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如果是单酶切,超螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒,因此条带会偏大,这是酶切充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;
如果是双酶切,而且片段大小适中,可以看见酶切的片段和载体,还有未切开的质粒。
能不能区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖凝胶的浓度,电泳时间,DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间,应当是有区别的。酶切之前就有几条带,可能是因为质粒样品中有杂带,来源于杂菌或者降解。
扩展资料:
质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子,存在于细胞质中(但酵母除外,酵母的2 μm质粒存在于细胞核中),具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息,是闭合环状的双链DNA分子。
质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质,可自行丢失或人工处理而消除,如高温、紫外线等。质粒携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状,有利于细菌在特定的环境条件下生存。
根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类:严紧控制型和松弛控制型。
严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用,只能在细胞周期的一定阶段进行复制,当细胞染色体停止复制时,质粒也就不再复制。
松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响,在整个细胞生长周期中随时都可以复制,在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。
参考资料来源:百度百科——质粒
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超螺旋是最常见也是研究最多的DNA三级结构,DNA的三级结构是指在双螺旋结构基础上分子的进一步扭曲或再次螺旋所形成的构象,由于DNA双螺旋是处于最低能量状态的结构,如果使正常DNA的双螺旋额外的多转几圈或少转几圈,就会使双螺旋内的原子偏离正常的位置,这样在双螺旋分子中就存在额外张力.如果双螺旋末端是开放的,张力会通过链的旋转而释放,如果DNA分子两端是以某种方式固定的,这些额外张力就不能释放到分子之外,而只能在DNA分子内部重新分配,从而造成原子或基因的重排,导致DNA形成超螺旋.细胞内的DNA主要以超螺旋形式存在.2023-06-28 19:04:361
超螺旋结构对染色体包装,dna的复制以及转录有何意义?
1.超螺旋DNA比松弛型DNA更紧密,使DNA分子的体积更小,得以包装在细胞内. 2.超螺旋会影响双螺旋分子的解旋能力,从而影响到DNA与其他分子之间的相互作用. 3.超螺旋有利于DNA的转录,复制及表达调控.2023-06-28 19:04:431
超螺旋和环状DNA有关系吗
没有。因为你提到环状DNA,所以默认为讨论的是原核细胞。超螺旋针对的是genomeDNA,是DNA双螺旋的二级结构,有正负两种超螺旋,在转录和复制过程中具有重要作用。而环状DNA(也叫plasmid质粒)指的是细菌细胞内不属于染色质DNA的小型DNA,一般携带的是对细菌不必要的遗传信息。细菌可以随意的得到或失去质粒DNA,区别于genomeDNA,质粒DNA显得不那么重要,但是质粒可以让细菌具有更强的生存能力。例如,pUC-19质粒,上有Ampicillin抗性基因,可以让细菌细胞对该抗生素有抗性,得以存活。2023-06-28 19:04:511
rna链可以形成超螺旋结构吗?
不可以DNA中由戊糖和磷酸基构成的两条主锭以反平行的方式和右手方向相互缠绕,构成双螺旋的骨架。主链由于其亲水性而处于双螺旋的外表面,碱基由于其一定程度的疏水性而位于双螺旋的内部。这种结构是B型双螺旋结构。RNA一般是单链,只能通过自身回折形成局部配对来形成双螺旋。天然RNA只有局部区域为双螺旋结构。这些双链结构是由于RNA单链分子通过自身回折使得互补的碱基对相遇,通过氢键结合形成反平行右手双螺旋结构。且由于核糖2"羟基的存在,只能形成A型双螺旋(类似DNA脱水形成的结构类似),与DNA的B型双螺旋不同。2023-06-28 19:05:101
DNA超螺旋只存在于环状DNA么
DNA超螺旋只存在于环状DNA么1、DNA的三螺旋和四螺旋,是分别只DNA有3条和4条核苷酸链组成.也就是说DNA按核苷酸链数可分:单链,双链,三链,四链.(均是由同样4种脱氧核苷酸形成)单链DNA不用碱基配对;双链DNA碱基配对你是知道的;三链DNA是3条核苷酸链彼此互相碱基相连,从横截面上看,像三角形的3个顶点;四链DNA也就是4条核苷酸链由碱基相连,截面是矩形的4个顶点.三链和四链的碱基氢键形成原理远超出你的知识范围,就不解释了;并且这两种情况很少见的,你可以忽略,仅作了解.2、超螺旋DNA是指,线性DNA经过多次缠绕浓缩,形成的浓缩体.2023-06-28 19:05:191
DNA的超螺旋结构到底是怎么回事?对这个问题特别熟悉的朋友帮帮我!
L是比较容易理解的,就是两条链,一条绕另一条的次数。就像我们看到拧成两股的绳子有交叉点,一个交叉点就是一条绕另一条的1次,因此一定是整数的。T是盘绕数,在典型Watson-Crick双螺旋中,约10个碱基对旋转上升1圈,这就叫盘绕1圈,T值为1。更形象点,双螺旋你拿走1条链,剩下的1条仍然呈原来的典型Watson-Crick双螺旋中的状态,这时候就很像弹簧了,弹簧的圈数就是T值,当然可以是非整数了。希望对你有帮助2023-06-28 19:05:281
如何消除DNA双链的超螺旋堆积
DNA拓扑异构酶作用下解开。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量,可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种:使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中,使L数(参见DNA拓扑学异构体)发生一种变化,即松弛(relaxation)。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA,使单链DNA打结(topologicalknot)或解结。另外在二个环状双链DNA一个分子的一个链切断时,形成链环状二聚体的分子(ca-tenane)。在Ⅱ型拓扑异构酶中,DNA促旋酶可单独催化闭环状DNA产生超螺旋,这是独特的。其它二个型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,还可催化促旋酶的催化反应。真核细胞的拓扑异构酶Ⅰ,参与核小体的形成,细菌的ω蛋白参与转录和某种转位子的插入。促旋酶和T4拓扑异构酶Ⅱ参与DNA的复制和转录过程。2023-06-28 19:05:351
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真核生物体有没有DNA高级结构DNA形成超螺
DNA在形成超螺旋前已经与组蛋白结合形成核小体,就像一节绳上打了很多结一样,然后DNA可以形成超螺旋超螺旋,一般存在于环状DNA分子中,具有环状DNA分子的一般是原核生物。 关于染色体压缩:DNA组装成核小体,其长度缩短7倍,核小体由连接DNA相连,并借助组蛋白之间的相互作用而彼此挨在一起,进一步盘绕形成30nm染色质纤丝,每圈六个核小体,这次盘绕使得DNA压缩大约40倍。目前认为,染色质纤丝组成突环,再由突环组成玫瑰花结,进而组装成螺旋圈,由螺旋圈形成染色单体结构(每个染色单体含10个螺旋圈)。 总之,染色体是由DNA和蛋白质以及RNA构成的不同层次的缠绕线和螺旋管结构。2023-06-28 19:06:071
DNA超螺旋的生物学意义是什么?
大沟是调控蛋白质识别DNA信息的主要场所。维系DNA二级结构的主要作用力是氢键和碱基堆集力,而磷酸基的负电荷和碱基内能则不利于双螺旋结构的稳定, 在生理状况下,双螺旋的碱基对之间氢键不断地发生断裂和再生,这就是DNA的所谓呼吸作用。DNA在热或其他变性剂作用之下,双链发生分离,即变性作用。变性的DNA单链在适合的条件下又能恢复双螺旋结构,即复性作用。基于DNA的变性作用和复性作用,产生了十分有用的分子杂交技术。 小沟这也没什么好说的,它是客观形成的2023-06-28 19:06:173
DNA复制之初参与从超螺旋结构解开双股链的酶是什么?
是解旋酶. 解旋酶能在DNA复制时把DNA的双链解旋成两条单链,作用部位是碱基之间的氢键,也就是说把氢键打开. 解旋酶是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构.在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性.大部分的移动方向是5"→3",但也有3"→5"移到的情况,如n"蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3"→5"移动.2023-06-28 19:06:231
为什么DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同
DNA质粒中的三种形态的电泳速度不同的原因:正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环,或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同,分离速度不同,分成三带。闭环(超螺旋),开环,线形的螺旋率依次降低。(开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链,因此电泳速度最慢)三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。 质粒DNA具有三种不同的构型分别是:OC构型、L构型、SC构型。在电泳中最前面的是SC构型。2023-06-28 19:06:431
DNA复制过程中有什么重要的意义?
①解旋:复制刚开始时,DNA分子首先利用细胞提供的能量,在解旋酶的作用下,把两条螺旋的双链解开,这个过程叫做解旋。②复制:以解开的每一段母链为模板,以周围环境中游离的4种脱氧核苷酸(分别是腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸4种)为原料,按照碱基互补配对原则,在有关酶的作用下,各自合成与母链互补的一段子链。③复旋:随着解旋过程的进行,新合成的子链也不断延伸,同时每条子链与其对应的母链盘绕成双螺旋结构,从而各形成一个新的DNA分子。这就是DNA分子的复制过程,复制结束后,一个DNA分子就形成了两个完全相同的DNA分子。新复制出的两个子代DNA分子,通过细胞分裂分配到子细胞中去。扩展资料:DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链(如果复制过程正常的话),每条双链都与原来的双链一样。这个过程是通过名为半保留复制的机制来得以顺利完成的。DNA复制不能沿滞后链进行,也就是说,从头到尾的DNA链,直到已经复制了足够长度的DNA分子,否则DNA复制不会继续沿着模本链进行复制,DNA复制于是从新合成复制叉处分开。在复制过程中必须暂停并等待更多的亲本DNA链片段,而此时整个长度只是沿着开始到结束方向前进了一小段距离。DNA复制为边解旋边复制,原核生物一般是单个复制起点,真核生物多个复制起点。旋转酶的作用是解开由解旋酶切断DNA链产生的超螺旋化,解旋酶使DNA链旋转并释放超螺旋体,使它们重新加入到DNA链中。旋转酶最常见于复制叉的上游,形成超螺旋的位置。由于DNA聚合酶只能连接DNA链(不能开始),所以由引物酶引导指导链进行复制。引物酶将与模本链互补的RNA引物加到DNA链上开始复制冈崎片段。单链结合蛋白绑定在暴露的碱基上竭力防止DNA链的不稳定并保证单链DNA之间不会由氢键形成危险的发夹结构。DNA合成酶包含一个校对机制,通常指的是“外切核酸酶活性”,即将错误添加的核酸去除掉。参考资料来源:百度百科——DNA复制2023-06-28 19:06:502
正超螺旋的介绍
正超螺旋:由线性双螺旋分子两端连接起来或因与蛋白质结合而固定的环状DNA分子,进一步扭曲都可形成超螺旋·双螺旋DNA处于拧紧状态时所形成的超螺旋为正超螺旋(右手超螺旋)。2023-06-28 19:07:031
质粒的不同构象是否会影响在电泳过程中的迁移速率呢?
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。不同构型DNA的移动速度次序为:供价闭环DNA(covalently closed circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。2023-06-28 19:07:182
DNA复制过程中的酶类及其主要功能分别是什么?
1.DNA聚合酶 DNA的复制过程极为复杂,但其速度极快,这是由于许多酶和蛋白质因子参与了复制过程。其中,DNA聚合酶起着重要作用。在原有DNA模板链存在情况下,DNA聚合酶催化四种脱氧核苷酸(dATP、dTTP、dGTP、dCTP),通过与模板链的碱基互补配对,合成新的对应DNA链,故此酶又称为DNA指导的DNA聚合酶(DNA directed DNA polymerase,缩写为 DDDP)。DNA聚合酶的特点是不能自行从头合成DNA链,而必须有一个多核苷酸链作为引物,DNA聚合酶只能在此引物的端催化dNTP与末端作用,形成磷酸二酯键,从而逐步合成DNA链。因此,DNA链的合成是有方向性的,即从5'端→3'端方向进行。这一特点在DNA复制过程中具有重要意义。无论在原核细胞或真核细胞中,都存在多种DNA聚合酶,它们的性质和作用不完全相同。在真核细胞中至少有5种DNA聚合酶,即DNA聚合酶α、β、γ、δ和线粒体聚合酶。其中DNA聚合酶α在细胞中活性最强,在复制中起关键作用,而DNA聚合酶β主要在DNA损伤的修复中起作用。在DNA复制过程中,若有 dNTP与亲代DNA链中相应碱基错误配对时,某些DNA聚合酶还具有核酸外切酶的活性,切去错误配对的核苷酸,以保证DNA复制的忠实性,称为“校对”作用。DNA复制的这一特性也具有重要意义。除了上述的三种酶,DNA复制还需要一些其它的酶和蛋白质因子,它们主要参与DNA的解旋和解链过程。因为DNA具有超螺旋结构,复制时必然要松弛DNA模板的超螺旋结构,并使DNA的双链分开,暴露碱基,才能发挥模板作用。 (1)松弛DNA超螺旋结构的酶是拓扑异构酶。 (2)解开DNA双链的酶是解链酶。 (3)还有一些蛋白质因子结合在解开的单链DNA链上,保持模板链处于单链状态,便于复制,称为DNA结合蛋白。 2.DNA连接酶 DNA连接酶也是DNA复制过程中不可缺少的酶。因为复制过程中DNA链的合成方向只能由端5'→3'端方向进行,因此其中有一条新链的合成是不连续的,起初生成的只是许多短链的DNA片段(对这点的理解十分重要)。此种片段须在DNA连接酶的催化下,首尾相连,才能成为一条完整的DNA长链。实际上,DNA连接酶是将一片段DNA链上的-OH末端与相邻另一片段DNA链上的P末端连接起来,使二者生成磷酸二酯键,从而将两个片段的DNA链连接起来。 3.引物酶 引物酶是DNA复制的另一种重要的酶。如上所述,DNA聚合酶不能自行从头合成DNA链,因此,在复制过程中首先需要合成一小段多核苷酸链作为引物(Primer)。实验证明,这段引物是RNA链片段,在这段引物的3'端引导DNA链的合成。催化引物链合成的酶称为引物酶,实际上它是一种特殊的RNA聚合酶。此酶以相应复制起始部位的DNA链为模板,合成短片段的RNA引物。2023-06-28 19:07:352
正超螺旋为什么是左手螺旋
在外力往紧缠的方向捻转时,会产生一个左旋的超螺旋。正超螺旋是指两股以右旋方向缠绕的螺旋,在外力往紧缠的方向捻转时,会产生一个左旋的超螺旋,以解除外力捻转造成的胁变,这样形成的螺旋为正超螺旋。2023-06-28 19:07:521
DNA超螺旋只能存在于环状DNA分子中吗
dna超螺旋只存在于环状dna么1、dna的三螺旋和四螺旋,是分别只dna有3条和4条核苷酸链组成.也就是说dna按核苷酸链数可分:单链,双链,三链,四链.(均是由同样4种脱氧核苷酸形成)单链dna不用碱基配对;双链dna碱基配对你是知道的;三链dna是3条核苷酸链彼此互相碱基相连,从横截面上看,像三角形的3个顶点;四链dna也就是4条核苷酸链由碱基相连,截面是矩形的4个顶点.三链和四链的碱基氢键形成原理远超出你的知识范围,就不解释了;并且这两种情况很少见的,你可以忽略,仅作了解.2、超螺旋dna是指,线性dna经过多次缠绕浓缩,形成的浓缩体.2023-06-28 19:08:011
什么叫DNA的正超螺旋和负超螺旋?
正向超螺旋:两股以右旋方向缠绕的螺旋,在外力往紧缠的方向捻转时,会产生一个左旋的超螺旋,以解除外力捻转造成的胁变。这样形成的螺旋为正超螺旋。反之为负超螺旋。图片见:http://tupian.hudong.com/a0_20_86_01300000320438123181869105030_jpg.html2023-06-28 19:10:171
琼脂糖凝胶电泳DNA跑胶快慢的次序是什么?
质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大,摩擦阻力越大,第一条带是超螺旋带应该最亮,因为超螺旋结构完整紧密,跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA,不如超螺旋紧密,跑得相对慢 。第三条带为开环质粒,DNA双链的其中一根断开,导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构,结构臃肿,跑得最慢。扩展资料:琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题,琼脂就像有孔海绵分子筛,细菌质粒提取中电泳会出现三条带,最快的是超螺旋带,它是完整的,因为它的构型紧密,跑得快。 第二条带在中间,是直链带,即环状双链DNA 两条链均断开,其分子构象变为线性,不如超螺旋紧密,跑得就慢一点。最慢的是开环带,即环状双链DNA 有一条链断开,拖着一条尾巴,显得很臃肿,所以跑得最慢。参考资料:百度百科——DNA2023-06-28 19:10:351
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为什么自然界的超螺旋DNA都是负超螺旋环DNA(closed circular DNA)没有断口的双链环状DNA,亦称为超螺旋DNA.由于具有螺旋结构的双链各自闭合,结果使整个DNA分子进一步旋曲而形成三级结构.自然界中主要是负超螺旋另外如果一条或二条链的不同部位上产生一个断口,就会成为无旋曲的开环DNA分子.从细胞中提取出来的质粒或病毒DNA都含有闭环和开环这二种分子.可根据两者与色素结合能力的不同,而将两者分离开来.在双螺旋结构中,没旋转一圈含有10个碱基对处于能量最低的状态,少于10个就会形成右手超螺旋,反之为左手超螺旋.前者称为负超螺旋,后者称为正超螺旋..原核细胞中的DNA超螺旋是在DNA旋转酶作用下,由ATP提供能量形成的环状DNA负超螺旋,真核细胞中的DNA与组蛋白形成的核小体以正超螺旋结构存在2023-06-28 19:10:481
DNA的超螺旋结构是属于()
DNA的超螺旋结构是属于() A.一级结构B.二级结构C.三级结构D.四级结构的一种形式E.无定型结构正确答案:C2023-06-28 19:10:551
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是解旋酶。解旋酶能在DNA复制时把DNA的双链解旋成两条单链,作用部位是碱基之间的氢键,也就是说把氢键打开。 解旋酶是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5"→3",但也有3"→5"移到的情况,如n"蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3"→5"移动。2023-06-28 19:11:234
1.泳道的质粒DNA有几条带?为什么?
通常如果是只抽提了质粒,会因为质粒有不同的构型,检测到多个条带. 质粒可能会有超螺旋构型,环状构型和线性构型.这三种构型中,迁移率最快的应该是超螺旋的,其次是线性和环状.通常观察到的是超螺旋和环状质粒. 所以一般情况下,如果质粒抽提出来,不建议直接电泳检测,因为会看到多条条带,需要通过单酶切以后,把质粒变成线性的,才能据此判断质粒条带的大小.确认抽提获得的质粒是否是目标质粒. 如果是基因组或者是RNA污染会有其他条带,但是由于和质粒位置距离较远,应该能够判断出来.2023-06-28 19:11:321
在DNA复制过程中,超螺旋结构是如何解开的?
DNA拓扑异构酶作用下解开。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量,可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种:使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中,使L数(参见DNA拓扑学异构体)发生一种变化,即松弛(relaxation)。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA,使单链DNA打结(topological knot)或解结。另外在二个环状双链DNA一个分子的一个链切断时,形成链环状二聚体的分子(ca-tenane)。在Ⅱ型拓扑异构酶中,DNA促旋酶可单独催化闭环状DNA产生超螺旋,这是独特的。其它二个型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,还可催化促旋酶的催化反应。真核细胞的拓扑异构酶Ⅰ,参与核小体的形成,细菌的ω蛋白参与转录和某种转位子的插入。促旋酶和T4拓扑异构酶Ⅱ参与DNA的复制和转录过程。2023-06-28 19:11:403
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为什么超螺旋电泳跑的最快
因为超螺旋状的DNA体积最小,在凝胶(凝胶其实是多孔的物质)中的孔中运动的阻力小,因此泳动的快.同理,线状的DNA在孔内运动阻力很大,因此泳动慢.2023-06-28 19:12:081
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两股右手螺旋的确是左手超螺旋。根据相关信息查询,正超螺旋是指两股以右旋方向缠绕的螺旋,在外力往紧缠的方向捻转时,会产生一个左旋的超螺旋,以解除外力捻转造成的胁变.这样形成的螺旋为正超螺旋。而a螺旋恰恰是右旋螺旋,所以形成的超螺旋就是左旋。2023-06-28 19:12:141
dna旋转一周多少bp
构成典型的dna右手双螺旋时,每10bp螺旋一周,所以400bp的dNa可形成40周螺旋. 现在是32,说明有负超螺旋存在,负超螺旋数为8,你的问题答案为:有,负超螺旋8个(或简写—8).2023-06-28 19:12:231
大肠杆菌DNA复制起始的步骤?
①解旋:复制刚开始时,DNA分子首先利用细胞提供的能量,在解旋酶的作用下,把两条螺旋的双链解开,这个过程叫做解旋。②复制:以解开的每一段母链为模板,以周围环境中游离的4种脱氧核苷酸(分别是腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸4种)为原料,按照碱基互补配对原则,在有关酶的作用下,各自合成与母链互补的一段子链。③复旋:随着解旋过程的进行,新合成的子链也不断延伸,同时每条子链与其对应的母链盘绕成双螺旋结构,从而各形成一个新的DNA分子。这就是DNA分子的复制过程,复制结束后,一个DNA分子就形成了两个完全相同的DNA分子。新复制出的两个子代DNA分子,通过细胞分裂分配到子细胞中去。扩展资料:DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程,复制的结果是一条双链变成两条一样的双链(如果复制过程正常的话),每条双链都与原来的双链一样。这个过程是通过名为半保留复制的机制来得以顺利完成的。DNA复制不能沿滞后链进行,也就是说,从头到尾的DNA链,直到已经复制了足够长度的DNA分子,否则DNA复制不会继续沿着模本链进行复制,DNA复制于是从新合成复制叉处分开。在复制过程中必须暂停并等待更多的亲本DNA链片段,而此时整个长度只是沿着开始到结束方向前进了一小段距离。DNA复制为边解旋边复制,原核生物一般是单个复制起点,真核生物多个复制起点。旋转酶的作用是解开由解旋酶切断DNA链产生的超螺旋化,解旋酶使DNA链旋转并释放超螺旋体,使它们重新加入到DNA链中。旋转酶最常见于复制叉的上游,形成超螺旋的位置。由于DNA聚合酶只能连接DNA链(不能开始),所以由引物酶引导指导链进行复制。引物酶将与模本链互补的RNA引物加到DNA链上开始复制冈崎片段。单链结合蛋白绑定在暴露的碱基上竭力防止DNA链的不稳定并保证单链DNA之间不会由氢键形成危险的发夹结构。DNA合成酶包含一个校对机制,通常指的是“外切核酸酶活性”,即将错误添加的核酸去除掉。参考资料来源:百度百科——DNA复制2023-06-28 19:12:314
DNA双螺旋结构是通过什么连在一起的?
两条链是通过碱基间的氢键连接在一起的嘌呤和嘧啶之间可以形成氢键,而碱基对的碱基堆积力有利于维持DNA空间结构的稳定。在链的内部,核糖核苷酸间以3-5磷酸二酯键连接2023-06-28 19:12:476
DNA三级结构的主要形式是( ) A.双螺旋结构 B.α-螺旋 C.超螺旋 D.无规则卷曲 E.开环型结构
【答案】:CDNA三级结构的主要形式是超螺旋,DNA二级结构的主要形式是双螺旋。超螺旋是在双螺旋基础上的进一步螺旋化。2023-06-28 19:13:131
关于DNA分子构象的详细说明
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。2023-06-28 19:13:221
染色体中的dna是超螺旋结构吗?
a、DNA与组蛋白包装成核小体,在组蛋白H1的介导下核小体彼此连接形成直径约10nm的核小体串珠结构,这是染色质包装的一级结构;b、在有组蛋白H1存在的情况下,由直径10nm的核小体串珠结构螺旋盘绕,每圈6个核小体,形成外径30nm,内径10nm,螺距11nm的螺线管。螺线管是染色质包装的二级结构。C、螺线管进一步螺旋化形成直径为0.4um的圆筒状结构,称为超螺线管,这是染色质包装的三级结构。d、超螺线管进一步折叠、压缩,形成长2-10um的染色单体,即四级结构。a压缩7倍b压缩6倍压缩40倍压缩5倍DNA核小体螺线管超螺线管染色单体压缩8400倍2023-06-28 19:13:291
正超螺旋是右手螺旋吗?(就是DNA的那种螺旋)
正超螺旋:环状DNA分子、线性双螺旋分子两端连接起来或因与蛋白质结合而固定时,进一步扭曲都可形成超螺旋,双螺旋DNA处于拧紧状态时所形成的超螺旋为正超螺旋(左手超螺旋)。2023-06-28 19:13:382
电泳 为什么超螺旋DNA移动最快
这主要是因为DNA在超螺旋后,改变了自身的拓扑结构,消除了部分溶液中与其作用的氢键,使DNA磷酸骨架中更多的负电荷直接暴露在了电场之中,在电泳的作用下,其可更快速的移动至正极。2023-06-28 19:13:472
单链dna具有超螺旋结构吗
没有。单链DNA大部分DNA以双螺旋结构存在,但一经热或碱处理就会变为单链状态。一级结构就是DNA单链,三级结构就是DNA超螺旋结构,单链DNA就是指以这种状态存在的DNA。2023-06-28 19:14:051
DNA拓扑异构酶1和DNA拓扑异构酶2有什么异同?
为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。催化DNA链断开和结合的偶联反应,为了分析体外反应机制,用环状DNA为底物。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(top-oisomeraseⅠ),通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅡ)。属于Ⅰ型的拓扑异构酶,有大肠杆菌的ω蛋白(ω-protein,由分子量11万的单个多肽链所成)及各种真核细胞中存在的切断-结合酶(nicking-closingenzyme,分子量约6万5千—7万的及分子量约10万的)。Ⅱ型拓扑异构酶,有存在于细菌中的DNA促旋酶、噬菌体T4的拓扑异构酶Ⅱ以及真核细胞中依赖ATP的拓扑异构酶Ⅱ等。另外,噬菌体λ的irt基因产物和噬菌体φX174的基因A的产物等也具有切断—结合酶的活性,可认为是拓扑异构酶之一种。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量,可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种:使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中,使L数(参见DNA拓扑学异构体)发生一种变化,即松弛(relaxation)(图1)。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA(图2),使单链DNA打结(topologicalknot)或解结(图3)。另外在二个环状双链DNA一个分子的一个链切断时,形成链环状二聚体的分子(ca-tenane)。在Ⅱ型拓扑异构酶中,DNA促旋酶可单独催化闭环状DNA产生超螺旋,这是独特的。其它二个型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,还可催化促旋酶的催化反应。真核细胞的拓扑异构酶Ⅰ,参与核小体的形成,细菌的ω蛋白参与转录和某种转位子的插入。促旋酶和T4拓扑异构酶Ⅱ参与DNA的复制和转录过程。参考资料出有图2023-06-28 19:14:141
DNA重哪儿开始复制的?两端还是中间?
DNA的复制从起始点(origin)开始,这些特定的起始位点可以被DNA聚合酶识别。真核生物DNA的复制有多个起始点,先形成多个冈崎片段,然后在连接起来形成一条完整的DNA链,是半不连续复制。原核生物DNA为环状,复制起始位点一般只有一个。2023-06-28 19:15:032
超螺旋质粒大小
不同质粒大小在2-300kb之间。可自然形成超螺旋结构,不同质粒大小在2-300kb之间,<15kb的小质粒比较容易分离纯化,>15kb的大质粒则不易提取。能自主复制,是能独立复制的复制子。2023-06-28 19:15:101
什么是超螺旋共价闭合环状
DNA的双链是卷在一起的。收尾两端的联合是共价键联合的。因为是收尾两段共价联合 所以是闭合环状2023-06-28 19:15:171
质粒加热后超螺旋比例会下降么?
会。超螺旋是DNA分子的一种结构形态,当质粒加热时,高温会导致DNA分子的双螺旋结构解开,使DNA变为单链状态。在单链状态下,超螺旋比例会下降。2023-06-28 19:15:231
张力是什么意思
张力的意思是物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。拼音:zhāng lì。释义:张力,物理学名词。物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。被拉伸的弦、绳等柔性物体对拉伸它的其他物体的作用力或被拉伸的柔性物体内部各部分之间的作用力。示例:某绳AB可以看成是AC和CB两段组成,其中C为绳AB中的任一横截面,AC段和CB段的相互作用力就是张力。在绳的截面上单位面积所受的张力称为张应力。含义:1、引起伸长的两个平衡力之一。2、弹性物体拉长时产生的应力。3、在哲学中表示矛盾或不相容。4、小提琴弦的张力。5、由内而外的张力,富有弹性。拳击运动员的肌肉更有张力。应用举例在文学评论中,常常会有这样的评价:文章写的张弛有度。就是说写文章应该有紧有松有疏有密跌宕起伏,有张有驰节奏感好的文章读起来令人赏心悦目。这里的“张”就是指张力,在物理中常指某物体受到拉力后物体内部产生的一种牵引力,引申在文学方向则是指作者对文章的情节内容驾驭熟练,可收可放,使文章节奏恰当,而不拖沓,如弓之开合,不平淡不夸张,恰到好处,内涵深厚。在艺术创作中,也常使用张力借指画面的表现力及力量感。2023-06-28 19:15:551
张力是什么意思?
张力的意思是物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。张力,物理学名词。被拉伸的弦、绳等柔性物体对拉伸它的其他物体的作用力或被拉伸的柔性物体内部各部分之间的作用力。张力的意思是物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。例如,某绳AB可以看成是AC和CB两段组成,其中C为绳AB中的任一横截面,AC段和CB段的相互作用力就是张力。在绳的截面上单位面积所受的张力称为张应力。例如,内陆很多断裂带的产生并不是分离型板块的张力所致,而恰恰是汇聚型板块。例如,大洋板块俯冲到大陆板块之下产生的压力使陆块隆起,而隆起必然使薄弱环节产生张裂。张力造句1、没有阻力的世界,少了感人的戏剧张力。2、桑德伯格和林赛走的是绷紧的钢索;假如他们的诗在张力上一放松,就要摔到两个极端去,不是平淡无味,就是无病呻吟。3、东方的美就是体现在东方女人的内敛、矜持但是不失张力,朴素,但是绝对不是霸气。4、只有建立内心的价值系统,才能把压力变为生命的张力。5、狞厉是一种气魄之美,它崇尚雄强,夸张力度,有强烈得常常让人受不了的气概,使人想起地狱和魔鬼,狞厉之美不登大雅之堂也显然易见。以上内容参考百度百科-张力2023-06-28 19:16:101
张力的网络解释张力的网络解释是什么
张力的网络解释是:张力(富力地产集团联席董事长兼总裁)张力,男,1953年出生于广东广州,祖籍广州市珠江村,第一学历大专学历,恒生国际商学院MBA,美国国立波士顿大学企业管理博士。现任第十三届全国政协经济委员会委员,广州富力地产股份有限公司联席董事长兼总裁,富力足球俱乐部董事长,广东省总商会名誉会长。张力(汉语词语)张力,物理学名词。物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。被拉伸的弦、绳等柔性物体对拉伸它的其他物体的作用力或被拉伸的柔性物体内部各部分之间的作用力。例如,某绳AB可以看成是AC和CB两段组成,其中C为绳AB中的任一横截面,AC段和CB段的相互作用力就是张力。在绳的截面上单位面积所受的张力称为张应力。张力的网络解释是:张力(富力地产集团联席董事长兼总裁)张力,男,1953年出生于广东广州,祖籍广州市珠江村,第一学历大专学历,恒生国际商学院MBA,美国国立波士顿大学企业管理博士。现任第十三届全国政协经济委员会委员,广州富力地产股份有限公司联席董事长兼总裁,富力足球俱乐部董事长,广东省总商会名誉会长。张力(汉语词语)张力,物理学名词。物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。被拉伸的弦、绳等柔性物体对拉伸它的其他物体的作用力或被拉伸的柔性物体内部各部分之间的作用力。例如,某绳AB可以看成是AC和CB两段组成,其中C为绳AB中的任一横截面,AC段和CB段的相互作用力就是张力。在绳的截面上单位面积所受的张力称为张应力。词性是:名词。结构是:张(左右结构)力(独体结构)。拼音是:zhānglì。注音是:ㄓㄤㄌ一_。张力的具体解释是什么呢,我们通过以下几个方面为您介绍:一、词语解释【点此查看计划详细内容】张力zhānglì。1._鹕斐さ牧礁銎胶饬χ弧2._晕锾謇な辈挠αΑ二、引证解释⒈物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。引徐迟《地质之光》:“所谓受了歪曲的亚洲大陆,他写道,难道指的只是自然界的各种应力--压力、张力、扭力造成亚洲大陆的各种形变,仅仅指此而言的呢?还是为了指责欧美地质人员,因为他们用狭隘眼光来解释亚洲的造山运动,从而使亚洲枉受了许多的歪曲和冤屈呢?”三、国语词典物体受到拉力作用时,存在于物体内部而垂直于两相邻部分接触面上的相互牵引力。如:「表面张力」。如:「戏剧张力」。关于张力的近义词压力关于张力的诗词《丁衡甫中丞属题张力臣符山堂图卷》关于张力的单词tensiontensileutmosttension关于张力的成语大张其词明目张胆张眉张眼狼顾鸱张改柱张弦弩张剑拔讲文张字范张鸡黍慌慌张张改弦易张关于张力的词语弩张剑拔讲文张字明目张胆改弦易张改柱张弦张火伞东张西觑火伞张大张其词范张鸡黍关于张力的造句1、一个蓝色的光,团长张力计,然后举行了反对的眼睛来衡量的压力,在眼睛。2、没有阻力的世界,少了感人的戏剧张力。3、提出了一种解决张力腿平台系索疲劳可靠性问题的思路。4、低黏度的乳胶,它拥有较柔软的聚合物薄膜,适用于洗涤过程,黏著力特佳和有很强的抗张力,抗潮湿和耐碱性。5、研究结果显示,在力学性质方面,马歇尔稳定值、间接张力强度及直接剪力强度等皆随炼钢炉碴含量增加而提升。点此查看更多关于张力的详细信息2023-06-28 19:16:221
张力的含义?
张力是什么意思 物理上 张力,物理名词的一种,指的是分子间的引力, 基本解释 2. 引起伸长的两个平衡力之一3. 弹性物体拉长时产生的应力 4.小提琴弦的张力 详细解释 物体受到拉力作用时,存在于其内部而垂直于两邻部分接触面上的相互牵引力。 徐迟 《地质之光》:“所谓受了歪曲的 亚洲 大陆,他写道,难道指的只是自然界的各种应力--压力、张力、扭力造成 亚洲 大陆的各种形变,仅仅指此而言的呢?还是为了指责 欧 美 地质人员,因为他们用狭隘眼光来解释 亚洲 的造山运动,从而使 亚洲 枉受了许多的歪曲和冤屈呢?” 物理名词 受到拉力作用时,物体内部任一截面两侧存在的相互牵引力。 请一定要注意张力和液体表面张力并非同一概念。‘水的表面张力"是分子间的引力,这个引力试图使液体的表面积保持最小,而所有形状中,只有球形的表面积最小。所以,失重状态下的液体呈球形。 如你所说:地壳运动产生压力和张力,压力常见于汇聚型板块,如:印度洋板块(前端带着印度大陆)与欧亚板块间的碰撞。张力常见于分离型板块,如海底扩张、红海裂谷、东非大裂谷等。在地壳运动中压力和张力是相辅相成的。例如:内陆很多断裂带的产生并不是分离型板块的张力所致,而恰恰是汇聚型板块,如大洋板块俯冲到大陆板块之下产生的压力使陆块隆起,而隆起必然使薄弱环节产生张裂。如成都平原向青藏高原过度带,地壳从平均35千米向65千米过度(在材料力学上叫应力集中点)的龙门山断裂带。 文学上 文学张力界定为:在整个文学活动过程中,在各种对立的文学元素构成的统一体中,各方并不消除对立关系,而是互相比较、衬映、抗衡、冲击,使读者的思维不断在各极中往返、游移,在多重观念的影响下产生的立体感受。它具有四个特征:多义性,情感的饱绽,包孕矛盾对立,弯弓待发的运动感。分别从比喻、悖论、语法判逆和意、意境、叙事、角色等方面阐释张力的产生。文学张力中的美是一种“坚奥的美”,经历了惊讶-压抑、涵咏-释放两个阶段后,指向审美超越。优秀的文本建立在恰当的张力度的基础之上,使文本的量和由文本激发的读者审美感受量都指向最大化。 张力是什么意思 语言的张力。我觉得就是不断寻求语言可能性的冒险。一种创造性的体现。比如你听到的一些诗意的歌词。那就是一种体现。或者一些看不太懂的现代诗中,语言文字都是极具张力的。哈哈。 简单的解释什么叫做张力? 张力,顾名思义为紧张状态下引起的力。一根绳子绷紧,就呈紧张状态,这时在绳子的内部会产生张力,它用于使绳子收缩以抵抗外部的拉开。 要更好地理解这个概念,不妨看看绳子的端点,在端点绳子受到一个向外拉扯的力,但绳子并没有被拉动厂这时我们就说一定是绳子产生了一个等大反向的力抵消了这个拉力的作用,而这个抵抗力就是绳端这一个质点(不妨称之为端质点)旁边那个质点(不妨称之为邻质点)施加到端质点上的,这个力就是所谓的张力,依据牛顿第三定律,既然邻质点对端质点施加了力,那么端质点也一定对邻质点施加了等大反向的力,这样一对力,也叫张力。一条绳子内部的张力,就是这样一对一对张力互相牵扯著的——如果绳子的质量可以忽略不计,那么每一对张力的大小都是相等的,这时我们就说绳子把一端的力等大地传递到另一端,比如定滑轮就是这样用的 张力:受到拉力作用时,物体内部任一截面两侧存在的相互牵引力。 张力和拉力的不同在于物体是主动还是被动 一个物体,例如弹簧,在受压缩的时候,它自己会有张开的趋势,就叫做张力,张开的力大,就说明该物体的张力大,反之亦然; 对于拉力,物体是受力者,比如你用手拉橡皮筋,力的大小就是拉力的大小。 总之,张力,物体是施力者;拉力,物体是受力者 ufeff2023-06-28 19:16:281
三螺旋,四螺旋DNA有什么差距
呵呵,我就简单给你解释下,你问的东西,是大学的课本内容喽。(注:以下均为个人归纳)1、DNA的三螺旋和四螺旋,是分别只DNA有3条和4条核苷酸链组成。也就是说DNA按核苷酸链数可分:单链,双链,三链,四链。(均是由同样4种脱氧核苷酸形成)单链DNA不用碱基配对;双链DNA碱基配对你是知道的;三链DNA是3条核苷酸链彼此互相碱基相连,从横截面上看,像三角形的3个顶点;四链DNA也就是4条核苷酸链由碱基相连,截面是矩形的4个顶点。三链和四链的碱基氢键形成原理远超出你的知识范围,就不解释了;并且这两种情况很少见的,你可以忽略,仅作了解。2、超螺旋DNA是指,线性DNA经过多次缠绕浓缩,形成的浓缩体。(你可以想象下,就像多次扭麻花的)而至于为何是叫“超螺旋”,你只要记住这个名词就OK,因为这个涉及到DNA“缠绕浓缩”的具体过程:是通过酶往DNA中引入负超螺旋形成的。超螺旋DNA只是DNA的一种存在形式,并无分类。倒是,我们一般会把DNA分为:超螺旋DNA、开环DNA(开环DNA是指双链只断裂一条链的环状双链DNA)、单链DNA。3、双螺旋结构中,每圈螺旋,在一条链上有10个碱基。双链上共有20个碱基。4、不是碱基控制DNA的旋转,DNA更不是旋转的,DNA的螺旋构象是决定于它的环境和分子间作用力。在通常情况下,是双螺旋的。在特殊情况下,不是螺旋状(有“之”字状的)。上面的回答,我是以你是高中生基础解释的。如果你有更多的知识基础,或还有疑问,请发追问。2023-06-28 19:04:111
如何克隆一个基因?具体说明
(一)DNA复制的引发 复制的引发阶段包括DNA复制起点双链解开,通过转录激活步骤合成RNA分子,RNA引物的合成,DNA聚合酶将第一个脱氧核苷酸加到引物RNA的3"-OH末端复制引发的关键步骤就是前导链DNA的合成,一旦前导链DNA的聚合作用开始,滞后链上的DNA合成也随着开始,在所有前导链开始聚合之前有一必需的步骤就是由RNA聚合酶(不是引物酶)沿滞后链模板转录一短的RNA分子。在有些DNA复制中,(如质粒ColE),该RNA分子经过加式成为DNA复制的引物。但是,在大部分DNA复制中,该RNA分子没有引物作用。它的作用似乎只是分开两条DNA链,暴露出某些特定序列以便引发体与之结合,在前导链模板DNA上开始合成RNA引物,这个过程称为转录激活,在前导链的复制引发过程中还需要其他一些蛋白质,如大肠杆菌的dnaA蛋白。这两种蛋白质可以和复制起点处DNA上高度保守的4个9bp长的序列结合,其具体功能尚不清楚。可能是这些蛋白质与DNA复制起点结合后能促进DNA聚合酶Ⅲ复合体的七种蛋白质在复制起点处装配成有功能的全酶。DNA复制开始时,DNA螺旋酶首先在复制起点处将双链DNA解开,通过转录激活合成的RNA分子也起分离两条DNA链的作用,然后单链DNA结合蛋白质结合在被解开的链上。由复制因子X(n蛋白),复制因子Y(n"蛋白),n"蛋白,i蛋白,dnaB蛋白和dnaC蛋白等6种蛋白质组成的引发前体(preprimosome),在单链DNA结合蛋白的作用下与单链DNA结合生成中间物,这是一种前引发过程。引发前体进一步与引物酶(primase)组装成引发体(primosome)。引发体可以在单链DNA上移动,在dnaB亚基的作用下识别DNA复制起点位置。首先在前导链上由引物酶催化合成一段RNA引物,然后,引发体在滞后链上沿5"→3"方向不停的移动(这是一种相对移动,也可能是滞后链模板在移动,见后),在一定距离上反复合成RNA引物供DNA聚合酶Ⅲ合成冈崎片段使用,引发体中许多蛋白因子的功能尚不清楚。但是,这些成份必须协同工作才能使引发体在滞后链上移动,识别合适的引物合成位置,并将核苷酸在引发位置上聚合成RNA引物。由于引发体在滞后链模板上的移动方向与其合成引物的方向相反,所以在滞后链上所合成的RNA引物非常短,一般只有3-5个核苷酸长。而且,在同一种生物体细胞中这些引物都具有相似的序列,表明引物酶要在DNA滞后链模板上比较特定的位置(序列)上才能合成RNA引物。 为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢?这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关。DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA复制的准确性。RNA引物形成后,由DNA聚合酶Ⅲ催化将第一个脱氧核苷酸按碱基互补原则加在RNA引物3"-OH端而进入DNA链的延伸阶段。(二)DNA链的延伸 DNA新生链的合成由DNA聚合酶Ⅲ所催化,然而,DNA必须由螺旋酶在复制叉处边移动边解开双链。这样就产生了一种拓扑学上的问题:由于DNA的解链,在DNA双链区势必产生正超螺旋,在环状DNA中更为明显,当达到一定程度后就会造成复制叉难再继续前进,从而终止DNA复制。但是,在细胞内DNA复制不会因出现拓扑学问题而停止。有两种机制可以防止这种现象发生:[1]DNA在生物细胞中本身就是超螺旋,当DNA解链而产生正超螺旋时,可以被原来存在的负超螺旋所中和;[2]DNA拓扑异构酶Ⅰ要以打开一条链,使正超螺旋状态转变成松弛状态,而DNA拓扑异构酶Ⅱ(旋转酶)可以在DNA解链前方不停地继续将负超螺旋引入双链DNA。这两种机制保证了无论是环状DNA还是开环DNA的复制顺利的解链,再由DNA聚合酶Ⅲ合成新的DNA链。前已述及DNA生长链的延伸主要由DNA聚合酶催化,该酶是由7种蛋白质(多肽)组成的聚合体,称为全酶。全酶中所有亚基对完成DNA复制都是必需的。α亚基具有聚合功能和5"→3"外切酶活性,ε亚基具有3"→5"外切酶活性。另外,全酶中还有ATP分子它是DNA聚合酶Ⅲ催化第一个脱氧核糖核苷酸连接在RNA引物上所必需的,其他亚基的功能尚不清楚。 在DNA复制叉处要能由两套DNA聚合酶Ⅲ在同一时间分别进行复制DNA前导链和滞后链。如果滞后链模板环绕DNA聚合酶Ⅲ全酶,并通过DNA聚合酶Ⅲ,然后再折向与未解链的双链DNA在同一方向上,则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向上进行。 这样,当DNA聚合酶Ⅲ沿着滞后链模板移动时,由特异的引物酶催化合成的RNA引物即可以由DNA聚合酶Ⅲ所延伸。当合成的DNA链到达前一次合成的冈崎片段的位置时,滞后链模板及刚合成的冈崎片断便从DNA聚合酶Ⅲ上释放出来。这时,由于复制叉继续向前运动,便产生了又一段单链的滞后链模板,它重新环绕DNA聚合酶Ⅲ全酶,并通过DNA聚合酶Ⅲ开始合成新的滞后链冈崎片段。通过这样的机制,前导链的合成不会超过滞后链太多(最后只有一个冈崎片段的长度)。而且,这样引发体在DNA链上和DNA聚合酶Ⅲ以同一速度移动。 按上述DNA复制的机制,在复制叉附近,形成了以两套DNA聚合酶Ⅲ全酶分子、引发体和螺旋构成的类似核糖体大小的复合体,称为DNA复制体。复制体在DNA前导链模板和滞后链模板上移动时便合成了连续的DNA前导链和由许多冈崎片段组成的滞后链。在DNA合成延伸过程中主要是DNA聚合酶Ⅲ的作用。当冈崎片段形成后,DNA聚合酶Ⅰ通过其5"→3"外切酶活性切除冈崎片段上的RNA引物,同时,利用后一个冈崎片段作为引物由5"→3"合成DNA。最后两个冈崎片段由DNA连接酶将其接起来,形成完整的DNA滞后链。(三)DNA复制的终止 过去认为,DNA一旦复制开始,就会将该DNA分子全部复制完毕,才终止其DNA复制。但最近的实验表明,在DNA上也存在着复制终止位点,DNA复制将在复制终止位点处终止,并不一定等全部DNA合成完毕。但目前对复制终止位点的结构和功能了解甚少在NDA复制终止阶段令人困惑的一个问题是,线性DNA分子两端是如何完成其复制的?已知DNA复制都要有RNA引物参与。当RNA引物被切除后,中间所遗留的间隙由DNA聚合Ⅰ所填充。但是,在线性分子的两端以5"→3"为模板的滞后链的合成,其末端的RNA引物被切除后是无法被DNA聚合酶所填充的。 在研究T7DNA复制时,这个问题部分地得到了解决。T7DNA两端的DNA序列区有160bp长的序列完全相同。而且,在T7DNA复制时,产生的子代DNA分子不是一个单位T7DNA长度,而是许多单位长度的T7DNA首尾连接在一起。T7DNA两个子代DNA分子都会有一个3"端单链尾巴,两个子代DNA的3"端尾巴以互补结合形成两个单位T7DNA的线性连接。然后由DNA聚合酶Ⅰ填充和DNA连接酶连接后,继续复制便形成四个单位长度的T7DNA分子。这样复制下去,便可形成多个单位长度的T7DNA分子。这样的T7DNA分子可以被特异的内切酶切开,用DNA聚合酶填充与亲代DNA完全一样的双链T7DNA分子。 在研究痘病毒复制时,发现了线性DNA分子完成末端复制的第二种方式。痘病毒DNA在两端都形成发夹环状结构。DNA复制时,在线性分子中间的一个复制起点开始,双向进行,将发夹环状结构变成双链环状DNA。然后,在发夹的中央将不同DNA链切开,使DNA分子变性,双链分开。这样,在每个分子两端形成一个单链尾端要以自我互补,形成完整的发夹结构,与亲代DNA分子一样。在真核生物染色体线性DNA分子复制时,尚不清楚末端的复制过程是怎样进行的。也可能像痘病毒那样形成发夹结构而进行复制。但最近的实验表明,真核生物染色体末端DNA复制是由一种特殊的酶将一个新的末端DNA序列加在刚刚完成复制的DNA末端。这种机制首先在四膜虫中发现。该生物细胞的线性DNA分子末端有30-70拷贝的5"TTGGGG3"序列,该细胞中存在一种酶可以将TTGGGG序列加在事先已存在的单键DNA末端的TTGGGG序列上。这样有较长的末端单链DNA,可以被引物酶重新引发或其他的酶蛋白引发而合成RNA引物,并由DNA聚合酶将其变成双链DNA。这样就可以避免其DNA随着复制的不断进行而逐渐变短。 在环状DNA的复制的末端终止阶段则不存在上述问题。环状DNA复制到最后,由DNA拓扑异构酶Ⅱ切开双链DNA,将两个DNA分子分开成为两个完整的与亲代DNA分子一样的子代DNA2023-06-28 19:04:031
真核生物复制起点的结构特征
一般把生物体的复制单位称为复制子(replicon)。一个复制子只含一个复制起点。多复制子:DNA复制时,原核生物一般只有一个起始位点,而真核生物则有多个起始位点,因而在复制时呈现多复制泡,也称为多复制子。 DNA的复制主要是从固定的起始点以双向等速复制方式进行的(图2-18)。复制叉以DNA分子上某一特定顺序为起点,向两个方向等速生长前进。拓扑异构酶I 拓扑异构酶I解开负超螺旋,并与解链酶共同作用,在复制起点处解开双链。参与解链的除一组解链酶外,还有Dna蛋白等。DNA解链酶(DNA helicase) DNA解链酶能通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。单链结合蛋白(SSB蛋白 ) SSB蛋白的作用是保证被解链酶解开的单链在复制完成前能保持单链结构,它以四聚体形式存在于复制叉处,待单链复制后才掉下,重新循环。所以,SSB蛋白只保持单链的存在,并不能起解链的作用。3、DNA的半不连续复制 与冈崎片段DNA复制时,短时间内合成的约1000个核苷酸左右的小片段,称之为冈崎片段(Okazaki fragment)DNA复制过程中至少有一条链首先合成较短的片段,然后再由连接酶连成大分子DNA。现在已知一般原核生物的冈崎片段要长些,真核生物中的要短些。进一步研究还证明,这种前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的,因而称之为双螺旋的半不连续复制。DNA链的延伸:DNA复制体(replisome):在复制叉附近,形成了以两套DNA聚合酶Ⅲ全酶分子、引发体和解链酶构成的类似核糖体大小的复合体,称为DNA复制体。4、滞后链的引发 DNA复制时,往往先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段RNA引物,再由DNA聚合酶从RNA引物3" 端开始合成新的DNA链。滞后链的引发过程往往由引发体(primosome)来完成。引发体由6种蛋白质n、n"、n""、Dna B、C和I共同组成,只有当引发前体(preprimosome)把这6种蛋白质合在一起并与引发酶(primase)进一步组装后形成引发体,才能发挥其功效。5、链的终止 当复制叉前移,遇到20bp重复性终止子序列(Ter)时,Ter-Tus复合物能阻挡复制叉的继续前移,等到相反方向的复制叉到达后在DNA拓扑异构酶IV的作用下使复制叉解体,释放子链DNA。6、复制的几种方式(1)环状DNA双链的复制 环状双链DNA的复制可分为θ型、滚环型和D-环型几种类型。(a) θ型 复制的起始点涉及到DNA双链的解旋和松开,形成两个方向相反的复制叉 。前导链DNA开始复制前,复制原点的核酸序列被转录生成短RNA链,作为起始DNA复制的引物。(b) 滚环型(rolling circle) 这是单向复制的特殊方式。如ΦX174的双链环状DNA复制型(RF)就是以这种方式复制的。DNA的合成由对正链原点的专一性切割开始,所形成的自由5‘ 端被从双链环中置换出来并为单链DNA结合蛋白所覆盖,使其3"—OH端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。在这个过程中,单链尾巴的延伸与双链DNA的绕轴旋转同步 。(c) D-环型(D-loop) 这也是一种单向复制的特殊方式。这种方式首先在动物线粒体DNA的复制中被发现。双链环在固定点解开进行复制。但两条链的合成是高度不对称的,一条链上迅速合成出互补链,另一条链则成为游离的单链环(即D-环)。(2)线性DNA双链的复制 线性DNA复制中RNA引物被切除后,留下5"端部分单链DNA,不能为DNA聚合酶所作用,使子链短于母链。T4和T7噬菌体DNA通过其末端的简并性使不同链的3"端因互补而结合,其缺口被聚合酶作用填满,再经DNA连接酶作用生成二联体。这个过程可重复进行直到生成原长20多倍的多联体,并由噬菌体DNA编码的核酸酶特异切割形成单位长度的DNA分子。二、原核和真核生物DNA的复制特点1、原核生物DNA的复制特点大肠杆菌DNA聚合酶I、II和III的性质比较原核生物的DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅰ:有3"→5"外切酶活性和5"→3"外切酶活性。保证DNA复制的准确性。DNA聚合酶Ⅱ :活性低,其3"→5"核酸外切酶活性可起校正作用。主要起修复DNA的作用。DNA聚合酶Ⅲ:7种亚单位9个亚基。只具3"→5"外切酶活性,主导聚合酶。Klenow fragment:用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶,获得两个片段,大片段分子量76000U,称为Klenow 片段。它保留着聚合酶和3"→5"外切酶的活性,广泛使用于DNA序列分析中。三、真核生物DNA的复制特点真核生物DNA复制的起始需要起始原点识别复合物(ORC)参与。真核生物DNA复制叉的移动速度大约只有50bp/秒,还不到大肠杆菌的1/20。真核生物的染色体在全部完成复制之前,各个起始点上DNA的复制不能再开始。2023-06-28 19:03:532