如何在NCBI上找到基因外显子或内含子的序列

据基因的构成原理寻找基因序列，如下：A、C、G和T分别代表组成DNA的四种核苷酸——腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤，胸腺嘧啶。每个字母代表一种碱基，两个碱基形成一个碱基对，碱基对的配对规律是固定的，即是：A-T,C-G。典型的他们无间隔的排列在一起，例如序列AAAGTCTGAC。任意长度大于4的一串核苷酸被称作一个序列。关于它的生物功能，则依赖于上下文的序列，一个序列可能被正读，反读；包含编码或者无编码。DNA序列也可能包含“junk DNA”。注：带有遗传讯息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因。扩展资料：基因诊断当环境中的有害物质进入受精卵或母体，当父母有一定的共同血缘或有一定相同数目的遗传基因关系，在这些情况下，后代的基因组里的基因会发生缺陷，产生疾病。通过使用基因芯片等技术分析人类基因组，可找出致病的遗传缺陷基因区域。癌症、糖尿病等，都是遗传基因缺陷引起的疾病。医学和生物学研究人员将能在数秒钟内鉴定出最终会导致癌症等的突变基因。借助一小滴测试液，医生们能预测药物对病人的功效，可诊断出药物在治疗过程中的不良反应，还能当场鉴别出病人受到了何种细菌、病毒或其他微生物的感染。利用基因芯片分析遗传基因，将使10年后对糖尿病的确诊率达到50%以上。未来人们在体检时，由搭载基因芯片的诊断机器人对受检者取血，转瞬间体检结果便可以显示在计算机屏幕上。利用基因诊断，医疗将从千篇一律的“大众医疗”的时代，进一步精确到依据个人遗传基因而异的“定制医疗”的时代，也可以抽羊水进行产前基因诊断。参考资料来源：百度百科-DNA序列

简单说就是碱基的排列,组合成不同的密码子,再转录成不同的氨基酸,通过氨基酸排列顺序形成不同的蛋白质,组成各种器官和组织

　　CDS是编码序列Coding sequence的缩写。DNA转录成mRNA，mRNA经剪接等加工后翻译出蛋白质，所谓CDS就是与蛋白质序列一 一对应的DNA序列，且该序列中间不含其它非该蛋白质对应的序列，不考虑mRNA加工等过程中的序列变化，总之，就是与蛋白质的密码子完全对应。CDS是编码一段蛋白产物的序列，是结构基因组学术语。ORF开放阅读框是基因序列的一部分，包含一段可以编码蛋白的碱基序列，不能被终止子打断。当一个新基因被识别，其DNA序列被解读，人们仍旧无法搞清相应的蛋白序列是什么。　　基本区别(1)开放读码框是从一个起始密码子开始到一个终止密码子结束的一段序列;不是所有读码框都能被表达出蛋白产物，或者能表达出占有优势或者能产生生物学功能的蛋白。　　(2) CDS，是编码一段蛋白产物的序列。　　(3) cds必定是一个orf。但也可能包括很多orf。　　(4)反之，每个orf不一定都是cds。　　希望对您有所帮助

人类基因组：指人体DNA分子所携带的全部遗传信息。由24条双链的DNA分子组成（包括1~22号染色体DNA与X、Y染色体DNA），上边有30亿个碱基对，30多亿个碱基对构成的人类基因组精确测序，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息。30亿个碱基对，太庞大了，无法精确的告知你序列是什么样的。但可以告诉你：人类基因组计划： 1、概念：是指分析测定人类基因组的核苷酸序列。 2、主要内容：绘制人类基因组的四张图，即遗传图、物理图、序列图和转录图。绘制这四张图好比是建立一个“人体地图”，沿着地图中一个个路标，如“遗传标记”、“物理标记”等，可以一步步地找到每一个基因，搞清楚每一个基因的核苷酸序列。 3、进展：2000年6月26日，6国科学家向世界宣布：“人类基因组草图”的绘制工作已经全部完成。预计到2003年，“人类基因组精图”的绘制工作也将全部完成。 4、意义：（1）对于各种疾病，尤其是各种遗传病的诊断、治疗具有划时代的意义；（有利于疾病的诊断和治疗。）（2）对于进一步了解基因表达的调控机制、细胞的生长、分化和个体发育的机制，以及生物的进化等也具有重要的意义；（有利于研究基因的表达和调控机制）； （有利于研究生物的进化。）（3）将推动生物高新技术的发展，并产生巨大的经济效益。（有利于培育优良的动植物品种）。另外，美国奎格61文特研究所和多伦多儿童医院以及加州大学的研究者日前公布了奎格61文特本人的基因组序列，这是世界上第一次公布单个个体二倍体的基因组序列，初步分析报告发表在最新一期的《PLOS生物学》上。

我一般是在NCBI上面找，世界上有三个大的数据库，NCBI是其中一个，美国的，这个我觉得是最好的。在上边查找基因序列方法是：首先打开NCBI网站首页，然后在search一栏中选择nucleotide，在框中输入你要的基因序列名称，点击search就行。然后会出来很多结果，因为很多基因是同名的，或是一个基因在不同种属中不一样，寻找你要的基因序列就行了。注意的是，要确定你的基因名称是否是统一的，我以前就是找一个基因费了很多事，之后发现是自己没有用通用的。找到基因序列，蛋白序列就很容易了，因为结果中会显示该基因的蛋白序列。你也可以在开始search的时候选protein，找到的就是蛋白序列了。多尝试就好了，其实很简单，英文不错的话，更简单。要有耐心。只要已经测过序的基因上边都有，而且这是最全的基因库。其他的不用考虑，找不到就只能考虑上边本人的经验。

我一般是在NCBI上面找，世界上有三个大的数据库，NCBI是其中一个，美国的，这个我觉得是最好的。在上边查找基因序列方法是：首先打开NCBI网站首页，然后在search一栏中选择nucleotide，在框中输入你要的基因序列名称，点击search就行。然后会出来很多结果，因为很多基因是同名的，或是一个基因在不同种属中不一样，寻找你要的基因序列就行了。注意的是，要确定你的基因名称是否是统一的，我以前就是找一个基因费了很多事，之后发现是自己没有用通用的。找到基因序列，蛋白序列就很容易了，因为结果中会显示该基因的蛋白序列。你也可以在开始search的时候选protein，找到的就是蛋白序列了。多尝试就好了，其实很简单，英文不错的话，更简单。要有耐心。只要已经测过序的基因上边都有，而且这是最全的基因库。其他的不用考虑，找不到就只能考虑上边本人的经验。

在NCBI上面找在上边查找基因序列方法是： 首先打开NCBI网站首页，然后在search一栏中选择nucleotide，在框中输入要的基因序列名称，点击search就行。然后会出来很多结果，因为很多基因是同名的，或是一个基因在不同种属中不一样，寻找要的基因序列就行了。注意的是，要确定基因名称是否是统一的，找到基因序列，蛋白序列就很容易了，因为结果中会显示该基因的蛋白序列。可以在开始search的时候选protein，找到的就是蛋白序列了。

基因组序列：包含所有基因组染色体在内的所有DNA序列，不仅仅包含所有的基因序列。按照染色体序号 编写章节。是一本仅仅包含“ATCG”四个字母的天书，看起来很无聊的。。。基因序列：一般是指功能基因的序列，从起始密码子开始到终止密码子结束的一段DNA序列，同样 也只含有“ATCG”四个字母，序列要短小的多。（基因组：含有一套完整遗传信息的集合，即配子的遗传物质，人类基因组包含：22条常染色体+X+Y ）

1、打开NCBI百度搜索键入“NCBI”，点击“搜索”，第一个就是官方主页，点击打开。2、关键字查找以H9亚型流感病毒HA基因下载为例，说明详细过程。既然要下载基因序列，需要在栏目内找到“Nucleotide”（核苷酸），搜索栏内填入“Avian influenza virus H9 HA”，点击“search”。3、添加限定词点击搜索后，我们看到页面中间显示了很多关于“Avian influenza virus H9 HA”的基因序列，如果其中的一个符合你的要求，就可以下载。如何不符合的要求，可以继续在搜索条内添加限定，比如添加“2010”，即2010年分离到的病毒。3、序列选定找到目标基因序列后，我们要将其下载下来。以给出第一个序列为例，点击序列前面的“小方格”，将其选定。4、下载序列选定后，点击页面右上角的“Send to”，选择“file”，再将format选择为“FASTA”格式，点击“Create file”，将序列下载到自定的文件夹内。5、用DNAStar打开下载的序列为FASTA格式，需要使用相关的软件打开，小编经常使用的是DNAStar中的Editseq，这个功能还是很强大的。

植物基因组通常具有较高的重复序列，且很多为多倍体，因此组装植物基因组具有一定的挑战性。双子叶模式植物拟南芥、单子叶模式植物水稻基因组序列分别在2000年、2005年公布，它们都是基于BAC克隆及sanger法测序的方法获得的，至今在植物基因组序列中其质量依然是最好的。二代测序技术的出现及发展，极大地加快了植物基因组的研究进程，已经有超过200种植物获得了基因组序列，但是由于二代测序读长短，大部分的基因组组装结果都不高，含有数千个scaffolds；虽然基因区相对完整，但是富含转座元件的区域都装得比较碎，且明显低估了这些区域的比例，仅有少部分组装到了染色体水平。近年来，随着三代PacBio、Oxford Nanopore测序技术的发展，可以获得较长的DNA片段，采用一定的组装软件，较为容易获得高质量的组装结果，尤其是在提高序列的完整性及重复序列组装方面有了很大的改善。不过到目前为止，依然只有少数植物基因组组装的完整性较好，contig N50>5Mb的只有6个；另外即使是基于长读长reads得到较长的contigN50(>1Mb)，要想获得染色体水平的序列依然是不太容易的。下面，小编通过Nature Plant一篇文献“Chromosome-scale assemblies of plant genomes using nanopore long reads and optical maps”了解下如何通过采用三代测序加上optical maps、Illumina二代数据及遗传图谱的策略获得染色体级别的植物基因组序列吧。组装结果文章研究了三个物种，分别为双子叶芸薹属的B. rapa(yellow sarson,Z1)，B.oleracea(broccoli, HDEM)及单子叶芭蕉属的Musa schizocarpa(banana)，这3个物种B.rapa Chiifu、B. oleracea To1000、Musa acuminate Pahang-HD曾采用short-reads策略获得了基因组序列，不过序列多为片段化(contig N50<50kb)。

打开Pubmed后，在最顶上的下拉框中选中nucleotide, 然后输入基因的名称，这样查出来的一般是mRNA序列如果在下拉框中选Gene，则查出来的一般是该基因的其他信息。注意，结果一般会有好多，选中你要的种属。

人类基因组：指人体DNA分子所携带的全部遗传信息。由24条双链的DNA分子组成（包括1~22号染色体DNA与X、Y染色体DNA），上边有30亿个碱基对，30多亿个碱基对构成的人类基因组精确测序，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息。30亿个碱基对，太庞大了，无法精确的告知你序列是什么样的。基因组序列包含的遗传信息是转录和翻译。特定的序列组成了DNA的密码,转录和翻译.这些过程都是按照特定的DNA的核苷酸序列进行的,需要按照一定的顺序输入才能正确启动复制遗传信息的传递就是DNA的复制

在NCBI主页上方search栏左边有一个database选择框，点击下拉三角形选择nucleotide（如图红框）在search栏输入基因名搜索即可。以人的orc1基因为例，在搜索结果中选择mRNA和complete cds序列的结果都可以，如下点击进入序列文件查看详情，以上图搜索结果18为例，点开后界面如下向下找到cds标签点击CDS跳出如下界面棕色标记的序列就是cDNA序列，旁边有对应的氨基酸序列。如果搜索结果太多，可以在检索结果中按物种筛选，如下图红框。以上即是基本步骤。

双链，双螺旋，碱基互补配对

到这个网页http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed在靠近最上方的下拉箭头，点击，选中Gene。然后在右侧的空格处输入基因的名称（英文). 点回车就可以了。会得到好几个结果，属于不同物种，人的是[Homo sapiens(human)]

就是整个基因组DNA全部的核苷酸序列

>guanylate cyclase 1, soluble, alpha 3 (GUCY1A3)atgttctgcacgaagctcaaggatctcaagatcacaggagagtgtcctttctccttactggcaccaggtcaagttcctaacgagtcttcagaggaggcagcaggaagctcagagagctgcaaagcaaccgtgcccatctgtcaagacattcctgagaagaacatacaagaaagtcttcctcaaagaaaaaccagtcggagccgagtctatcttcacactttggcagagagtatttgcaaactgattttcccagagtttgaacggctgaatgttgcacttcagagaacattggcaaagcacaaaataaaagaaagcaggaaatctttggaaagagaagactttgaaaaaacaattgcagagcaagcagttgcagcaggagttccagtggaggttatcaaagaatctcttggtgaagaggtttttaaaatatgttacgaggaagatgaaaacatccttggggtggttggaggcacccttaaagattttttaaacagcttcagtacccttctgaaacagagcagccattgccaagaagcaggaaaaaggggcaggcttgaggacgcctccattctatgcctggataaggaggatgattttctacatgtttactacttcttccctaagagaaccacctccctgattcttcccggcatcataaaggcagctgctcacgtattatatgaaacggaagtggaagtgtcgttaatgcctccctgcttccataatgattgcagcgagtttgtgaatcagccctacttgttgtactccgttcacatgaaaagcaccaagccatccctgtcccccagcaaaccccagtcctcgctggtgattcccacatcgctattctgcaagacatttccattccatttcatgtttgacaaagatatgacaattctgcaatttggcaatggcatcagaaggctgatgaacaggagagactttcaaggaaagcctaattttgaagaatactttgaaattctgactccaaaaatcaaccagacgtttagcgggatcatgactatgttgaatatgcagtttgttgtacgagtgaggagatgggacaactctgtgaaaaaatcttcaagggttatggacctcaaaggccaaatgatctacattgttgaatccagtgcaatcttgtttttggggtcaccctgtgtggacagattagaagattttacaggacgagggctctacctctcagacatcccaattcacaatgcactgagggatgtggtcttaataggggaacaagcccgagctcaagatggcctgaagaagaggctggggaagctgaaggctacccttgagcaagcccaccaagccctggaggaggagaagaaaaagacagtagaccttctgtgctccatatttccctgtgaggttgctcagcagctgtggcaagggcaagttgtgcaagccaagaagttcagtaatgtcaccatgctcttctcagacatcgttgggttcactgccatctgctcccagtgctcaccgctgcaggtcatcaccatgctcaatgcactgtacactcgcttcgaccagcagtgtggagagctggatgtctacaaggtggagaccattggcgatgcctattgtgtagctgggggattacacaaagagagtgatactcatgctgttcagatagcgctgatggccctgaagatgatggagctctctgatgaagttatgtctccccatggagaacctatcaagatgcgaattggactgcactctggatcagtttttgctggcgtcgttggagttaaaatgccccgttactgtctttttggaaacaatgtcactctggctaacaaatttgagtcctgcagtgtaccacgaaaaatcaatgtcagcccaacaacttacagattactcaaagactgtcctggtttcgtgtttacccctcgatcaagggaggaacttccaccaaacttccctagtgaaatccccggaatctgccattttctggatgcttaccaacaaggaacaaactcaaaaccatgcttccaaaagaaagatgtggaagatggcaatgccaattttttaggcaaagcatcaggaatagattag>guanylate cyclase 1, soluble, beta 3 (GUCY1B3)atgtacggatttgtgaatcacgccctggagttgctggtgatccgcaattacggccccgaggtgtgggaagacatcaaaaaagaggcacagttagatgaagaaggacagtttcttgtcagaataatatatgatgactccaaaacttatgatttggttgctgctgcaagcaaagtcctcaatctcaatgctggagaaatcctccaaatgtttgggaagatgtttttcgtcttttgccaagaatctggttatgatacaatcttgcgtgtcctgggctctaatgtcagagaatttctacagaaccttgatgctctgcacgaccaccttgctaccatctacccaggaatgcgtgcaccttcctttaggtgcactgatgcagaaaagggcaaaggactcattttgcactactactcagagagagaaggacttcaggatattgtcattggaatcatcaaaacagtggcacaacaaatccatggcactgaaatagacatgaaggttattcagcaaagaaatgaagaatgtgatcatactcaatttttaattgaagaaaaagagtcaaaagaagaggatttttatgaagatcttgacagatttgaagaaaatggtacccaggaatcacgcatcagcccatatacattctgcaaagcttttccttttcatataatatttgaccgggacctagtggtcactcagtgtggcaatgctatatacagagttctcccccagctccagcctgggaattgcagccttctgtctgtcttctcgctggttcgtcctcatattgatattagtttccatgggatcctttctcacatcaatactgtttttgtattgagaagcaaggaaggattgttggatgtggagaaattagaatgtgaggatgaactgactgggactgagatcagctgcttacgtctcaagggtcaaatgatctacttacctgaagcagatagcatactttttctatgttcaccaagtgtcatgaacctggacgatttgacaaggagagggctgtatctaagtgacatccctctgcatgatgccacgcgcgatcttgttcttttgggagaacaatttagagaggaatacaaactcacccaagaactggaaatcctcactgacaggctacagctcacgttaagagccctggaagatgaaaagaaaaagacagacacattgctgtattctgtccttcctccgtctgttgccaatgagctgcggcacaagcgtccagtgcctgccaaaagatatgacaatgtgaccatcctctttagtggcattgtgggcttcaatgctttctgtagcaagcatgcatctggagaaggagccatgaagatcgtcaacctcctcaacgacctctacaccagatttgacacactgactgattcccggaaaaacccatttgtttataaggtggagactgttggtgacaagtatatgacagtgagtggtttaccagagccatgcattcaccatgcacgatccatctgccacctggccttggacatgatggaaattgctggccaggttcaagtagatggtgaatctgttcagataacaatagggatacacactggagaggtagttacaggtgtcataggacagcggatgcctcgatactgtctttttgggaatactgtcaacctcacaagccgaacagaaaccacaggagaaaagggaaaaataaatgtgtctgaatatacatacagatgtcttatgtctccagaaaattcagatccacaattccacttggagcacagaggcccagtgtccatgaagggcaaaaaagaaccaatgcaagtttggtttctatccagaaaaaatacaggaacagaggaaacaaagcaggatgatgactga建议你去ncbi上自己看看，找找。http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=gene&Cmd=retrieve&dopt=full_report&list_uids=2982&log$=databasead&logdbfrom=nuccorehttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=gene&Cmd=retrieve&dopt=full_report&list_uids=2983&log$=databasead&logdbfrom=nuccore

人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)旨在通过测定人类基因组DNA约3×109对核苷酸的序列，探寻所有人类基因并确定它们在染色体上的位置，明确所有基因的结构和功能，解读人类的全部遗传信息，使得人类第一次在分子水平上全面认识自我。 人类基因组DNA序列分布于22条常染色体和2条性染色体上，目前人们已掌握其信息储存与表达规律的基因，只占其中的一小部分。对人类基因组的研究，并不是为了单纯地积累数据，而是为了揭示大量数据中所蕴藏的内在规律，从而更好地认识和保护生命体。由于载有基因的染色体不能直接用来测序，人类基因组计划的战略构想是将人类的整个基因组一步步由粗到细地进行有序的划分，最后得到可用于测序的重叠度最小的连续克隆系，将基因组分解成为较易操作的小的结构区域的过程称为作图，根据所用标志和手段不同，可分为遗传连锁图、物理图和转录图(也称基因图)。分解得到的大片段DNA一般采用下列步骤进行测序：(1)将待测大片段DNA的克隆体随机切成小片段(约1500bp)；(2)将小片段克隆入测序载体；(3)对每kb的DNA进行10个～30个亚克隆的高覆盖率测序；(4)将相互重叠的读出序列组装成连续的多序列的重叠线；(5)从质量最高的读出序列中取得最后的确认序列。 人类基因组计划把“作图”定为测序的前提，目的是保证人类整个基因组的完整性，然而作图速度会限制基因组DNA的测序速度。自宣布成功绘制人类基因组草图和公布人类基因组测序草图至今，对人类基因的研究又取得了一系列重大的发现： 1 人类基因总数在3万个到3.5万个之间，低于原来估计数目的一半。这说明人类在使用基因上比其它物种更为高效。 2 基因组中存在着基因密度较高的“热点”区域和大片不携带人类基因的“荒漠”区域。研究结果表明：基因密度在第17、19和22号染色体上最高，在X、Y、第4号和第18号染色体上密度较小。 3 大约1/3以上基因组包含重复序列，这些重复序列的作用有待进一步研究。 4 所有人都具有99.99%的相同基因，而且不同人种的人比同一人种的人在基因上更为相似，任何两个不同个体之间大约每1000个核苷酸序列中会有一个不同，这称为单核苷酸多态性(SNP)，每个人都有自己的一套SNP，它对“个性”起着决定的作用。 人类基因组计划对生命科学的研究和生物产业的发展具有非常重要的意义，它为人类社会带来的巨大影响是不可估量的。 首先，获得人类全部基因序列将有助于人类认识许多遗传疾病以及癌症等疾病的致病机理，为分子诊断、基因治疗等新方法提供理论依据。在不远的将来，根据每个人DNA序列的差异，可了解不同个体对疾病的抵抗力，依照每个人的“基因特点”对症下药，这便是21世纪的医学——个体化医学。更重要的是，通过基因治疗，不但可预防当事人日后发生疾病，还可预防其后代发生同样的疾病。 第二，破译生命密码的人类基因组计划有助于人们对基因的表达调控有更深入的了解。人体内真正发挥作用的是蛋白质，人类功能基因组学便是应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体特定序列的表达谱。有人将HGP比作生命周期表，因为它不再是从研究个别基因着手，而是力求在细胞水平解决基因组问题，同时研究所有基因及其表达产物，以建立对生命现象的整体认识。目前，研究者已着手通过DNA芯片等新技术对基因的表达展开全面研究，也通过蛋白质芯片的制作，标准化双向蛋白质凝胶电泳、色谱、质谱等分析手段对人类可能存在的几十万种蛋白质或多肽的特征和功能进行研究。科学家预言，蛋白质组的研究将导致药物开发方面实质性的突破，以使人类真正攻克癌症等顽疾。最后，人类基因组图谱对揭示人类发展、进化的历史具有重要意义。对进化的研究，不再建立在假说的基础上，利用比较基因组学，通过研究古代DNA，可揭示生命进化的奥秘以及古今生物的联系，帮助人们更好地认识人类在自然界中的地位。

我来总结一下吧——! 人类基因组计划测定的是人类染色体上的全部基因序列. 从基因序列的种类来看,它是测定了全部染色体上的全部基因序列. 在实际测定过程中,由于人是二倍体生物,所以只需要测定24条染色体（22条常染色体加X、Y2条性染色体）上的DNA序列 即可. 也就是说,人类基因组计划通过人体的部分染色体测定了人体全部染色体上的全部基因序列. !好累.懂了没?

您好！基因, 也称为遗传因子, 是指携带有遗传信息的DNA序列，是控制性状的基本遗传单位。基因通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。一般来说，生物体中的每个细胞都含有相同的基因，但并不是每个细胞中的每个基因所携带的遗传信息都会被表达出来。细胞类型的不同只是由于基因表达不同而已。

在NCBI主页上方search栏左边有一个database选择框,点击下拉三角形选择nucleotide（如图红框）在search栏输入基因名搜索即可.以人的orc1基因为例,在搜索结果中选择mRNA和completecds序列的结果都可以,如下点击进入序...

16S rRNA基因是细菌上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的基因组中。16S rRNA具有高度的保守性和特异性以及该基因序列足够长（包含约50个功能域）。随着PCR技术的出现及核酸研究技术的不断完善，16S rRNA基因检测技术已成为病原菌检测和鉴定的一种强有力工具。数据库的不断完善，应用该技术可以实现对病原菌进行快速、微量、准确简便地分类鉴定和检测。该技术主要有三个步骤：首先是基因组DNA的获得，其次是16S rRNA基因片段的获得，最后是进行16S rRNA基因序列的分析。16S RNA 即 16S ribosomal RNA，是原核核糖体30S小亚基的组成部分。16S中的"S"是一个沉降系数，亦即反映生物大分子在离心场中向下沉降速度的一个指标，值越高，说明分子越大。16S rRNA具有多项功能。1.对于核糖体蛋白的固定起到脚手架的作用。2.3"末端包含反向的SD序列，用来与mRNA的AUG起始密码子结合。16S rRNA的3"端与S1、S21的结合被发现与蛋白质合成的开始有关系。3.与23S进行交互，帮助两个核糖体子单元的结合。（50S+30S）4.在A site 稳定密码子与反密码子的正确配对。

1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

如何确定基因的内含子和外显子序列及基因结构图1、首先输入基因的完整学名,找到与基因相关的cDNA序列.在这一cRNA序列的解说信息里,就已经有各外显子的分节.2、将该cDNA输入Blast进行序列比对,就可以找到其每一个外显子所对应的染色体位置,这些信息就显示了所有的外显子.处于外显子两端的序列就是内含子.3、如你需要完整的基因序列,需要在blast中选择others这个数据库,然后查找相关的Bac质粒中含有你完整基因的文件,在其中找到你所需的信息.

既然已经有了推荐答案，就补充回答几点吧：首先，楼主的问题没有那么混乱的，不要紧张。补充瑜玥的回答：两个基因的编码框有重叠是存在的，无论是同链重叠还是异链重叠。而且个人认为从基因组的大小和进化的角度来看，这也应该是可以存在的。这个在pubmed上可以找到不少文献，不具体说了，给篇综述（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18410680）其次，针对楼主的追问。箭头指代的确实是基因的读取方向。我想楼主不太清楚的地方应该是DNA双链是反向平行的；而RNA的转录合成由于RNA聚合酶的特性，是从3‘到5"端读取DNA，合成的RNA是从5‘到3"。所以说楼主提到的方向问题（3‘-5"）没有错，只不过DNA双链反向平行的特性决定了转录RNA的方向有可能不同向。 所以楼主说的“DNA的两条链中有一条是模板链，但是不是说两条链中任何一条链，任何时候都不绝对是模板链，而要看某个基因了，那个基因在那条链上，就以那条链做模板，基因在另一条互补链上，表达的时候就要更换模板”是对的。但其实不存在更换模板的问题，转录开始时RNA聚合酶结合到DNA上的时候方向就选定了（当然这一点好像最近有一些新的进展争议，我的说法不一定严格，但意思应该还是对的），所以不要想像有个什么跳跃更换的过程，两条链是平等的，就是一个选择问题，不存在转录到一半跳到另一条链上之类的事情。 我就不用楼主的“基因序列的方向”这种说法了，既然两条DNA链是反向平行的，那么选择不同的链，转录合成RNA的前进方向也就不同，所以需要用箭头表示出来。在用NCBI、UCSC等基因组浏览器时，在看基因的时候，你也是可以看到箭头的，方向有可能相同，也有可能不同。 回到楼主的pBR22这个质粒，楼主在网上看到解释是对的，只不过个人不太喜欢它的用词。其实基因无所谓在那条链上，实际研究中常用的是“转录方向”，我会说启动子的转录方向和抗性基因的转录方向相反。所以这样看来楼主追问中提到的两种说法表达的意思是一致的。

基因的蛋白质编码序列是CDS序列，可以叫coding segment或coding sequence。这条序列从ATG启动密码子开始，终止密码子结束。所有的CDS都是ORF（开发阅读框 open reading framework），ORF就是ATG开始，终止密码子结束的一条序列，但ORF不一定编码蛋白，这是它和CDS的区别，只有编码蛋白的ORF才是CDS。对于真核生物来说，mRNA是由外显子组成的。真核生物在转录后产生核不均一RNA（hnRNA）经过修饰加工可变剪切（除去内含子）形成成熟mRNA。原核生物则不需要。所以在生物信息学中单纯使用查找ATG的方式找ORF只适合原核生物或mRNA，真核有专门的基因预测软件。基因（遗传因子）是产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。基因支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡等过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖，演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定生命健康的内在因素。因此，基因具有双重属性：物质性（存在方式）和信息性（根本属性）。

今年，全球面临着巨大的困难和挑战，因为我们碰到了新冠病毒。这种病毒也是第一次被人们发现，它有着较强的变异性和传播性，目前已在全球蔓延开来，累计确诊新冠患者已达两千多万，累计死亡病例达到81万。形势似乎越来越严峻，甚至产生了毒株变异，疫苗的研发，也显得迫在眉睫。在8月21日，世卫组织举行新冠肺炎例行发布会，世卫组织总干事发表了演讲。一、变异不影响传染性世卫组织卫生部表示，目前全球已有超过八万个新冠病毒基因序列，大部分变异不会影响病毒的传染性和严重性。世卫组织已成立专门工作组，确认不同的变异，并研究其可能对病毒行为产生的影响。并希望可以能在两年之内结束新冠大流行，充分利用包括疫苗在内的抗疫工具。二、什么是基因序列那到底什么是基因序列呢？基因序列是使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。部分DNA序列或基因序列使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构，任意长度大于4的一串核苷酸被称作一个序列。三、疫情前的自我保护俄罗斯是世界上首个正式注册新冠疫苗的国家，但是根据调查显示，准备接种国产新冠疫苗的俄罗斯民众只占四成，不打算接种的居然占到五成，俄罗斯民众对于新冠疫苗的安全性还是比较担忧的。所以当疫苗的安全性还没有完全得到保证的时候，我们更应该做好自我保护。尽量不去人流密集的场所；出门戴口罩，养成勤洗手、多测体温以及给房屋通风的习惯；在居家隔离期间，也要保持适当的锻炼，增强自己的抵抗力。保护好我们自己，其实也是为疫情出了一份力。

　　1、双序列比对需要BLAST，NCBI上有，也可以在百度搜索本地版的下载下来。　　2、多序列比对需要cluxtal X软件， 要把所有基因序列fasta格式放在一起，需要输入所有序列的fasta格式，然后进行多序列联配。

你先看看你引物序列是什么吧，如果是巢氏PCR的引物，很有可能一部分序列是不在靶基因中的。即使是一般的PCR引物，也可以只有3"端的一部分序列与靶基因匹配即可。 如果你想验证，直接合成后PCR，然后测序，验证下是不是得到EGFR序列即可。 当然，你也可以根据EGFR基因自己设计引物，这个很容易。

1.碱基序列：碱基序列通常是指核苷酸序列,包括核糖核酸序列和脱氧核糖核酸序列（即DNA序列和RNA序列）2.基因序列：基因序列是指具有遗传效应的DNA片段.并非所有DNA都是基因.所以基因序列就只是指具有遗传效应的DNA序列（即能翻译出蛋白质的DNA序列）3.基因重组是原有基因的重新组合，并没有产生新基因，而是产生了新的基因型4.基因突变是染色体上某一位点基因上碱基的而改变，突变的结果产生了新的基因（等位基因）5.染色体变异是指染色体结构和数目发生变化

真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。基因序列中的字母只有四种，即A、C、G、T，分别代表组成DNA的四种核苷酸。腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤，胸腺嘧啶，任意长度大于4的一串核苷酸被称做一个序列，每个字母代表一种碱基，两个碱基形成一个碱基对，碱基对的配对规律是固定的。部分DNA序列或基因序列使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。

在NCBI上面找在上边查找基因序列方法是： 首先打开NCBI网站首页，然后在search一栏中选择nucleotide，在框中输入要的基因序列名称，点击search就行。然后会出来很多结果，因为很多基因是同名的，或是一个基因在不同种属中不一样，寻找要的基因序列就行了。注意的是，要确定基因名称是否是统一的，找到基因序列，蛋白序列就很容易了，因为结果中会显示该基因的蛋白序列。可以在开始search的时候选protein，找到的就是蛋白序列了。

部分DNA序列或基因序列使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。可能的字母只有A，C，G和T，分别代表组成DNA的四种核苷酸——腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤，胸腺嘧啶。每个字母代表一种碱基，两个碱基形成一个碱基对，碱基对的配对规律是固定的，即是：A-T,C-G。典型的他们无间隔的排列在一起，例如序列AAAGTCTGAC。任意长度大于4的一串核苷酸被称做一个序列。关于它的生物功能，则依赖于上下文的序列，一个序列可能被正读，反读；包含编码或者无编码。DNA序列也可能包含"junk DNA"。

如何在NCBI上找某个基因的mRNA序列1 打开NCBI主页2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

1 打开NCBI主页 2 左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称 3 在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属。 4 再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK。 5 最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区域范围来看。

1、首先输入基因的完整学名,找到与基因相关的cDNA序列.在这一cRNA序列的解说信息里,就已经有各外显子的分节.2、将该cDNA输入Blast进行序列比对,就可以找到其每一个外显子所对应的染色体位置,这些信息就显示了所有的外显子.处于外显子两端的序列就是内含子.3、如你需要完整的基因序列,需要在blast中选择others这个数据库,然后查找相关的Bac质粒中含有你完整基因的文件,在其中找到你所需的信息.

是5‘端到3"端

人类基因组DNA序列分布于22条常染色体和2条性染色体上，目前人们已掌握其信息储存与表达规律的基因，只占其中的一小部分。对人类基因组的研究，并不是为了单纯地积累数据，而是为了揭示大量数据中所蕴藏的内在规律，从而更好地认识和保护生命体。由于载有基因的染色体不能直接用来测序，人类基因组计划的战略构想是将人类的整个基因组一步步由粗到细地进行有序的划分，最后得到可用于测序的重叠度最小的连续克隆系，将基因组分解成为较易操作的小的结构区域的过程称为作图，根据所用标志和手段不同，可分为遗传连锁图、物理图和转录图(也称基因图)。分解得到的大片段DNA一般采用下列步骤进行测序：(1)将待测大片段DNA的克隆体随机切成小片段(约1500bp)；(2)将小片段克隆入测序载体；(3)对每kb的DNA进行10个～30个亚克隆的高覆盖率测序；(4)将相互重叠的读出序列组装成连续的多序列的重叠线；(5)从质量最高的读出序列中取得最后的确认序列。 人类基因组计划把“作图”定为测序的前提，目的是保证人类整个基因组的完整性，然而作图速度会限制基因组DNA的测序速度。自宣布成功绘制人类基因组草图和公布人类基因组测序草图至今，对人类基因的研究又取得了一系列重大的发现： 1 人类基因总数在3万个到3.5万个之间，低于原来估计数目的一半。这说明人类在使用基因上比其它物种更为高效。 2 基因组中存在着基因密度较高的“热点”区域和大片不携带人类基因的“荒漠”区域。研究结果表明：基因密度在第17、19和22号染色体上最高，在X、Y、第4号和第18号染色体上密度较小。 3 大约1/3以上基因组包含重复序列，这些重复序列的作用有待进一步研究。 4 所有人都具有99.99%的相同基因，而且不同人种的人比同一人种的人在基因上更为相似，任何两个不同个体之间大约每1000个核苷酸序列中会有一个不同，这称为单核苷酸多态性(SNP)，每个人都有自己的一套SNP，它对“个性”起着决定的作用。 人类基因组计划对生命科学的研究和生物产业的发展具有非常重要的意义，它为人类社会带来的巨大影响是不可估量的。 首先，获得人类全部基因序列将有助于人类认识许多遗传疾病以及癌症等疾病的致病机理，为分子诊断、基因治疗等新方法提供理论依据。在不远的将来，根据每个人DNA序列的差异，可了解不同个体对疾病的抵抗力，依照每个人的“基因特点”对症下药，这便是21世纪的医学——个体化医学。更重要的是，通过基因治疗，不但可预防当事人日后发生疾病，还可预防其后代发生同样的疾病。 第二，破译生命密码的人类基因组计划有助于人们对基因的表达调控有更深入的了解。人体内真正发挥作用的是蛋白质，人类功能基因组学便是应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体特定序列的表达谱。有人将HGP比作生命周期表，因为它不再是从研究个别基因着手，而是力求在细胞水平解决基因组问题，同时研究所有基因及其表达产物，以建立对生命现象的整体认识。目前，研究者已着手通过DNA芯片等新技术对基因的表达展开全面研究，也通过蛋白质芯片的制作，标准化双向蛋白质凝胶电泳、色谱、质谱等分析手段对人类可能存在的几十万种蛋白质或多肽的特征和功能进行研究。科学家预言，蛋白质组的研究将导致药物开发方面实质性的突破，以使人类真正攻克癌症等顽疾。最后，人类基因组图谱对揭示人类发展、进化的历史具有重要意义。

这个是使用seqin在Genebank上提交的基因组注释格式gene1..1751基因的起始、终结位点/gene="FSHB"基因的名称/note="folliclestimulatinghormone,betapolypeptide"关于这个名称的相关注释/db_xref="GeneID:281171"基因的IDCDS70..459基因中编码一段蛋白产物的序列/translation="MKSVQFCFLFCCWRAICCRSCELTNITITVEKEECGFCISINTTWCAGYCYTRDLVYRDPARPNIQKTCTFKELVYETVKVPGCAHHADSLYTYPVATECHCSKCDSDSTDCTVRGLGPSYCSFREIKE"蛋白序列翻译结果其他都是一些重复的，你可以去看一下关于NCBI的介绍

　　CDS是编码序列Codingsequence的缩写。DNA转录成mRNA，mRNA经剪接等加工后翻译出蛋白质，所谓CDS就是与蛋白质序列一一对应的DNA序列，且该序列中间不含其它非该蛋白质对应的序列，不考虑mRNA加工等过程中的序列变化，总之，就是与蛋白质的密码子完全对应。CDS是编码一段蛋白产物的序列，是结构基因组学术语。ORF开放阅读框是基因序列的一部分，包含一段可以编码蛋白的碱基序列，不能被终止子打断。当一个新基因被识别，其DNA序列被解读，人们仍旧无法搞清相应的蛋白序列是什么。　　基本区别(1)开放读码框是从一个起始密码子开始到一个终止密码子结束的一段序列;不是所有读码框都能被表达出蛋白产物，或者能表达出占有优势或者能产生生物学功能的蛋白。　　(2)CDS，是编码一段蛋白产物的序列。　　(3)cds必定是一个orf。但也可能包括很多orf。　　(4)反之，每个orf不一定都是cds。　　希望对您有所帮助

NCBI,若有序列号则直接输入查找。没有可以通过查找物种以及基因名称在NCBI中查找。步骤：1.打开http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez2. 上方有搜索条，默认为PUBMED,打开下拉菜单，选择Gene,在右侧输入"基因名称"AND"物种名称", 点击搜索3. 如基因序列收录，应该在搜索结果里，找到点击打开说的比较简单，如你没搜到，可以给我发消息

用你要查的基因的ID。在NCBI等数据库库中，每个基因都有一个编号，即ID，就像每个人有一个身份证一样。如果你不知道其ID 也可以输入基因名称搜寻的。

到NCBI网站，查人的基因组，找到关注的染色体就可以。在染色体上获取目的基因要用到限制性核酸内切酶，根据目的基因的基因序列来选择相应的限制性核酸内切酶，限制性核酸内切酶就能切割出所需的目的基因了，并且根据切割的末端又可以分为粘性末端和平末端。用于DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程。限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是提高自身的防御能力。限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。扩展资料：DNA分子类似“计算机磁盘”，拥有信息的保存、复制、改写等功能。将人体细胞核中的23对染色体中的DNA分子连接起来拉直，其长度大约为0.7米，但若把它折叠起来，又可以缩小为直径只有几微米的小球。因此，DNA分子被视为超高密度、大容量的分子存储器。基因芯片经过改进，利用不同生物状态表达不同的数字后还可用于制造生物计算机。基于基因芯片和基因算法，未来的生物信息学领域，将有望出现能与当今的计算机业硬件巨头――英特尔公司、软件巨头――微软公司相匹敌的生物信息企业。参考资料来源：百度百科-基因

1、首先输入基因的完整学名，找到与基因相关的cDNA序列。在这一cRNA序列的解说信息里，就已经有各外显子的分节。2、将该cDNA输入Blast进行序列比对，就可以找到其每一个外显子所对应的染色体位置，这些信息就显示了所有的外显子。处于外显子两端的序列就是内含子。3、如你需要完整的基因序列，需要在blast中选择others这个数据库，然后查找相关的Bac质粒中含有你完整基因的文件，在其中找到你所需的信息。

基因是遗传物质基本的功能单位，分离和克隆目的基因是研究基因结构、揭示基因功能及表达的基础，因此，克隆某个功能基因是生物工程及分子生物学研究的一个重点。经典克隆未知基因的方法比如通过筛选文库等有个共同的弊病, 即实验操作繁琐, 周期较长、工作量繁重,且不易得到全长序列。又由于在不同植物中目的基因mRNA丰度不同，所以获得目的基因的难易程度又不一样，特别是对于丰度比较低的目的基因即使使用不用的方法也不一定能获得成功。近年来随着PCR技术的快速发展和成熟.已经有多种方法可以获得基因的全长序列, 比如经典的RACE技术，染色体步移法和同源克隆法等，本文主要综述几种重要的克隆方法的原理和运用，并且比较分析这几种方法的优缺点，为你的实验节约时间和成本。 　　1. RACE技术 　　 1985年由美国PE-Cetus公司的科学家Mulis等[1]发明的PCR技术使生命科学得到了飞跃性的发展。1988年Frohman等[2] 在PCR技术的基础上发明了一项新技术, 即cDNA末端快速扩增技术( rapid amplification of cDNA ends, RACE), 其实质是长距PCR( long distance, PCR)。通过PCR由已知的部分cDNA 序列, 获得5′端和3′端完整的cDNA, 该方法也被称为锚定PCR ( anchored PCR) [3] 和单边PCR( one-sidePCR) [4]。RACE技术又分为3"RACE和5"端RACE。3′RACE 的原理是利用mRNA 的3′端天然的poly(A) 尾巴作为一个引物结合位点进行PCR, 以Oligo( dT) 和一个接头组成的接头引物( adaptor primer, AP)反转录mRNA得到加接头的第一链cDNA。然后用一个正向的基因特异性引物( gene-specific primer, GSP) 和一个含有接头序列的引物分别与已知序列区和poly(A) 尾区退火, 经PCR扩增位于已知序列区域和poly( A) 尾区之间的未知序列，若为了防止非特异性条带的产生, 可采用巢式引物( nested primer) 进行第二轮扩增, 即巢式PCR( nested PCR) [5，6]。5"RACE跟3"RACE原理基本一样，但是相对于3"RACE来说难度较大。 　　5"-RACE受到诸多因素的影响而常常不能获取全长，因此研究者都着手改进它。这些措施主要是通过逆转录酶、5"接头引物等的改变来实现的，因此出现了包括基于“模板跳转反转录”的SMART RACE技术( switching mechanism at 5′ end of RNA transcript) [7] , 基于5′脱帽和RNA酶连接技术的RLM-RACE技术(RNA ligase mediated RACE)[8], 利用RNA连接酶为cDNA第一链接上寡聚核苷酸接头的SLC RACE技术(single strand ligation to single-stranded cDNA)[9] , 以及以内部环化的cDNA第一链为模板进行扩增的自连接或环化RACE技术(self-ligation RACE or circular RACE)[10]，和通过末端脱氧核苷酸转移酶( TdT)加尾后引入锚定引物的锚定RACE技术( anchored RACE)[11]。 　　1.1基于‘模板跳转"的SMART RACE技术　　SMART-RACE技术的最大特点是5′ RACE过程中的“模板跳转”现象,即当反转录进行到mRNA模板的5′末端时,反转录酶表现出末端转移酶活性,在第一链cDNA的3′端加上3-5 个残基(主要是dC) ,随后第一链cDNA与3′端含几个dG的寡核苷酸引物退火,使反转录反应发生跳移,以引物中寡核苷酸为模板继续进行,最终反转录所得产物必然包含完整的mRNA5′末端序列及引物序列,可直接用于RACE-PCR获得完整地5′ cDNA末端。由于上述过程无需接头连接,而且直接以第一链cDNA作为模板进行RACE-PCR ,因此更加简便、快捷。另外,SMART -RACE还采用了降落PCR、抑制PCR、LD - PCR 等先进扩增技术,提高了PCR扩增的敏感性和真实性,降低了非特异的产物背景,因此该技术已被广泛应用于cDNA末端快速扩增,尤其是5"端的克隆。 　　1.2末端脱氧核苷酸转移酶( TdT)加尾技术 　　传统的5′RACE反应是以TdT对第一链cDNA进行同聚物加尾来引发第二链cDNA的合成[12] ,这种方法经常会导致RACE反应失败或产生一些副产品。其主要原因是同聚物加尾反应难以控制,TdT 加尾时不能区分cDNA是否是全长,非全长cDNA分子被加尾后将在随后的PCR反应中得到优先扩增,从而产生大量的非特异性产物背景，并且TDT的加尾效率比较低[13]。目前许多研究这对其进行了改进。 　　夏瑞等[11]提出了一种改良的TDT加尾克隆基因5"端的方法。其首先用1个15 bp左右的特异反转录引物代替通用反转录引物Olig( dT) n对模板cDNA进行初步筛选,使合成的cDNA更靠近目的基因的5′端。其次, 两个上游引物采取巢式策略取代一般的poly( dG)n或poly ( dC)n，从而控制第二轮PCR的退火温度, 保证扩增的特异性。并且在PCR过程中采用了如锚定PCR、巢式PCR、降落PCR等方法增加扩展产物的特异性。这些新的改进使得到目的条带的概论增加，并且反转录引物不需要磷酸化, 从而大大节约实验成本。 　　2.染色体步移法 　　染色体步行(chromosome walking)是指由生物基因组或基因组文库中的已知序列出发逐步探知其旁邻的未知序列或与已知序列呈线性关系的目的序列核苷酸组成的方法和过程14]。对于基因组测序已经完成的少数物种(水稻、拟南芥等)来说，可以轻松地从数据库中找到已知序列的侧翼序列。但是这毕竟只是研究少数模式植物时的情况，对于自然界中种类繁多的其植物而言，在不知道它们的基因组DNA序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。因而，染色体步移技术在现代分子生物学研究中占有举足轻重的地位，是结构基因组研究以及功能基因组研究的基础。 　　目前,分离侧翼序列的染色体步移方法主要有两种,一是结合基因组文库为主要手段的染色体步移技术,构建基因组文库进行染色体步移尽管步骤比较繁琐,但是适于长距离步移,可以获得代表某一特定染色体的较长连续区段的重叠基因组克隆群。随着亚克隆文库条件构建条件的优化及测序技术的进步,这种方法也将更加快捷,准确。另一个是基于PCR扩增为主要手段的染色体步移技术。基于PCR扩增为主要手段的染色体步移技术步移距离相对较短,但是操作比较简单,尤其适合于已知一段核苷酸序列的情况下进行的染色体步移。反向PCR、外源接头介导PCR和热不对称交错PCR(TAIl-PCR)等就是建立在PCR技术基础上的染色体步行技术，为扩增已知序列旁侧的未知DNA片段提供了捷径．这些方法的建立可以不必经过烦琐的建库和筛选过程而获得全长基因序列． 　　2.1连接介导PCR 　　 连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术，首先通过基因组DNA酶切，在酶切后的DNA片段的一端连接上一个公共连接子，而后用这个连接子为引物与另一个基因特异引物进行扩增，得到了包含连接子在内的基因序列。连接介导PCR又分为连接载体的PCR、连接单链接头的PCR和连接双链接头PCR。此方法原理简单,操作方便。 　　2.1.1连接载体的PCR 　 连接载体的PCR是利用已知基因组DNA序列设计的特异引物和载体通用引物进行扩增获得目的片段的一项PCR技术。操作方法是首先用内切酶酶切基因组DNA和载体质粒DNA，得到小片段DNA和线形字体序列，然后用T4连接酶把载体序列与DNA小片段相连接，以连接产物为模板，以一个基因特异引物和载体引物进行扩展，通过克隆测序得到未知的侧翼序列。 　　2.1.2连接单链接头的PCR 　　 连接单链接头的PCR又叫锅柄PCR，是连接单链接头PCR的典型代表,因其以一个类似锅柄结构的DNA分子为模板而得名[18]。其基本原理是：将基因组总DNA 用能产生5" 端突出末端的内切酶切割；接着连上一条单链的寡核苷酸，其具有两个特点，其一是5"端和限制性片段的突出末端互补，其二是除此以外的序列必须和已知序列中一段完全同源；在PCR 的复性阶段，外源接头就会和其链内同源序列配对而成一个末端部分封闭的分子内环状结构，在TaqDNA 聚合酶的作用下，沿着3" 端将单链部分完全补平后而形成一个锅柄结构，因此这种方法也被称为锅柄PCR。由于其末端是一个反向重复序列，故最后只需一条引物即可完成对目标区段的扩增。 　　2.1.3连接双链接头PCR 　　双链接头法也称为adapter介导的PCR法[ 19，20]。其主要过程为首先用能够产生粘性末端的限制性内切酶消化基因组DNA,然后将末端配对的接头和限制性片段连接,以其作模板,用接头引物和已知序列特异引物进行PCR扩增,即可获得包含侧翼序列的目标片段。显然，这类方法存在一个问题：即如何抑制接头到接头的非目标扩增。因此许多研究者由对其进行了改进，出现了抑制PCR，多功能接头PCR和T接头PCR[21]。 　　2.2热不对称交错PCR(TAIl-PCR) 　　热不对称性PCR (thermal asymmetric interlaced PCR, TAIL-PCR)就是建立在PCR技术基础上的染色体步移技术，为扩增已知序列旁侧的未知DNA 片段提供了捷径。该技术由Liu和Whitter于1995年首先研究并报道[22]。以基因组DNA为模板，使用高退火温度的长特异引物和短的低退火温度的简并引物，通过特殊的热不对称(高严谨性PCR和低严谨性PCR交替)循环程序，有效扩增特异产物。该技术具有简单快速、特异性高、分离出的DNA 序列可以用于图位克隆、遗传图谱绘制和直接测序等优点，近年来，被分子生物学研究者广泛应用，成为分子生物学研究中非常实用的基因侧翼序列克隆技术，同时在植物基因克隆方面也取得了很大进展。 　　TAIL-PCR技术的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(special prime ,简称sp1 ,sp2 ,sp3 ,约20 bp) ,用它们分别和1个具有低Tm值的短的(14 bp) 随机简并引物(Arbitrary degenerate prime 简称AD)相组合,以基因组DNA作为模板,根据引物的长短和特异性的差异设计不对称的温度循环,通过分级反应来扩增特异引物。 　　TAIL-PCR包括3轮PCR反应。第1轮PCR反应包括5次高严谨性反应、1次低严谨性反应、10次较低严谨性反应和12次热不对称的超级循环。首先5次高严谨性的反应，使长的高退火温度的特异引物SPl与已知的序列退火并延伸，目标序列扩增成直线性型上升，由AD引物结合产生的非特异性产物的浓度则较低。而后进行1次低退火温度的反应，目的是使简并引物结合到较多的目标序列上，接下来10次较低严谨性的反应可以使两种引物均能与模板退火，从而使原来由高严谨性循环所产生的单链靶DNA复制成双链DNA，为下一轮线性扩增模板做准备。最后是进行12次热不对称的TAIL循环(超级循环即高特异性和低特异性循环交替)，目的片段得以指数性地扩增，扩增的量大大超过了非目标片段。经过上述一系列的反应得到了不同浓度的3种类型产物：TAIL-PCR中间会出现3 种类型的产物。类型1是特异引物和任意引物之间扩增的产物（即目标产物；类型2是单独由特异引物扩增的产物；类型3是单独由任意引物引发的产物。该方法由3步连续的PCR扩增过程构成。经过第一阶段的PCR扩增后，类型2产物的分子数目在3种产物中最多，类型1产物稍低。在第二阶段的扩增中，类型1产物的分子数逐渐升至最高，类型2分子数目基本保持不变，而类型3的分子数目仍然保持很低。在第三阶段结束后，基本上只有类型1产物，即目的产物。 　　TAIL-PCR的技术难点，首先是引物设计，和一般的PCR反应相比，TAIL-PCR反应对引物的要求较高，引物的设计很是重要。特异性引物和简并引物的选择直接影响扩增的效果。特异引物设计：3个嵌套的特异性引物长度一般在20~30 bp之间，Tm 值一般设为58~68℃。SP1、SP2 和SP3之间最好相距100 bp以上以便在电泳时更容易区分3轮PCR产物。简并引物是按照物种普遍存在的蛋白质的保守氨基酸序列设计的，相对较短，长度一般是14 bp左右，Tm值介于30~48℃之间。AD引物是否最佳与它的简并度、引物长度和核苷酸序列组成有很大关系。 　　目前一些研究这又对TAIL-PCR进行了该进，比如省去了10个中等严谨度的PCR循环，3次PCR循环中的变性时间由5 s延长到了30 s,更有利于DNA彻底解链，第3次循环增加了热不对称交织PCR,更有利于特异目的片段的富集，把较低特异性反应的温度从44℃降到29℃等，以利于更好的扩增目的片段。 　　3 .RACE技术与染色体步移方的比较 　　3.1 SMART-RACE与末端脱氧核苷酸转移酶( TdT)加尾技术的比较 　　 SMART-RACE技术是目前一种比较成熟的技术，它能够最大限度地提高在反转录反应中获取全长cDNA的可能，成功率高，可以节约时间并且操作程序简单，但是于价格过于昂贵, 试验成本增加, 而且对RNA质量要求很高。TdT加尾扩增法的优化改良, 成功率和稳定性都得到较大的提高，改良的TdT末端加尾扩增法综合了多项PCR扩增方法如锚定PCR、巢式PCR、降落PCR等, 原理简单易懂, 操作性强，能够满足一般基因克隆的要求。 　　3.2连接介导PCR与TAIL-PCR的比较 　　 连接介导PCR原理简单，但其需要DNA内酶切酶切，而内酶切又比较昂贵，增加实验的成本。并且酶切的好坏，接头处理方法是否得当而影响接头与DNA小片段的连接效率，从而导致失败。TAIL-PCR不需要进行DNA酶切而直接用DNA做模板进行扩增，仅仅只需要三轮PCR扩增，就可以得到目的条带。简单、特异性高、高灵敏度、快速、不涉及连接反应这就是TAIL-PCR的优点，但是TAIL-PCR也有缺点，主要是TAIL-PCR 反应需要较多的引物组合。此外,由于AD引物存在有限的结合位点,对于个别的侧翼序列,即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果。目前已经有学者提出用RAPD的引物替代AD引物的观点，由于RAPD引物数量很多，所以可以解决AD引物存在有限的结合位点的不足。 　　4.总结 　　 RACE是一种快速、有效的克隆基因全长cDNA的有效方法。基因的3"端通过RACE技术非常容易得到，但是5"端却比较难，即使用比较昂贵的5"端RACE试剂盒也不一定能得结果。而基于PCR扩增的染色体步移法，却有得天独厚的优势，它不仅仅能用于基因全长的获得而且还可以得到基因5"端的启动子序列。模板仅仅只要基因组DNA就行，原理简单易懂，操作方法也简单易行，并且非常的廉价，适用于不同水平和不同层次的研究者。笔者通过TAIL-PCR技术成功得到了芒果LFY基因的全长及其启动子序列。

真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。基因序列中的字母只有四种，即A、C、G、T，分别代表组成DNA的四种核苷酸。腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤，胸腺嘧啶，任意长度大于4的一串核苷酸被称做一个序列，每个字母代表一种碱基，两个碱基形成一个碱基对，碱基对的配对规律是固定的。部分DNA序列或基因序列使用一串字母表示的真实的或者假设的携带基因信息的DNA分子的一级结构。

大肠杆菌有不同的菌株，其基因组序列是不同的，你可以用准确的菌株名在NCBI的Genome数据库中搜索，以实验室常用的工程大肠杆菌BL21株为例，其基因组的序列和信息在以下链接中非常详细：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome?Db=genome&Cmd=ShowDetailView&TermToSearch=24757其基因组的序列和图片（包括编码区）在这个链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/253322479?report=graph你可以拷贝全部序列，或者部分序列，编码区连氨基酸对应的密码子都标好了，非常方便。其基因组中各个基因的序列在下面这个链接，要那个基因，就点相应的链接（文件大，需耐心等待）：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/CP001665有什么问题可给我留言。

看你是要对比几条序列了，双序列比对需要BLAST，NCBI上有，也可以在百度搜索本地版的下载下来，多序列比对需要cluxtal X软件， 要把所有基因序列fasta格式放在一起，需要输入所有序列的fasta格式，然后进行多序列联配！

PCR一对引物的序列与目的基因中的两段序列（分别为正链与反链）呈互补关系。这种关系看图一目了然，文字半天也说不清楚。请楼主直接搜索PCR原理图片。引物如果冻干状态可以在-20oC保存很久。如果用TE缓冲液溶解后需要分装，仍保存在-20oC，用时取一小支，稀释到使用倍数，避免重复解冻

蛋白质是由氨基酸连接并经过加工在空间中形成不同空间结构才产生具有生物功能的蛋白质。也就是说机体在产生蛋白质前是先通过 机体在一定时间，一定部位选择性的表达特定基因(mRNA)，真核生物编码一种氨基酸都对应一个密码子，在rRNA的参与下通过tRNA转录处所要表达的氨基酸，连接成多肽，再在经过编辑，剪切等过程加工成成熟多肽，通过各种细胞器加工，分泌产生成熟蛋白质。即 蛋白质是由对应氨基酸不同排布形成，归根结底都是由基因表达的不同阶段的产物。 这个只是大概的过程 完整的基因表达产生蛋白质的过程是相当的复杂 ，目前有的具体加工过程只是推理换为得到验证，甚至有些过程换有待科学工作者去深入研究。