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cDNA文库的注意事项

2023-06-28 19:23:07
TAG: DNA
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LuckySXyd

构建全长cDNA文库分为噬菌体文库和质粒文库,二者大同小异。无论怎样,应当注意如下几个方面:

获得起始RNA

构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多,在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录,这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好,虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH的SMART 4的中级柱子要求纯化后的总mRNA量最好在0.05-0.5微克左右,这就要求起始总RNA量较多。虽然有的试剂盒声称少至几十个纳克的总RNA也可以构建cDNA文库,但这是针对材料极为稀缺者而言,但起始RNA太少还是会或多或少影响文库构建成功的风险和文库的代表性。至于RNA的质量,如果采用纯化总mRNA后反转录,则对总RNA的杂质方面要求稍松,但对RNA的完整性则一丝不苟,要求未降解。如果直接采用总RNA进行反转录,则对总RNA的质量要求非常高,不仅要求RNA相当完整而无降解,而且要求多酚、多糖、蛋白、盐、异硫氰酸胍等杂质少,最好是试剂盒抽提的。

反转录

这是构建cDNA文库中最贵的一步,也是核酸质变的一步,它将易降解的RNA变成了不易降解的cDNA。反转录不成功,说明一次文库方案的夭折。反转录效率不高表现在一是部分mRNA被反转录了,但还有相当一部分本该反转录的mRNA未被反转总的全长cDNA太少,这就难以构建好的全长cDNA文库。少量程度的mRNA降解或反转录不完全在SMART 4等试剂盒及手工方法构建中对文库的滴度影响不大,但对文库的全长性则有很大影响。Invitrogen公司基于去磷酸化、去帽、RNA接头连接后再反转录的新技术(可参考其GeneRacer说明书)从原理上是保证最终获得全长cDNA的最好方法,但对mRNA的完整性要求非常高,理论上讲必须是带有帽子结构和Poly A结构的全长mRNA且反转录完全,才能进入文库中。反转录完成后点样检测cDNA的浓度及分子量分布是很重要的。

层析柱cDNA分级

这一步稍不注意会影响成功性或影响获得的cDNA的片段分布特点。这一步的操作要小心,尤其要在加入cDNA之前通过反复悬浮和试滴保证柱子能正常工作,cDNA的加入和收集要精力集中。获得的每一级的cDNA量很少,检测时带型很暗,所以要用新鲜做的透明薄胶检测,根据检测结果一定要舍弃太短的cDNA(一般400bp以下就不要了,因为短片段太多会严重影响后面的连接转化效果及文库质量)。

四、噬菌体文库或质粒文库均对载体与cDNA的连接效率要求很高,也对连接产物转染或转化大肠杆菌的效率要求很高。连接效率高低直接关系到文库构建是否成功,更要注意的是文库连接与一般的片段克隆的连接不一样。一般的片段克隆连接是固定长度的载体与固定长度的目的DNA连接,而文库连接是固定长度的载体与非固定长度的目的DNA连接,目的基因cDNA长的有10kb以上,短的只有500bp或更短。一系列长度不等的cDNA与载体在一起连接的结果,不同长度cDNA的连接效率就不一样。有的专家的经验是,根据分级结果,有意识地将长度不同的cDNA群分别与载体连接,再分别转化或转染大肠杆菌,分别完成滴度检测,最后将不同长度级别的文库混合在一起供杂交筛选。

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“cDNA”的名词解释是什么?

cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。【cDNA定义】为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。【DNA与cDNA的区别】DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
2023-06-28 18:22:273

cdna是什么 详解cdna的定义和应用?

cdna可以用来分析基因表达水平。通过PCR扩增cdna,可以得到特定基因的DNA产物,并通过序列分析等方法来确定该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。cdna的定义2. 基因表达分析2. 基因表达分析cdna可以用来分析基因表达水平。通过PCR扩增cdna,可以得到特定基因的DNA产物,并通过序列分析等方法来确定该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。cdna是通过逆转录反应将mRNA作为模板合成的DNA分子。逆转录是指将RNA作为模板合成DNA的过程,这个过程由逆转录酶催化完成。逆转录过程中,RNA模板首先被逆转录酶的反转录酶活性所逆转录,形成相应的DNA互补链,然后由DNA聚合酶合成第二条DNA链,形成完整的双链DNA分子。这个过程合成的DNA分子即为cdna。
2023-06-28 18:22:343

cDNA的名词解释是什么?

互补DNA 英文名称: cDNA, complementary DNA 学科分类: 遗传学 注 释: 信使RNA(mRNA)分子的双链DNA拷贝。 构成基因的双链DNA分子用一条单链作为模板,转录产生与其序列互补的信使RNA分子,然后在反转录酶的作用下,以mRNA分子为模板,合成一条与mRNA序列互补的单链DNA,最后再以单链DNA为模板合成另一条与其互补的单链DNA,两条互补的单链DNA分子组成一个双链cDNA分子.因此,双链cDNA分子的序列同转录产生的mRNA分子的基因是相同的.所以一个cDNA分子就代表一个基因.但是cDNA仍不同于基因,因为基因在转录产生mRNA时,一些不编码的序列即内含子被删除了,保留的只是编码序列,即外显子.所以cDNA序列都比基因序列要短得多,因为cDNA中不包括基因的非编码序列---内含子.
2023-06-28 18:22:501

cDNA 和DNA有何区别?

cDNA就是由成熟mRNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达。基因组DNA指生物中所有的DNA包括有真核生物的内含子等结构不能在原核生物体内表达,基因克隆中只能在真核生物中表达。cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为"蓝图"或"食谱"。其中包含的指令,是建构细胞内其他的化合物,如蛋白质与RNA所需。带有遗传讯息的DNA片段称为基因,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因 。
2023-06-28 18:22:591

CDNA与基因组DNA有何区别?

一、来源不同CDNA:CDNA是以mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA经过反转录而得到的DNA,是mRNA链互补的DNA链。基因组DNA:基因组DNA是指整套人类基因结构,控制着人类从一个单个细胞到一个复杂整体的发育。二、所属细胞类型不同CDNA:CDNA的基因可以来自于原核细胞,也可以来自于真核细胞。基因组DNA:基因组DNA是指人类基因,属于真核细胞。三、结构不同CDNA:cDNA内部已无内含子等结构。基因组DNA:基因组DNA通常存在内含子等结构。扩展资料二代测序均是先将RNA反转录组成cDNA再进行测序的。mRNA,并不是严格意义上的基因,而是基因信息的载体,称作Messenger RNA (mRNA),即信使核糖核酸。“基因”是指负载特定生物遗传信息,能够产生一条多肽链或功能RNA所必需的DNA分子片段,不但包括编码区,还包括5"-端和3"-端两侧特异性序列,虽然这些序列不编码氨基酸,但在基因表达的过程中起着重要的作用。参考资料来源:百度百科-CDNA百度百科-基因组DNA
2023-06-28 18:23:083

高中生物老师cDNA可以理解为什么?是DNA-RNA的结合体还是双链DNA?

cDNA是双链DNA。在高中生物里可能是为了方便只提了第一步里的逆转录酶,事实上在整个制作步骤中,你可以看到由第一链产生第二链的过程中是需要DNA聚合酶的。不用在意这些,等大学里学到相关知识的时候会学到的。
2023-06-28 18:23:2713

什么是cDNA,有什么作用

cDNA就是环状DNA的意思,c就是circle的首字母,环状DNA有两种,一种是原核细胞的拟核,拟核就是一个环状的DNA分子,是原核生物邪恶遗传物质;另一种是存在于原核细胞中的除拟核之外的一种小型的环状DNA分子,他也控制一部分形状。
2023-06-28 18:24:083

cDNA是什么?

CDNA是染色体的主要化学成分,同时也是基因组成的,有时被称为“遗传微粒”。RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA(百科解释)因为基因上并不是全部都表达的DNA片段,比如内含子,在基因转录的时候是要一段全都转录的,这就需要将转录来的mRNA中不需要的部分切除,然后再拼接。也就是说用RNA逆转录出来的DNA单练是比原来的短的,这个纯粹有基因表达序列的DNA这个就是cDNA
2023-06-28 18:24:187

反转录的cDNA是单链还是双链?

RNA反转录的cDNA是单链的,最终形成双链。cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成。并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。扩展资料:反转录的生物学意义:1、对分子生物学的中心法则进行了修正和补充,修正后的中心法则表示为:是指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。某些病毒中的RNA自我复制(如烟草花叶病毒等)和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程(某些致癌病毒)。有些病毒(如阮病毒,即疯牛病病毒)以蛋白质直接形成蛋白质。2、在致癌病毒的研究中发现了癌基因,在人类一些癌细胞如膀胱癌、小细胞肺癌等细胞中,也分离出与病毒癌基因相同的碱基序列,称为细胞癌基因或原癌基因。癌基因的发现为肿瘤发病机理的研究提供了很有前途的线索。3、在实际工作中有助于基因工程的实施。由于目的基因的转录产物易于制备,可将mRNA反向转录形成DNA用以获得目的基因。参考资料来源:百度百科-反转录参考资料来源:百度百科-cDNA
2023-06-28 18:24:451

求教cDNA制备的一般方法

参考:http://baike.baidu.com/view/60324.htm一、制备用于克隆cDNA的mRNA 1.Oligotex mRNA Kits (QIAGEN)法 2.磁珠法分离mRNA 注意:一般需要做mRNA完整性的检测(检查mRNA在无细胞翻译体系指导合成高分子量蛋白质的能力、mRNA分子的大小等);如果用于制备cDNA文库则还需要检测mRNA在细胞中的丰度。二、cDNA第一链的合成 1、oligo(dT)引导的DNA合成法: 利用真核mRNA分子所具有的poly(A)尾巴的特性,加入oligo(dT)短片段,由反转录酶合成cDNA的第一链. 2、随机引物引导的cDNA合成法 (randomly primed cDNA synthesis) : 根据许多可能的序列,合成出6-10个核苷酸长的寡核苷酸短片段(混合物),作为合成第一链cDNA的引物.在应用这种混合引物的情况下,cDNA的合成可以从mRNA模板的许多位点同时发生,而不仅仅从3"-末端的oligo(dT)引物一处开始. 三、cDNA第二链的合成 1、自身引导合成法: 单链cDNA的3"端能够形成发夹状的结构作为引物,在大肠杆菌聚合酶I Klenow或反转录酶的作用下,合成cDNA的第二链. 缺 点: 在以S1核酸酶切割cDNA的发夹状结构时,会导致对应于mRNA 5"端的地方的序列出现缺失和重排. S1核酸酶的纯度不够时,会偶尔破坏合成的双链cDNA分子. 2、置换合成法 原 理: 以第一链合成产物cDNA:mRNA杂交体作为切口平移的模板,RNA酶H在杂交体的mRNA链上造成切口和缺口,产生一系列RNA引物,在大肠杆菌DNA聚合酶I 的作用下合成cDNA的第二链. 优点:a)合成cDNA的效率高 b)直接利用第一链的反应产物,不需纯化 c)避免使用S1核酸酶来切割双链cDNA 3、引物-衔接头法
2023-06-28 18:25:012

如何验证cDNA

cDNA一般是不检测的,并且也不好检测,因为你的cDNA都是mRNA,电泳出来会是一条弥散的带。并且上样量需要较大才能看间。需要检测的是提取的RNA,看是否28s和18s rRNA是否清晰、明显(二者位置分别在5kb和2kb处)。最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。如果RNA抽提没有问题,那么RT产生的cDNA一般来说是不会出现问题的。
2023-06-28 18:25:081

cDNA感染性克隆的概念和原理

cDNA克隆是以mRNA为原材料,经体外反转录合成互补的DNA(cDNA),再与载体DNA分子连接引入寄主细胞。每一cDNA反映一种mRNA的结构,cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布。特点是: ①有些生物,如RNA病毒没有DNA,只能用cDNA克隆; ②cDNA克隆易筛选,因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆,而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息; ③cDNA能在细菌中表达。cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息,只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息。 1.方法: (1)DNA片段的制备:常用以下方法获得DNA片段:①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段;②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段;③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段;④从mRNA反转录产生cDNA。 (2)载体DNA的选择: ①质粒:质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态,一是“紧密型”;二是“松驰型”。此外还应具有分子量小,易转化,有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段,适用于构建原核生物基因文库,cDNA库和次级克隆。 ②噬菌体DNA:常用的λ噬菌体的DNA是双链,长约49kb,约含50个基因,其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的,分布在噬菌体DNA两端。中间是非必需区,进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库。 M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌,但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主制复,制备方法同质粒。寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体,又能方便地制备单链DNA,用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。 ③拷斯(Cos)质粒:是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。是噬菌体-质粒混合物。此类载体分子容量大,可携带45kb的外源DNA片段。也能象一般质粒一样携带小片段DNA,直接转化寄主菌。这类载体常被用来构建高等生物基因文库。 (3)DNA片段与载体连接:DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一,方法有:①粘性末端连接,DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端,用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样,有些限制性内切酶虽然识别不同顺序,却能产生相同末端。②平头末端连接,用物理方法制备的DNA往往是平头末端,有些酶也可产生平头末端。平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来,但连接效率不如粘性末端高;③同聚寡核苷酸末端连接。④人工接头分子连接,在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段,经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率。以λ或Cos质粒为载体时,形成线性多连体DNA分子,载体与DNA片段的比率高些为佳。以质粒为载体时,形成环状分子,比率常为1∶1。 (4)引入寄主细胞:常用两种方法:①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大,转化困难。②转导,病毒类侵染宿主菌的过程称为转导,一般转导的效率比转化高。
2023-06-28 18:25:311

什么是cDNA,有什么作用

学科分类: 遗传学注释: 信使RNA(mRNA)分子的双链DNA拷贝。构成基因的双链DNA分子用一条单链作为模板,转录产生与其序列互补的信使RNA分子,然后在反转录酶的作用下,以mRNA分子为模板,合成一条与mRNA序列互补的单链DNA,最后再以单链DNA为模板合成另一条与其互补的单链DNA,两条互补的单链DNA分子组成一个双链cDNA分子.因此,双链cDNA分子的序列同转录产生的mRNA分子的基因是相同的.所以一个cDNA分子就代表一个基因.但是cDNA仍不同于基因,因为基因在转录产生mRNA时,一些不编码的序列即内含子被删除了,保留的只是编码序列,即外显子.所以cDNA序列都比基因序列要短得多,因为cDNA中不包括基因的非编码序列---内含子.
2023-06-28 18:25:402

下列关于CDNA叙述正确的是

【答案】:DcDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA。故答案为D。考点:cDNA
2023-06-28 18:25:471

cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?

cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。其基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定),要构建一个高质量的 cDNA 文库,获得高质量的 mRNA 是至关重要的,所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心。由于 RNA 酶存在所有的生物中,并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境,因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。在获得高质量的 mRNA 后,用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链, cDNA 第2链的合成(用 RNA 酶 H 和大肠杆菌 DNA 聚合酶 I,同时包括使用 T4 噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌 DNA 连接酶进行的修复反应),合成接头的加入、将双链 DNA 克隆到载体中去、分析 cDNA 插入片断,扩增 cDNA 文库、对建立的 cDNA 文库进行鉴定。这里强调的是对载体的选择,常规用的是 λ 噬菌体,这是因为 λ DNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端,可用来构建柯斯质粒,这种质粒能容纳大片段的外源 DNA。
2023-06-28 18:26:091

cDNA文库和基因DNA有什么区别?

cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。cDNA文库以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA基因组文库用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
2023-06-28 18:26:171

什么是ctDNA,dsDNA,ssDNA,cDNA?

ctDNA(小牛胸腺DNA)是一种很常用的双链DNA,dsDNA是双链DNA的简称,ssDNA是单链DNA的简称,cDNA(complement DNA)表示互补DNA。
2023-06-28 18:26:362

现代分子生物学中cDNA中文名是什么?

叫做部分基因文库有mRNA逆转录形成的DNA即称为cDNA无启动子
2023-06-28 18:26:431

cdna文库不含内含子

...cDNA是环状DNA,一般只存在于原核生物的dna中,根据原核生物dna的特点没有内含子,逆转录的dna是从mrna来的,mrna全都是外显子转录来的,内含子在转录的过程中已经被剪切掉了,如果没有模板是不能逆转录出内含子. 至于编码区,他是dna中编码蛋白质的基因,当然只存在于dna中. 总之,dna转录加工去掉内含子转录的部分,留下外显子转录的部分连接起来组成mrna,后进行翻译,mrna可以在逆转录酶的存在下,在逆转录回dna中的外显子部分.
2023-06-28 18:26:511

问mRNA转录成cDNA的过程

有反转录酶,可以以rna为模版合成dna。这过程需要引物,根据mrna有3‘polya尾巴的特点,可以用oligo-dt作为引物,合成cdna,这样可以自然去除非mrna的rna的转录。也可以用随机引物去合成大量不同的cdna。如果要反转录特定的mrna,就根据它设计特异性引物反转录,这样理论上只有目的cdna产生
2023-06-28 18:27:005

【求助】cDNA 该如何保存?

最好不要长久用cDNA做模版。 可以用PCR产物稀释100倍左右作为模版。 是RT后的cDNA。 不是PCR后得双链CDNA。 PCR后得产物是稳定的。 不知道你是用的哪个我说是的RT后的cDNA可以分装成小份儿的,经常用的放4度,其他的放-20度保存分装
2023-06-28 18:27:281

mrna逆转录为什么得到cdna

是的,得到的是全体mRNA的cDNA的库.然后通过PCR手段获得需要的目的片段.但是实际操作过程中,由于mRNA的降解,因此一次实验不可能得到全部的cDNA,因此要重复1~2次,才能保证全部mRNA被反转录为cDNA.
2023-06-28 18:27:361

cDNA是双链么

你知道realtimePCR用cDNA和用DNA的目的区别在哪儿吗?用DNA的一般是检测基因组中目的片段的数量的用cDNA的一般是检测目的基因表达量的,这当然就需要检测mRNA的量,但是RNA太容易被分解,难以检测,故而用反转录而成的cDNA。一般反转录而成的cDNA是单链的,要形成双链,还需要其他步骤,比如两步法中的pcr步骤。
2023-06-28 18:27:421

ORF cDNA 和CDS的区别

CDS是Coding sequence的缩写,是编码一段蛋白产物的序列,是结构基因组学术语ORF开放阅读框是基因序列的一部分,包含一段可以编码蛋白的碱基序列,不能被终止子打断.当一个新基因被识别,其DNA序列被解读,人们仍旧无法搞清相应的蛋白序列是什么CDS与开放读码框ORF的区别(1)开放读码框是从一个起始密码子开始到一个终止密码子结束的一段序列;不是所有读码框都能被表达出蛋白产物,或者能表达出占有优势或者能产生生物学功能的蛋白.(2) CDS,是编码一段蛋白产物的序列.(3) cds必定是一个orf.但也可能包括很多orf.(4)反之,每个orf不一定都是cds.(5)Open reading frame (ORF) - a reading frame that does not contain a nucleotide triplet which stops translation before formation of a complete polypeptide.Coding sequence (CDS) - The portion of DNA that codes for transcription of messenger RNAORF-----translation,CDS----transcriptiontranslation 是理论上的,而transcription则显然是事实存在的.cDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链EST (Expressed Sequence Tag)表达序列标签—是从一个随机选择的cDNA 克隆,进行5"端和3"端单一次测序挑选出来获得的短的cDNA 部分序列,代表一个完整基因的一小部分,在数据库中其长度一般从20 到7000bp 不等,平均长度为360 ±120bp .由于cDNA文库的复杂性和测序的随机性,有时多个EST代表同一基因或基因组,将其归类形成EST簇(EST clusteF)mRNA携带遗传信息,在蛋白质合成时充当模板的RNA.
2023-06-28 18:27:511

由cDNA全长怎么得到DNA全长

以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA。步骤的话应该与DNA复制过程类似,需要的原料是mRNA模板,四中脱氧核糖核苷酸,逆转录酶,还有能量,注意:这样获得的DNA片段不含非编码区序列。以下是专业回答一).构建cDNA文库:以生物细胞的总mRNA为模板,用反转录酶合成互补的双链cDNA,然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是cDNA文库。1、mRNA的提取及其完整性的确定1)总RNA的提取RNA提取方法:APGC法或NP-40或应用试剂盒提取总RNA2)mRNA的分离高等真核生物mRNA分子的3"端均有poly(A)尾,将总RNA通过寡聚(DT)纤维柱分离mRNA或利用磁珠法制备纯mRNA。在某些情况下,裂解细胞后用蔗糖梯度来制备mRNA-核糖体复合物作为提取mRNA的替换途径。3)mRNA的纯化①按照大小对总mRNA进行分级,主要用琼脂糖凝胶电泳和蔗糖密度梯度离心法进行分级;②多聚核糖体的免疫学纯化法,这是利用抗体来纯化合成目的多肽的方法。4)mRNA完整性的确定确定mRNA完整性的方法有三种:①直接检测mRNA分子的大小;②测定mRNA的转译能力;③检测总mRNA指导合成cDNA第一链长分子的能力。2、cDNA的合成和克隆1)cDNA第一链的合成用亲和层析法得到mRNA后,根据mRNA分子的3"端有poly(A)尾结构的原理,用12~20个核苷酸长的oligo(dT)与纯化的mRNA混合,oligo(dT)会与poly(A)结合作为反转录酶的引物,反转录反应的产物是一条RNA-DNA的杂交链。oligo(dT)结合在mRNA的3"端,因此合成全长的cDNA需要反转录酶从mRNA分子的一端移动到另一端,有时这种全合成难以达到,尤其是mRNA链很长时,为此建立了一种随机引物法合成cDNA。随机引物是一种长度为6~10个核苷酸,由4种碱基随机组成的DNA片段。与oligo(dT)仅与mRNA3"端结合不同,它们可以在mRNA的不同位点结合。随机引物法合成的产物也是RNA-DNA的杂交体。把cDNA克隆到载体中之前,必须把这种杂交体中的RNA转变成DNA链,即形成双链DNA分子。2).双链cDNA的合成合成cDNA第二条链有两种方法。一种方法是利用cDNA第一链的3"末端常常出现发夹环的特征,这种发夹结构是反转录酶在第一链末端“返折”并且进行复制第一链的结果,它为合成cDNA第二链提供了有用的引物。用这种方法合成的双链cDNA在一端有一个发夹环,可以用单链特异的S1核酸酶切去。但是S1核酸酶的处理,常常会“修剪”过多的cDNA顺序,使cDNA丢失了mRNA5"端的部分顺序。另一种方法是用大肠杆菌的RNaseH进行修饰。RNaseH能识别RNA-DNA杂交分子并把其中的RNA切割成短的片段,这些RNA短片段仍与cDNA第一链结合,可被新合成的DNA所取代。新合成的DNA存在切口,用DNA连接酶把这些切口连接在一起形成一条完整的DNA链。RNaseH法优于S1核酸酶法,它能获得包括mRNA5"端全部或绝大部分的更长顺序cDNA分子。3)将cDNA重组到载体上合成的cDNA与载体DNA进行连接一般有3种方法:①借助于末端转移酶的3"-OH端合成均聚物的能力,双链cDNA和线性化载体DNA的3"-OH端分别加上均聚核苷酸链;②双链cDNA和线性化载体DNA分别用Klenow片段进行末端补平,然后用T4DNA连接酶进行齐头连接,形成重组体;③通过粘性末端连接。4).转化重组的载体DNA分子在一定条件下转化入大肠杆菌,形成携带质粒的菌株。当不同重组的DNA含有不同的cDNA基因时,整个转化子含有来自mRNA群体的各种cDNA基因,这样的转化子群体构成该mRNA全部遗传信息的cDNA基因文库。5).目的cDNA克隆的鉴定用于从cDNA文库中筛选和鉴定目的cDNA的方法主要有3种:①核酸杂交②免疫学杂交检测③cDNA同胞选择
2023-06-28 18:28:012

如何用已有的cDNA,做出相应的蛋白质

1.dna经过转录合成rna,再经过翻译形成肽链,经过内质网和高尔基体加工后成为有一定空间结构的蛋白质。2.mrna经过逆转录形成cdna(complementarydna),这一般是rna病毒才能进行的过程。
2023-06-28 18:28:181

如何检测cDNA的纯度,有什么方法

cDNA量少,直接跑看不出来什么,即使有弥散也不能说明质量好坏。纯度的话用跨内含子的housekeeping基因引物P,看产物大小,避免有基因组残余。有符合要求的目的基因的引物更好了,但是表达量少的话容易P不出来反转要成功,首先RNA要好,操作要小心,RNasin要加,dNTP要新的(至少也是RT专用的)。热变性要充分
2023-06-28 18:28:271

为什么cDNA文库的基因没有启动子和终止子

cDNA文库是用mRNA逆转录得到的DNA,只含有编辑对应蛋白质的信息,没有控制该基因表达的相关元件(启动子、终止子、增强子),也没有内含子。因此,cDNA文库的基因没有启动子和终止子 。
2023-06-28 18:28:362

简述cDNA文库与基因组文库的主要区别

cDNA文库 以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA基因组文库用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。 将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
2023-06-28 18:28:451

由mRNA反转录形成cDNA的过程大致分为哪些步骤?

先从细胞提取总rna,然后根据大多数真核mrna含有多聚腺嘌呤(polyadenylicacid,polya)尾的特点,用寡聚dt纤维素柱将mrna分离出,以mrna为模板,在多聚a尾上结合12-18个dt的寡聚dt片段,作为合适的起始引物,在逆转录酶作用下合成
2023-06-28 18:28:531

RT后cDNA浓度能测出来吗

可以用紫外分光光度计(浓度计)进行测量,但不太准。Real-timePCR可以对cDNA中某基因进行定量或半定量,但要准确测量总cDNA比较困难。一般cDNA就用反转录的RNA的量进行估算,而且反转录和之后的检测基本都连续在一起,有内参进行对照,所以没必要测cDNA的浓度。
2023-06-28 18:29:002

cDNAs是什么意思?是双链CDNA吗?

全长互补脱氧核糖核酸(cDNAs)。
2023-06-28 18:29:082

cDNA文库和基因DNA有什么区别?

cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA.cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列. cDNA文库 以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库.基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性.cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因.但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组.DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA 基因组文库 用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆.这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库. 将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆.这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因.
2023-06-28 18:29:161

cdna是什么

  cdna,是一种互补脱氧核糖核酸,与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。   cdna为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementaryDNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomicDNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。
2023-06-28 18:29:361

cDNA是什么意思?

cDNA 是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来的基因组DNA相同而且无内含子;相反地,对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3"末端的poly A序列等的核苷序列上,与外显子序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。
2023-06-28 18:29:431

什么是cDNA?

cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。【cDNA定义】为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。【DNA与cDNA的区别】DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
2023-06-28 18:29:491

cdna是什么 详解cdna的定义和应用?

通过cdna的克隆和表达,可以研究基因的功能。例如,将cdna克隆到表达载体中,转染到细胞中,就可以研究该基因的表达和功能。1. 基因克隆cdna的应用3. 基因功能研究cdna是通过逆转录反应将mRNA作为模板合成的DNA分子。逆转录是指将RNA作为模板合成DNA的过程,这个过程由逆转录酶催化完成。逆转录过程中,RNA模板首先被逆转录酶的反转录酶活性所逆转录,形成相应的DNA互补链,然后由DNA聚合酶合成第二条DNA链,形成完整的双链DNA分子。这个过程合成的DNA分子即为cdna。通过cdna的克隆和表达,可以研究基因的功能。例如,将cdna克隆到表达载体中,转染到细胞中,就可以研究该基因的表达和功能。
2023-06-28 18:29:561

什么是cDNA,有什么用?

cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。【cDNA定义】为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。【DNA与cDNA的区别】DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
2023-06-28 18:30:031

cDNA是什么意思?

cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。【cDNA定义】为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。【DNA与cDNA的区别】DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
2023-06-28 18:30:091

“cDNA”的名词解释是什么?

cDNA(全称complementary DNA),是一种互补脱氧核糖核酸。与mRNA链互补的单链DNA,以其mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。【cDNA定义】为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。【DNA与cDNA的区别】DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
2023-06-28 18:30:181

什么是cDNA?

科技名词定义 中文名称:cDNA文库 英文名称:cDNA library 定义:含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克隆群。所属学科:遗传学(一级学科);分子遗传学(二级学科)
2023-06-28 18:30:284

cDNA是什么啊?

DNA(Deoxyribonucleic acid),中文译名为脱氧核糖核酸,是染色体的主要化学成分,同时也是基因组成的,有时被称为“遗传微粒”。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。cDNA 互补脱氧核糖核酸   为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。(转自http://baike.baidu.com/view/212931.htm)
2023-06-28 18:31:415

CDNA与基因组DNA有何区别?

一、来源不同CDNA:CDNA是以mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA经过反转录而得到的DNA,是mRNA链互补的DNA链。基因组DNA:基因组DNA是指整套人类基因结构,控制着人类从一个单个细胞到一个复杂整体的发育。二、所属细胞类型不同CDNA:CDNA的基因可以来自于原核细胞,也可以来自于真核细胞。基因组DNA:基因组DNA是指人类基因,属于真核细胞。三、结构不同CDNA:cDNA内部已无内含子等结构。基因组DNA:基因组DNA通常存在内含子等结构。扩展资料二代测序均是先将RNA反转录组成cDNA再进行测序的。mRNA,并不是严格意义上的基因,而是基因信息的载体,称作Messenger RNA (mRNA),即信使核糖核酸。“基因”是指负载特定生物遗传信息,能够产生一条多肽链或功能RNA所必需的DNA分子片段,不但包括编码区,还包括5"-端和3"-端两侧特异性序列,虽然这些序列不编码氨基酸,但在基因表达的过程中起着重要的作用。参考资料来源:百度百科-CDNA百度百科-基因组DNA
2023-06-28 18:31:572

cdna是什么 详解cdna的定义和应用?

通过cdna的克隆和表达,可以研究基因的功能。例如,将cdna克隆到表达载体中,转染到细胞中,就可以研究该基因的表达和功能。3. 基因功能研究3. 基因功能研究cdna是通过逆转录反应将mRNA作为模板合成的DNA分子。逆转录是指将RNA作为模板合成DNA的过程,这个过程由逆转录酶催化完成。逆转录过程中,RNA模板首先被逆转录酶的反转录酶活性所逆转录,形成相应的DNA互补链,然后由DNA聚合酶合成第二条DNA链,形成完整的双链DNA分子。这个过程合成的DNA分子即为cdna。1. 基因克隆
2023-06-28 18:32:132

cDNA和基因组DNA有什么不同

一、来源不同CDNA:CDNA是以mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA经过反转录而得到的DNA,是mRNA链互补的DNA链。基因组DNA:基因组DNA是指整套人类基因结构,控制着人类从一个单个细胞到一个复杂整体的发育。二、所属细胞类型不同CDNA:CDNA的基因可以来自于原核细胞,也可以来自于真核细胞。基因组DNA:基因组DNA是指人类基因,属于真核细胞。三、结构不同CDNA:cDNA内部已无内含子等结构。基因组DNA:基因组DNA通常存在内含子等结构。扩展资料二代测序均是先将RNA反转录组成cDNA再进行测序的。mRNA,并不是严格意义上的基因,而是基因信息的载体,称作Messenger RNA (mRNA),即信使核糖核酸。“基因”是指负载特定生物遗传信息,能够产生一条多肽链或功能RNA所必需的DNA分子片段,不但包括编码区,还包括5"-端和3"-端两侧特异性序列,虽然这些序列不编码氨基酸,但在基因表达的过程中起着重要的作用。参考资料来源:百度百科-CDNA百度百科-基因组DNA
2023-06-28 18:32:222

cDNA反转录的产物是双链还是单链的?

RNA反转录的cDNA是单链的,最终形成双链。cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成。并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶作用合成双链cDNA。扩展资料:反转录的生物学意义:1、对分子生物学的中心法则进行了修正和补充,修正后的中心法则表示为:是指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。某些病毒中的RNA自我复制(如烟草花叶病毒等)和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程(某些致癌病毒)。有些病毒(如阮病毒,即疯牛病病毒)以蛋白质直接形成蛋白质。2、在致癌病毒的研究中发现了癌基因,在人类一些癌细胞如膀胱癌、小细胞肺癌等细胞中,也分离出与病毒癌基因相同的碱基序列,称为细胞癌基因或原癌基因。癌基因的发现为肿瘤发病机理的研究提供了很有前途的线索。3、在实际工作中有助于基因工程的实施。由于目的基因的转录产物易于制备,可将mRNA反向转录形成DNA用以获得目的基因。参考资料来源:百度百科-反转录参考资料来源:百度百科-cDNA
2023-06-28 18:32:371

什么是cDNA,有什么作用

中文名称: 互补DNA 英文名称: cDNA, complementary DNA 学科分类: 遗传学 注 释: 信使RNA(mRNA)分子的双链DNA拷贝。构成基因的双链DNA分子用一条单链作为模板,转录产生与其序列互补的信使RNA分子,然后在反转录酶的作用下,以mRNA分子为模板,合成一条与mRNA序列互补的单链DNA,最后再以单链DNA为模板合成另一条与其互补的单链DNA,两条互补的单链DNA分子组成一个双链cDNA分子.因此,双链cDNA分子的序列同转录产生的mRNA分子的基因是相同的.所以一个cDNA分子就代表一个基因.但是cDNA仍不同于基因,因为基因在转录产生mRNA时,一些不编码的序列即内含子被删除了,保留的只是编码序列,即外显子.所以cDNA序列都比基因序列要短得多,因为cDNA中不包括基因的非编码序列---内含子.
2023-06-28 18:32:531

cDNA和gDNA区别

gDNA(genomic DNA,基因组DNA):是指有机体在单倍体状态下的DNA全部含量。广义的基因组也指某一体系(如核或细胞器)中的DNA,它包括编码或细胞中固有的核糖体DNA(rDNA)、线粒体DNA(mtDNA)、tRNA基因及其它RNA编码。cDNA:与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA进行一定条件下合成的,就是cDNA。两者从定义就可以看出区别,从某种意义上来说,前者包括后者.
2023-06-28 18:33:021

CDNA与基因组DNA有何区别?

一、来源不同CDNA:CDNA是以mRNA为模板,在适当引物的存在下,由mRNA经过反转录而得到的DNA,是mRNA链互补的DNA链。基因组DNA:基因组DNA是指整套人类基因结构,控制着人类从一个单个细胞到一个复杂整体的发育。二、所属细胞类型不同CDNA:CDNA的基因可以来自于原核细胞,也可以来自于真核细胞。基因组DNA:基因组DNA是指人类基因,属于真核细胞。三、结构不同CDNA:cDNA内部已无内含子等结构。基因组DNA:基因组DNA通常存在内含子等结构。扩展资料二代测序均是先将RNA反转录组成cDNA再进行测序的。mRNA,并不是严格意义上的基因,而是基因信息的载体,称作Messenger RNA (mRNA),即信使核糖核酸。“基因”是指负载特定生物遗传信息,能够产生一条多肽链或功能RNA所必需的DNA分子片段,不但包括编码区,还包括5"-端和3"-端两侧特异性序列,虽然这些序列不编码氨基酸,但在基因表达的过程中起着重要的作用。参考资料来源:百度百科-CDNA百度百科-基因组DNA
2023-06-28 18:33:101

下列关于cDNA叙述正确的是

【答案】:DcDNA是指以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA。
2023-06-28 18:33:251