L/min◎原始数据存储量不少于1000套◎最大功率：1300W (220V AC 50HZ)◎体积：680mm×500mm×350mm◎重量：45Kg适用范围◎适用于食品、制药、谷物、饲料、水、土壤、化工、农业的氮、蛋白质的分析。

取适量硫酸铵，放入消化管，按正常操作，运行全自动凯氏定氮仪，看测量结果和标准硫酸铵的含量。两者比较，判断定氮仪的稳定性。济南精锐分析分析仪器

测定品种：粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等；工作方式：半自动进水方式：自来水、蒸馏水两种进水方式，使用区域广泛样品量：固体0.20g～2.00g；半固定2.00g～5.00 g液体10.00ml～25.00ml测定范围：0.1mgN～200mgN(毫克氮)回收率：≥99%（相对误差，包括消化过程）；蒸馏速度：5～ 15分钟/样品 （按样品量而定 ）冷却水消耗：3L/分钟重复率：相对标准偏差<±1%供电：AC220V/50Hz功率：1000w供水：水压大于1.5MPa；水温小于20度外形尺寸：380*320*670mm重量：20kg

是的。海能仪器是一家分析仪器研发商，主要产品包括二氧化硫残留量测定仪、全自动凯氏定氮仪、固相萃取仪、全自动视频熔点仪及智能微型光谱仪等，主要应用于食品、制药、农业、化工以及环境分析领域。更多同行分析，上企知道了解

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挥发性盐基氮是样品水浸液在弱碱下与水蒸汽一起蒸馏出来的总氮量， 是富含蛋白质类物质腐败变质的产物， 它也是鉴定食物腐败变质程度的一个指标。发性盐基氮受发酵时间、温度等因素影响，按照国家标准食品卫生理化检验GB ／ T 5009.44-2003，对发酵食品可采用半微量定量法， 完成挥发性盐基氮指标的检测。半微量法具有科学性、合理性的玻璃仪器操作, 减少污染, 准确度高, 适合于所有的样品检测, 因此一直沿用至今。但存在消化时间太长( 不同材料通常1 到几小时) 及放出有毒有害气体, 必须在通风橱中进行的弊端。 而用全自动凯氏定氮法是测定食品中蛋白质含量，否能对样品中挥发性盐基氮等项目进行检测,有待对其功能做进一步探讨。

肯定全自动了啊， 这东西主要看你们的经费， 国产性价比最高的确实是上海晟声的，山东海能其次。 前者精度最高，选材好些，特别是试剂泵，后者稍逊点，但价格便宜些。

测肥料中的氮，首先你要告诉是测得什么肥。含氮的肥料有很多，但方法都大同小异。原理也都是一样的。最普遍的是无机复混肥中的GB15063-2001国家标准，其中氮的检测引用的是GB/T 8572-2001蒸馏后滴定法。有机肥用的是NY525-2002农业标准，前面提取不一样，用的是过氧化氢，后面是一样的，也是蒸馏后滴定。硫铵的是GB535-95，尿素的是GBT2441.1-2001,磷酸铵的是GB 10205，其他的就不一一列举了。测氮原理就是先把肥料里面的氮提取出来，如含尿素的就用浓硫酸加热消化使其水解成NH4+铵根离子；含硝态氮的就用铬粉等还原剂将其还原成NH4+铵根离子；含有机质的氮，需用硫酸铜-硫酸钾混合催化剂，再加浓硫酸加热使其水解成NH4+铵根离子。总之就是先把各种形态的氮，全部转化成NH4+铵根离子，然后加入过量的氢氧化钠溶液，加热蒸馏，将蒸出的氨气收集在过量而且准确定容的硫酸溶液里面，加入甲基红-亚甲基蓝混合指示剂，再用精确到0.0001mol/L的氢氧化钠标准溶液反滴定，记录消耗的氢氧化钠溶液数。同时还要做一份平行样和一份空白对照试验。平行样结果偏差不能大于0.2%。最后就是计算了。我就是做这个的，几乎每天都测氮磷钾。再熟悉不过了。蒸馏后滴定法是仲裁法，现在有用仪器的快速法。但是都不够权威。所需装置如下：1.消化仪器:1000ml圆底蒸馏烧瓶(与蒸馏仪器配套)和梨形玻璃漏斗;2.蒸馏仪器:按GB/T 2441.1配备;冷凝管，循环水，三角接收瓶，弯管接头。3.防暴沸颗粒或防暴沸装置:后者由一根长约100mm，直径约5mm玻璃棒连接在一根长约25mm的聚乙烯管上;4.消化加热装置:置于通风橱内的1500w电炉，或能在7min-8min内使250mL水从常温至剧烈沸腾的其他形式热源;5.蒸馏加热装置:1000w--1500w电炉，置于升降台架上，可自由调节高度。也可使用调温电炉或能够调节供热强度的其他形式热源。4和5的电炉用同一个就可以了。防爆装置可以用止沸剂代替。总之，都是普通装置组合而成的。有QQ的话，可以把GB/T 8572-2001传给你。

凯氏定氮仪是分析各类物质中氮元素含量的仪器。物质中的氮是以各种类型存在的，比如铵态氮、硝态氮、有机氮、无机氮等各种类型。要想测的准确就需要尽可能将所有的氮元素回收下来，如果回收率太低，结果的准确度就会很差。氮的回收率受到蒸馏系统的密封性能、冷凝效率、防倒吸能力、防暴沸能力、是否排空、样品接触器件的材质等等诸多因素的影响

什么是仪器的精度？现在我们来讨论一下仪器的“精度”问题： 闲来无事，学习各同行全自动定氮仪的优点。发现“滴定精度”概念被一些厂商采用。突发奇想，我查看一下有关“仪器精度”文献，了解一下“精度”。百科文献及其他文献告诉我：精度的概念：精度是测量值与真值的接近程度。包含精密度和准确度两方面。精度表征方法：精度常使用三种方式来表征。1）最大误差占真实值的百分比，如测量误差3%；2）最大误差，如测量精度±0.02mm；3）误差正态分布，如误差0%~10%占比例65%，误差10%~20%占比例20%，误差20%~30%占10%，误差30%以上占5%。 全自动定氮仪除了判断终点方法重要性以外，滴定的精度是仪器最重要的技术指标。如果滴定精度高的话，那仪器可信度高，如果滴定精度低到不能忍受的时候，那就不成为仪器。一些进口全自动定氮仪滴定精度：2ul/步、2.4ul/步、一些国产全自动定氮仪滴定精度：1ul/步。从滴定精度定义来看：每步要误差1ul，那一个样品要滴定几步呢？总误差就清楚了。 每步要误差2.4ul,，那一个样品要滴定几步呢？总误差是多少呢？想想都后怕，误差那么大还敢炫耀？是：无知？-------不懂仪器技术参数，还是概念搞错了？无谓？-------这是随便写的，无所谓，反正也没人计较？无畏？-------我就是这样的，我还怕你不买？ 滴定精度应该以百分比来表示才正确。例：上海沛欧全自动定氮仪SKD-2000滴定精度：0.15%（比如：一个样品消耗标准酸15ml，真实值与滴定值最多偏差为20ul ）。以上全自动凯氏定氮仪的“滴定精度”是我们仔细参看文献得来数据，供参考。希望我们的国人啊不要一味的崇外，抄袭了外人的错误概念了。。。。。。 上海沛欧分析仪器有限公司

广州深华生物技术有限公司专业代理销售全自动凯氏定氮仪，价格绝对优惠。

蛋白质是食品中的重要营养成分，也是评价食品营养价值的重要指标之一，因此蛋白质的测定在食品分析中是一个高频的分析项目，具有非凡的意义。目前测定蛋白质的主要方法有凯氏定氮法、分光光度法、燃烧法和近红外方法。本文主要采用了凯氏定氮法和燃烧定氮法两种方法测定：玉米淀粉，奶粉，蜂王浆，功能性大豆浓缩蛋白，大豆分离蛋白和蜂蜜等的蛋白质的含量，比较两种方法和所用仪器之间的优缺点，以确定一种快速无污染的氮含量测定的方法。 　　蛋白质是由氨基酸脱水缩合经过肽链链接而成的高分子化合物，它存在于机体中的每个细胞中，主要参与酶和激素的构成，作为运载工具，构成抗体，调节渗透压，供给能量等，是生命的基础物质。蛋白质一般由碳、氢、氧、氮四种元素构成，也有部分蛋白质含有硫、铁、铜和磷等元素，其中氮是蛋白质中含量最稳定的元素，平均含量为16%，故测定食物中蛋白质含量通常只用测定氮元素的含量。 　　1 实验方法与原理 　　早在一百多年前，凯氏定氮法就被应用于测定物质中的含氮量，但因凯氏法的测定耗时长，且需要使用危险化学试剂，容易造成环境污染，危害人类健康，随着氮元素分析设备的不断改进，杜马斯燃烧法逐渐替代传统的凯氏定氮法。本实验主要采用凯氏定氮法和燃烧法两种方法分别测定各种食品中蛋白质的含量，比较两种方法的优缺点。 　　1.1 凯氏定氮法 　　凯氏定氮法原理为：食品中的蛋白质在硫酸铜催化的情况下被分解产生氮原子，能与硫酸结合成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，再用硼酸吸收，以盐酸或硫酸标准滴定溶液滴定，根据消耗酸的数量换算出蛋白质的含量。凯氏定氮法是测定蛋白质最常用的方法，它是测定样品中氮含量最简单和最准确的方法之一。 　　1.2 燃烧定氮法 　　燃烧法原理：将样品在900℃～1200℃的高温下燃烧，燃烧产生混合气体，将其中碳硫等干扰气体以及盐类用吸收管吸收，氮氧化物全部被还原成氮气，形成的氮气通过热导检测仪（TCD）进行检测得出含量。 　　2 实验材料仪器与步骤 　　2.1 试验原料： 　　本实验主要测定的食品材料有：玉米淀粉；蜂蜜；蜂王浆；功能性大豆浓缩蛋白；奶粉；大豆分离蛋白等。仪器有：全自动凯氏定氮仪（Kjeltec2300，FOSS公司），杜马斯燃烧定氮仪（Rapid NCUBE，德国Elementar公司）。 　　2.2 主要仪器设备 　　2.2.1 凯氏定氮法 　　称取一定量的样品到消化管内，全自动凯氏定氮仪器kjeltec2300，硼酸溶液：10g/L，氢氧化钠溶液：400g/L，催化剂4.5gk2SO4+0.5gcuso4.5H2O/片。加热温度420℃，加热时间110min，使用前排气泡并清洗系统，样品中加入催化剂2片和硫酸12ml，轻微混匀启动消解程序，消解结束后，将定氮管支架及定氮管取入冷却至室温。 　　2.2.2 杜马斯燃烧法 　　采用德国生产的氮素自动分析仪。称取一定量样品包在锡箔中，置于自动落样器上。样品落入燃烧反应炉后，通纯氧170ml/min五分钟，直到氧气剩余量为12%时停止燃烧。燃烧炉中的产物经载气运送到原炉中，用铜针和钨还原成氮气，出去水后进入TCD检测器检测，测定结果由计算机自动输出和打印。 　　3 实验结果与分析比较 　　3.1 实验结果（见表1） 　　据统计，蜂王浆的蛋白含量在15%左右，玉米淀粉在0.3%左右，奶粉在10%～20%之间，功能性大豆浓缩蛋白湿基在68%左右，蜂蜜的蛋白含量不到1%，大豆分离蛋白含量最多，湿基蛋白质在86%-87%以上。 　　3.2 结果分析与讨论 　　从实验结果可以看出，两种测量方法的结果未呈显著性差异，两者都处于满意结果的范围之内。杜马斯燃烧法测定各种样品时所得的结果均略高于凯氏定氮法，测定结果更精准，重复性更好。在实验过程中比较得出：①凯氏定氮法相对于杜马斯燃烧法而言，使用范围较广，高中低含量的蛋白质，固体或液体的样品都可以采用该方法。杜马斯燃烧法对于含量低于1%以下的样品不适合，且液体样品不好操作；②凯氏定氮法耗费时间，平均一个样品需要5min左右的时间，大量消耗人力和时间，该测试方法受检测人员的影响较大。由于该法工作量大，需要溶液种类多，滴定的时候需要人员更换消化管，总原因会导致实验存在随机误差，实验结果受外界干扰，不精确。杜马斯燃烧法使用的仪器是自动加样，故不存在进样等的操作误差，省时省力，但杜马斯法所用的仪器成本高，维修复杂，其送样检样的成本较高；③凯氏定氮法中使用了强酸强碱等危险性试剂，容易对污染到环境和对操作人员存在潜在危险性伤害。杜马斯燃烧法不会对环境造成污染，但样品重量太大的时候容易造成爆燃，测定结果数值偏高。 　　杜马斯法和凯氏定氮法在食品蛋白质实验中得到的实验精度和重复性均可满足相应的国家检测标准要求。两种方法各有优缺点，但在重复性和精确度来说，杜马斯法更优秀，且杜马斯法还能节约时间和人力，操作简单，误差较少，对环境的污染度较低，因此，在满足使用杜马斯燃烧法的条件下，可优先选择杜马斯燃烧法进行测定食品中蛋白质的含量。

维护保养很重要。我们是跟仪路通签的。

冷却水水温，管路有跑冒滴漏，蒸馏时间少，硼酸吸收液不足，分离器结构不合理，等等都会完成回收率偏低

目前就功能来说还是国外的一些品牌比较好，像福斯、歩棋等，但是国外的仪器价格比较贵，现在国内的仪器制造行业也越来越成熟，功能越来越完善，服务也很到位，相对国外的仪器来说性价比较高。目前有家民族仪器制造企业：海能科技的仪器就不错。他家的定氮仪有向国外看齐的趋势，目前刚上市K9860N全自动凯氏定氮仪和K1100全自动凯氏定氮仪，功能比较齐全，质量也不错！

定氮蒸馏装置:如图所示。1.安全管2.导管3.汽水分离管4.样品入口5.塞子6.直型冷凝管7.吸收瓶8.隔热液套9.反应管10.蒸汽发生瓶

可能是加碱量的问题，导致硫酸铵未完全转化为氨水，氨气释放不完全，所以吸收液显红色回复

1、凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。 凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即: 蛋白质含量=含氮量/16%。 2、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

凯氏定氮法的原理如下：凯氏定氮法计算公式：X=*F*100%。式中，X表示样品中蛋白质的百分含量，V1表示样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，V2表示试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，N表示硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度，0。014表示1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数，m表示样品的质量或体积，F表示氮换算为蛋白质的系数。凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%-19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即：蛋白质含量＝含氮量／16%。凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

1贵和好的仪器的区别 2性价比和大品牌的选择 3.选择仪器的要点大家好：如话说：民以食为天，对从事天的事业的你们，我在此向你们致敬。食品企业的检测仪器是保障食品安全和品质的重要手段，那么采购什么样仪器对企业合适呢？我想在坐企业内有身价千万上亿的企业家，也有每月数万的精英和四位数收入的普通员工。但有一个共同点：都是黄皮肤黑头发的中国人。但是有些企业一旦采购仪器就以进口和国产作为区别好坏仪器的标准，而一旦采购国产的就以绝对低价来衡量从而丧失了优质高性价比的仪器的采购。这对企业来说是个大损失。在此我分3点和大家分享和讨论。就算是抛砖引玉。1 贵和好的仪器的区别 一些企业“钱不是问题，挑贵的买”。贵的、大品牌的、大型的仪器充实实验室，于是就产生高成本消耗、不堪忍受的保养费、低效的使用率。大把的现金变成招展的花瓶。这不是一个令人起敬的实验室。2 大品牌和性价比的选择大品牌的高价是其对市场的溢价，采购大品牌对具体的采购人员是最方便的：风险小且又可炫耀，即便出了问题也可推托。久而久之有些实验室变成别人品牌的展览室，实际上矮化了自己品牌。花大钱树别人的品牌。实际上企业需要的是合适自己规模和要求的仪器，而成本上，要的是高性价比的仪器。而这一点能力对企业来说是需要的和困难的。这对采购人员提出了更高的要求：性能、速度、质量、精度、价格、品牌、口碑等一些列问题接踵而至。 一个设备适合要求，质量可靠、精度达标而低成本的实验室是令人尊敬的。3 仪器选择的要求点作为使用仪器的用户，一般不如商家对仪器的了解，所以首先要和商家的沟通和了解，获得一般仪器的性能和指标。由于商家能力和诚信的参差不齐这对采购方造成了判断的困难。a要对一些明显高于一般企业指标要特别注意，更要注意此指标的内在技术支撑，而如果没有仪器内在的技术支撑，那还是少碰为妙。b 首先要关注仪器的主要指标，不要被一些花拳绣腿的功能所迷惑而忽略主要指标的关注。c 关注可验证的指标，这对一些不良企业就会知难而退。d 关注仪器使用外部和内部环境：温度、耗电、试剂、催化剂、水等要考察仪器使用材料对环境的适应性。e 对把“最”挂在嘴上的而不能证明的要避而远之。f 避开最便宜的仪器，他可能让你买了最贵的废物。以上是沛欧公司对仪器采购方面的一些体会，接下来给大家谈一下“定氮仪的选购指南”凯氏定氮仪的使用领域：食品、饮料、饲料、粮油、乳品、土壤、肥料、化肥、畜牧、农业 食品、 污水处理、生物制药。。。。。 凯氏定氮仪分类有哪些？ 定氮仪的分类： 1.凯氏定氮玻璃装置 （操作不安全，检测范围比较窄） 2.半自动定氮仪（手动加部分试剂，自动蒸馏 ） 3.自动定氮仪（自动加各种试剂，自动完成蒸馏） 4.全自动定氮仪(蒸馏滴定一体的定氮仪，减少了人为因素误差） 凯氏定氮仪的重要指标是什么？沛欧是怎样的技术保证这些指标的？ 1.测量范围:0.1-200mgn（沛欧加热功率1500w，高效冷凝管的专利） 2.回收率≥99.5% （①封闭性：沛欧定氮仪采用自主研发的耐腐管路，保修3年 ② 冷却效果：采用自主专利的高效冷凝管。如果冷凝效果不理想， 氨气会逃逸） ③功率：800-1500W(目前国内最高的功率沛欧的加热功率为750-1500保证了高低含氮量样品的回收率） 3.蒸馏器补水是否有（沛欧采用双液位控制（双保险），消除干烧之虞 ） 目前市场上定氮仪普遍存在的问题及沛欧是如何解决这些问题呢？ 1. 定氮仪整体机壳从外到里锈迹斑斑。（定氮仪的使用环境决定-----强酸、强碱、高温高压。 沛欧定氮仪的外壳整体汽车用的高性能ABS材料，永不生锈。）2. 定氮仪碱泵容易坏。（沛欧定氮仪采用恒压式加碱，即使得碱液量精确添加，又解决了碱 泵腐蚀的问题）3. 市场上的定氮仪蒸馏液倒吸现象时有发生。（沛欧定氮仪所有管路压力平衡，杜绝蒸馏液倒吸现象）4.高含氮量的样品做不准确。（沛欧的冷凝管是自主研发的获得专利的高效冷凝管，保证了1500w以上加热功率的蒸馏液迅速冷却，从而保证了高含氮量样品的回收率。加热功率的越高，检测的含氮量样品越高，即测量范围越宽）。

两种制氮方法不同。1，克氏定氮法 ：天然含氮有机化合物（如蛋白质）与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵。在克氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解出氨。用水蒸气蒸馏法将氨蒸入硼酸溶液中，然后再用标准稀硫酸酸溶液进行滴定，滴定所用稀硫酸酸的量（mol）相当于被测样品中氨的量（mol），根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。 原理是因为蛋白质含氮量通常在16%左右，所以将克氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。2，凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。， 凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，即: 蛋白质含量=含氮量/16%。[1凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热硝化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量1.有机物中的氨在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4)2SO4反应式为：凯氏定氮法2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中反应式为:3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，即得蛋白质的含量反应式为：或试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。2.1 硫酸铜。2.2 硫酸钾。2.3 硫酸。2.4 2%硼酸溶液。2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。2.6 30%氢氧化钠溶液。2.7 0.025mol/L硫酸标准溶液或

是的。海能仪器是一家分析仪器研发商，主要产品包括二氧化硫残留量测定仪、全自动凯氏定氮仪、固相萃取仪、全自动视频熔点仪及智能微型光谱仪等，主要应用于食品、制药、农业、化工以及环境分析领域。更多同行分析，上企知道了解

方法是：1、使用前检查蒸馏装置及循环水道是否畅通，连接是否牢固，防止漏水漏气；2、接通电源，加热蒸汽发生器(瓶内水要保持橙红色，蒸汽发生器蒸汽明显时，再通循环水，冷却冷凝管；3、将装有吸收液和指示剂的三角瓶置于冷凝管末端，并使尖端浸入吸收液。凯氏定氮仪是根据蛋白质中氮的含量恒定的原理，通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的仪器。因其蛋白质含量测量计算的方法叫做凯氏定氮法，故被称为凯氏定氮仪，又名定氮仪、蛋白质测定仪、粗蛋白测定仪。

自动定氮仪测氮样品值为0原因如下。1、消解过程中，消解温度过低或时间不足，样品未完全消解，消化样品时有挂壁现象产生。2、盐酸或者硫酸标准溶液放置时间过长，造成溶度不准。3、凯氏定氮仪蒸馏装置冷凝管或防溅管有破损，产生的氨气泄漏。

凯氏定氮法计算公式：X=*F*100%。式中，X表示样品中蛋白质的百分含量，V1表示样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，V2表示试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，N表示硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度，0。014表示1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数，m表示样品的质量或体积，F表示氮换算为蛋白质的系数。凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%-19%),因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即：蛋白质含量＝含氮量／16%。凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。u200b

药典中的凯氏定氮针对有机氮化合物,主要是指蛋白质,aa,核酸,尿素以及大量合成的氮为负三价的有机氮化合物.它不包括叠氮化合物,联氮,偶氮,腙,硝酸盐,亚硝酸盐,硝基,腈,肟和半卡巴腙类的含氮化合物. 凯氏定氮法只是一个氧化还原反应,把低价氮氧化并转为氨盐来测定,而不能把高价氮还原为氮盐的形式,所以不可以测出物质中所有价态的氮含量.

是氨氮。凯氏定氮法是不能测硝基氮和叠氮化合物中的氮元素的含量的。凯氏定氮法分为消解、蒸馏、滴定。最终滴定是用酸碱中和的方法，所以他只能测定氨氮。即所有能转化成氨氮的氮元素含量都能测出来。 美国海能公司专业生产凯氏定氮仪 400-618-6188

1、消化:精密称取大豆样品1.0g左右，放入干燥的250 ml消化管中，加入0.4g CuSO4 7g K2SO4 10ml H2SO4先200"C炭化，待泡沫停止后提高温度到450"C，加热至液体沸腾，待瓶内液体呈蓝绿色透明后，再继续加热0.5h。冷却后加入20ml水，移入100ml容量瓶中，用少量水洗涤消化管2~3次，洗液合并于容量瓶中定容。2、蒸馏:连接凯氏定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至2/3处，加甲基红指示剂数滴及数ml硫酸，保持水呈酸性。加入数粒玻璃珠以防暴沸，调节火力加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3、向吸收瓶内加入20g/L硼酸溶液20ml及混合指示剂2滴，并使冷凝管下端插入液面以下，吸取10ml样品消化稀释液由进样口进入反应室，并以10ml水洗涤进样口使其流入反应室内，将400g/L NaOH溶液10ml倒入进样口，立即夹紧螺旋夹，并加入少量蒸馏水，密封进样口。当蒸汽通入反应室时，准确计时，反应产生的氨气通过冷凝管进入吸收瓶，蒸馏5min，移动吸收瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏Imin，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下吸收瓶。停止加热，使反应室内的液体进入汽水分离器，打开进样口的螺旋夹，将汽水分离器的液体放出。再向反应室内加入蒸馏水，夹紧螺旋夹，再次进行加热至水蒸汽放出，停止加热，使反应室内的水进入汽水分离器，进行洗涤。4、滴定:用0.025mol/L硫酸标准溶液滴定吸收液至灰色。5、计算:X= 2cVX 14X5.71/mX为样品中蛋白质的含量，%；c为硫酸标准溶液的浓度，molL；V为样品消化液消耗硫酸标准溶液的体积，ml；m为样品的质量，g。注意事项(1) 样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。(2) 样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万-沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。(3) 消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢(H2O2)2-3ml，促使氧化。(4) 在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。(5)如硫酸缺少， 过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。(6)加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。(7)混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。(8) 氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性。扩展资料：凯氏定氮法原理凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程 称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类类提高沸点，但效果不如硫酸钾。硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有氧化汞、汞、硒粉、钼酸钠等，但考虑到效果、价格及环境污染等多种因素，应用最广泛的是硫酸铜。参考资料：百度百科-凯氏定氮法

冷凝管下端进入页面以下是因为氮是也氨气的形式蒸馏出来的，如果不在页面以下，就不能完全的被吸收液吸收，造成结果偏小。氨是否完全蒸馏完全，可用PH试纸试检测馏出液是否为碱性。蒸馏完全后就去滴定。如果是用的凯氏定氮仪的话，结束后只要注意机子的保养就好了，如果是自己组装的装置那就要就要注意：蒸馏结束后，掐紧簧夹，断绝蒸气，使反应室内溶液全部吸人回流管中，再放松簧夹，从小漏斗加入蒸馏水40～50ml。再通蒸气加热和回流，放掉回流管中残液，这样反复3～4次，将反应室洗涤干净，才能备下一次测试用(标准书上只洗一次，不易洗净)。在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。扩展资料：蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量。在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。如硫酸缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾，而不与氨作用。因此，当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。参考资料来源：百度百科--凯氏定氮法

半微量，全量之分，仪器不太一样，原理都是凯氏定氮，有半微量定氮仪，全量定氮仪，

当然不是一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配制，酪蛋白用0．05n naoh配制。（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（cuso4u20225h2o）和6.0克酒石酸钾钠（knac4h4o6u20224h2o），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。2. 器材：可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。（三）操作方法1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。2、样品的测定：取2～3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。三、folin—酚试剂法（lowry法）（一）实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。folin—酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定。若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1～2倍。进行测定时，加folin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性ph条件下稳定，但上述还原反应只在ph=10的情况下发生，故当folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前，还原反应即能发生。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。此法可检测的最低蛋白质量达5mg。通常测定范围是20~250mg。（二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（a）10克 na2co3，2克 naoh和0.25克酒石酸钾钠 （knac4h4o6u20224h2o）。溶解于500毫升蒸馏水中。（b）0.5克硫酸铜（cuso4u20225h2o）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（a）与1份（b）混合，即为试剂甲。（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（na2wo4u20222h2o）,25克钼酸钠（na2moo4u20222h2o）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫 酸 锂（li2so4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准naoh滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1n左右。（3）标准蛋白质溶液: 精确称取结晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9%nacl溶液。2. 器材（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）秒表（4）试管16支（三）操作方法1. 标准曲线的测定：取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml）。用水补足到1.0毫升，然后每支试管加入5毫升试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温（20～25℃）放置10分钟。再逐管加入0.5毫升试剂乙（folin—酚试剂），同样立即混匀。这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。然后在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。以蛋白质的量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制出标准曲线。注意：因lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间，即第1支试管加入5毫升试剂甲后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入5毫升试剂甲，2分钟后加第3支试管，余此类推。全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟，则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙，1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙，2分钟后加第3支试管，余此类推。待最后一支试管加完试剂后，再放置30分钟，然后开始测定光吸收。每分钟测一个样品。进行多试管操作时，为了防止出错，每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。表中是每个试管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的顺序，逐管加入。最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量（微克）和测得的吸光度值。folin—酚试剂法实验表管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 （250mg/ml） 未知蛋白质 0.2 0.4 0.6（约250mg/ml）蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4试剂甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0试剂乙 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5每管中蛋白质的量（mg）吸光度值（a700）2. 样品的测定：取1毫升样品溶液（其中约含蛋白质20~250微克），按上述方法进行操作，取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。即在标准曲线测定的各试管后面，再增加3个试管。如上表中的8、9、10试管。根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质量，从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。注意:由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。四、改良的简易folin—酚试剂法（一）试剂1. 试剂甲：碱性铜试剂溶液中，含0.5n naoh、10%na2co3、0.1%酒石酸钾和0.05%硫酸铜，配制时注意硫酸铜用少量蒸馏水溶解后，最后加入。2. 试剂乙：与前面的基本法相同。临用时加蒸馏水稀释8倍。3. 标准蛋白质溶液：同基本法。（二）操作步骤测定标准曲线与样品溶液的操作方法与基本法相同。只是试剂甲改为1毫升，室温放置10分钟后，试剂乙改为4毫升。在55℃恒温水浴中保温5分钟。用流动水冷却后，在660nm下测定其吸光度值。改良的快速简易法，可获得与 folin—酚试剂法（即lowry基本法）相接近的结果。 五、考马斯亮兰法（bradford法）（一）实验原理双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰g-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值a595，与蛋白质浓度成正比。bradford法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的多。（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间。（3）干扰物质少。如干扰lowry法的k+、na+、mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不干扰此测定法。此法的缺点是：（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 triton x-100、十二烷基硫酸钠（sds）和0.1n的naoh。（如同0.1n的酸干扰lowary法一样）。（3）标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液，用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(bsa)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。（2）考马斯亮兰g—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰g—250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）试管16支（三）操作方法1. 标准方法（1）取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰g—250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。（2）加完试剂2-5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值a595，空白对照为第1号试管，即0.1mlh2o加5.0mlg—250试剂。注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。考马斯亮兰法实验表管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 (1.0mg/ml)未知蛋白质 0.02 0.04 0.06 (约1.0mg/ml)蒸馏水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04 考马斯亮蓝g－250试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 每管中的蛋白质量（mg）光吸收值（a595）（3）用标准蛋白质量（mg）为横座标，用吸光度值a595为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的a595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的a595约为0.50。2. 微量法当样品中蛋白质浓度较稀时（10－100mg/ml）,可将取样量（包括补加的水）加大到0.5ml或1.0ml, 空白对照则分别为0.5ml或1.0ml h2o, 考马斯亮蓝g－250试剂仍加5.0ml, 同时作相应的标准曲线，测定595nm的光吸收值。0.05mg牛血清蛋白/ml溶液的a595约为0.29。六、紫外吸收法蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。低浓度的盐，例如生化制备中常用的（nh4）2so4等和大多数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰。核酸的干扰可以通过查校正表，再进行计算的方法，加以适当的校正。但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的，虽然经过校正，测定的结果还是存在一定的误差。此外，进行紫外吸收法测定时，由于蛋白质吸收高峰常因ph的改变而有变化，因此要注意溶液的ph值，测定样品时的ph要与测定标准曲线的ph相一致。下面介绍四种紫外吸收法：1. 280nm的光吸收法因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有最大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂（水或缓冲液）作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值a280。蛋白质浓度可控制在0.1～1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿，盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时，a280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。许多蛋白质在一定浓度和一定波长下的光吸收值（a1％1cm）有文献数据可查，根据此光吸收值可以较准确地计算蛋白质浓度。下式列出了蛋白质浓度与（a1％1cm）值（即蛋白质溶液浓度为1%，光径为1cm时的光吸收值）的关系。文献值a1％1cm,?称为百分吸收系数或比吸收系数。蛋白质浓度 = (a280′10 )/ a1％1cm,280nm (mg/ml)(q 1%浓度?10mg/ml)例：牛血清清蛋白 ： a1％1cm=6.3 (280nm)溶菌酶： a1％1cm=22.8 (280nm)若查不到待测蛋白质的a1％1cm值，则可选用一种与待测蛋白质的酪氨酸和色氨酸含量相近的蛋白质作为标准蛋白质，用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0mg/ml。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（bsa）。标准曲线的测定：取6支试管，按下表编号并加入试剂：管号 1 2 3 4 5 6 bsa（1.0mg/ml） 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0h2o 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0a280用第1管为空白对照，各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度a280，以a280为纵座标，各管的蛋白质浓度或蛋白质量（mg）为横座标作图，标准曲线应为直线，利用此标准曲线，根据测出的未知样品的a280值，即可查出未知样品的蛋白质含量，也可以用2至6管a280值与相应的试管中的蛋白质浓度计算出该蛋白质的a1％1cm,280nm2. 280nm和260nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260nm处的吸收更强，其吸收高峰在260nm附近。核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍，而蛋白质则相反，280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常：纯蛋白质的光吸收比值：a280/a260 ? 1.8纯核酸的光吸收比值： a280/a260 ? 0.5含有核酸的蛋白质溶液，可分别测定其a280和a260，由此吸收差值，用下面的经验公式，即可算出蛋白质的浓度。蛋白质浓度(mg/ml)=1.45×a280－0.74×a260 此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质（酵母烯醇化酶）和核酸（酵母核酸）的混合液所测定的数据来建立的。3. 215nm与225nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280nm的光吸收测定时，可用215nm与225nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。用已知浓度的标准蛋白质，配制成20～100 mg/ml的一系列5.0ml的蛋白质溶液，分别测定215nm和225nm的吸光度值，并计算出吸收差：吸收差d= a215 －a225以吸收差d为纵座标，蛋白质浓度为横座标，绘出标准曲线。再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线上查出未知样品的蛋白质浓度。本方法在蛋白质浓度20~100mg/ml范围内，蛋白质浓度与吸光度成正比，nacl、（nh4）2so4以及0.1m磷酸、硼酸和tris等缓冲液，都无显著干扰作用，但是0.1n naoh, 0.1m乙酸、琥珀酸、邻苯二甲酸、巴比妥等缓冲液的215nm光吸收值较大，必须将其浓度降到0.005m以下才无显著影响。4. 肽键测定法蛋白质溶液在238nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500mg/ml已知浓度的5.0ml蛋白质溶液，测定238nm的光吸收值a238，以a238为纵座标, 蛋白质含量为横座标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。进行蛋白质溶液的柱层析分离时，洗脱液也可以用238nm检测蛋白质的峰位。本方法比280nm吸收法灵敏。但多种有机物，如醇、酮、醛、醚、有机酸、酰胺类和过氧化物等都有干扰作用。所以最好用无机盐，无机碱和水溶液进行测定。若含有有机溶剂，可先将样品蒸干，或用其他方法除去干扰物质，然后用水、稀酸和稀碱溶解后再作测定。不过凯式定氮法最常用

出现异常情况。感叹号的出现表示该管中出现了异常情况，气泡、漏液等问题，需要进行检查和修理。

赛维格胶囊也称《赛力哥》，作为蓝帽保健产品，含有淫羊藿、山茱萸、西洋参等珍贵药材。淫羊藿用来补命门、益精气、强筋骨、补肾壮阳之要药，临床常用于治疗男子阳痿不举、滑精早泄、小便不禁以及女子不孕等症。山茱萸用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴。西洋参具有滋阴补气、生津止渴、除烦躁、清虚火、扶正气、抗疲劳的功效。中国“三大名药店”之一的安顺堂研制，1907年，安顺堂第十二代传人张金盛在江西青江县创建京都安顺堂，与北京“同仁堂”、杭州“胡庆余堂”并誉为中国“三大名药店”。安顺堂生物科技有限公司——位于药都樟树,樟树是举世公认的中药发源地,素有“药不到樟树不齐,药不过樟树不灵”的美誉。安顺堂正是诞生、成长、发展、壮大于这片拥有近2000年药文化历史的土地上。公司生产基地占地7.9万平方米，总投资超过1亿元人民币，拥有8000平方米GMP车间，是国内最大的保健品认证厂区之一。公司生产线均从欧美、日本、瑞士、韩国等地原装进口，代表着国际最先进水平，拥有6条韩国进口的全自动软胶囊生产线，年产能力达20亿粒，安装了16条现代化的生产线，包括最先进的片剂、粉剂、口服液的全自动生产线以及全自动包装线，涵盖了保健品所有的剂型。年生产能力可达10亿元以上。公司投入巨资建设3个专业的品质保证实验室、配备Waters的高效液相色谱仪、Perkin Elmer的气液相色谱仪和近红外分光光度仪、Varian的原子吸收分光光度仪、Beck-man紫外分光光度仪、Gerhardt的凯氏定氮仪、Vankel的溶出度仪和崩解仪、Mettler Tol-edo的微量天平和滴定仪、Steris的高压灭菌锅、Labconco的无菌层流罩、Hotpack的培养箱和加速稳定性箱等等检测设备。

　　一、实验原理　蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液 滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量　　1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4 凯氏定氮法凯氏定氮法反应式为：　　2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）　　2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中反应式为:　　(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4　　2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O　　3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量　　反应式为：　　(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3　　(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3　　　　二、操作　　　1、 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验。但是此法比较危险，不易在实验室演示，现在大多数实验室有消煮仪一次可以进行多个（一次可以消煮16个样品）样品处理，并有通风橱进行通风，温度可以自己设定，更加安全和可操作性，因此逐步成为主要的凯氏定氮法的首选处理方法。　　一般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解。　　2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红 指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。　　3、向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，不能立即将玻璃盖塞紧，这样易使玻璃塞粘在进样口，应先用蒸馏水冲洗然后再盖，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。　　同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。　　　　三、计算　　　　X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100%　　X：样品中蛋白质的百分含量，g；　　V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；　　V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，ml；　　N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；　　0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；　　m：样品的质量（体积），g（ml）；　　F：氮换算为蛋白质的系数 。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。

饲料中粗蛋白测定方法（畜禽饲料与添加剂）本标准参照采用ISO5983―1979《动物饲料——氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2引用标准GB601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。4试剂4.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。4.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。4.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m／V）。4.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m／V）。4.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。4.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）＝0.1mol／L。8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。4.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）＝0.02mol／L。1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。4.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。4.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。4.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。5仪器设备5.1实验室用样品粉碎机或研钵。5.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。5.3分析天平：感量0.0001g。5.4消煮炉或电炉。5.5滴定管：酸式，10、25mL。5.6凯氏烧瓶：250mL。5.7凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。5.8锥形瓶：150、250mL。5.9容量瓶：100mL。5.10消煮管：250mL。5.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。6试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。7分析步骤7.1仲裁法7.1.1试样的消煮称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。7.1.2氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）7.1.2.1常量蒸馏法将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。7.1.2.2半微量蒸馏法将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器（5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶（5.8）使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。7.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵（4.8），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。7.1.3滴定用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol／L（4.6.1）或0.02mol／L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。7.2推荐法7.2.1试样的消煮称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）或6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。7.2.2氨的蒸馏采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。采用半自动定氮仪（5.11）时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸（4.4）为吸收液，加入2滴混合指示剂（4.5），蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3）进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。7.2.3滴定用0.1mol／L的标准盐酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。8空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0.1mol／L盐酸标准溶液（4.6.1）的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol／L盐酸标准溶液（4.6.2）体积不得超过0.3mL。9分析结果的表述9.1计算见下式：粗蛋白质（％）＝（V2－V1）c×0.0140×6.25／（m×V′／V）式中：V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；C——盐酸标准溶液浓度，mol／L；m——试样质量，g；V——试样分解液总体积，mL；V′——试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140——与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）＝1.000mol／L〕相当的、以克表示的氮的质量。6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。9.2重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。我有个现成的其他的我现在没时间你自己找吧.cn/standard/article/2006-10-20/2253-1.htm牧草我没做过如果粗蛋白的含量比较低的话建议取样加倍补充一下．饲料中Ca的测定方法GB/T6436-921.简述：本标准适应于配合饲料，浓缩料，预混合料和单一饲料。2.原理：将试样中有机物破坏，使钙溶解制备成溶液，用三乙醇胺、乙二胺、和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用EDTA标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。3.试剂：1)盐酸羟胺（AR）；2)盐酸1+1（V1+V2）；3)氢氧化钾溶液200g/L；4)三乙醇胺水溶液1+1(V1+V2)；5)乙二胺水溶液1+1（V1+V2）；6)淀粉溶液；10g/L（1%）称取1g可溶性淀粉加入200ml烧杯中，加5ml水润湿。加95ml沸水搅匀，煮沸，冷却备用（现配现用）；7)孔雀绿水溶液：1g/L；8)钙黄绿素-甲基百里香酚蓝指示剂：0.1g钙黄绿素与0.10g甲基麝香草酚蓝与0.3克百里香酚蓝，5g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用；9)EDTA标准滴定溶液(对钙的滴定度为0.4g/ml)。4.试样制备:方法:称取试样适量(预混料1g，浓缩料，全价料，鱼粉等2-4g于坩埚中)，精密称定，在电炉上小心炭化，再加入高温炉于550oC下灼烧3h（或测定粗灰分连续进行），在盛灰坩埚中加入盐酸溶液（1+1）10ml，小心煮沸，冷却至室温，将此溶液过滤（脱脂棉）转入容量瓶中（100ml），用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。5．测定准确移取试样分解液5ml，加水50ml，加淀粉溶液10ml，三乙醇胺2ml，乙二胺1ml，1滴孔雀石绿，滴加氢氧化钾溶液10ml，加0.1g盐酸羟胺(每滴一种试剂都需摇匀)，加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA标准滴定溶液，滴定至绿色消失呈现紫红色为滴定终点.6．计算钙的含量：X（%）=式中：T--------EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度，mg/mlV0-------试样分解液的总体积，mlV1-------分取试样分解液的体积，mlV2--------实际消耗EDTA标准滴定溶液的体积，mlm---------试样的质量，g所得结果应表示至二位小数7．重复性：每一试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含钙量在5%以上，允许相对偏差3%；含钙量5%--1%时，允许相对偏差5%；含钙量1%以下，允许相对偏差10%。四．饲料中总磷量的测定方法。分光光度法CB/T6437—921．简述：本标准适应于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和单一饲料。测定范围磷含量0——20mg/ml。2．方法原理：将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH)3PO4NH4VO316MoO3，，在波长420mm下进行比色测定。3．试剂：1)盐酸（1+1水溶液）硝酸高氯酸2)钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加硝酸250ml，另称取钼酸铵25g，加水400ml加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容成1000ml。避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。（注：钼酸铵倒入偏钒酸铵中）。3)磷标准液：将磷酸二氢钾在105oC干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000ml容量瓶中，加入硝酸3ml，用水稀释至刻度，摇匀，即为50mg/ml的磷标准液。4.试样的分解干法:与Ca测定试样的制备方法一致，在实际中，Ca，P使用同一分解液.5.标准曲线的制备：准确移取磷酸标准液，取0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0ml于50ml容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0ml溶液为参比，用10mm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。6．试样的测定：准确移取试样分解液0.5ml—10ml（含磷量50—750mg）（实际中取0.5ml）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸胺显色剂10ml，按5的方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查得试样分解液的含磷量。7．计算：样品中总磷含量（P%）=式中：m---------试样的质量，g；m1----------由标准曲线查得试样分解液磷含量，mg；V1---------移取试样分解液的体积，ml；V-------试样分解液的总体积，ml；所得到的结果应精确到0.01%8．允许差每个试样称取两个平行样品进行测定，以其算术平均值为测定结果，其间分析结果的相对偏差不大于下表所列相对允许偏差：磷含量%允许偏差%＞0.510≥0.53五、饲料中粗灰分的测定方法1、简述：本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及各种单一饲料中粗灰分的测定。2、方法原理：试料在550℃灼烧后所得残渣，用质量百分率来表示。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料中的砂石、土等，故称粗灰分。3、测定步骤：将干净坩埚放入高温炉，在550±20℃下灼烧30min，取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却30min，称其质量。再重复灼烧冷却至恒重。在已恒重的坩埚中称取2g试料，精密称定，在电炉上小心炭化，在炭化过程中，应将试料在较低温度状态加热灼烧至无烟，尔后升温灼烧至样品无炭粒，再放入高温炉，于550±20℃下灼烧3h。取出，在空气中冷却约1min，放入干燥器冷却至30min，称取质量。再同样灼烧1h，至恒重。4、计算结果：式中：m0——为恒重空坩埚质量，（g）；m1——为坩埚加试料后质量，（g）；m2——为灰化后坩埚加灰分的质量，（g）；所得结果应表示至0.01%5、允许误差：粗灰分含量在5%以上，允许相对偏差为1%；灰分含量在5%以下，允许相对偏差为5%。六、饲料中水溶性氯化物的测定方法快速测定法（GB/T6439-92）1．简述：本标准用于测定配合饲料和单一饲料中水溶性氯化物的测定，以及原料中水溶性氯化物的测定。2．方法原理：使试样中氯离子溶解于水中，用硝酸银标准滴定液使氯化物形成氯化银沉淀，过量的硝酸银使铬酸钾指示液变色。3．试剂：1)10%的铬酸钾指示剂2)0.1mol/L硝酸银标准滴定液（4．测定方法：称取5-10g样品，准确至0.001g，准确加蒸馏水100ml，搅拌15min，放置至澄清（或过滤），准确移取上清液25ml，10%铬酸钾指示剂1ml，用硝酸银标准溶液滴定，呈现出砖红色，且1min不褪色为终点。5．计算：式中：V0——试样稀释的总体积，ml；V2——滴定用硝酸银溶液的体积，ml；V1——移取试液的体积，ml；C——硝酸银溶液的麾尔浓度，mol/L；m——称取试样的重量，g；实际中：V0=100ml；V1=25ml；氯含量在3%以下（含3%），允许绝对误差0.05；氯含量在3%以上，允许相对偏差3%。七、饲料中粗蛋白的测定方法GB/T6432—19941、简述：本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2、原理：凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮量转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。3、试剂：1)硫酸：化学纯、含量为98%，无氮；2)混合催化剂：0.4g硫酸铜，6g硫酸钾或硫酸钠，磨碎混合均匀；3)氢氧化钠：40%水溶液（m/v）；4)硼酸：2%水溶液；5)混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。6)盐酸标准溶液：0.1mol/L（8.3ml盐酸注入1000ml蒸馏水中）。标定：4、试样的消煮：称取试样0.5g，精密称定，放入凯氏烧瓶中，加入3.4g混合催化剂，再加和10ml浓硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，共加热3小时。5、常量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入60~100ml蒸馏水，摇匀，冷水冷却。将蒸馏装置的冷凝管来端浸入装有50ml硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50ml氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏并行瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100ml。降下锥形瓶使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1~2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。6、蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按上述步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.1g±0.2%，否则应检查加碱，蒸馏和滴定各步骤是否正确。7、滴定用0.1molL的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝色变成灰红色为终点。8、计算：式中：V2——滴定试样时所需用的标准盐酸溶液的体积，ml；V1——滴定空白时所需标准盐酸溶液的体积，ml；C——盐酸的标准溶液的浓度，mol/L；m——称取试样的质量，g。0.0140——每毫克当量氮的克数；6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。9、重复性每个试样的平行样进行测定，以其算术平均什为结果。当粗蛋白质在25%以上时，允许相对偏差为1%；当粗蛋白质在10%~25%之间时，允许相对偏差为2%；当粗蛋白质在10%以下时，允许相对偏差为3%。真蛋白的检测1）称1克样品于200ml烧杯中2）加50ml水煮沸3）加10%硫酸铜20ml4）加2.5%氢氧化钠20ml边加边搅拌5）放置1小时后过滤6）用70度的热水反复洗残渣,直到滤液无硫酸根离子为止7）放入烘箱65~75度,干燥两个小时8）其余和做粗蛋白一样(硫酸过量一点)八、饲料中粗脂肪测定方法。GB/T6433—19941、简述：本标准适用于各种单一、混合饲料和预混料中粗脂肪的测定方法。2、方法原理：索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂、脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。3、试剂与仪器2)无水乙醚（AR）3)索氏脂肪提取器（带球形冷凝管）：100或150ml。4)索氏脂肪提取仪。4、使用索氏脂肪提取器测定：索氏提取器应干燥无水。抽提瓶（内有沸石数粒）在105±2℃烘箱中烘干60min，干燥器中冷却30min，称重，再烘干30min，同样冷却称重，两次重量之差小于0.0008g为恒重。称取试样1---5g，于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105℃烘箱中，烘干120min（或称测水分后的干试样，折算成风干样重），滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准。将滤纸筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加无水乙醚60----100ml，在60---75℃的水浴（用蒸馏水）上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50次（含油高的试样约70次）或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。（将试样在无水乙醚中浸泡三小时，效果更佳）取出试样，仍用原提取器回收乙醚直到抽提瓶全部收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去残余乙醚，擦净瓶外壁。将抽提瓶放入105+-2℃烘箱中烘干120min，干燥器中冷却30min称重，再烘干30min，同样冷却称重，两次重量之差小于0.001g这恒重。5、计算：粗脂肪（%）=式中：m-----风干试样重量，gm1-----已恒重的抽提瓶重量，g；m2----已恒重的盛有脂肪的抽提瓶重量，g.6、重复性每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗脂肪含量在10%以上（含10%）允许相对偏差为3%。粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。九、饲料中粗纤维的测定1适用范围本标准规定了饲料中粗纤维含量的测定方法。适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩饲料及单一饲料。2、原理用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维，它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。3、试剂3.1硫酸溶液0.128±0.005mol/L：3.2氢氧化钠溶液，0.313±0.005mol/L：3.3酸洗石棉、95％乙醇、乙醚、正辛醇（防泡剂）。4.4消煮器：有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶。4.5抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶和漏斗。（滤器使用200目不锈钢网或尼龙滤布）4.6古氏坩埚：30mL，预先加入酸洗石棉悬浮液30mL（内含酸洗石棉0.2～0.3g）再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。上下铺两层玻璃纤维有助于过滤。7、分析步骤7.1仲裁法称取1～2g试样，准确至0.0002g，用乙醚脱脂（含脂肪大于10％必须脱脂，含脂肪不大于10％，可不脱脂），放入消煮器（或大的三角烧瓶中），加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液（3.1）200mL和1滴正辛醇，立即加热，应使其在2min内沸腾，调整加热器，使溶液保持微沸，且连续微沸30min，注意保持硫酸浓度不变。试样不应离开溶液沾到瓶壁上。随后抽滤，残渣用沸蒸馏水洗至中性后抽干。用浓度准确且已沸腾的氢氧化钠溶液（3.2）将残渣转移至原容器中并加至200mL，同样准确微沸30min，立即在铺有石棉的古氏坩埚上过滤，先用25mL硫酸溶液洗涤，用沸蒸馏水洗至中性，再用15mL乙醇洗涤，抽干。将坩埚放入烘箱，于130±2℃下烘干2h，取出后在干燥器中冷却至室温，称重，再于550±25℃高温炉中灼烧30min，取出后于干燥器中冷却至室温后称重。7.2推荐法称1～2g试样（脱脂步骤同手工方法）于G2玻璃沙漏斗中，用坩埚夹将漏斗插入热萃取器；从顶部加入预先煮沸的硫酸溶液200mL和两滴正辛醇，将加热旋扭开到最大位置，待溶液沸腾后，将旋扭调到合适位置，使溶液保持微沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，加入预先煮沸的氢氧化钠溶液200mL，同样准确微沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，将坩埚转移至冷萃取器，加入25mL95％乙醇，抽干，将漏斗转移到烘箱，于130±2℃下烘干2h，取出后在干燥器中冷却至室温，称重。再放入500±25℃高温炉中灼烧1h，干燥器中冷却至室温后称重。型号不同的仪器具体操作步骤见该仪器使用说明书。8测定结果的计算8.1计算公式粗纤维（％）＝（m1－m2）/m式中：m1——130℃烘干后坩埚及试样残渣重，g；m2——550℃（或500℃）灼烧后坩埚及试样残渣重，g；m——试样（未脱脂）质量，g。8.2重复性每个试样取两平行样进行测定，以算术平均值为结果。粗纤维含量在10％以下，绝对值相差0.4。粗纤维含量在10％以上，相对偏差为4％。

一般是根据产品标准要求选测定方法的，食品中蛋白质测定的最常用方法当然是凯氮测定法：常量凯氏定氮法和微量凯氏定氮法。我大学时还做过考马斯亮蓝半微量定氮法，与最新标准一致，我这有稍微简化的方法：以饼干为例：称取2.000克于定氮瓶中，加20mL浓硫酸，加0.2g硫酸铜，加3.0g硫酸钾，然后进行消化，消化至澄清液体后倒入100mL具塞比色管，3次清洗定氮瓶，洗液并入100mL具塞比色管，蒸馏水加至100mL刻度线，摇匀，取10mL进半微量定氮装置蒸馏，收集瓶中为2%硼酸溶液10mL，以甲基红-亚甲蓝为指示剂2滴，用购置的0.1000标准溶液进行滴定，步骤结束。要点：称量需准确；吸取也准确；玻璃仪器需检定合格。

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凯氏定氮法只能检测蛋白质中氮含量，不能检测氨基酸的含量。其中蛋白质含量也只是称为粗蛋白质的含量，只是用氮的含量乘以6.25（系数）得出，不是真正的蛋白质的含量。凯氏定氮法测氮的方法如下：1、称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，无损失地放入凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钾（或硫酸钠）15g，与试样混合均匀，再加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消煮炉士小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（360～410℃）直至溶液澄清后，再加热消化15min。2、氨的蒸馏（1）常量直接茂馏法 将上述的试样消煮液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。沿瓶壁小心加入40％氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连．蒸馏装置冷凝管的末端应浸入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏，直至馏出液体积约150ml。先将吸收液取下，再停止加热。（2）半微量水蒸汽蒸馏法 上述试样的消煮液冷却，加蒸馏水20m1转入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。取2％硼酸溶液20ml，加混合指示剂2滴，使半微量蕉馏装置的冷凝管末端浸入此溶液；蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色，否则应补加少许硫酸。准确移取试样分解液10～20ml注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml40％氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，并在入口处加水封密好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。3、滴定 用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol

凯氏定氮法定氮瓶斜着放的原因是防止溶液爆沸外溢。根据查询相关资料信息，硝化时溶液会沸腾，将定氮瓶斜着放可以防止溶液爆沸外溢。凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。