蛋白质抑制基因表达，luciferase结果是什么样

RNAi (RNA interference) 即RNA干涉，是近年来发现的在生物体内普遍存在的一种古老的生物学现象,是由双链RNA（dsRNA）介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi 广泛存在于从真菌到高等植物、从无脊椎动物到哺乳动物各种生物中。同时作为一项新兴生物技术，RNAi有着广泛的应用前景。本文主要论述了RNAi的发现、RNAi 的机理、RNAi的作用特点以及RNAi 的应用前景。1.RNAi的定义目前对RNAi (RNA interference)的定义有很多种，不同的资料对其定义的侧重点也不尽相同，如果将RNAi看作一种生物学现象，可以有以下定义：① RNAi是由dsRNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。② RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列特异性的自我防御机制，是一种当外源基因导入或病毒入侵后，细胞中与转基因或入侵病毒RNA同源的基因发生共同基因沉默的现象。如果将其作为一门生物技术，则定义为：① RNAi 是指通过反义RNA与正链RNA 形成双链RNA 特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA 和反义RNA) ,从而诱导内源靶基因的mRNA 降解,达到阻止基因表达的目的。② RNAi是指体外人工合成的或体内的双链RNA（dsRNA）在细胞内特异性的将与之同源的 mRNA降解成21nt～23nt 的小片段，使相应的基因沉默。③ RNAi是将与靶基因的mRNA 同源互补的双链RNA(dsRNA ) 导入细胞,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失, 属于转录后水平的基因沉默(post - transcriptional gene silence , PTGS)。各种不同定义虽然说法不同，但所描述事实是大体相同的，简单地可以说，RNAi就是指由RNA介导的基因沉默现象。

RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理转录抑制 与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。转录后抑制不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。翻译抑制 Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。

写作素材翻译整理收集 May 20, 2002 转录后基因沉默（PTGS）最初被认为是一种仅限于矮牵牛和其他几种植物的奇异现象，现在已成为分子生物学中最热门的话题之一。 近几年已经清楚的是，PTGS在植物和动物中都存在，并且在病毒防御和转座子沉默机制中起作用。 然而，也许最令人兴奋的是PTGS的新兴应用，尤其是RNA干扰（RNAi）——通过引入双链RNA（dsRNA）引发的PTGS-作为敲除多种特定基因表达的工具生物。 RNAi是如何发现的？它是如何工作的？也许更重要的是，如何将其用于功能基因组学实验？本文将简要回答这些问题，并为您提供有关PTGS和RNAi研究的深入信息。 发现一个奇怪的现象：植物共抑制和PTGS 十多年前，在矮牵牛中进行了令人惊讶的观察。在尝试加深这些花的紫色时，Rich Jorgensen及其同事在强大的启动子控制下引入了色素生成基因。与其预期的深紫色不同，许多花朵似乎杂色甚至是白色。乔根森称观察到的现象为“共抑制/cosuppression”，因为导入基因和同源内源基因的表达均被抑制。 最初被认为是矮牵牛的怪癖，后来发现共抑制在许多植物物种中都发生。还已经在真菌中观察到了它，并且在克雷索氏菌中被特别好地表征，在那儿它被称为“抑制/quelling”。 但是什么原因导致这种基因沉默呢？尽管在某些植物中转基因诱导的沉默似乎涉及基因特异性甲基化（转录基因沉默或TGS），但在另一些植物中，沉默发生在转录后水平（转录后基因沉默或PTGS）。在后一种情况下的核运行实验表明，产生了同源转录本，但是它在细胞质中迅速降解并且没有积累。 转基因的引入可以触发PTGS，但是也可以通过引入某些病毒来诱导沉默。触发后，PTGS由可扩散的反式作用分子介导。这首先在Neurospora中得到证实，当时Cogoni及其同事证明了基因沉默可以在异核生物株的核之间转移。后来在Palauqui及其同事通过将沉默的，含转基因的来源植物嫁接到未沉默的宿主中而在宿主植物中诱导PTGS时在植物中得到证实。从线虫和苍蝇的工作中，我们现在知道负责植物中PTGS的反式作用因子是dsRNA。 dsRNA基因沉默：RNA干扰 RNAi在线虫中被发现 dsRNA可能导致基因沉默的第一个证据来自线虫秀丽隐杆线虫的工作。七年前，研究人员Guo和Kemphues试图使用反义RNA来关闭par-1基因的表达，以评估其功能。正如预期的那样，反义RNA的注入破坏了par-1的表达，但令人困惑的是，正义链控制的注入也确实如此。 直到三年后，这个结果还是一个谜。然后，Fire和Mello首先将dsRNA（正义链和反义链的混合物）注入到秀丽隐杆线虫中。与仅注射有义或反义链相比，这种注射导致沉默效率更高。实际上，每个细胞仅注射几个分子的dsRNA就足以完全沉默同源基因的表达。此外，将dsRNA注入蠕虫的肠道不仅导致整个蠕虫的基因沉默，而且还导致其第一代后代的基因沉默。 RNAi的效力激发了Fire和Timmons尝试喂养线虫细菌，这种细菌经过改造后可以表达与秀丽隐杆线虫unc-22基因同源的dsRNA。令人惊讶的是，这些蠕虫形成了unc-22 null-like表型。进一步的研究表明，将蠕虫浸入dsRNA中也能够诱导沉默。这些策略使大量线虫暴露于dsRNA，从而使大规模筛选能够选择RNAi缺陷的秀丽隐杆线虫突变体，并导致对该生物体内的大量基因敲除研究。 果蝇中的RNAi 在果蝇中也观察到了RNAi。尽管将酵母工程化以产生dsRNA然后喂给果蝇的策略无法奏效，但用dsRNA显微注射果蝇胚胎确实会产生沉默（2）。也可以通过用“基因枪”将dsRNA“射击”到果蝇胚胎中，或通过工程蝇携带带有待沉默基因的反向重复序列的DNA来诱导沉默。在过去的几年中，这些RNAi策略已被用作果蝇生物，胚胎裂解液和细胞中的逆向遗传学工具，以表征各种功能丧失的表型。 RNAi的生化机制 那么注射dsRNA如何导致基因沉默呢？在过去的几年中，许多研究小组都在努力地回答这一重要问题。鲍尔科姆和汉密尔顿的一项重要发现提供了第一个线索。他们鉴定出在非沉默植物中共抑制的植物中约25个核苷酸的RNA。这些RNA与被沉默基因的有义和反义链都是互补的。 在果蝇中的进一步工作-使用胚胎裂解液和源自S2细胞的体外系统-为受试者提供了更多的信息。在一系列值得注意的实验中，Zamore及其同事发现，添加到果蝇胚胎裂解物中的dsRNA被加工成21-23个核苷酸。他们还发现，同源内源性mRNA仅在与导入的dsRNA相对应的区域被切割，并且切割以21-23个核苷酸的间隔发生。迅速地，RNAi的机制变得清晰起来。 RNAi机制的当前模型 生化和遗传方法（请参阅下面的“ PTGS和RNAi涉及的基因和酶”中有关用于理解RNAi的遗传方法的讨论）都形成了RNAi机制的当前模型。在这些模型中，RNAi包括启动步骤和效应器步骤（另请参见参考文献3的Flash动画“ RNAi如何工作？”）。 在起始步骤中，将输入的dsRNA消化成21-23个核苷酸的小干扰RNA（siRNA），也称为“引导RNA”。有证据表明，dscer酶是dsRNA特异性核糖核酸酶RNase III家族的一员，Dicer酶以ATP依赖性，加工方式连续切割dsRNA（直接或通过转基因或病毒引入）。连续的切割事件将RNA降解为19-21 bp的双链体（siRNA），每个双链体都带有2个核苷酸的3"突出端。 在效应子步骤中，siRNA双链体与核酸酶复合物结合形成所谓的RNA诱导的沉默复合物或RISC。激活RISC时，需要依赖ATP的siRNA双链体展开。然后，活性RISC通过碱基配对相互作用靶向同源转录本，并从siRNA的3"末端切割u301c12个核苷酸的mRNA。尽管目前尚不清楚切割的机理，但研究表明，每个RISC都包含单个siRNA和一个与Dicer不同的RNase。 由于RNAi在某些生物体中的显着效力，因此还提出了RNAi途径内的扩增步骤。扩增可通过复制输入的dsRNA（可产生更多的siRNA）或通过siRNA自身的复制来进行（请参见下面的“ RNA依赖性RNA聚合酶的可能作用”）。替代地或另外，可以通过RISC的多个周转事件来实现扩增。 PTGS和RNAi涉及的基因和酶 RNA依赖的RNA聚合酶的可能作用 Neurospora，秀丽隐杆线虫和拟南芥的遗传筛选已鉴定出一些基因，这些基因似乎对PTGS和RNAi至关重要。其中一些，包括Neurospora qde-1，拟南芥SDE-1 / SGS-2和秀丽隐杆线虫ego-1，似乎编码RNA依赖性RNA聚合酶（RdRPs）。乍一看，可以假设这证明RNAi需要RdRP活性。如果RdRP在切割前直接扩增dsRNA或直接扩增siRNA，RdRP的存在当然可以解释dsRNA诱导的沉默的显着效率。但是这些基因的突变体具有不同的表型，这使得RdRP在RNAi中的作用难以辨别。 在秀丽隐杆线虫ego-1突变体（“ ego”代表“ glp-1增强剂”）中，RNAi在体细胞中正常运行，但在主要表达ego-1的种系细胞中有缺陷。在拟南芥SDE-1 / SGS-2突变体中（“ SGS”代表基因沉默的抑制物），当通过内源复制的RNA病毒引入dsRNA时，会产生siRNA，而通过转基因引入时则不会产生siRNA。已经提出在这些突变体中病毒RdRP可能替代了拟南芥酶。尽管在果蝇或人类中均未发现RdRP的同源物，但最近在果蝇胚胎裂解液中报道了RdRP的活性。一种称为“随机降解PCR”模型的扩增模型表明，RdRP使用siRNA的导链作为目标mRNA的引物，从而为Dicer生成了dsRNA底物，从而产生了更多的siRNA。在蠕虫中发现了支持该模型的证据，而从果蝇胚胎裂解物中获得了反驳该模型的实验结果。 RNAi引发剂 两种秀丽隐杆线虫基因rde-1和rde-4（“ rde”代表“ RNAi缺陷”）被认为与RNAi的起始步骤有关。这些基因的突变体产生的动物通过注射dsRNA可以抵抗沉默，但是沉默可以通过从没有沉默缺陷的杂合子亲本中传递siRNA来实现。秀丽隐杆线虫的rde-1基因是一个大家族基因的成员，与Neurospora qde-2（“ qde”代表“抑制缺乏”）和拟南芥AGO1基因（“ AGO”代表“ argonaute”）同源。 ”；以前已确定AGO1与拟南芥的发育有关。尽管这些基因在PTGS中的功能尚不清楚，但已将RDE-1家族的哺乳动物成员鉴定为翻译起始因子。有趣的是，对共抑制有缺陷的AGO1拟南芥突变体在叶片发育中也表现出缺陷。因此，PTGS中涉及的某些过程或酶也可能参与发育。 RNAi效应子 PTGS的效应子步骤的重要基因包括秀丽隐杆线虫rde-2和mut-7基因。这些基因最初是从不能将RNAi传递给其纯合后代的杂合突变蠕虫中鉴定出来的。带有突变的rde-2或mut-7基因的蠕虫表现出有缺陷的RNAi，但是有趣的是，它们还证明了转座子活性水平的提高。因此，转座子的沉默似乎是通过与RNAi和PTGS相关的机制发生的。尽管尚未鉴定出rde-2基因产物，但mut-7基因编码的蛋白与RNase D的核酸酶结构域具有同源性，并且与人的Werner综合征（一种快速衰老疾病）有关（。也许这种蛋白质是目标RNA降解所需的核酸酶活性的候选者。 PTGS具有悠久的历史 遗传和生物化学方法的发现都表明PTGS具有深厚的进化根源。有人提出，PTGS可能是抵御转座子或RNA病毒的防御机制，也许是在动植物分化之前发展的。 有趣的是，许多研究人员指出，RNAi所需基因的破坏通常会导致严重的发育缺陷。该观察结果提示RNAi与至少一个发育途径之间存在联系。 一组称为小时序RNA（stRNA）的小RNA分子通过翻译靶标转录物来调控秀丽隐杆线虫的发育时间。研究表明，将秀丽隐杆线虫lin-4和let-7 stRNA从这些较长的转录本折叠成茎环结构后，由70个核苷酸的转录本生成。折叠的RNA分子被切酶切割（产生秀丽隐杆线虫中的DCR-1），以产生22 nt stRNA。因此，Dicer既生成siRNA，也生成stRNA，并代表RNAi和stRNA途径的交点。 最近，在果蝇，秀丽隐杆线虫和HeLa细胞中发现了近100个另外的u301c22 nt RNA分子，称为microRNA（miRNA）。这些miRNA与lin-4和let-7非常相似，它们是由折叠成茎环二级结构的前体RNA分子形成的。据信，新发现的约22 nt的miRNA在调节基因表达中起作用，并且已知其中至少有两个需要Dicer来生产。似乎在整个进化过程中，将小RNA用于基因调控和RNAi是一个共同的主题。 在哺乳动物细胞中诱导RNAi-从机理到应用 长dsRNA导致的非特异性基因沉默 尽管已经在多种生物（植物，原生动物，昆虫和线虫）中观察到了RNAi的天然存在，但哺乳动物细胞中存在RNAi的证据需要花费更长的时间才能建立。将长dsRNA分子（> 30 nt）转染到大多数哺乳动物细胞中会导致基因表达的非特异性抑制，这与其他生物体中看到的基因特异性抑制相反。这种抑制作用归因于抗病毒反应，它通过两种途径之一发生。 在一种途径中，长dsRNA激活蛋白激酶PKR。活化的PKR进而磷酸化并使翻译起始因子eIF2a失活，从而导致翻译受阻。在另一种途径中，长dsRNA激活RNase L，导致非特异性RNA降解。 许多研究小组表明，小鼠胚胎干（ES）细胞和至少一种胚胎来源的细胞系不存在dsRNA诱导的抗病毒反应。因此，可以使用长dsRNA沉默这些特定哺乳动物细胞中的特定基因。但是，抗病毒反应无法在大多数其他哺乳动物细胞类型中使用长dsRNA诱导RNAi。 siRNA绕过抗病毒反应 有趣的是，长度小于30 nt的dsRNA不会激活PKR激酶途径。这一观察结果以及对长dsRNA会在蠕虫和果蝇中裂解形成siRNA以及siRNA能够在果蝇胚胎裂解液中诱导RNAi的认识促使研究人员测试引入siRNA是否会在哺乳动物细胞中诱导基因特异性沉默。实际上，发现通过瞬时转染引入的siRNA以序列特异性方式有效地诱导了哺乳动物培养细胞中的RNAi。 siRNA的有效性各不相同-最有效的siRNA可使靶RNA和蛋白质水平降低> 90％。事实证明，最有效的siRNA是21 nt dsRNA，带有2 nt 3"突出端。 siRNA的序列特异性非常严格，因为siRNA及其靶mRNA之间的单碱基对错配会显着降低沉默。不幸的是，并非所有具有这些特征的siRNA都是有效的。其原因尚不清楚，但可能是位置效应的结果。有关设计siRNA的最新建议，请参见“ siRNA设计”。 RNAi作为功能基因组学的工具 尽管RNAi和PTGS的历史和机理令人着迷，但许多研究人员对RNAi作为功能基因组学工具的潜在用途感到最为兴奋。 RNAi已经被用于确定果蝇，秀丽隐杆线虫和几种植物中许多基因的功能。知道可以通过转染siRNA在哺乳动物细胞中诱导RNAi，因此许多研究人员开始将RNAi用作人类，小鼠和其他哺乳动物细胞培养系统的工具。 在哺乳动物细胞的早期实验中，siRNA是化学合成的（Ambion是提供定制siRNA合成的多家公司之一）。最近，Ambion推出了一种通过体外转录生产siRNA的试剂盒（Silenceru2122siRNA构建试剂盒），这是化学合成的廉价替代品，特别是在需要合成多种不同siRNA的情况下。制备完成后，可通过瞬时转染将siRNA引入细胞。由于功效的差异，大多数研究人员会将3–4个siRNA合成为靶基因，并进行先导实验以确定最有效的一种。用这种方法已经观察到超过90％的瞬态沉默。 到目前为止，将dsRNA注射并转染到细胞和生物中已经成为传递siRNA的主要方法。尽管沉默效果持续了几天，而且似乎确实转移到了子细胞上，但最终确实减弱了。但是，最近，许多研究小组已经开发出表达载体，以在瞬时和稳定转染的哺乳动物细胞中连续表达siRNA。这些载体中的某些已被工程化以表达小发夹RNA（shRNA），该小发夹RNA在体内被加工成能够进行基因特异性沉默的siRNA样分子。载体包含在聚合酶III（pol III）启动子和4-5胸腺嘧啶核苷转录终止位点之间的shRNA序列。转录物终止于终止位点的第2位（pol III转录物自然缺少poly（A）尾巴），然后折叠成具有3"UU突出端的茎环结构。 shRNA的末端在体内进行加工，将shRNA转化为约21 nt siRNA样分子，从而启动RNAi。后一个发现与秀丽隐杆线虫，果蝇，植物和锥虫中的最新实验有关，其中折叠成茎环结构的RNA分子诱导了RNAi（在3中进行了综述）。 由另一个研究小组开发的另一种siRNA表达载体在独立的pol III启动子的控制下编码有义和反义siRNA链。该载体的siRNA链与其他载体的shRNA一样，具有5个胸苷终止信号。两种类型的表达载体的沉默功效均与瞬时转染siRNA所诱导的沉默功效相当。 最近有关RNAi的研究席卷了整个研究领域。快速，轻松地创建功能丧失表型的能力使研究人员急于尽可能多地了解RNAi和有效siRNA的特征。将来，RNAi甚至有望有望开发出基因特异性疗法。人们已经学到了很多有关这种强大技术的知识，但是几乎每天都可以获得其他信息（请参阅RNA干扰资源以了解最新的RNAi研究和工具）。可以肯定地说，RNAi正在改变功能基因组学领域。 专业术语 共抑制-由于引入转基因或被病毒感染而导致的内源基因沉默。这个术语可以指转录后（PTGS）或转录（TGS）级别的沉默，已被植物研究人员广泛采用。 转录后基因沉默（PTGS）-通过引入同源dsRNA，转基因或病毒引起的内源基因沉默。在PTGS中，沉默基因的转录物是合成的，但不会积累，因为它会迅速降解。这是一个比RNAi更通用的术语，因为它可以通过几种不同的方式触发。 抑制-引入转基因诱导的神经孢菌中的PTGS。 RISC-RNA诱导的沉默复合物。核酸酶复合物，由蛋白质和siRNA组成（见下文），靶向并破坏与复合物中siRNA互补的内源性mRNA。 RNA干扰（RNAi）-直接引入dsRNA诱导的转录后基因沉默（PTGS）。研究人员首先对秀丽隐杆线虫使用“ RNA干扰”一词。 siRNA-小干扰RNA。 PTGS的当前模型表明，这些21-23个核苷酸的dsRNA介导PTGS。 siRNA的引入可以在哺乳动物细胞中诱导PTGS。 siRNA显然是通过直接或通过转基因或病毒导入的dsRNA裂解体内产生的。 RNA依赖性RNA聚合酶（RdRP）的扩增可能发生在某些生物中。将siRNA掺入RNA诱导的沉默复合物（RISC）中，将复合物引导至同源内源性mRNA，其中复合物切割转录物。

RNA干扰及其应用进展孙德惠1,2,才学鹏1*,常惠芸1 ,独军政1 (1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;2.甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070)摘 要:RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象.RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点.RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究.文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源,可能的作用机制,作用特点,研究方法,应用前景及展望等方面进行了综述.关键词:RNA干扰;双链RNA;基因沉默RNAi是Napoli C D等[1]在试图向紫色矮牵牛花转导色素合成基因,用以增加其花色时发现的.结果出乎预料,转基因的植株不仅没有新基因的表达,反而自身的色素合成也减弱了,一些转基因的花出现了全白色或部分白色.他们把这种导入的基因未表达和植物本身合成色素基因的失活现象命名为共抑制(cosuppression).之后,Ramano等在向粗糙孢菌ue006(Neurospora crassa)ue006中导入合成胡萝卜素的基因时造成失活,他们称为基因静止(quelling).Guo S等[2]发现正义RNA与反义RNA有相同水平的抑制效应,但未能就此现象给出合理的解释.Fire A等[3]在研究反义核苷酸时发现在线虫体内,双链RNA( double stranded RNA,dsRNA)能有效地抑制有互补序列的内源性基因,且抑制效果优于单链反义RNA.至此,正式提出了双链RNA诱导的RNAi的概念,开启了RNAi研究的序幕.1 RNAi可能的作用机制及特点1.1 RNAi的作用机制虽然RNAi作用的确切机制尚不清楚,但目前普遍认可是Bass假说.具体概括为三个阶段.(1)起始阶段.在细胞内,双链RNA(dsRNA)由核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ) Dicer 在ATP的参与下被处理为21个～23个碱基的小RNA,即小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA).siRNA是由19个～21个碱基配对形成的双链,并在其3′末端有两个游离未配对的核苷酸.研究发现, siRNA 是RNAi 作用发生的重要中间分子,序列与所作用的靶mRNA 的序列具有高度同源性;双链的两端各有2个～3个突出的非配对的3′碱基;两条单链末端为5′端磷酸和3′端羟基.这些是细胞赖以区分真正的siRNA和其他双链RNA的结构基础. 研究表明,平末端的siRNA 或失去了5′磷酸基团的siRNA 不具有RNAi 的功能[4] (2)引发阶段.siRNA与Argonaute蛋白家族及其他未知因素结合,形成siRNA-核蛋白复合物(siRNA-ribonucleoprotein complex,siRNP).siRNP在ATP及其他未知因素参与下,使双链siRNA解旋形成RNA诱导的沉默复合物(RNA inducing silencing Complex ,RISC).RISC可能以完全单链或两条链解旋但不完全分离的形式存在,继而RISC在dsRNA的介导作用下与互补mRNA结合,并将其降解.mRNA被降解在转录后水平,抑制基因表达,因而又称之为转录后基因沉默( posttranscriptional gene silencing,PTGS)(3)循环放大阶段.在siRNA诱导的RNAi过程中,可能还存在siRNA 的循环放大过程,以维持它的RNA诱导功能.此过程推测是以siRNA为引物,互补mRNA 为模板,在RNA依赖性RNA合成酶(RNA-dependent RNA Polymerase,RdRP) 的作用下,合成新的双链RNA,再由Dicer作用,产生新的siRNA,完成siRNA 的放大过程,开始新的RNAi循环[5].关于对RNAi机制中重要酶的作用研究,Zamore P D等[6]发现,21 nt RNA指导mRNA的降解; Scharf W D等[7]发现ATP依赖的RNA解旋酶为Mut6;Grishok A等[8]发现Let-7和lin-4为内源性的RNAi基因(stRNA);Dalmay T等[9]提出RNA依赖的RNA多聚酶就是SDE-1; Bernstein E等[10]证实RNaseш样的核酸酶为Dicer; Elbashir S M等[11]应用外源性21 nt-siRNA能够抑制同源mRNA的表达;Novina C D等[12]证实无论是针对病毒感染细胞所需的CD4受体,还是针对病毒基因组的gag区域,siRNA都可以有效地使病毒与细胞的基因沉默,抑制HIV的感染与复制.1.2 RNAi的作用特点(1)"共抑制"性.RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默.(2)高效性.试验证明双链RNA干扰mRNA 翻译的效率比单纯反义或正义RNA 的抑制效率提高了几个数量级;RNAi可在低于反义核酸几个数量级的浓度下,使靶基因表达降到很低水平甚至完全"剔除",而产生缺失突变体表型.它比基因敲除技术更为便捷,科学家称RNAi技术为靶基因或靶蛋白的"剔降"(knockdown).(3)高特异性.由dsRNA降解成的小干扰RNA,除其正义链3′端的两个碱基在序列识别中不起主要作用外,其余碱基在序列识别中都是必需的,单个碱基的改变即可使RNAi失效,RNAi能特异性降解mRNA,针对同源基因共有序列的RNAi则可使同源基因全部失活.(4)高穿透性.RNAi具有很强的穿透能力,能在不同的细胞间长距离传递和维持,如在含有双链RNA的溶液中,喂食表达双链RNA的细菌等,能向秀丽隐杆线虫导入双链RNA.(5)"遗传性".已在线虫中观察到RNAi效应通过生殖系传递到后代,说明RNAi具有一定的可遗传性.(6)高稳定性.细胞中可能存在天然的稳定siRNA的机制.此机制可能是siRNA与某种保护性蛋白结合,从而使其具有相对的稳定性,这些双链RNA 不像反义核酸那样需要多种化学修饰来提高其半衰期.(7)双干扰系统.哺乳动物中存在有非特异性干扰和特异性干扰两条独立的途径. 非特异性干扰反应是由大于30个碱基对的双链RNA介导,导致整个细胞中非特异性蛋白合成抑制,RNA降解;特异性反应由21 bp～25 bp的小干扰RNA介导,可逃避非特异性干扰系统的"监控",只降解与其序列相应的单个基因的mRNA[11].2 研究方法在研究过程中,科研人员逐渐摸索总结出了成套的研究方法.目前,展开RNAi操作主要有两种方法.一种为直接将靶向特定基因的大约21个碱基长短siRNA,或45个~50个碱基的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)转染到细胞,shRNA在细胞中会自动被加工成siRNA,从而引发基因沉默或表达抑制.另一种为构建特定的siRNA表达载体,通过质粒在体内表达siRNA而引发基因沉默.此法的优点是排除了RNA酶干扰,延长siRNA半衰期.更重要的是,该法可以进行稳定表达细胞株的筛选,且随着质粒复制扩散到整个机体,基因抑制效果可传代.试验表明,可被化学合成或体外合成的siRNA抑制的基因同样可被表达相同序列的载体表达出的siRNA所抑制.3 RNAi的应用3.1 基因功能研究在神经生物学研究中,科学家们通过siRNA表达质粒对中脑腹侧神经细胞中的多巴胺能相关基因进行了有效抑制,还通过病毒介导的RNAi建立了此类成年小鼠模型,不仅为建立神经系统的功能缺失模型找到了一些有价值的表型标记,对神经系统的基因治疗也有一定借鉴意义;在癌症研究中,通过shRNA表达载体成功抑制成年大鼠脑癌基因,同时对RNAi的远程(穿过血脑屏障)基因沉默方法进行了非常有益的探索;利用细胞凋亡途径,通过RNAi抑制凋亡基因Caspase-8能提高患急性肝功能衰竭小鼠的成活率,并发现Caspase 8 siRNA处理对特异性Fas激活剂(Jo2和AdFasL)和野生型腺病毒介导的急性肝功能衰竭都有效,表明这个动物模型能反应人类急性病毒肝炎多分子参与的机制,增强了siRNA用于急性肝炎病人治疗的希望.除了对某些关键基因的RNAi研究外,还在哺乳动物细胞中探索了siRNA在基因组水平上的筛选方法.他们建立了一个包含8 000多个基因的siRNA表达框文库阵列,通过它来高通量筛选NF-kB信号途径中已知的及Unique基因.由此可见,RNA干扰也正作为筛选成百甚至上千基因的工具,发挥着越来越大的作用[13].RNAi为系统地抑制RNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径.通过在一段时间内对一个基因RNA信号的抑制,研究者可以深入研究基因功能,进而描绘支配从细胞形态到信号系统的遗传网络.3.2 基因治疗及药物筛选探索由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径.其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达.尤其针对引起一些对人类健康严重危害的病毒,如2003年在全球多个国家和地区流行的SARS,病原体是单链核酸的新型冠状病毒,寻找药物靶点,设计核酸药物就更为方便.目前已经有很多公司在积极开发这方面的药物,如在SARS药物研究中一鸣惊人的美国俄勒冈州的AVI BioPharma生物制药公司等.国内也有很多研究机构及生物技术公司投入了这方面的工作.如上海生科院成立了SARS防治科研攻关小组,其中生化细胞所和药物所的一些课题组在从RNAi的角度努力.此外,北京大学,中南大学,北京动物所等大专院校和研究机构,以及北京金赛狮反义核酸技术开发有限公司等,也开展了RNAi药物的研究与开发.基因治疗方面最引人注目的进展之一是对肝炎病毒的RNAi研究.Mccaffrey A P等通过表达shRNA的载体在细胞水平和转染HBV质粒后免疫活性缺失的小鼠肝脏中成功抑制了HBV复制.与对照相比,小鼠血清中测得的HBsAg下降了84.5%,免疫组化对HBcAg的分析结果下降率更超过99%.哈佛大学Lieberman研究小组通过注射针对Fas的siRNA,过度激活炎症反应,诱导小鼠肝细胞自身混乱.然后给测试小鼠注入 Fas hyperdrive的抗体,发现未进行siRNA处理的对照组小鼠在几天中死于急性肝功能衰竭,而82%的siRNA处理小鼠都存活下来,其中80%~90%的肝细胞结合了siRNA.并且,RNAi发挥功能达10 d,3周后才完全衰退.由于Fas很少在肝细胞外的其他细胞高水平表达,它对其他器官几乎没有副作用.此外,这个小组还和其他研究者积极开展针对HIV的RNAi测试,目前报道他们使用的针对CCR5蛋白的siRNA能阻止HIV进入免疫细胞约3周,在已经感染的细胞中也能阻止感染病毒的复制.然而,尽管取得了不少研究成果,但要真正用于医疗还需时日.目前大多数还停留在小鼠测试阶段,siRNA的导入多采用静脉或腹腔注射,尾部注射,细胞移植等,如何对人进行有效的给药,既能确保药效在靶器官靶组织有效释放,还要具有高度安全性等问题都需进一步研究.人们期待着RNAi引领的新医学革命的到来.在药物筛选领域,除了线虫这种低等动物的RNAi高通量药筛模式外,Lavery K S等对RNAi在药筛领域的应用前景进行了高度评价,RNAi技术将逐渐成为药物靶点筛选和鉴定的强大工具.他对如何在药筛的各个阶段应用RNAi做了具体描述及展望,并指出将这项技术与高通量筛选,体外生物检测和体内疾病模式相结合,将提供大量基因功能方面的有用信息,在药物开发过程的多个阶段促进靶点的有效筛选.3.3 抗肿瘤治疗多种癌基因可以作为靶点设计相对应siRNA[14].Brummelkamp T R等[15]用逆转录病毒载体将siRNA 导入肿瘤细胞中,特异性抑制了癌基因K2RAS (V12)的表达.对急性髓性白血病的研究已经取得了较好的结果.Scherr M等[16]以引起慢性髓性白血病和bcr2abl阳性急性成淋巴细胞白血病的bcr2abl癌基因为靶基因,设计了对应的siRNA,并获得了87% 的有效抑制率.Wilda M等[17]用siRNA抑制白血病BCR/ABL融合基因表达也取得了成功. 因此,基于RNAi 技术的抗肿瘤治疗药物开发潜力巨大.有报道称,一种全新生物工程药品"RNA干扰剂"(非干扰素)业已浮出水面,并有望在3年内上市.经过多年的探索,科学家终于发现,在癌细胞和病毒RNA的22对碱基中有1对碱基专门负责复制工作,只要能使这对碱基"休眠",癌细胞或病毒就会自动停止复制.这一重要发现为一种全新药物——RNA干扰剂奠定了基础.科学家们相信,艾滋病,乙型肝炎,恶性胶质瘤(恶性脑瘤)和胰腺癌等疾病有望成为RNA干扰剂的第一批受益者(2004年经FDA批准已开始RNA干扰剂的临床试验),艾滋病,中枢神经系统退行性病变疾病如多发性硬化症,阿尔茨海默病,帕金森病等将成为第二批受益者.3.4 抗病毒治疗由于RNAi 是机体中古老而天然的抗病毒机制,目前国外科技人员利用此特点,已设计出针对HIV gag,tat,rev,nef等基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒非结构蛋白5B基因的siRNA,针对脊髓灰质炎病毒衣壳蛋白和多聚酶基因的siRNA,针对口蹄疫病毒3D片段siRNA等[18],均在试验中取得理想结果.陆续有关通过RNAi抑制其他病毒在细胞内复制的报道如呼吸道合胞病毒,人乳头瘤病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒[19]等,国内也已设计出针对口蹄疫病毒VP1基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒5′保守区的siRNA,针对口蹄疫病毒IRES和L串联序列两侧的保守区的siRNA[20],针对SARS冠状病毒的6个siRNA,即RL001,R L002,RL003,RL004,RL005和RL006,均已取得理想结果.针对病原的siRNA已经进行到动物实验阶段[21],向病毒病的有效防治迈出了坚实的一步.由此可见,利用RNAi技术将使病毒病的有效治疗成为可能.3.5 转基因研究在动植物的转基因试验中, 经常发生基因沉默.因此, 对转基因沉默机制的探索可以为在转基因研究中避免基因沉默提供对策.在转基因植物研究中避免基因沉默可提高试验成功率,且节省时间,而在大型动物转基因研究中避免基因沉默可节约成本,提高产率.3.6 干细胞研究在干细胞研究方面,在dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞 Hes5表达的试验中[22],观察外源性短dsRNA在转录后水平mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行了初步探讨.同时基于干细胞可能拥有自己的一套基因组,不同类型的干细胞又拥有各自所特有的基因,这些基因可能是决定干细胞特性的最关键的实质性因素.因此,RNAi技术在此领域应用空间广阔.3.7 研究信号传导的新途径Biotech认为,联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果.RNAi技术较传统的转染试验简单,快速,重复性好,克服了转染试验中重组蛋白特异性聚集和转染率不高的缺点,因此认为RNAi技术可能成为研究细胞信号传导通路的新途径.3.8 常见病的治疗Nature杂志报道了miRNA(Micro RNA)的应用上一个重要发现,成功采用miRNA调节了胰岛素的分泌,这为糖尿病的治疗带来新的希望,也将为糖尿病的新药研究带来新的曙光和思路.据Sicence杂志报道,显示应用RNAi技术可有效降低血管内胆固醇含量,对治疗心血管疾病有明显的作用.4 展望综上所述,RNAi技术在基因功能研究,抗肿瘤治疗,抗病毒治疗,基因应用研究,常见病的治疗等许多方面都是强有力的工具和手段.同时做为新兴的生物技术,还有广阔的研究和应用空间期待着科研人员的探索.例如,siRNA在病毒持续性感染过程中扮演怎样的角色 siRNA在冬眠动物体内的作用如何 RNAi在雀斑形成中起到怎样的作用 如上述问题得到解决,将进一步依据其机理及特点,有望应用于病毒持续性感染的鉴别诊断及治疗,利用siRNA在冬眠动物体内的作用进行星际航行,以解决能量供应及时间跃迁问题,RNAi应用于祛除雀斑等.aware可自测不用抽血祝您健康天 猫！尽管在RNAi方面的研究已取得许多突破性进展,尤其是哺乳动物细胞中的研究的报道逐渐增多,但由于RNAi机制尚未完全阐明,仍有许多问题尚未得到彻底解答.例如,siRNA 在哺乳动物细胞中抑制mRNA表达是有效的, 但达不到果蝇细胞那样的高抑制率, 可能是因为生物进化水平越高,调控基因表达系统的复杂程度相应的越高,多种抑制机制间相互作用的频率也越高,抑制作用受到的影响因素也就越多.另外, 在哺乳动物中,RNAi能否成功地抑制基因表达以及抑制的程度还取决于细胞类型.对线虫来说,可以采用注射,浸泡或喂食的方法转入dsRNA,而对哺乳动物来说,寻找高效的方式来转入siRNA以及快速的方式来筛选siRNA仍在进一步探索中.RNAi在抗病毒感染中的应用令人鼓舞, 但要取得最终的成功还有很漫长的路要走.其中一个关键的原因是siRNA并不能对所有病毒RNA发生作用,有些病毒靶序列可能隐藏在二级结构下, 或者位于高度折叠的区域中, 而有些病毒序列可能与蛋白质形成紧密的复合物, 阻碍了与siRNA 的识别.因此,不仅要选合适的靶序列,而且需要反复试验.另一个重要的原因是病毒子代的突变率较高, 这使病毒可逃避siRNA 的识别.为了克服这个障碍,所选病毒RNA的靶序列必须是高度保守的, 或者设计数对siRNA同时作用[23].总之,RNAi作为一种新发展起来的分子生物学技术,不可避免地会存在潜在的问题,这就要求研究者在利用该技术时要考虑到生物安全性等诸多问题,以使RNAi技术更好地为人类服务.

RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理转录抑制与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptionalgenesilencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。转录后抑制不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Posttranscriptionalgenesilencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。翻译抑制Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(smalltemporalRNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。

RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理转录抑制 与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。转录后抑制不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。翻译抑制 Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。

RNA干扰及其应用进展孙德惠1,2,才学鹏1*,常惠芸1 ,独军政1 (1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;2.甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070)摘 要:RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象.RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点.RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究.文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源,可能的作用机制,作用特点,研究方法,应用前景及展望等方面进行了综述.关键词:RNA干扰;双链RNA;基因沉默RNAi是Napoli C D等[1]在试图向紫色矮牵牛花转导色素合成基因,用以增加其花色时发现的.结果出乎预料,转基因的植株不仅没有新基因的表达,反而自身的色素合成也减弱了,一些转基因的花出现了全白色或部分白色.他们把这种导入的基因未表达和植物本身合成色素基因的失活现象命名为共抑制(cosuppression).之后,Ramano等在向粗糙孢菌(Neurospora crassa)中导入合成胡萝卜素的基因时造成失活,他们称为基因静止(quelling).Guo S等[2]发现正义RNA与反义RNA有相同水平的抑制效应,但未能就此现象给出合理的解释.Fire A等[3]在研究反义核苷酸时发现在线虫体内,双链RNA( double stranded RNA,dsRNA)能有效地抑制有互补序列的内源性基因,且抑制效果优于单链反义RNA.至此,正式提出了双链RNA诱导的RNAi的概念,开启了RNAi研究的序幕.1 RNAi可能的作用机制及特点1.1 RNAi的作用机制虽然RNAi作用的确切机制尚不清楚,但目前普遍认可是Bass假说.具体概括为三个阶段.(1)起始阶段.在细胞内,双链RNA(dsRNA)由核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ) Dicer 在ATP的参与下被处理为21个～23个碱基的小RNA,即小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA).siRNA是由19个～21个碱基配对形成的双链,并在其3′末端有两个游离未配对的核苷酸.研究发现, siRNA 是RNAi 作用发生的重要中间分子,序列与所作用的靶mRNA 的序列具有高度同源性;双链的两端各有2个～3个突出的非配对的3′碱基;两条单链末端为5′端磷酸和3′端羟基.这些是细胞赖以区分真正的siRNA和其他双链RNA的结构基础. 研究表明,平末端的siRNA 或失去了5′磷酸基团的siRNA 不具有RNAi 的功能[4] (2)引发阶段.siRNA与Argonaute蛋白家族及其他未知因素结合,形成siRNA-核蛋白复合物(siRNA-ribonucleoprotein complex,siRNP).siRNP在ATP及其他未知因素参与下,使双链siRNA解旋形成RNA诱导的沉默复合物(RNA inducing silencing Complex ,RISC).RISC可能以完全单链或两条链解旋但不完全分离的形式存在,继而RISC在dsRNA的介导作用下与互补mRNA结合,并将其降解.mRNA被降解在转录后水平,抑制基因表达,因而又称之为转录后基因沉默( posttranscriptional gene silencing,PTGS)(3)循环放大阶段.在siRNA诱导的RNAi过程中,可能还存在siRNA 的循环放大过程,以维持它的RNA诱导功能.此过程推测是以siRNA为引物,互补mRNA 为模板,在RNA依赖性RNA合成酶(RNA-dependent RNA Polymerase,RdRP) 的作用下,合成新的双链RNA,再由Dicer作用,产生新的siRNA,完成siRNA 的放大过程,开始新的RNAi循环[5].关于对RNAi机制中重要酶的作用研究,Zamore P D等[6]发现,21 nt RNA指导mRNA的降解; Scharf W D等[7]发现ATP依赖的RNA解旋酶为Mut6;Grishok A等[8]发现Let-7和lin-4为内源性的RNAi基因(stRNA);Dalmay T等[9]提出RNA依赖的RNA多聚酶就是SDE-1; Bernstein E等[10]证实RNaseш样的核酸酶为Dicer; Elbashir S M等[11]应用外源性21 nt-siRNA能够抑制同源mRNA的表达;Novina C D等[12]证实无论是针对病毒感染细胞所需的CD4受体,还是针对病毒基因组的gag区域,siRNA都可以有效地使病毒与细胞的基因沉默,抑制HIV的感染与复制.1.2 RNAi的作用特点(1)"共抑制"性.RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默.(2)高效性.试验证明双链RNA干扰mRNA 翻译的效率比单纯反义或正义RNA 的抑制效率提高了几个数量级;RNAi可在低于反义核酸几个数量级的浓度下,使靶基因表达降到很低水平甚至完全"剔除",而产生缺失突变体表型.它比基因敲除技术更为便捷,科学家称RNAi技术为靶基因或靶蛋白的"剔降"(knockdown).(3)高特异性.由dsRNA降解成的小干扰RNA,除其正义链3′端的两个碱基在序列识别中不起主要作用外,其余碱基在序列识别中都是必需的,单个碱基的改变即可使RNAi失效,RNAi能特异性降解mRNA,针对同源基因共有序列的RNAi则可使同源基因全部失活.(4)高穿透性.RNAi具有很强的穿透能力,能在不同的细胞间长距离传递和维持,如在含有双链RNA的溶液中,喂食表达双链RNA的细菌等,能向秀丽隐杆线虫导入双链RNA.(5)"遗传性".已在线虫中观察到RNAi效应通过生殖系传递到后代,说明RNAi具有一定的可遗传性.(6)高稳定性.细胞中可能存在天然的稳定siRNA的机制.此机制可能是siRNA与某种保护性蛋白结合,从而使其具有相对的稳定性,这些双链RNA 不像反义核酸那样需要多种化学修饰来提高其半衰期.(7)双干扰系统.哺乳动物中存在有非特异性干扰和特异性干扰两条独立的途径. 非特异性干扰反应是由大于30个碱基对的双链RNA介导,导致整个细胞中非特异性蛋白合成抑制,RNA降解;特异性反应由21 bp～25 bp的小干扰RNA介导,可逃避非特异性干扰系统的"监控",只降解与其序列相应的单个基因的mRNA[11].2 研究方法在研究过程中,科研人员逐渐摸索总结出了成套的研究方法.目前,展开RNAi操作主要有两种方法.一种为直接将靶向特定基因的大约21个碱基长短siRNA,或45个~50个碱基的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)转染到细胞,shRNA在细胞中会自动被加工成siRNA,从而引发基因沉默或表达抑制.另一种为构建特定的siRNA表达载体,通过质粒在体内表达siRNA而引发基因沉默.此法的优点是排除了RNA酶干扰,延长siRNA半衰期.更重要的是,该法可以进行稳定表达细胞株的筛选,且随着质粒复制扩散到整个机体,基因抑制效果可传代.试验表明,可被化学合成或体外合成的siRNA抑制的基因同样可被表达相同序列的载体表达出的siRNA所抑制.3 RNAi的应用3.1 基因功能研究在神经生物学研究中,科学家们通过siRNA表达质粒对中脑腹侧神经细胞中的多巴胺能相关基因进行了有效抑制,还通过病毒介导的RNAi建立了此类成年小鼠模型,不仅为建立神经系统的功能缺失模型找到了一些有价值的表型标记,对神经系统的基因治疗也有一定借鉴意义;在癌症研究中,通过shRNA表达载体成功抑制成年大鼠脑癌基因,同时对RNAi的远程(穿过血脑屏障)基因沉默方法进行了非常有益的探索;利用细胞凋亡途径,通过RNAi抑制凋亡基因Caspase-8能提高患急性肝功能衰竭小鼠的成活率,并发现Caspase 8 siRNA处理对特异性Fas激活剂(Jo2和AdFasL)和野生型腺病毒介导的急性肝功能衰竭都有效,表明这个动物模型能反应人类急性病毒肝炎多分子参与的机制,增强了siRNA用于急性肝炎病人治疗的希望.除了对某些关键基因的RNAi研究外,还在哺乳动物细胞中探索了siRNA在基因组水平上的筛选方法.他们建立了一个包含8 000多个基因的siRNA表达框文库阵列,通过它来高通量筛选NF-kB信号途径中已知的及Unique基因.由此可见,RNA干扰也正作为筛选成百甚至上千基因的工具,发挥着越来越大的作用[13].RNAi为系统地抑制RNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径.通过在一段时间内对一个基因RNA信号的抑制,研究者可以深入研究基因功能,进而描绘支配从细胞形态到信号系统的遗传网络.3.2 基因治疗及药物筛选探索由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径.其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达.尤其针对引起一些对人类健康严重危害的病毒,如2003年在全球多个国家和地区流行的SARS,病原体是单链核酸的新型冠状病毒,寻找药物靶点,设计核酸药物就更为方便.目前已经有很多公司在积极开发这方面的药物,如在SARS药物研究中一鸣惊人的美国俄勒冈州的AVI BioPharma生物制药公司等.国内也有很多研究机构及生物技术公司投入了这方面的工作.如上海生科院成立了SARS防治科研攻关小组,其中生化细胞所和药物所的一些课题组在从RNAi的角度努力.此外,北京大学,中南大学,北京动物所等大专院校和研究机构,以及北京金赛狮反义核酸技术开发有限公司等,也开展了RNAi药物的研究与开发.基因治疗方面最引人注目的进展之一是对肝炎病毒的RNAi研究.Mccaffrey A P等通过表达shRNA的载体在细胞水平和转染HBV质粒后免疫活性缺失的小鼠肝脏中成功抑制了HBV复制.与对照相比,小鼠血清中测得的HBsAg下降了84.5%,免疫组化对HBcAg的分析结果下降率更超过99%.哈佛大学Lieberman研究小组通过注射针对Fas的siRNA,过度激活炎症反应,诱导小鼠肝细胞自身混乱.然后给测试小鼠注入 Fas hyperdrive的抗体,发现未进行siRNA处理的对照组小鼠在几天中死于急性肝功能衰竭,而82%的siRNA处理小鼠都存活下来,其中80%~90%的肝细胞结合了siRNA.并且,RNAi发挥功能达10 d,3周后才完全衰退.由于Fas很少在肝细胞外的其他细胞高水平表达,它对其他器官几乎没有副作用.此外,这个小组还和其他研究者积极开展针对HIV的RNAi测试,目前报道他们使用的针对CCR5蛋白的siRNA能阻止HIV进入免疫细胞约3周,在已经感染的细胞中也能阻止感染病毒的复制.然而,尽管取得了不少研究成果,但要真正用于医疗还需时日.目前大多数还停留在小鼠测试阶段,siRNA的导入多采用静脉或腹腔注射,尾部注射,细胞移植等,如何对人进行有效的给药,既能确保药效在靶器官靶组织有效释放,还要具有高度安全性等问题都需进一步研究.人们期待着RNAi引领的新医学革命的到来.在药物筛选领域,除了线虫这种低等动物的RNAi高通量药筛模式外,Lavery K S等对RNAi在药筛领域的应用前景进行了高度评价,RNAi技术将逐渐成为药物靶点筛选和鉴定的强大工具.他对如何在药筛的各个阶段应用RNAi做了具体描述及展望,并指出将这项技术与高通量筛选,体外生物检测和体内疾病模式相结合,将提供大量基因功能方面的有用信息,在药物开发过程的多个阶段促进靶点的有效筛选.3.3 抗肿瘤治疗多种癌基因可以作为靶点设计相对应siRNA[14].Brummelkamp T R等[15]用逆转录病毒载体将siRNA 导入肿瘤细胞中,特异性抑制了癌基因K2RAS (V12)的表达.对急性髓性白血病的研究已经取得了较好的结果.Scherr M等[16]以引起慢性髓性白血病和bcr2abl阳性急性成淋巴细胞白血病的bcr2abl癌基因为靶基因,设计了对应的siRNA,并获得了87% 的有效抑制率.Wilda M等[17]用siRNA抑制白血病BCR/ABL融合基因表达也取得了成功. 因此,基于RNAi 技术的抗肿瘤治疗药物开发潜力巨大.有报道称,一种全新生物工程药品"RNA干扰剂"(非干扰素)业已浮出水面,并有望在3年内上市.经过多年的探索,科学家终于发现,在癌细胞和病毒RNA的22对碱基中有1对碱基专门负责复制工作,只要能使这对碱基"休眠",癌细胞或病毒就会自动停止复制.这一重要发现为一种全新药物——RNA干扰剂奠定了基础.科学家们相信,艾滋病,乙型肝炎,恶性胶质瘤(恶性脑瘤)和胰腺癌等疾病有望成为RNA干扰剂的第一批受益者(2004年经FDA批准已开始RNA干扰剂的临床试验),艾滋病,中枢神经系统退行性病变疾病如多发性硬化症,阿尔茨海默病,帕金森病等将成为第二批受益者.3.4 抗病毒治疗由于RNAi 是机体中古老而天然的抗病毒机制,目前国外科技人员利用此特点,已设计出针对HIV gag,tat,rev,nef等基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒非结构蛋白5B基因的siRNA,针对脊髓灰质炎病毒衣壳蛋白和多聚酶基因的siRNA,针对口蹄疫病毒3D片段siRNA等[18],均在试验中取得理想结果.陆续有关通过RNAi抑制其他病毒在细胞内复制的报道如呼吸道合胞病毒,人乳头瘤病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒[19]等,国内也已设计出针对口蹄疫病毒VP1基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒5′保守区的siRNA,针对口蹄疫病毒IRES和L串联序列两侧的保守区的siRNA[20],针对SARS冠状病毒的6个siRNA,即RL001,R L002,RL003,RL004,RL005和RL006,均已取得理想结果.针对病原的siRNA已经进行到动物实验阶段[21],向病毒病的有效防治迈出了坚实的一步.由此可见,利用RNAi技术将使病毒病的有效治疗成为可能.3.5 转基因研究在动植物的转基因试验中, 经常发生基因沉默.因此, 对转基因沉默机制的探索可以为在转基因研究中避免基因沉默提供对策.在转基因植物研究中避免基因沉默可提高试验成功率,且节省时间,而在大型动物转基因研究中避免基因沉默可节约成本,提高产率.3.6 干细胞研究在干细胞研究方面,在dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞 Hes5表达的试验中[22],观察外源性短dsRNA在转录后水平mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行了初步探讨.同时基于干细胞可能拥有自己的一套基因组,不同类型的干细胞又拥有各自所特有的基因,这些基因可能是决定干细胞特性的最关键的实质性因素.因此,RNAi技术在此领域应用空间广阔.3.7 研究信号传导的新途径Biotech认为,联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果.RNAi技术较传统的转染试验简单,快速,重复性好,克服了转染试验中重组蛋白特异性聚集和转染率不高的缺点,因此认为RNAi技术可能成为研究细胞信号传导通路的新途径.3.8 常见病的治疗Nature杂志报道了miRNA(Micro RNA)的应用上一个重要发现,成功采用miRNA调节了胰岛素的分泌,这为糖尿病的治疗带来新的希望,也将为糖尿病的新药研究带来新的曙光和思路.据Sicence杂志报道,显示应用RNAi技术可有效降低血管内胆固醇含量,对治疗心血管疾病有明显的作用.4 展望综上所述,RNAi技术在基因功能研究,抗肿瘤治疗,抗病毒治疗,基因应用研究,常见病的治疗等许多方面都是强有力的工具和手段.同时做为新兴的生物技术,还有广阔的研究和应用空间期待着科研人员的探索.例如,siRNA在病毒持续性感染过程中扮演怎样的角色 siRNA在冬眠动物体内的作用如何 RNAi在雀斑形成中起到怎样的作用 如上述问题得到解决,将进一步依据其机理及特点,有望应用于病毒持续性感染的鉴别诊断及治疗,利用siRNA在冬眠动物体内的作用进行星际航行,以解决能量供应及时间跃迁问题,RNAi应用于祛除雀斑等.尽管在RNAi方面的研究已取得许多突破性进展,尤其是哺乳动物细胞中的研究的报道逐渐增多,但由于RNAi机制尚未完全阐明,仍有许多问题尚未得到彻底解答.例如,siRNA 在哺乳动物细胞中抑制mRNA表达是有效的, 但达不到果蝇细胞那样的高抑制率, 可能是因为生物进化水平越高,调控基因表达系统的复杂程度相应的越高,多种抑制机制间相互作用的频率也越高,抑制作用受到的影响因素也就越多.另外, 在哺乳动物中,RNAi能否成功地抑制基因表达以及抑制的程度还取决于细胞类型.对线虫来说,可以采用注射,浸泡或喂食的方法转入dsRNA,而对哺乳动物来说,寻找高效的方式来转入siRNA以及快速的方式来筛选siRNA仍在进一步探索中.RNAi在抗病毒感染中的应用令人鼓舞, 但要取得最终的成功还有很漫长的路要走.其中一个关键的原因是siRNA并不能对所有病毒RNA发生作用,有些病毒靶序列可能隐藏在二级结构下, 或者位于高度折叠的区域中, 而有些病毒序列可能与蛋白质形成紧密的复合物, 阻碍了与siRNA 的识别.因此,不仅要选合适的靶序列,而且需要反复试验.另一个重要的原因是病毒子代的突变率较高, 这使病毒可逃避siRNA 的识别.为了克服这个障碍,所选病毒RNA的靶序列必须是高度保守的, 或者设计数对siRNA同时作用[23].总之,RNAi作为一种新发展起来的分子生物学技术,不可避免地会存在潜在的问题,这就要求研究者在利用该技术时要考虑到生物安全性等诸多问题,以使RNAi技术更好地为人类服务.参考文献(略)

巴萨队中的米利托叫加布里埃尔米利托是刚刚转会去国际米兰的名字是叫迭戈米利托巴萨的米利托和现在国米的米利托是一对兄弟！是有血缘关系的兄弟巴萨的加布里埃尔米利托是中后卫国米的迭戈米利托是前锋两个不是一个人而是兄弟O(∩_∩)O~他们都是阿根廷人

⑴ 999个短篇鬼故事 999个短篇鬼故事之人体蜈蚣 范超被蚊子折磨的快疯掉了，他在回宿舍的路上顺便在地摊上买了一瓶无名杀虫剂，想要“为民除害”。 回到寝室，范超见三个舍友都还未归，便关上窗户一阵乱喷，凡是他能想到的地方都难逃一劫。喷完后，他捂着鼻子跑出寝室，重重地关上了门。 十分钟后，范超回到宿舍楼，他远远地看见自己所在的寝室门已经敞开了，他知道一定是舍友回来了，便兴奋地朝寝室跑，可刚到门口，他却吓愣住了：室友们的头全部断落在地上，身体一节一节天衣无缝的连接着，手脚撑在地上，活像一个巨大的蜈蚣？ 范超顿了顿，刚想开口说话，“蜈蚣”中开首的室友先言一步：“你在寝室里干了些什么？” “没干什么啊，只是这大冬天的蚊子太多，我买了瓶杀虫剂喷了喷！”范超说着想往寝室里走。 “别进来！”处于“蜈蚣”第二节的室友向范超吼叫着，“你自己看看这个杀虫剂的说明书。”说着，他用一只脚将杀虫剂推出了寝室。 范超疑不见怅的盯了盯说明书，看完后他呆住了，杀虫剂瓶体上写着：本杀虫剂适量可驱蚊，过量可能会出现副作用，亦可驱鬼，鬼魄忌用！ 范超心里如浪翻滚，他刚晃过神，就见那条“人体蜈蚣”朝自己爬来。一边爬着，“蜈蚣”尾部那个室友一边道：“阿超，我们这些鬼本来今年从这个学校毕业就可以投胎了，可你用鬼魂克星杀虫剂扼杀了我们，那你也别想去投胎了！” 范超只觉眼前一黑，晕了过去。在这一瞬间，他才想起自己已经死了，现在只是一个鬼而已，他也总算明白为什么大冬天的还有那么多蚊子缠着他了。 范超醒时已是午夜，他发现自己头和身子还在才吁了一口气，可下一秒，他悲讶了，自己四肢着地，背后有三个人身像火车一样连在自己身后，他明白了，室友们的报复就是，自己也成为了人体蜈蚣的一部分。 这是我在网上找的一个999鬼故事专题中的一篇，其实你可以直接去看，鬼姐姐鬼故事有这么一个专题。 ⑵ 《999个短篇鬼故事》txt全集下载 999个短篇鬼故事 txt全集小说附件已上传到网络网盘，点击免费下载： 应该是你需要的吧

香港濒临南海，北与深圳相连。香港的区域范围包括香港岛、九龙、新界和周围262个岛屿，陆地总面积1106.66平方千米，海域面积1648.69平方千米。截至2020年末，总人口747.42万人，是世界上人口密度最高的地区之一，人均寿命全球第一，人类发展指数全球第四。香港自古以来就是中国的领土，1842—1997年间曾受英国殖民统治。二战以后，香港经济和社会迅速发展，不仅跻身“亚洲四小龙”行列，更成为全球最富裕、经济最发达和生活水准最高的地区之一。特产美食：在香港丰富多样的美食中，粤菜作为最主要的菜系传承百年，魅力不减。在2017年推出的香港版《米其林指南》中，有两家经营传统粤菜的餐厅荣获最高级的米其林三星。香港传统本地菜以广州菜为主，盆菜则是新界原居民在节日时的传统菜。由于香港临近海洋，因此海鲜也是常见的菜色，亦发展出如避风塘炒蟹的避风塘菜色。香港饮食也深受外来饮食文化影响。中环苏豪区、湾仔及尖沙咀酒吧林立，慕尼黑啤酒节由1991年起每年于尖沙咀广东道举行。快餐方面，美式快餐主要由麦当劳及肯德基经营，而香港也发展出自己的港式快餐，当中以大家乐、大快活及美心快餐为代表。以上内容参考：百度百科-香港

耐克和安德玛的篮球鞋哪个更好?好在哪?求两个品牌都穿过的盆友们解答一下,谢谢哟!要看看是什么系列的了，现在篮球鞋都是往产量走，基本上和当年的质量相差许多，现在都是以外形设计为重点。特别是NIKE，外形设计越来越好，十年间变化挺大。安德玛无疑质量比NIKE好许多，但是在外形设计方面没有NIKE花功夫，你自己参考一下你更注重哪方面吧。安德玛跑步鞋好不好？跟耐克比哪个好些？安德玛的鞋子不错，是美国知名高端功能性专业运动品牌，特别是他们全新的HOVR系列，很适合跑步的时候穿，有几款还是有数字联网功能的，搭载了UARecordSensor技术，能追踪、分析和储存每一次奔跑数据，而且根据数据去改善锻炼，会更高效些。另外这款鞋的面料很符合人体工程学设计。underarmour好在哪里UnderArmour，美国体育运动装备品牌。UnderArmour的总部在巴尔地摩，马里兰州，该公司主要生产体育装备。中文名安德玛外文名UnderArmour总部巴尔地摩经营范围体育运动装备在美国，提到UnderArmour，必然会想起高端和专业的运动装备，UnderArmour逐渐成为“专业”的代名词。1．此牌子走的是专业路线，产品做工相对不错，价格比nike稍微高一点，算是体育装备中顶级牌子。紧身衣是其最著名产品。UnderArmour产品图册2．牌子口号“棉是我们的敌人”。所有产品都是尼龙，涤纶制造。3．设计风格比较简约。4．以大学football起家，所以在年轻人心目中有很高的地位。5．新出的女性系列颜色以粉兰粉红为主。6．NCAABasketball中，见过北卡，UW-Madison有这个牌子的装备和球衣，价格似乎比nike要高一点，不大清楚他们的合作关系7．每一款紧身衣都有其独特的科技含量，透气，快干，舒适，减少摩擦以及协助肌肉发力等等，HeatGear和ColdGear是品牌两大科技主打，意思是冷的时候我们的产品保暖，热的时候我们通风。除此之外，还有AllSeasonGear，LooseGear等等。underarmour怎么样比耐克定位略高端一点点。走技术路线，这方面有点像阿迪达斯。总体定位就是为真正热爱运动的人，提供充满新科技的高功能性产品。在北美正在侵蚀耐克的市场。目前差不多是第三的位置。个人感觉，耐克最商业化，阿迪达斯注重科技和商业的结合，安德玛最满足运动需求。underarmour是什么品牌UnderArmour美国体育运动装备牌子。UA这个牌子开始在海外有了知名度。他们在阿姆斯特丹设立了欧洲总部。英国，加拿大，欧洲，日本，澳大利亚，新西兰以及南非都成为他们发展的目标。l在美国,提到UnderArmour，必然会想起高端和专业的运动装备，UnderArmour逐渐成为”专业”的代名词1．此牌子走的是专业路线，产品做工相对不错，价格比nike稍微高一点，算是体育装备中顶级牌子。紧身衣是其最著名产品。2．牌子口号“棉是我们的敌人”。。。非常极端，所有产品都是尼龙，涤纶制造。有穿过nikepro的朋友大概知道那种感觉：很轻，排汗，但其实我觉得没有棉舒服。3．设计风格比较简约，线条设计很漂亮，这是nikepro比不上的。4．以大学football起家，所以在年轻人心目中有很高的地位。5．战线拉得不开，似乎走精华路线，但现在战线也开始拉长。6．新出的女性系列颜色以粉兰粉红为主，非常漂亮。。。7．NCAABasketball中，见过北卡，UW-Madison有这个牌子的装备和球衣，价格似乎比nike要高一点，不大清楚他们的合作关系8．每一款紧身衣都有其独特的科技含量，透气，快干，舒适，减少摩擦以及协助肌肉发力等等，HeatGear和ColdGear是品牌两大科技主打，意思是冷的时候我们的产品保暖，热的时候我们通风。除此之外，还有AllSeasonGear,LooseGear等等。9．所有广告硬照都很cool，都是些很纯粹的运动照。希望帮到你了

故事一： 有个男子，在情人节那天偷偷潜到女朋友家里。想给她个惊喜。但是想想又想玩点刺激的，就到倒了好多番茄汁到脸上又披件白色床单。想吓吓女朋友。然后他跑到厨房去看他把自己划成什么样了。在厨房的镜子里一照，那撕牙裂嘴的样子及至恐怖，把自己都下一跳。想女朋友肯定受不了。就忙又把妆给卸了。 等女朋友回来他把这事告诉她，她女朋友听了眼睛瞪得很大，一副不敢相信的样子。 男子就问她怎么了。 她说：“你说你你在厨房照着镜子把自己吓到了？” 他回答“是啊！真吓人！” “可是”她的眼睛更大了，脸色铁青。“可是，厨房根本没有镜子啊~！！！” 啊！！！ 故事二： 就在这几天，村里来了一位老人。老人看起来非常的憔悴失意，可是或许是因为没有人认识他，所以也没有人特别注意。结果，就在傍晚，老人被人发现在在树林里上吊了！而那上吊之处，就正好在小静家的后面，而且甚至只要透过浴室的窗户就可以清楚的看到老人！ 晚上，小静回来了，由于尸体很快被处理了。所以小静并不知情，然后小静就去洗澡，因为浴室非常小，所以洗澡时候是非常靠近气窗的。就当洗到一半时，小静一个抬头，正好看到气窗。当时看到的景象让小静整个人都僵掉！因为她看见一个人头！小静无法动弹，而人头却一直眼睁睁的看着她！就在这时，人头竟然笑了！并说： “姐，你有没有吓一跳？” 故事三： 我弟弟很不喜欢我妈妈煮的菜，偏偏喜欢吃泡面。有一天我妈妈没烧菜，我弟又要吃泡面，我妈就骂他：“妈妈没煮菜你不会出去买便当啊？吃泡面没营养啦！！” 我弟说：”我就是喜欢吃,怎样？！“ “唉呀.....妈妈跟你说，泡面真的不是什么好东西，你爸爸以前公司有一个年轻的小姐，为了都把钱存下来寄回家，所以早上吃泡面，中午吃泡面，晚上吃泡面。天天吃泡面，结果三个月以后她死了！” （大惊失色）：“真的假的？” “妈妈怎么会骗你？” “真的喔，那她是怎么死的？“ 这个啊，买泡面时出车祸..... 故事五： 高中时，在华中桥前的果菜市场发生一幕（惊心动魄）的画面.... 由于果菜市场是许多车的分点，又正值下班放学的时间，我们坐的那班车人挤的让站在车门口的人整个人包括脸都像壁虎一样紧紧贴在车门上。 司机先生等人都上来后，开始出发，由于要上桥，他一直踩着油门加速。等到发现前面有个老婆婆正过马路，踩煞车时已经来不及了！ 只见老婆婆整个人趴在车前的马路上，一动不动，身旁流出一堆肠子，还开始渗出泊泊的血水...... 有的人开始尖叫....有的看得说不出话来，而司机脸色苍白，坐在位子上不敢下去，当车上的司机开始指责司机时，一件奇怪的事情发生了...... 突然，老婆婆抖抖地站起来，拿出一个破破的塑料袋，开始捡肠子，口里还喃喃地嘀咕：“夭寿啊....刚买回来的肠子，这样怎么吃啊.....” 故事六： 告诉你一个鬼故事，而且粉恐怖！ 在一个寂静的月夜，又准的夜晚，一名行经山区的旅行者很不幸的迷了路了。 正当他饥寒交迫，体力不去时，终于在那遥远的前方发现了一栋茅草屋。 他高兴地上前奔去，并且敲了敲门，大声喊到：“有人在吗？”随后就有一位老阿婆出来应门。 旅行者说明了来意之后，老阿婆就好心地给了这们旅者一盒便当，并答应旅者当晚就在阿婆家暂且住下。 第二天一早，旅者一醒来，惊觉身边根本就没有什么茅草房，自己就睡在地上。更别说有什么老阿婆了，但旅者并不害怕，心中仍十分感激那位阿婆，认为那是菩萨化身，前来救苦救难了。 于是他在原地拜了拜，满怀感激之意离去。经过长途跋涉，最后终于回到村里。 回去之后，他逢人就讲这档子事，过了很久，终于有人说到：“你说的那们阿婆啊，她在三年前就去世了。”旅者一听，心中暗叫不妙，突觉身体一阵剧痛，并大叫到： “不好了....我，....我...我吃了过...过期的便当！”

这届世界杯80%可能性穿22号，因为这个号码第一,没人与他竞争;第二，这是米利托的俱乐部号码，在萨拉戈萨，热亚那，还有现在的国米，都是这个号码。9号估计是伊瓜因，10号梅西，11号特维斯，17号古铁雷斯，这些号码他们一直再穿，估计变动的可能性不大。如果这几个球星都没入选的话，可能米利托的号码会变。呵呵!其实穿什么号不太重要吧，只要能进球就好。说的准不准，只有事实胜于雄辩了。

标正，不过最好把鞋整体再发来，还有鞋底等细节，因为很多仿鞋都是正品标

1、拖地的老太太有一个女孩，叫美夕。一天晚上，她想上厕所。可天十分黑，美夕便叫同学陪她去。那那同学在门口等了好长时间，也不见她出来，十分担心。走进去一看，只看见一个老太太，手拿拖把，正在拖地。那同学便问：“老奶奶，，你有没有看见一个女孩进来上厕所？”老太太说没有。第二天，天亮了。那同学又去找美夕。走进厕所间，看见……看见美夕的尸体倒挂挂在那里。这才明白过来，昨晚那老太太就是倒拿着美夕的尸体在……在拖地。拖地的老太太！2、95级新生刚刚入学的时候，听说了这样一件事：就在前一个学期，某寝室的一个男同学每到晚上都会听见有一个声音对他说：“哥们儿咱俩背靠背，哥们儿咱俩背靠背！”他开始以为是同寝室的同学在说梦话，没太在意。可时间久了，有些受不了。一天晚上，他又听见有一个声音说：“哥们儿咱俩背靠背！他忍无可忍了，爬起来把上铺的同学叫醒，那声音还在：＂哥们儿咱俩背靠背。＂于是他又叫醒了临铺的两位同学，声音还在，同寝室的其他三位同学都听不见，只有他一个听得很清楚，那声音不大，但的确很清楚！！其他同学安慰他，精神别太紧张，放松点儿，他也觉得可能是幻觉——马上就要考试了的确有些紧张。后来，那声音果然就听不见了。放暑假，学校的寝室楼大修，他们这栋楼由于年代久远，须大动干戈，连水泥地基都刨开了。就在这位同学睡的床地下挖出一具男生尸体，是面朝下埋的。3、寝室门开了，今天来推销的人脸色苍白，“袜子要么？”小三随口应了一句“几块？”“十块五双。”小三说：“贵了”小贩冷冰冰的说：“你说要几块？”小三说道：“八块。”小贩却转身走了，第二天，小三的尸体在厕所被发现他被剁成了八块。4、今天晚上一个人在家无聊，就打电话给女朋友叫她来我家，我想吓吓她，就把自己打扮得恐怖无比。女友一走出电梯，我便在门外把她一吓，把她吓哭了，我惊呆了，连忙安慰她，等她情绪稳定后便生气离开了。我后悔了，回家后过了一会，等她气消了，打电话给她道歉，她在电话里说：“你跟你朋友串通好了吧，骗我来你这一起吓我”。5、学校新来了一个年轻的男老师，他姓詹。因为相貌俊秀，性格温柔，而受到很多女学生的追捧。可是凡是追过他的女生无不意外身亡，那阵子学院里人心惶惶，温和可亲的詹老师甚至还被警察叫去问话。可最终还是没有结果，这件事情最后还是不了了之。深夜，他站在镜子前，指尖轻轻触摸镜子里的自己，微微一笑，亲爱的，怎么能有人比我更爱你呢？

德国旅游有淡旺季之分，但并没有一个绝对的概念，一定要什么时候游览德国才是最好玩的。因为德国的不同季节都会举办不同的活动，也会适合不同的游玩方式，所以需要根据个人的喜好来选择合适的季节出游。德国的春天，属于音乐和美食。很多城市都会举办音乐节，例如欧洲顶级古典音乐节“海德堡之春”，上百场古典乐演出，让老城堡和内卡河都萦绕在音乐的氛围之中。而一到四月，芦笋上市，全德国都会沉浸在美食的氛围之中，在施韦青根Schwetzingen等芦笋产地，对游客来说，春天就意味着顶级美食和田园风光。德国的夏天，属于户外和活动。德国的夏天并不炎热，可以参加众多的户外运动，可以攀登雄奇的阿尔卑斯山，可以在辽阔的北海边遨游，可以在静谧的湖中泛舟，可以在郁郁葱葱的林间漫步……而德国的大城小镇则会举办丰富多彩的户外活动，有遵循传统的民俗活动，有追求新潮创意的时尚活动，有你争我夺的竞技活动，有大快朵颐的美食活动，多到令人眼花缭乱。德国的秋天，属于自然和美酒。层林尽染的山川，是摄影爱好者的天堂，众多景点在秋色映衬下格外壮美。秋天也是啤酒节的季节，慕尼黑啤酒节为代表的各地啤酒盛会，让无数人心醉神迷。这也是葡萄收获的季节，在葡萄园中品尝葡萄酒，更是人生享受。德国的冬天，属于传统和浪漫。长达一个多月的圣诞市场，让德国各个城市都沉浸在传统节日的氛围之中。每个城市的圣诞市场都会有自己的特色、传统，这也是德国冬天最吸引人的活动。而每年二月，科隆，美因茨、杜塞尔多夫等城市都会举行狂欢节，整座城市都会进行庆祝、跳舞、游行，都陷入疯狂的狂欢状态。而大雪则把德国的城市打扮成童话里的城镇，为众多节庆增添了浪漫的气氛。只有见过雪中的新天鹅堡，你才会真正明白童话里的浪漫。

斐乐和安德玛各有千秋，喜欢运动的可以看一下安德玛，喜欢潮流好看百搭的可以看一下斐乐，都是不错的选择。安德玛是做紧身衣起家的，他紧身衣在全球都是很火的，很受明星和健身人士喜欢，近几年签了NBA的库里做篮球鞋，目前发售到了curry 7代了。而斐乐，来自于意大利罗马的运动品牌。1911年创立，至今已经有100多年历史啦。斐乐的鞋子的话，还是很受大家喜欢的，这几年复古热潮的回归，可以说是各大网红必备款，颜值在线的同时上脚舒适度也很好。安德玛的历史这家非常成功的公司成立于1996年，创办者是前马里兰橄榄球明星Kevin Plank。由于厌倦了那种运动完身上棉制TEE被汗水浸湿的痛苦感觉，Kevin Plank发明研制了一种能让运动员在剧烈运动中保持身体清爽和轻盈的材料原形。紧接着他马上说服了两支在炎热气候城市的大学足球队购买他的装备：乔治亚理工（在潮湿炎热的亚特兰大）以及亚利桑拿州大（在沙漠附近的凤凰城区）。随后NFL球队亚特兰大猎鹰也穿上了这个牌子的装备。此后，选择UA装备的球队数量不断增加，而这其中包括了大半NCAADivision 1-A的足球队。同时公司也为其他运动设计制造了不少装备。

是19号啊。22 罗梅罗 守门员 21 安杜哈尔 守门员 1 波佐 守门员 15 奥塔门迪 后卫 3 C-罗德里格斯 后卫 13 萨穆埃尔 后卫 12 加尔塞 后卫 6 海因策 后卫 4 布尔迪索 后卫 2 德米凯利斯 后卫 23 帕斯托雷 前卫 5 博拉蒂 前卫 8 贝隆 前卫 20 M-罗德里格斯 前卫 7 迪马利亚 前卫 14 马斯切拉诺 前卫 17 古铁雷斯 前卫 19 米利托 前锋 16 阿圭罗 前锋 10 梅西 前锋 9 伊瓜因 前锋 11 特维斯 前锋 18 帕勒莫 前锋

楼主WECN&WSI V4.2补丁里阿根廷里就有迭戈米利托的，我现在用的就是WECN&WSI V4.2补丁，刚才还帮你进入游戏去看了看确定有请尊重别人的劳动成果，不要复制，共同创造一个充满温馨和智慧的问问社区，谢谢合作！！！【^_^】请认真看，没一句废话：WECN&WSI V4.2发布了，WECN&WSI V4.2中有中超的，而且最新转会是截至4月底的,下载地址： http://bbs.winning11cn.com/viewthread.php?tid=738106&extra=page%3D1 请尊重别人的劳动成果，不要复制，共同创造一个充满温馨和智慧的问问社区，谢谢合作！！！如果完全实况论坛你没号可以来这个下载V4.2： http://www.peshome.com/download/download_13.htm 但是安装WECN&WSI V4.2请注意：本补丁基于Pro Evolutiong Soccer 2009 V1.2版或1.3版官方补丁进行修改，请先升级到官方1.2或1.3补丁。安装4.2时，一定一定不要用虚拟光驱载入， 否则安装时出现“请插入磁盘2”提示，用WINRAR等压缩软件解压ISO后到硬盘后，直接安装（不要解压缩到游戏所在目录），解压缩后的文件如下，点击setup开始安装。如果你是PES2009_ WECN&WSI_V4.0的用户，那么直接安装WECN&WSI V4.2即可，其他什么都不用管了。pes2009 V1.2补丁来我的迅雷博客下载： http://lzman2007.blog.xunlei.com/category_2055.html?cid=041A1DA65BA8136D9252410DCD1D3163BDED8F05 PES2009V1.20安装方法：（建议重新安装一次游戏，这样减少出错的概率）下载后用pes2009.exe替换原exe文件，pdata.img、pinfo.img和cv0f.img放入游戏安装目录下的img文件夹。请尊重别人的劳动成果，不要复制，共同创造一个充满温馨和智慧的问问社区，谢谢合作！！！架空球员小BUG修复完全覆盖版: http://www.rayfile.com/files/8803348f-36e1-11de-ab74-0019d11a795f/ 请尊重别人的劳动成果，不要复制，共同创造一个充满温馨和智慧的问问社区，谢谢合作！！！V4.2答疑及安装时出现的问题请查看此贴2楼： http://game.ali213.net/thread-2694408-1-1.html 游戏愉快！！！请尊重别人的劳动成果，不要复制，共同创造一个充满温馨和智慧的问问社区，谢谢合作！！！

　　请不要过度沉迷鬼故事，也不要相信迷信，因为在这个上是没有鬼和神的，只有科学。所谓的鬼故事，可以让你充满压力的人生稍微得到放松和宣懈。下面是我为大家准备的短篇鬼故事大全1000字，希望大家喜欢! 　　短篇鬼故事大全1000字篇一 　　我到李庄的时候，天还没黑。 　　正在吃饭的人家，一张方桌，几个马扎，一家人聚在一起，其乐融融。 　　尚未开饭的人家，也升起了袅袅炊烟， 　　没有城内的喧嚣，这一切为宁静的村庄添加了一丝祥和的气息。 　　然而，此到李庄，却并非是为了这情这景，而是为了听一个故事，一个关于掌灯客的故事。 　　“掌灯客，客灯之掌者。客之来者，灯辉;客之去者，灯噩。”这句从古书上意外看到的活让我对掌灯客产生了浓厚的兴趣，几经探询，终于在李庄得知了一丝线索。 　　老者的家甚是隐蔽，事实上，如果天未黑，我可能找不到这样一个地方。 　　当夜色将这个古朴的村庄吞噬，当这个没有被先进科技侵夺的村庄真正地沉寂下去，一处四散着微黄烛光的小屋也就分外耀眼了。 　　寻光而去，简陋的茅屋，遍布油灯，燃烧，灯光摇曳。 　　案几已是陈旧，一老者在竹席上盘坐，眼微闭。 　　“仙身可知掌灯客?” 　　老者眼微睁，虚让了一下：“客家稍坐。”身却未大动，又是不言。 　　“仙身可知掌灯客?”我又追问了一句。 　　这次老者却是睁开了眼睛：“这灯，我却是知道，这掌灯客一名，却再无了。” 　　“那这灯u2026u2026” 　　老者却未直接答话，反是问了我一句：“客家可知灵灯?” 　　“倒是知道一点儿。”想了想，我整理了下之前所了解的，“传闻人生来身上带有阳火，火在，则百鬼不侵。阳火随成长而逐步变化，幼时最弱，老时最残，而正值壮年，则阳火最盛。阳火盛极了，便会凝之为灯，这灯，便又叫作灵灯。在一些传说中，每个人有两盏灵灯，左右肩各一盏，行夜路时，若左右遥顾，灯便会熄灭，便会遭受阴气侵袭u2026u2026” 　　老者点了点头，又摇了摇头，打断了我的话。 　　“客家所说大体正确，然而，客家可知，这灵灯共有三盏?” 　　“三盏?” 　　“灵灯应阳火而生，对人之三魂，一名善，居人之左;一名恶，居人之右;最后一灯，名平常，通常悬于额上。然而，若有意外，人便会丢了魂魄，丢了魂魄便是飘走了灵灯。而人若是丢了灵灯，轻则浑浑噩噩，重则丧命。掌灯客，便是要寻回这飘散的灯，并且掌管，若是灯耀，则人生;若是灯灭，则人亡。” 　　老者顿了顿，又看了眼满屋灯光，继续说道：“李庄曾有一个灵者，说是灵者，不过是会些许异事，倒是和你有些相像。”老者玩笑了一句，又说下去，“灵者是这一片地区的掌灯客，其实，一个地区，掌灯客并非只有一人，但掌灯客之间却有个不成文的规矩——不能相见。而这个灵者，不但破坏了这个规矩，而且还犯了很严重的错误。” 　　“不能相见?” 　　“对，不能。”老者的眼中有些迷茫，却又很快清醒了过来，“据说，掌灯客掌灯，本身就是一种违反天道的事，逆天而行，怎么可能有好结果?不过，天怜掌灯客之苦，倒是并无其他惩罚，反而多了长寿的好处，但却一u2026不能相见。” 　　“这是个不成文的规定，没有哪个掌灯客相互见过面，掌灯客也只是会些异事的普通人，不可能去违反些忌讳，这不成文的规矩，也就继续不成文了下去。但，凡事都有例外，就比如这个灵者。” 　　“那个灵者见了其他掌灯客?” 　　老者却未回答我这个问题，而是叙述起了另一个故事：“其实，掌灯客还有一个禁忌，掌灯者，不能把u2018灯u2019让常人看到。那灯，普通人是接触不了的。说掌灯客是普通人，其实也只是一种自我安慰罢了。灯是人之魄，一点儿的失常便是关乎性命的事情。寻常人接触到了，几盏灵灯便会相互影响。至于到底会发生什么，没人知道，也没人刻意研究过。但有些事，却真实地发生了。” 　　老者平淡地叙述着，除了微动的嘴唇和喉结，再无活动的地方。房间里遍布寂寥的恐怖，除了老者的叙述声，甚至连呼吸都没有。 　　我不自然地环视了一下，灯光摇曳，相互之间，似乎有着什么。 　　“发生了。”老者又重复了一遍，眼里有些茫然。 　　“发生了什么?” 　　“发生了u2026u2026”老者眼里的茫然突然变成了一种恐惧，甚至连声音都颤栗了起来。封闭的房间突然刮过一阵微风，灯光忽灭又突然亮起，微弱地摇曳着。 　　“整个李庄的人，灵火都乱了。知道吗?整个李庄的人啊!” 　　老者的情绪突然激动了起来，混乱的话语，与之前所述似乎有些不同，继而，老者又茫然地沉默了。 　　我简单地整理了一下思绪，老者的大概意思应该是：某位掌灯客，意外让普通人看到了灵灯，继而引发了极大的混乱。 　　“可是，混乱是什么呢?” 　　“行尸走肉。”老者说了这四个字，整个人忽然变了一种状态，一种莫名的威严散发在外。 　　“整个村庄的人，灵灯都乱了，你能想象到那种场景吗?灵灯不断地交换，甚至飞走u2026u2026整个村庄都乱了，有的人性格突变，有的人浑浑噩噩u2026u2026还有人，发了疯，学狗、学猫，学u2026u2026总之，整个李庄都废掉了。” 　　“废掉?那u2026u2026” 　　我追问了一句，老者却转头瞪了我一眼，犀利的目光，和之前判若两人，但老者还是回答了我的问题。 　　“废掉了。懂吗?整个李庄没有一个正常的人。这样的李庄，还不叫废吗?” 　　“废了u2026u2026”老者锐利的目光却突然又迷茫了起来，继而又转变了语气，说起李庄废掉的原因，“还记得之前说过的灵者吗?” 　　我有些发愣，不太适应老者的转变，不过很快反应了过来：“你是说，那个犯了禁忌的灵者?就是与其他掌灯客相见的灵者?” 　　“对，就是他。你是不是很好奇?为什么只有他一个人犯了禁忌?相见，不应该是两个人的事情吗?” 　　经由老者这么一提及，我忽然反应过来，相见，本就是两个人的事情，怎么可能只有一个人犯禁忌? 　　“可是如果另一个人死了呢?” 　　“死了?” 　　“嗯，另一个掌灯客，死了u2026被u2026u2026那个灵者u2026u2026害死了u2026u2026”老者缓缓地说着，摇曳的灯光似乎又暗了些。 　　“其实，他没告诉你吧u2026” 　　他?我刚要发问，老者却又继续了下去：“其实，让普通人看到灵灯的那个掌灯客，也是那位灵者u2026u2026” 　　“最初的最初，灵者也只是好意，背负在掌灯客身上的宿命，太久了，也太沉重了。其实，他只是想做回一个普通人罢了，正是年轻，谁没有一点儿冲劲?大概灵者也是这样，总之，他用各种方式去尝试，比如让普通人u2026u2026结果，也就是那个样子了。” 　　“灵灯的混乱引起了其他掌灯客的注意，于是，也就那样了。”老者又突然苦笑，“这是宿命，掌灯客的宿命，遇灯则现，相见了，也就u2026u2026” 　　“那怎么说，灵者害死了另一个掌灯客?” 　　屋内的灯忽然灭了，一声鸡鸣，屋外隐约有了曙光。老者的声音又变得严酷，只是再也看不清老者的表情。 　　“我给你讲另外一个故事吧，当年的灵者确实是想要摆脱那种宿命，可是，在违反了不能让普通人看到灵灯的禁忌后，他畏瞑了，也退缩了。当他看到闻讯而来的其他掌灯客时，他的第一反应是u2026u2026害怕，于是他犯了一个比之前更严重的错误。他没有去补救之前的行为，而是杀了另一个掌灯客。他大概怎么也想不到，掌灯客彼此之间虽然不能相见，却是生生相息，于是，最后的结果是，他们共享了生命，变成了一副人不人鬼不鬼的样子，最后的最后，甚至他们，只能在夜间出现了。” 　　“可笑啊可笑u2026u2026你现在还在想这些吗?”老者的声音又起了变化，“年轻人，你不觉得，其实你和当年的灵者很像吗u2026u2026有些东西，不要去触碰u2026u2026” 　　“喔喔喔——” 　　鸡再鸣，头脑忽然有些发晕，只是老者的话语再也听不清楚，再睁眼时，已是黎明，脑海中最后的印象，只是老者重重的叹息声。 　　空旷的土地，杂乱的土石，一切似乎都从未存在过。 　　老者的话让我沉思，不过，人在年轻时，有梦想，就该去拼搏，不是吗? 　　至于他们知道的我的秘密u2026u2026大概是吧。 　　李庄的清晨有着异样的宁静，纵然有炊烟袅袅，但这里，依旧能够远离城市的喧嚣。 　　突然又想起了来李庄之前听说的—个故事： 　　在李庄，夜里总会有人给路人引路，只是灯，却没人看得到。故意抑或其他，这是不是又是另外一种救赎呢? 　　只是那夜间充满微黄灯光的小屋，似乎再也没有人看到过了。

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迭戈 阿亚拉 罗纳尔多进攻 88 62 91防守 42 91 30身体平衡 81 81 87体力 81 78 65速度 85 75 83启动 84 74 89反应 88 84 90敏捷 81 79 75带球精度 81 72 88带球速度 82 71 85短传精度 72 72 76短传速度 72 76 75长传精度 70 74 74长传速度 68 69 71射门精度 88 62 96射门力量 85 79 85射门技术 91 68 93任意球精度 67 60 70弧度 65 55 71头球精度 86 85 70弹跳力 84 99 69技术 84 75 90进攻欲望 88 60 92精神力 80 90 74门将技术 50 50 50配合能力 80 83 69状态稳定度 7 7 2逆足精度 7 5 7逆足频度 6 4 7受伤倾向 B B C迭戈是站位抢点 前插 射手 擅长单刀 点球手 一脚出球位置是CFH SS阿亚拉是盯人和后防统帅 位置似乎CB CWP罗纳而多是盘带突破 盘带控球 射手 擅长单刀 反越位 点球手 一脚出球 外脚背 位置是CF 那么累 加点分吧~~~~

吃：给你推荐几个地方，1：海鲜，别去旅游景点的，那里黑，去市里规模大的。 阳光大厦的海鲜自助也是不错的选择。 2：韩食，青瓦台，李朝牛尾 不要问为什么了，去了保准你不白来威海。住：国际海水浴场有家自由左岸青年旅舍。 四层的小别墅，相当有特色，如果是夏天去还可以在他们的露天酒吧自助烧烤。离沙滩十多米，价格也不贵。以前同学来威海我都安排住那里的，干净卫生，价格不高，推荐！如家快捷酒店也很好，不过要去威海公园的那家，干净便宜。游：威海的景点不算很多必须要去的有：刘公岛 ；成山头；想泡温泉就去天沐温泉；现在来的话，可以去天鹅湖看天鹅，美的很啊！第一天：威海刘公岛第二天：成山头，天鹅湖，都在荣成第三天：温泉游多多旅行网独家提供，中国旅游攻略第一网站，出门旅游 找攻略 找旅馆 首选游多多旅行网

　　鬼 故事 是民众自发地口头创作和传承的幻想故事之一,下面这些是我为大家推荐的几篇民间短篇鬼 故事大全 。 　　民间短篇 鬼故事 大全1：小女孩遇鬼 　　今年暑假回乡下，听说一个小女孩遇鬼的事。 　　小女孩家就在我家屋后不到二十米远的一个高坡地上，单门独户，其屋后隔着一片竹林，就是我们这个家族的祖坟山。 　　小女孩现在读初三，正是花季，虽然可能胆子小，可也不至于疑神疑鬼的。但是今年上半年某天开始，晚上睡觉时总是喊：“怕。” 　　她爸妈问她怕么事，她说看到了一个女人，长长的头发，站在她的房里，一睁眼就看到，一闭眼那女人就过来扯她的被子;把头埋在被子里，那女人就钻到被子里来扯她的手。 　　她爸从不信邪，叫她再看到那女人时喊他过来。而他过来了又有啥用呢。他根本就看不到，抡起锄头朝空中乱挥一气，女孩还是吓得躲到他怀里缩成一团直哭。 　　不知过了几天，女孩白天也吓得发抖，估计是白天也看到了。 　　后来冇得办法，怕女孩出事，他爸妈找了本村的一个“奇人”来做法。那个“奇人”年纪比我父亲还大几岁，但按辈份我该称他为哥。 　　这个老大哥说，有一男一女两个冤魂漂进了她的屋，需要送他们走。然后就是剪两个纸人，加点香，烧化。 　　后来暑假的时候，又见到了小女孩。还好，跟以前一样活泼可爱。 　　民间短篇鬼故事大全2:阴车捉鬼 　　这是是司机朋友讲的一个故事，是他单位一个同事的事儿，那同事和他一样大，也是个小伙子。 　　却说这司机和同伴两人开了一夜的车，早晨都有些困了，但仍强打精神行驶在高速上。 　　忽然前边三、四十米处，一个挑着一篮子鸡蛋的农村老头横穿马路，他当时觉得纳闷，怎么全封闭的高速公路上会有农村老头?便准备减慢车速，从旁边绕过去。 　　突然，那个老头竟然扭脸向他看来，还笑了一下，虽然隔着几十米，但他看得清清楚楚，立刻觉得心头发毛。 　　这时他的同伴回过神来了，大喊：“停车!快停车。” 　　他便也不顾危险，在高速上刹了车。就在这一瞬间，身边一辆大卡风弛电掣地从旁边窜了过去，转眼就将老头撞翻在地，卡车也翻倒了。 　　两个人头皮发麻地看完这一切，愣了一会儿，才回过神来，忙开车绕开事故现场，落荒而逃。 　　经过的时候，司机扭头看了一下，老头和卡车里的司机都一动不动地趴着，大概都死了，一篮子鸡蛋打翻在地，流了一片黄白色的汤。 　　开了十多里，到了收费站，才见到穿制服的交警，他们忙 报告 了这件事。 　　交警便让他们带路回到了那个地方。 　　但，奇了!刚才的事故现场什么都没有，老头，卡车，都踪迹全无，连一地的碎鸡蛋都了无踪影! 　　他们傻了眼，刚才真真切切看见了的啊!为这事，他们还被带到收费站盘问了半天。　　后来有老司机说，当时如果那个司机不是当机立断刹住了车，那么翻车的就是他们了。 　　而那个突然窜出的卡车，是阴间派出来捉鬼的车，在关键时刻完成了任务。 　　民间短篇鬼故事大全3:玉佛 　　很多人都有戴玉的习惯，而且据说玉器带的时间越长就越有灵性。民间都 传说 玉还可以给佩戴的人挡灾。告诉我这个事情的是老公单位的小李，这件事情就真实的发生在他一个战友身上。 　　他战友是上海松江人，是小李以前当兵时的队长，就叫他队长吧。 　　队长从小戴着一块家里祖传的玉佩。玉佩是一个卧佛的造型，据说在他们家传了好几代了。 　　事情发生在几年前，有天队长坐车从松江到市区来玩。从郊县到市中心的车就停在黄陂路那里吧，如果我没记错的话。 　　因为那里离淮海路很近的，他就边看边走的来到了东方美莎门口。这时候已经到了傍晚，华灯初上淮海路上霓虹灯五光十色非常好看。因为难得到市区来玩，所以队长光抬着头看灯了，压根没注意到一辆车从他印面驶来。也是一眨眼的功夫，队长就被这辆车给撞了个正着。其实司机当时已经踩刹车了，但还是撞了上去。队长被结结实实的撞在了地上。可是没想到前面还有辆出租刚刚载了客正在倒车，司机根本没注意地下还躺着个人，就在所有人都没反应过来的时候，出租车的后轮已经从队长的胸口压了过去。司机还以为压在了上街沿上。又倒了一把，结果车轮又在队长的胸口碾了一下。 　　这时旁边的群众连忙大声叫司机，压死人了压死人了。出租车司机这才发觉赶紧停车，下了车一看队长一动不动的躺在地上。周围的人都以为他肯定死了。马上张罗着打110、120。 　　可是没想到躺在地上的队长突然动了一下，他缓缓的支撑着站了起来把周围人都吓呆了。 　　旁边还有人说：“回光返照了。 　　而他很快就跌倒了。但是没多久他又站了起来，还拍了拍身上的土。站在边上的两个司机都看呆了。 　　他对那个司机说：“我没事情了。你们走吧。” 　　司机说：“不要吧，你还是去医院检查一下比好。” 　　队长说：“不用了我自己有数的。” 　　说完还朝自己的胸口拍了拍表示自己真的没事，然后他就走了。 　　周围的行人议论纷纷，司机不停的说：“今天遇到好人了，遇到好人了。” 　　当晚队长回到家把经过告诉了家人，家里人非常担心他会不会有内伤。 　　队长还笑笑说：“没事的，我自己知道，真的没事情。” 　　他老母亲就让他脱掉衣服看看，没想到就在脱衣服的时候，他祖传的玉佛竟然断了半截，而且断的地方就是他被车轮碾过的胸口位置。 　　这时玉佛的一半掉在地上，一半还戴在他脖子上。再看他胸口，被车压过地方呈现出隐隐的酱紫色。 　　他母亲看到了连忙说：“阿弥陀佛，菩萨保佑。这次你没事，是菩萨帮你挡了一劫啊。这块玉你以后就不要戴了。” 　　当时就叫队长就把玉取了下来。 　　可是第二天，队长起来告诉母亲说因为从小戴惯了，没有戴着玉连觉都睡不着。所以还是找人把玉粘好继续戴。当天他就找到一个做玉的店，找工匠把玉粘了起来，还把接口的地方打磨了一下，不仔细看还真看不出来是接过的。 　　就这样他又将玉重新戴了起来。 　　过了几天，他下班回家的时候，家里人都等着他回来吃饭。可是左等右等都不见他回来，就打电话去他们单位去问。但是单位里的人说看见他早走了。打到同事家，同事也说跟他一起下班到了岔路口才分开的。 　　这时家里人急了，担心他在路上出什么意外，马上就叫了左邻右舍帮忙去找他。才走出家门口没多远。队长女儿就看到自己父亲在家门口不远处的一块油菜地里转圈子呢。而且油菜花地都快给他踩平了。 　　女儿马上大声的喊：“爸爸，爸爸。” 　　这时队长才如梦初醒。他跟家人说他6点下班就回家了。可是到了门口竟然找不到路了，也就是说他在菜地里转了将近4个小时。当晚他在家人的陪同下回了家，吃了晚饭准备冲个澡再睡。没想到脖子上带着的玉佛又掉了下来，而且这次是摔的粉碎。原来是穿玉佩的那根红绳子断了。这次是彻底碎了，补也补不起来了。 　　队长非常恼火，但是也没办法。他媳妇觉得这是个非常不好的兆头，就告诉了队长的奶奶。队长的奶奶年级很大了。 　　她对队长的老婆说：“你最好有心理准备，可能他的阳寿要尽了。” 　　果然没出一个星期队长就过世了。他晚上躺下去然后就再也没有醒来。 　　当时小李告诉我的时候，我就问他是不是车祸内伤死的。小李说你想到的他家人也到了呀。可是到医院做的报告显示他的内脏器官完好无损，属于正常死亡。 　　他死的时候才40岁不到。因为大家在队里关系比较好，小李去参加他丧事的时候，队长的家人告诉他整件事情的经过。

安德玛低端篮球鞋，管真假，穿着玩去呗

德意志联邦共和国位于欧洲中部，东邻波兰、捷克，南接奥地利、瑞士，西接荷兰、比利时、卢森堡、法国，北接丹麦，濒临北海和波罗的海。德意志联邦共和国，简称德国（两德统一前简称西德或联邦德国），该国由16个联邦州组成，首都为柏林，领土面积357167平方公里，以温带气候为主，人口约8267万人，是欧洲联盟中人口最多的国家，以德意志人为主体民族。德国是一个高度发达的资本主义国家。欧洲四大经济体之一，其社会保障制度完善，国民具有极高的生活水平。以汽车和精密机床为代表的高端制造业，也是德国的重要象征。扩展资料：德国的地理环境：地形地貌德国的地形变化多端，有连绵起伏的山峦，高原台地，丘陵，有秀丽动人的湖畔，及辽阔宽广的平原。整个德国的地形可以分为五个具有不同特征的区域：北德低地、中等山脉隆起地带、西南部中等山脉梯形地带、南部阿尔卑斯前沿地带和巴伐利亚阿尔卑斯山区。气候特征德国处于大西洋东部大陆性气候之间的凉爽的西风带，温度大起大落的情况很少见。降雨分布在一年四季。夏季北德低地的平均温度在18℃左右，南部山地为20℃左右；冬季北德低地的平均温度在1.5℃左右，南部山地则为-6℃左右。参考资料来源：百度百科-德国

烟台威海五日游攻略？到了威海，不知道你要住在哪里，你可以到火车站汽车站之间的公交车站坐12路（起始站），到火炬大厦站（12路终点站）下车，无人售票，票价一元，打听下国际海景城，到了海景城，国际海水浴场也就已经在你的眼前了。在那里有个自由左岸青年旅舍^_^网上名气很大，而且靠近海景城，学生的话可以到那里，住宿两人一天的预算是100元，5天的话就是500元。吃饭可以在那里自己做着吃，早餐都有提供，而且很便宜，两个人按照一天50来算，5天250元，自己做的话更便宜，夏季的晚上一般都有左岸在外面都有活动，也可以去感受下氛围景点的话，推荐免费的有：国际海水浴场，韩国城(如前面网友所说的，东西比较贵，会讲价的可以，不会讲价的当逛商场了~呵呵)，幸福门消费的景点：刘公岛（船票110，50的船票，其他的是进岛的通票，听说通过威海自助游服务网，可以省不少钱，具体你从网上咨询下吧），成山头，海驴岛，成山头和海驴岛最好一起游吧，呵呵，你们来的话正好是旺季，省钱之道：拼车去。票价不是weihaibeach 所说的价格，票价已经涨了，成山头风景区150，海驴岛风景区100元，两景区联票220元，加上拼车60元，一共的价格是280元，通过威海自助游服务网能便宜50，也就是230元。第一天攻略的话我推荐这样走：住在国际海水浴场附近，休息一晚。国际海水浴场玩一天，免费的不玩白不玩，呵呵，别忘了去在自由左岸西侧的礁石海岸，我感觉那里更有感觉，有木栈桥，如果是情侣的话再适合不过了第二天考虑到地理位置（刘公岛，幸福门，韩国城靠的比较近），花一元坐7路，先到幸福门（登顶花钱，传说可以看韩国，本人没去过），后用买的船票去刘公岛，假设通过威海自助游网买到90元的票，两人费用：180元游玩合计：2（去的公交费）+2（回的公交费）+180*2=364元顺便了解下韩国城位置，为后来做准备。这天应该没时间去的。第三天海驴岛和天尽头——成山头，需要整整一天，成山头风景区150，海驴岛风景区100元，两景区联票220元，加上拼车60元，一共的价格是280元。通过威海自助游服务网，便宜50，也就是230元。两个人的游玩费用：230*2=460 元第四天好好休息一下了，去购购物吧，呵呵，到韩国城逛逛，一定记得要买东西要讲价，要不被宰可别怪我，如果不买，单纯参观的话，那此项消费就是0元，回到住处休息下，在海边散散步，拣下贝壳。准备下第五天返程了如果想在外面腐败的话，给顺便推荐下吧，李朝牛汤，两人消费少要100元吧，高的话自己看着办吧，呵呵神龟馅饼，一顿的消费，估计30差不多

我了解很多恐怖故事，以下是九个超恐怖的短篇鬼故事：《献身》：有一个女孩子发现了一只小狗，但当她越接近小狗，她越发现小狗似乎是从坟墓里出来的。《黑暗》：有一个人在自己家里被困了，他点燃了所有的蜡烛，但他发现他燃尽的蜡烛总是比新点的多。《安静的房子》：一对夫妻买了一栋房子，但他们发现他们听不到任何声音，最后他们发现整个社区都已经被闹鬼了。《镜子》：一个女孩子在镜子里看到了自己的另一面，但她的另一面似乎想要取代她的生活。《荒野之声》：一名徒步旅行者在荒野中遇到了一个迷路的女孩子，但他发现女孩子并不是人类。《黑衣女人》：一个男孩子在街上看到了一个黑衣女人，但当他回头再看时，女人已经消失了。《深夜咖啡馆》：一个人去一家深夜咖啡馆，但他发现所有的客人和工作人员都是鬼。《长寿之家》：一个老人居住在一家寿命长久的医院里，但他发现医院里的一切都不像是表面看起来的那样。《血腥玛丽》：一群朋友在玩“血腥玛丽”的游戏，但他们并不知道这个游戏的真正含义和后果。

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--库尔菲斯滕大街中央火车站一带的前西德繁荣大道库尔菲斯滕大街是柏林的商业和购物中心，百货公司和商店林立，极为热闹。中央火车站外是柏林动植物公园。--菩提树大街是以往东柏林最著名的大街，由勃兰登堡门沿大道东走至亚历山大广场，全长1.5公里，街道两旁全是古典建筑物，如洪堡大学、德国国会大厦、德国历史博物馆和圣母教堂等。--勃兰登堡门位于柏林中心区，为庆祝普鲁士王朝经过多年战争，终获得德意志联邦国统一而兴建，是国家统一的标记。东、西德分裂时期，所筑起的柏林围墙便是以这里为起点，是那时进出东、西柏林的通道，如今东、西德合并，它自然成为了国家统一的最重要标记，勃兰登堡门本身也是一件精致的艺术品，门上雕塑着4匹骏马，骏马拉着两辆战车，车上站着胜利女神，栩栩如生。--苏兵纪念碑位于勃兰登堡门前的大道上，二次世界大战时，盟军攻入柏林，这是为纪念第一个苏兵进入勃兰登堡门而建的。--波茨坦广场二次大战前这里是全欧洲最热闹的大型广场之一，后来东、西柏林被分隔，这一带亦被分隔了。统一后，这一带又成为了首都的新发展中心，渐渐、恢复昔日的繁荣。慕尼黑德国南部最重要的城市，大都市气息十分浓厚，每年9月底至10月间举行的啤酒节狂欢豪饮，至今已成了一年一度的世界盛事，每年都吸引大批游人涌至。--马利安广场位于市中心，四周古雅建筑物林立，是市内居民和游客休憩的中心点，不时会有街头艺人在这里表演。--新市政厅位于马利安广场一带，建于1909年，属歌德式设计，外型古典，钟楼上有活动音乐木偶，每天上午11：00后，会定时报时和表演，大批游客会闻风而至，在那里等候。--圣母大教堂位于马利安广场一带，建于1488年，是慕尼黑重要的标志之一。歌德式设计的教堂共有两座分别高99英尺及100英尺的塔楼。内部异常宏伟，历代主教和王爵的陵寝也置于其内。游人可登上南塔眺望，慕尼黑的市容一览无余。--皇宫位于麦士瑟广场之上，那是一整列建于16世纪至19世纪的皇宫建筑，包括有主宫殿、马克西米宫、节日大厅、皇宫博物馆、珍宝馆、埃及艺术馆、州立货币收藏馆等10个展馆，展出1250多件皇室成员的珠宝首饰，极近华丽。--奥林匹克公园1972年奥运会的举行场地，现改成公园，其内的体操馆、游泳馆、足球场馆等，均以高科技的钢缆和玻璃纤维制成，今日看来依然觉得前卫，当年就更可想而知了。另还有百多公尺高的高塔，游人可登临其上，鸟瞰全市景色。--宝马车博物馆位于奥林匹克公园隔邻，是德国著名的宝马车厂总部，设有一个博物馆，展示历年来宝马车厂的汽车发展史，以及各款古典和前卫汽车，并在现今的环境展出，有影像、声控和机械臂的示范等。--二次世界大战集中营位于慕尼黑郊区，是当年希特勒囚禁大量犹太人的集中营。原来的建设已大多被毁，只剩下外墙、大闸和火葬场，现时供人参观的两座营房皆为后来重建的，内部陈列了不少当年的珍贵图片，展示了当年犹太人的受虐情况，令人不忍卒睹。场外操场上还有一个状似骷髅骨组成的大型雕塑。--水晶宫位于市北，始建于1664年，是巴伐利亚统治者的夏季离宫，宫殿以一块块方形结构连接而成，包括主皇宫、画廊及博物馆，并有[中国之阁]，陈列了不少来自中国的珍贵瓷器，以及一个路易一世筹建的[美女画廊]，共有36幅美女肖像，美艳动人。外围有花园园林和喷泉，布置得十分精致。--新天鹅堡在富辛市郊5公里的斯华根小镇，建于1886年至1892年间，是巴伐利亚过往洛域二世的堡垒，建于半山腰之上，遥望透彻如镜的霍更丝湖，明净如一个天鹅湖，其外墙全以白色大理石建造，仿似童话世界中的堡垒，美国迪斯尼乐园的堡垒即依此设计。内部有不少厅房，包括殿堂、教堂、图书馆、造币厂、室内瀑布、人造洞穴，花园，其中有不少是为了欣赏歌剧而设的。--旧天鹅湖位于新天鹅湖不远处，建于1886年，呈黄色，也是洛域二世的堡垒，但没有新天鹅堡漂亮和有名。汉堡汉堡的起源可以追溯到公元9世纪，是个高度工业化的国际大城市，既繁华现代，又有乡村的景色和气息，是德国"通往世界的大门"。说汉堡是一个水上之城，一点也不夸张。旅游者们来到这里，仿佛置身于意大利的威尼斯或是荷兰首府阿姆斯特丹。而事实上汉堡的桥可比威尼斯多！这里河岔纵横，蜿蜒不绝。在阳光明媚的日子，坐上摇椅，穿梭于连绵的波光中，也穿梭于汉堡的历史和现实：仓储之城的古风，汉堡港的繁忙，圣保利泊桥的缠绵和Blankness的悠闲，无不使人留连忘返。法兰克福坐落在美因河畔的法兰克福是德国的金融中心、博览会城市和通向世界的空中门户及交通枢纽。同德国的其它城市相比，法兰克福更具有国际大都会的气派。作为世界金融中心之一，法兰克福市的银行区摩天建筑群鳞次栉比，令人目不暇接。法兰克福不仅是世界的一个金融中心，同时它又是一个具有800年历史传统的著名的博览会城市。每年要举办约15次大型国际博览会，如每年春夏两季举行的国际消费品博览会；两年一度的国?quot;卫生、取暖、空调"专业博览会；国际服装纺织品专业博览会；汽车展览会；图书展览会；烹饪技术展览会。--罗马广场位于市中心的广场，是法兰克福现代化是市容中，唯一保持中古风貌的地区，附近有不少古典建筑。包括旧市政厅，建于15世纪，是一座气派雄伟的歌德式建筑，其阶梯状的人字形屋顶，别具特色，内部挂满了历代帝王的肖像画；帝国大教堂，曾是罗马帝国国王加冕的圣地；另有巴特罗缪教堂，是法兰克福一座标志性的教堂，已有600多年历史，教堂的尖塔高100公尺，十分雄伟，可登上塔顶极目四方；并有罗马厅和圣古拉旧教堂等。--歌德故居位于市中心，德国近代著名诗人及剧作家歌德于1749年在这里出生，其内展出了不少诗人用过的物品，如诗人亲笔撰写的文章手稿等。楼下有厨房用具、家具、工作室等；2楼是大厅和琴房；3楼是歌德的出生地，有房间、衣柜等；4楼是歌德的书房，名为[诗人坊]，他就在这里完成他的《浮士德》和《少年维特的烦恼》等著名作品。海德堡德国西南部小城，毗邻莱茵河的支流尼卡河，是德国著名的大学城，气氛宁静，曾造就歌德等伟大诗人和艺术家的创作灵感，有种隔绝烦嚣的文化气息。--海德堡城堡位于市东面的山岗之上，尼卡河畔，建于13世纪，是市内最重要的观光点。全座古堡以红砖筑成，包含歌德式、巴洛克式和文艺复兴式三种建筑风格，宏伟非常。城堡包含有防御城墙、寝宫、宫室，陈列了不少古物，其中大桶堂陈列了世界上最大，容量达221276公升的大酒桶，游人登临古堡，可以俯瞰海德堡河岸两旁的古雅景色，令人心醉。--海德堡大学建于1386年的海德堡大学是全市的灵魂，大学广场一带，有不少建于18世纪的古典大学建筑物，并有一所以前用来囚禁犯规学生的学生监狱。徜徉于古建筑群中，有一种走进中世纪文化殿堂的感受。--哲学家之路从市集广场经过古桥到尼卡河另一边的北岸山丘，山上有一条长长的散步小径，景色异常优美，当年海德堡大学不少成名的学者均曾在这里散步，著名哲学家黑格尔在海德堡大学任教其间，就常和同事、朋友来这里散步，探讨学术问题，名副其实是一条哲学之路。波恩波恩是展开在莱茵河畔的一片朴实无华的大学城，规模不大，但自从第二次世界大战后，作为德意志联邦共和国的临时首都发展非常快。不过对于音乐爱好者来说，把波恩定义为贝多芬的出生之地，听起来会更顺耳一些吧。--贝多芬故居纪念馆贝多芬的故居位于火车站不远处的波恩街20号，公元1770年，著名音乐巨匠贝多芬就在这里出生，3层高的纪念馆展出了音乐大师的家史、教堂洗礼证书、半身像、用过的物品、钢琴、乐谱手稿和纪念品等。科隆位于德国西部，莱茵河中游左岸，是德国著名的海港，其历史悠久，于公元前38年为罗马人所建，现在却是一个充满朝气的现代化都市。--科隆大教堂位于科隆火车站旁，是科隆最重要的标志，举世闻名，是世界第四大教堂，建筑宏伟异常，市内差不多每一个角落都能看到它。科隆大教堂始建于1248年，后来停建，至1880年才告完成，属歌德式建筑，最突出的标记是其双塔式建筑，高约157公尺；黝黑色的墙身满是精致的雕塑，使它显得充满特色。内部有高耸精致的拱廊性屋顶，高大石柱、彩窗、壁画、雕塑等，美轮美奂。游人可登临97公尺高的了望台俯瞰科隆市。另外，教堂前的大广场如今成了咖啡座林立、街头艺人聚集的热闹地方。--罗马德国博物馆位于教堂的南侧，陈列了1世纪至5世纪罗马时期的各式工艺品和出土文物，还有油画和现代画及纪念碑等展品。其中还包括描绘希腊酒神的马赛克瓷砖地板，面积达74平方公尺，相当壮观，被视为是旷世杰作。

问题一：去德国旅游什么季节最好？德国旅游的最佳季节是什么时候？ 夏季是德国的最佳旅游季节，在每年的6月和7月天气热，每天都能玩到很晚，如果想去德国旅游，真正玩好一点，建议最好不要跟团，现在跟团旅行体验太差了，又是自费项目，又是购物点，又是赶行程，现在真正会玩的人，都是选择定制旅游，定制旅游是现在的一种新的旅游方式，可以根据自己的需求和想法来定制一个行程，如果自己弄不好，你不妨找那种旅行定制平台来设计，之前我们去德国玩是找的小蝌蚪旅行定制平台设计的，还挺不错的，每天去哪玩，怎么玩，都写的清清楚楚的，包括怎么乘车，乘什么车都写的很详细，而且还配了翻译机给我们用，服务还挺用心的。 问题二：去德国的最佳时间 德国位于大西洋和东部大陆性气候之间的凉爽西风带，四季分明、温和湿润。到这里旅行，一般只要准备华北的适用服装就可以了。夏季的白天很热、晚上较凉，需要带上毛衣；冬季北部气候较暖湿，甚至比南部温暖。冬季(1月)平均温度在l．5―6度之间；夏季(7月)则在18―20度之间。一年四季均有降水。属于例外的是上莱茵河谷、上拜恩和哈尔茨山区。相比之下，上莱茵河谷更加温暖潮湿；上拜恩经常可以感受到从阿尔卑斯山吹来的燥热风；哈尔茨山区山风刺骨、夏凉冬雪。 德国主要城平均气温 德国主要城平均气温　1月2月3月4月5月6月7月8月9月10月11月12月柏林2381319222423191373-3-30481214131062-1汉堡2381318222323191374-3-30371113131062-1法兰克富35111620232524211484-2-126913151411730慕尼黑1391418212323201372-6-5-237101211840-4 注：上格为日间平均气温，下格为夜间平均气温。 单位：摄氏度 以上四大城市均有一定代表性：柏林位于东部，汉堡位于北部，法兰克富位于中西部，慕尼黑位于南部。 　德国最佳旅游时间为秋冬季节。4月份是德国气候最不稳定的时间，常有大风、暴雨、大雪等恶劣天气发生。而7、8月份，是大多数德国人的夏季休假时间，除了警局、公立医院等特殊行业，大多数行业都放假休息，因而不适合外国游客前去旅游。而秋冬季节前往德国，将有机会参加规模盛大的慕尼黑啤酒节、圣诞节，饱览真正的德国风情。 问题三：去德国旅游的最佳时间 德国位于大西洋和东部大陆性气候之间的凉爽西风带，四季分明、温和湿润。到这里旅行，一般只要准备华北的适用服装就可以了。夏季的白天很热、晚上较凉，需要带上毛衣；冬季北部气候较暖湿，甚至比南部温暖。冬季(1月)平均温度在l．5―6度之间；夏季(7月)则在18―20度之间。一年四季均有降水。属于例外的是上莱茵河谷、上拜恩和哈尔茨山区。相比之下，上莱茵河谷更加温暖潮湿；上拜恩经常可以感受到从阿尔卑斯山吹来的燥热风；哈尔茨山区山风刺骨、夏凉冬雪。 德国主要城平均气温 德国主要城平均气温　1月2月3月4月5月6月7月8月9月10月11月12月柏林2381319222423191373-3-30481214131062-1汉堡2381318222323191374-3-30371113131062-1法兰克富35111620232524211484-2-126913151411730慕尼黑1391418212323201372-6-5-237101211840-4 注：上格为日间平均气温，下格为夜间平均气温。 单位：摄氏度 以上四大城市均有一定代表性：柏林位于东部，汉堡位于北部，法兰克富位于中西部，慕尼黑位于南部。 　德国最佳旅游时间为秋冬季节。4月份是德国气候最不稳定的时间，常有大风、暴雨、大雪等恶劣天气发生。而7、8月份，是大多数德国人的夏季休假时间，除了警局、公立医院等特殊行业，大多数行业都放假休息，因而不适合外国游客前去旅游。而秋冬季节前往德国，将有机会参加规模盛大的慕尼黑啤酒节、圣诞节，饱览真正的德国风情。 问题四：去德国旅游的最佳时间是几月 五彩缤纷的秋季和繁花奋力绽放的夏季是德国的最佳旅行时间。 从4月初到10月末，尤其是6，7两月，欧洲纬度高，每天都能玩到很晚，而且气候也不会很热，一般最热就30度出头。 春天的德国，还有着冬季的些微残雪，植物还未来得及尽数吐绿，加上春寒料峭，自然不能算是观感和体感最佳的季节； 冬天的德国，温度最低可达零下十几度，日短夜长，日子最短的时候下午4点左右天就黑了，不过冬天也自有冬天的无限乐趣，比方说在德国无处不在的雪夜里的圣诞市场！ 建议你淡季出行，旅行更加实惠，关于德国定制旅行的旅游资讯可以查看这里：dwz/Wuerzhilv 问题五：什么时候去德国旅游最好玩 德国纬度较高，但冬季无极寒，夏季无高温，四季分明，气候舒适宜人。 春季（3~5月）德国春季仍然比较寒冷，有时还会下雪，但进入4 月后气温明显上升，5 月温度宜人，适合旅行，平均气温10 ～ 20℃ 夏季（6~8月）夏季是德国的最佳旅行季节，蓝天白云，适合户外旅行，平均气温20 ～ 25℃ 秋季（9~11月）秋季是德国色彩最鲜艳的季节，秋高气爽，平均气温10 ～ 20℃ 冬季（12~2月）冬季德国寒冷、有大风，几乎无晴天，白天时间短，不经常下雪。适合感受圣诞节的气氛或者是室内活动，平均气温0 ～ 5℃ 5月至9月是旅游旺季，碧空如洗，暖意十足，特别适合户外活动。3月至5月以及10月天气依然很好，不同的是旅行者相对较少，可以充分享受宁静的时光。 更多德国旅游资讯可以查看这里：dwz/wuerzhilv 问题六：德国旅游最佳时间是什么时候 最适宜去德国旅游的时间在5月到10月，但具体的天气和气温也还是要勤查天气预报为准。如果想冬天来德国，推荐12月的圣诞市场季节和1月的打折季。其他月份气温低自然风景也差，不是很推荐。 德国的冬天比较长，10月末11月都有可能开始下雪，气温落到10℃以下。降雪集中在1、2月份，气温在0℃左右，极端最低气温会达到零下10℃以下，山区更冷。4月以后开始回暖，鲜花开放，5月山间树绿。德国的夏季很短，在6、7月间通常只有两三个星期会有炎热的感觉，极端最高温度达到30℃以上。9、10月份气温宜人，到10月下旬，树叶会呈现不同的颜色，是秋天特有的绚烂。 需要定制德国旅行，必须找定制旅行的公司才可以得，旅行社一般操作不了，更多关于德国定制旅行的资讯可以查看这里：dwz/Wuerzhilv 问题七：几月份去德国旅游最好?德国旅游最佳月份是什么时间？ 德国最佳旅游月份在5月到10月，但具体的天气和气温也还是要勤查天气预报为准。如果想冬天来德国，推荐12月的圣诞市场季节和1月的打折季。德国的纬度与我国东北地区相当，南靠阿尔卑斯山脉，北临北海，属温带大陆性气候。整体气候较冷，全年降水平均。德国的冬天比较长，10月末11月都有可能开始下雪，气温落到10℃以下。降雪集中在1、2月份，气温在0℃左右，极端最低气温会达到零下10℃以下，山区更冷。4月以后开始回暖，鲜花开放，5月山间树绿。德国的夏季很短，在6、7月间通常只有两三个星期会有炎热的感觉，极端最高温度达到30℃以上。9、10月份气温宜人，到10月下旬，树叶会呈现不同的颜色，是秋天特有的绚烂。德国各地的气候相差不大，靠近阿尔卑斯山区的地方因为海拔高，温度更低。总体而言，德国天气变化多端且无常。一天中可能有几次下雨又天晴的过程，前后两天温差会达到10℃，6月至8月间也会出现十几度的天气。天气晴好时，昼夜温差也比较大。 问题八：去德国旅游的最佳时间是几月 德国纬度较高，但冬季无极寒，夏季无高温，四季分明，气候舒适宜人。 春季（3~5月）德国春季仍然比较寒冷，有时还会下雪，但进入4 月后气温明显上升，5 月温度宜人，适合旅行，平均气温10 ～ 20℃ 夏季（6~8月）夏季是德国的最佳旅行季节，蓝天白云，适合户外旅行，平均气温20 ～ 25℃ 秋季（9~11月）秋季是德国色彩最鲜艳的季节，秋高气爽，平均气温10 ～ 20℃ 冬季（12~2月）冬季德国寒冷、有大风，几乎无晴天，白天时间短，不经常下雪。适合感受圣诞节的气氛或者是室内活动，平均气温0 ～ 5℃ 更多关于德国定制旅游资讯可以查看这里：dwz/wuerzhilv 问题九：德国旅游最佳时间 四季的德国都是很好的旅游地，但大多旅行者都在5―9月之间去德国，那时天空总是晴朗，适宜户外活动。啤酒园和咖啡馆24小时营业；户外竞赛和节日使得城市与村落都生机勃勃；徒步旅行、骑自行车都是旅行的运动。 不过，不论在哪个月份都有可能下雨。 在德国（3―5月以及10―11月）游客相对较少，而天气却出奇的好，在4―5月间，当鲜花和果树都含苞欲放。天气是温和而晴朗的。进入秋天后风和日丽的宜人气候也并不稀奇。 除冬季运动外，11―3月初之间的活动大多集中于文化和城市生活，在这几个月间，天空常常显得阴沉，而温度经常降到零下。此外，旅行者减少，景点排队的队伍也变短（除冬季旅行胜地外）。一定要带上足够多的衣服，并且记住只有6―8小时的日照。在12月，太阳在下午3点30左右就落山了。 滑雪季节通常最早开始于12月中旬，在新年过后进入高峰期，而在3月雪融初始之时结束。 德国旅行时间基本就是这样了，更多德国旅游的资讯可以查看这里：dwz/Wuerzhilv 问题十：几月份去德国旅游比较好 德国纬度较高，但冬季无极寒，夏季无高温，四季分明，气候舒适宜人。 春季（3~5月）德国春季仍然比较寒冷，有时还会下雪，但进入4 月后气温明显上升，5 月温度宜人，适合旅行，平均气温10 ～ 20℃ 夏季（6~8月）夏季是德国的最佳旅行季节，蓝天白云，适合户外旅行，平均气温20 ～ 25℃ 秋季（9~11月）秋季是德国色彩最鲜艳的季节，秋高气爽，平均气温10 ～ 20℃冬季（12~2月） 冬季德国寒冷、有大风，几乎无晴天，白天时间短，不经常下雪。适合感受圣诞节的气氛或者是室内活动，平均气温0 ～ 5℃ 要想深度游玩德国，推荐你自由行或者自驾游，那样旅游体验更好，关于德国旅游的资讯可以查看这里：dwz/Wuerzhilv

本场阿德之战，马拉多纳在技战术方面上彻底败给勒夫，德国队4球大胜的首要功劳要归到完美的防守上，正是德国队无懈可击的防守扼杀了阿根廷最引以为傲的进攻，从而占据主动打破对手。本场比赛，德国队从前场就开始逼抢，两个边锋穆勒和波多尔斯基在防守时都回撤的很深，双后腰施魏因斯泰格和赫迪拉更是不遗余力的满场飞奔，让德国队在后防线前就组织起多道防线。同时，德国人踢的并不冒进，很多时候都是等待梅西等人自己进入“包围圈”，让他们在多人包夹中自乱阵脚。 反观阿根廷，缺少了坎比亚索这样的中场铁闸之后，阿根廷的中场明显失去了控制力。马斯切拉诺双拳难敌四手，迪马里亚和马克西更是对防守毫无贡献。再加上前场的梅西、特维斯和伊瓜因被德国队防死，阿根廷在中场陷入死局。世界杯前马拉多纳毫无理由的弃用坎比亚索和萨内蒂，而勒夫在巴拉克受伤后带上了专职防守的赫迪拉，这两个选择决定了本场比赛的防守基调，最终的结果也是马拉多纳完败于勒夫。 在进攻上，马拉多纳还是过分的依赖梅西，而巴萨灵魂在国家队的表现又是一场灾难。阿根廷不是巴萨，没有中场哈维、伊涅斯塔等人的支援，梅西在阿根廷形单影只，单打独斗的他不能发挥出更大作用。此外，当比分落后时，阿根廷只能依靠特维斯、伊瓜因和梅西的个人能力，中场的组织力几乎为零。在需要梳理中场的关键时候，马拉多纳否定了自己此前的爱将贝隆，实在让人摸不着头脑。 反观德国，在进攻上勒夫果断的要求克洛泽、穆勒、厄齐尔等人轮番冲击阿根廷右后卫奥塔门迪，德国队的攻势也多是从这个方位打进。德国队的4个进球全部是从奥塔门迪这侧打开突破口，绝非偶然。同时勒夫还抓住了阿根廷后防速度偏慢的弱点，利用穆勒等人的速度快速反击，给了阿根廷人沉重的打击。与德国一战，阿根廷所有缺陷暴露无遗：落后时无法组织起有效的进攻，漏洞百出的后防线遇到强大火力时不堪一击，老马缺乏洞察能力，对场上形势判断能力不足。在有纪律，防守良好，配合娴熟，甚至技术都比自己强大的德国前，阿根廷队被羞辱地体无完肤。德国队更加南美化，而阿根廷队却迷失了自己的风格，攻击不细腻、无配合，防守漏洞百出。在勒夫的带领下，德国队完成了转型，但马拉多纳的阿根廷队却陷入了迷茫。看似意料之外的惨败，如果综合各种因素考虑的话，却能发现其中的一些必然性。打疯了的德国士气高涨，蔫了的阿根廷完全找不到方向，这样此消彼长，一场大屠杀的发生，也在意料之中。本 场阿德之战 ， 马拉多纳 在技战术方 面上彻底败 给 勒夫， 德国 队

威海是一个美丽的城市，旅游资源丰富，这周我们自驾游的目的地是威海!一、西霞口西霞口，是坐落在山东半岛最东端荣成市的一个小渔村，因晚霞从这里流走而得名。独特的乡俗旅游、古朴的渔家文化，可以使大家充分体验现代文化与当代渔民生活及休闲。朴实豪放的西霞口人将会热情款待每一位来宾!二、成山头风景区成山头，又称成山角或"天尽头"，位于山东省威海市荣成市成山镇，因地处成山山脉最东端而得名。成山头三面环海，一面接陆，与韩国隔海相望，最早看见海上日出的地方，自古就被誉为"太阳启升的地方"，春秋时称"朝舞"，有"中国的好望角"之称。成山头位于胶东半岛，威海成山山脉的最东端，故而得名"成山头"。成山头三面环海，群峰苍翠连绵，大海壮阔辽远，是理想的旅游胜地。三、威海赤山风景区赤山坐落于石岛港西北侧，方圆12.8平方公里，山海相连，景色秀丽。海纳百川，壁立千仞，海状山势，山借海威，以"东方神山"、"佛教胜地"、"海岛民俗"、"森林公园"等著称，属国家级风景名胜区。四、威海汤泊温泉度假村威海汤泊温泉度假区坐落于中国著名的温泉之都--文登，是按照国际五星级标准倾力打造的一家集天然温泉、休闲娱乐、商务洽谈、会务接待、温泉养生社区为一体的超大型综合性休闲度假区。游览中国好运角，穿越威海陆海景观名胜，饱览千里海滨魅力风情呀!

威海有趣的景点有:1.威海华夏城景区位于美丽的海滨度假城市威海。有最全面展示尧舜禹历史文化的禹王宫，有集中展现胶东民俗特色的避暑山庄，有建在矿井里的地下工程威海人防教育中心。2.赤山风景区位于山东半岛最东端的荣成市，荣膺首届全国魅力城市。方圆面积12.8平方公里，东隔黄海与韩国相望，素有“佛教圣地”、“森林公园”、“大明圣地”、“海岛民俗”等旅游胜地之称。3.仙姑顶是位于威海市环山路中段的一个景点，距市中心仅五公里，位于望岛西北山最高峰，海拔375米。景区内群峰耸立，怪石嶙峋，参天大树，奇花异草遍布，幽静幽深，古朴苍劲，景色迷人。登上山顶令人心旷神怡，东临大海和刘公岛，北望全城全景，西望青山和渤海湾。4.威海环翠楼公园位于威海市区，西临苍山，东临碧海，南、北分别与佛顶、古木岭两座山峰相望。登楼望去，城东碧波浩渺，绿荫掩映，故名“环翠”。是威海的著名景点，也是市民休息锻炼的好去处。5.成山头，又名“天之尽头”，位于山东省威海市荣成市成山镇，因位于成山山脉最东端而得名。成山头是海上第一个看日出的地方，自古就有“太阳升起的地方”之称。它在春秋时期被称为“舞向太阳”，被誉为“中国的好望角”。

米利托99年在阿根廷国内的竞技队出道，03年来到了欧洲加盟了当时还在意乙的热那亚，05年转投西甲皇家萨拉戈萨，08年重回意甲加盟老东家热那亚，本赛季加盟国际米兰。蒂亚戈席尔瓦02年在尤文图德开始自己的巴甲联赛征程，04年转会葡超波尔图，05年租借至莫斯科迪纳摩，06年重新回到巴甲，加盟佛卢米嫩塞，08-09赛季冬季转会加盟AC米兰效力至今。

1.十月威海旅游攻略详细路线：海原公园-中国油画小镇-环海路-茅头山观景台-孙家疃哈雷驿站-威海市环海路-国际海水浴场-火炬八街-小石岛景区驿站：孙家疃哈雷驿站路线特点：此段半山半海。在行驶过程中，你可以感受到起伏的青山和碧波荡漾的大海。可以经过高区的国际海水浴场，赶海、看海、赏海。推荐时间：6-9月特色美食：胶东海鲜注：环海路辅助线为东向西单行道。建议从半月湾出发，自驾效果最好。特色：海原公园、中国油画小镇、半月湾沙滩、环海路、茅头山、孙家疃哈雷驿站、国际海水浴场、火炬八街、小石岛景区。海源公园在威海，有一个深刻感受威海风情的绝佳去处，——海源公园。海源公园，位于鹤庆湾，是一个集公园、码头、客厅、古迹于一体的开放式公共场所。在这里，公园雕刻精美，景色优美，周围的一些海岸线也保持了最原始的风貌。拥有中心城市沿海地区罕见的李安林岛、黄岛、青岛、雅士岛景观，以及鹤庆码头、一战华工纪念馆，文化历史底蕴深厚。中国油画小镇中国油画小镇位于孙家疃街道，这里山、海、湾、滩、岛交相辉映，林海秀美，沙滩秀丽，风景秀丽。它被称为威海后花园和城市会议室！在这里，文艺的建筑风格与当代油画的完美结合形成了独特的多元文化空间。随着油画产业的发展，威海素描创作规模不断扩大，布局三区一线已经形成了油画之乡。艺海路艺术核心区、北海油画产业街区、半月湾创作休闲街区、环海路写生画廊都为油画家提供了更好的素材和环境。半月湾位于威海市北部的鹤庆区。海滩从北到南，全长约一公里。它自然形成一个半圆形的沙滩，像一弯新月，因此得名。加上海滩优美的曲线和沙滩上绵延而下的岩石，水质非常清澈，沙滩细腻。它不仅是威海著名的天然海水浴场，也是威海最美的海滩之一。每年定期举办国际沙滩音乐节、海鲜美食节、电音节等活动，点燃夏日海岸的激情。漫步于此，葱郁的森林、壮美的大海、刺绣的沙滩、随处可见的奇石，让你仿佛置身仙境。环鹿这条环海公路东起东山宾馆，西至小石岛，沿着蜿蜒的海岸线，像一条墨色的丝带。可以尝试在海路上步行或骑行，坡多弯多，很有挑战性；夏天可以乘坐46路观光车，票价2元，行程经过旅游码头和国际海水浴场。如果你喜欢自驾游，在这条没有几辆车的宽阔大道上兜风将会非常令人兴奋。整个环海的路都是沿海的，路比较平坦。慢下来，感受一下这条路上真正的威风。大海的节奏。位于环海路上的茅山是孙家疃景子村的一个岬角湾。它从东到西延伸到海里。最高点海拔只有45.7米。因其形似猫而得名。猫身上的日出和日落的头上有一种独特的美丽的山的魅力。清晨太阳探出半个脑袋，海岸礁石在云海中若隐若现，像一幅幅装饰图案的锦缎，每一个图案都瞬息万变。孙疃哈雷驿站以哈雷为原型。驿站里有哈雷兄弟从世界各地带回来的衣服、包包、帽子等服饰，每一件都有一个哈雷故事。世界上只有一辆哈雷摩托车停在最显眼的位置，设备精致，配色有限，这大概是每个男生心中的摩托车梦的心。当然，你也可以换上酷炫的哈雷装，明星国际海水浴场东临山东大学威海校区，海岸线总长2800多米，沙滩面积30万平方米。沙子柔软细腻，海水清澈，海滩坡度平缓。海水浴场周围数千英亩的松林在大海的映衬下十分美丽。慢下来，海水浴场会给你最愉悦的享受。火炬街南接文化西路，北直通海水浴场，终点与环海路形成丁字路口。从南到北，前半段路毫不起眼，当车从坡顶转弯时，眼前的风景瞬间展开。小石岛景区如果你问我去小石城最想做什么？那我就毫不犹豫的告诉你：赶海！抓住大海！抓住大海！吃海鲜！吃海鲜！吃海鲜！2.威海攻略游玩攻略一日游当然还有很多地方，比如蓬莱阁、蓬莱八仙过海景区、蓬莱海洋极地世界、赤库林集、海阳雷战景区、龙口南山景区、海昌鲸鲨海洋公园、张裕酒文化博物馆、牟氏庄园、艾山温泉杨康小镇、磁山温泉小镇、塔山旅游景区、招远淘金小镇、南山公园、张裕国际酒城等3.十月一威海旅游攻略威海人回答，10月1日威海气温比内陆略低。记得带长袖。刘公岛、动物园、海洋公园和华夏城都有演出。去看看你有什么我没在那里玩过。有类似的就没必要去了。不管怎么说，这几乎是一样的。从2010年到2010年，威海的冬天相当长，因为是典型的三面环海的海洋性气候，所以威海的春秋特别短，似乎夏冬特别长，通过每年的集体供暖时间就可以体会到。一般是从11月初开始到第二年的4月初，有时候天气不好的时候供暖时间会更长，所以威海的冬天大概也是同期，可以持续5个多月，也就是半年不到。4.冬季威海旅游攻略及消费我是威海人。我想给你推荐几个游览威海的好地方。1.每年五一前后可以开车去位于荣成市石岛镇的赤山景区。五一前后赤山景区的樱花很好看！在中国数到一！景区在海边，面朝大海，春暖花开！赏心悦目！2.秋冬春三季可以开车去温泉之都威海市文登区！可以开车去天目温泉或者唐伯温，住上一天，在露天沐浴泉水，放松提神，预定很高兴你来了！3.夏天来威海去海水浴场！我推荐Ni荣成的s海泰度假村。我很喜欢那里！走在沙滩上，在海里游泳，沙滩上各种休闲烧烤让人流连忘返！5.威海旅游详细攻略威海著名景点有刘公岛、成山头、国际海水浴场、赤山、银滩、华夏城、天鹅湖等。这些景点的风景很美，值得一去。刘公岛：位于山东半岛最东端的威海湾，是国家AAAAA级旅游景区。主要景点有中国甲午战争博物馆、中国甲午战争博物馆、刘公岛国家森林公园、刘公岛世博园、刘公岛鲸鱼馆、七顶山炮台、东虹炮台、铁码头等。6.十月威海旅游攻略大全穿短袖短裤或短裙，最好是防晒衣，以及长袖上衣和长裤。今年(22年)阳历八月中旬，恰好是威海的岁末。它白天很热，气温一般在26到31度之间。穿短袖短裤或裙子(加防晒衣)早晚比较凉快，温度一般在24-28之间，特别是海风大的时候几乎不热，只是有点潮湿。所以早晚出行可以穿长袖外套。但是威海的旺季也是全年最热的季节，一般要五六天。在此期间，白天一定要做好防晒防暑工作。7.威海旅游全攻略金秋十月当然是出游的不二之选。避开小长假后，就是旅游淡季。旅馆和农家乐的价格下降了这个时候可以去黄陵，婺源看秋日的太阳，北京香山或者南京栖霞山看红叶，还有东北的金桦林。它这真是一个美丽的世界，这个季节少雨也可以增加你的娱乐。各景点游客相对较少，吃喝住行费用相对便宜很多。图为乌兰乌德、秦皇岛、婺源、江西、江南天路的秋色，真正的蓝天白云。8.十月份威海旅游威海7月天气炎热，建议去海边度假。所需物品：身份证、手机(不t忘了充电器)、银行卡、少量现金、3套短袖衣服(短袖衬衫、短裤、内衣，不方便携带，也可以在当地买，不贵)、一套薄面料的长袖长裤(防晒、防天气、晚上防蚊虫)、一把太阳伞(折叠短)、简单洗漱用品(其实是it不建议携带它们，但超市现在建议用你的包带一些小物品，如纸巾、矿泉水、小笔记本、笔等。9.7月威海旅游攻略:威海景点不多。如果你想泡温泉，有刘公岛、成山头、天目温泉。如果你现在来，你可以去天鹅湖看天鹅。它它非常漂亮。1.威海刘公岛；2.成山头、天鹅湖都在荣成；3.温泉；吃：给你推荐几个地方；1:海鲜，唐不要去旅游景点，这那里比较黑，去市内大型的。阳光公馆的海鲜自助餐也是不错的选择；2:韩国食物，青瓦台，李超牛尾。唐不要问为什么。如果你去了那里，你一定会白来威海。住宿：国际海水浴场自由左岸有一家青年旅社。四层平房，挺有特色的。夏天去的话，还可以在他们的露天酒吧烧烤自己。它it"离海边十几米，价格也不贵。之前同学来威海，我安排住在那里。干净卫生，价格也不高。如家也很好，但是威海公园的那家干净又便宜。

1.北京到威海旅游攻略回答：北京到威海的主要路线是天津和济南，景点比较多。比如有几个比较有名的：途经天津时，可以去东江琴海公园、5A级景区、五道文化旅游区、天津欢乐谷、瓷房子等等。途经济南时，可以去大明湖、趵突泉、千佛山等著名景点。010-10:101:9小时开车。它将近一天s驱动。当然，先休息，明天再玩。跳洋头2:第一天，上午威海影视文化城，是带孩子的最佳选择。下午直接去威海国际海水浴场。下午，气候比较暖和，你可以在海边享受傍晚。羊头来3:第二天，刘公岛，那里的环境和气候是另一个特色，也可以游览四川岛。慢慢享受这一天吧。莱阳头条4:第三天，上午，在甲午战争纪念馆，进行了一场深刻的爱国主义教育，感受甲午战争的惨烈历史。下午威海博物馆，文化熏陶下。莱阳头条5:第四天可以去海陆岛的荣成成山头、神雕山、莱阳头条。6:第五天，赤山霍克吉上了莱阳头条，九铁茶山。7:第六天，海洋牧场，钓鱼。莱阳头条8:第七天，回到跳来头。2.北京出发去威海攻略威海北、穆平、烟台南、桃村北、莱阳、高密、潍坊、青州、淄博、济南、济南西、沧州西，终点站为头条莱阳、北京南站。3.威海去北京答案是：因人而异。喜欢开车且时间充裕的会选择自驾，不喜欢的不喜欢开车，时间有限会选择高铁。羊头来威海是一座沿海城市，位于山东省胶东半岛。它it"它离北京大约800公里。s高速公路，开车大概需要8个小时。高速公路300元左右，一辆车加汽油大概7-800元。从成本上来说，一车一人的话比较合适，成本比较高，一车四人。莱阳头条如果独自出行，选择高铁，票价在400元左右，费用会更经济。莱阳头条4.北京到威海旅游自驾游2022新年期间适合去的景点s日：第一，广西桂林。桂林美国的风景是世界上最好的，而且它在图片世界里旅行是值得一游的。第二，云南丽江。丽江古城，迷人的，它不去真遗憾。第三，海南岛。天涯海角，海南的宝岛，冬天也可以穿泳衣游泳。第四，湖南张家界。张家界森林公园以其壮丽的景色和宜人的景色享誉世界。5.北京到威海旅游攻略必去景点此数据来自百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。头条来样乘车路线：荣成214荣成101，全程约11.9公里。1.来自胡艾莲湾国际旅游度假区.步行约760米至头条莱阳，南沃岛站。2.坐荣成214路，9站后到家家悦海源站(也可以坐荣成207路、荣成223路)，到莱格头条。3.乘坐荣成101路，经过4站，到市委站下莱格头条(也可以乘坐荣成102路、荣成105路)。4.步行约300米，到达荣成市调莱头。6.北京到威海沿途景点这取决于你的身体健康状况。从北京到威海的距离将近900公里。你可以全程走高速公路。从北京出发，上京沪高速，然后转印青高速，再上荣威高速就到了威海。高速公路上有很多服务区供司机停车休息，你可以掌握好开车时间，每2小时到最近的服务区休息一次，这样你就赢了我不觉得累。7.北京到威海自驾游攻略是。只要是北京低风险的地方，都可以去威海。七天内，有中高风险区所在县(市、区)其他低风险区居住史的人员，进入威海后三天内进行两次核酸检测(间隔24小时)，做好健康监测。从中高风险区所在的县(市、区)进入威海的人员然后去淄博，看蒲松龄s故居，买点淄博瓷器，吃张店烧饼。莱阳头条然后去青岛，爬崂山，参观退役潜艇，吃海鲜，先感受大海的味道，喝点青岛散装啤酒。羊头来最后，到了威海，你又会得到海洋的气息，海风吹在脸上。宜居的城市会给你不一样的感觉！莱阳头条

说到德国节日，大家第一时间想到的应该都是举世闻名的慕尼黑啤酒节，但除了这个节日以外，德国还有很多独具特色的节日，每年4月30日的巫婆节就是其中之一，那么今天的西方节日就为你介绍，德国巫婆节是什么节日。巫婆节是德国哈茨山区戈斯拉尔城的节日，戈斯拉尔素有“北方罗马”之称，全城人口不足5万，却有47座教堂和修道院。同时，戈斯拉尔还一直被称为“巫婆城”，这里有一座巫婆博物馆，除了展出巫婆的各种造型、使用工具外，还有很多巫婆的历史传说资料，且每周定时进行巫婆剧表演。巫婆节又叫瓦尔普尔加节，在每年的4月30日。以前每逢冬春交替之际，人们就以驱赶巫婆象征赶走寒冷的冬季。4月30日夜里，当地居民和游客穿上奇装异服，戴上巫婆面具，骑着扫帚从四面八方走上戈斯拉尔的大街，然后游行前往荒芜的布罗肯山。伴随夜幕降临，巫婆舞便开始了。参加跳舞的除了众人扮演的巫婆外，还有骗子、乐手、龙、独角兽和人狼等角色。他们共同迎接魔鬼的到来。随着午夜的焰火，众巫婆开始踏上归途。她们咆哮着遁去，把哈茨山让给了夏天的女神，即五月女神。人们还把十字架和木柴捆系在门上，抽响鞭子，教堂鸣响钟声。据说这一切都是为了抗拒巫术。从19世纪末开始，戈斯拉尔便在4月30日巫婆节期间组织巫婆游行仪式。现在，这已逐渐发展成吸引世界各地游客的一个重要内容，来这里观光的游客每年达到20多万。有趣的是，前几年戈斯拉尔还举行过一届“世界巫婆大会”。据说当时共有100名来自全球各地的巫婆代表在此集会，希望通过施展巫术防止天灾人祸，争取世界和平。了解更多星座百科、八字姻缘、八字事业、婚姻运势、财神灵签、情感合盘、看另一半、八字测算、姓名速配、一生运势、复合机会，您可以在底部点击在线咨询（仅供娱乐）：http://www.adxqd.com/xz/

在目前的生活工作环境当中，如果要进行外出工作出差，大部分的朋友都是选择随身携带一台的笔记本电脑的，但是目前笔记本电脑的更新换代速度太快，那么要选择购买笔记本电脑，应该选择哪个品牌才最好呢?不用担心，下面小编就给大家介绍下最佳的十大笔记本电脑品牌排行榜，赶紧一起来看看吧。笔记本电脑买什么牌子最好　　1、苹果　　由史蒂夫·乔布斯、斯蒂夫·沃兹尼亚克和RonWayn在1976年4月1日创立于美国，在高科技企业中以创新而闻名，核心业务为电子科技产品，全球高端电脑与音视频便携媒体制造商，世界十大笔记本电脑品牌，苹果股份有限公司。PC机之外的;世外高人，可以这么理解，苹果公司=精简的IBM加上精简的微软。因为原来只有白色，俗称;小白。如果说，IBM是最实用强悍的笔记本，那么，苹果就是最艺术的最火星的笔记本了，当然，价格也很;艺术。总部位于加利福尼亚州的库比蒂诺，知名的产品有appleII、MacintOSh电脑、Macbook笔记本电脑、iPod音乐播放器、ITunes商店、iMac一体机、iPhone手机和iPad平板电脑等。　　2、三星　　三星集团是世界500强企业之一，是一家集电子、机械、化工、金融及贸易服务为一体的集团，全球消费电子领域龙头企业。与三星电子的品牌成长一样，三星笔记本见证了三星电子的品牌成长，并取得了令人瞩目的成绩。三星笔记本秉承;创新、为你的产品理念，始终坚持品质与设计的不断提升。旗下产品以X(超轻薄，高端，时尚系列)、Q(小尺寸便携系列)、R(主流，高性价比系列)、P(商用系列)、UMPC系列为主，包括从7超便携到12、13、14、15等丰富尺寸多媒体高性能的产品，充分满足了商务、行业、家庭、学生等不同用户群的需求。　　3、华为　　华为技术有限公司是一家生产销售通信设备的民营通信科技公司，于1987年正式注册成立，总部位于中国广东省深圳市龙岗区坂田华为基地。华为是全球领先的信息与通信技术(ICT)解决方案供应商，专注于ICT领域。华为笔记本，是华为集团旗下的电子产品之一。商标名称MateBook。确定在2016年4月开始量产首款笔记本。处理器采用x86架构，即Intel处理器，适合娱乐和办公的笔记本电脑。　　4、华硕　　华硕(ASUS)，创立于1989年，一家以技术为核心的公司，至今已经成长为全球性的企业，拥有世界最顶尖的研发队伍，以高品质的产品、创新的技术和令人感动的服务闻名于世。华硕电脑是全球领先的3C解决方案提供商，致力于为个人和企业用户提供最具创新价值的产品及应用方案。身为这股改革潮流中的领导者之一，华硕的使命是藉由提供不断创新的IT解决方案，激励华硕的使用者发挥最大潜能。　　4、ThinkPad　　联想是一家营业额达340亿美元的个人科技产品公司，是全球第一大个人电脑厂商之一，也是PC 产品领域新晋领导厂商。ThinkPad，笔记本电脑十大品牌，原IBM旗下便携式电脑品牌由联想收购，ThinkPad，中文名为;思考本，在2005年以前是IBMPC事业部旗下的便携式计算机品牌，凭借坚固和可靠的特性在业界享有很高声誉。在Lenovo收购IBMPC事业部之后，ThinkPad商标为Lenovo所有。ThinkPad自问世以来一直保持着黑色的经典外观并对技术有着自己独到的见解，如：TrackPoint(指点杆，俗称小红点)、ThinkLight键盘灯、全尺寸键盘和Aps(ActiveProtectionSystem，主动保护系统)。俗称;小黑，一成不变的颜色和样式，追求性能、便携、稳定、可用的笔记本爱好者的首选佳作。　　6、惠普　　惠普公司(Hewlett-PackARd，简称HP)是一家来自美国的资讯科技公司，成立于1939年，主要专注于生产打印机、数码影像、软件、计算机与资讯服务等业务。惠普由斯坦福大学的两位毕业生威廉·休利特及戴维·帕卡德创办，经过几十年的发展以及一系列收购活动，现已成为世界上最大的科技企业之一，在打印及成像领域和IT服务领域都处于领先地位。惠普商用笔记本电脑和平板电脑专为满足消费者的多种需求而设计，具有纤薄的外观、耐用的机身和强大的安全功能。　　7、戴尔　　戴尔(Dell)，是一家总部位于美国德克萨斯州朗德罗克的世界五百强企业，由迈克尔·戴尔于1984年创立。戴尔以生产、设计、销售家用以及办公室电脑而闻名，不过它同时也涉足高端电脑市场，生产与销售服务器、数据储存设备、网络设备等。戴尔，全球领先的IT产品提供商，全球最大五百家公司之一，全球最大的直销个人电脑公司。　　8、索尼　　索尼(中国)有限公司-VAIO，笔记本电脑十大品牌，索尼公司旗下个人电脑著名品牌，笔记本电脑行业领先品牌，世界上民用及专业视听产品、游戏产品、通讯产品、关键零部件和信息技术等领域的先导企业之一　　VAIO，自1997年的推出第一款笔记本电脑以来，以其时尚的外观设计与独特的使用体验在用户和业界中一直获得高度的认可。VAIO产品线丰富，经典机型层出不穷，广泛覆盖便携商务，炫彩时尚与家庭娱乐等领域，是业界时尚与科技的引领者与标杆。　　9、宏碁　　宏碁集团(Acer)创立于1976年，是全球第二大个人电脑品牌，同时也是全球第二大笔记本电脑品牌。40多年后，宏碁在全球笔记型计算机的市占率排名第二，全球PC排名第三，其它如台式机、显示器、投影机等产品，宏碁也名列前茅。宏基秉持;创新关怀的企业理念，主要从事自主品牌的笔记本电脑、台式机、液晶显示器、服务器及数字家庭等产品的研发、设计、行销与服务，持续提供全球消费者易用、可靠的资讯产品。　　10、神舟　　神舟笔记本，又名神舟电脑。深圳市神舟电脑股份有限公司的前身是深圳市神舟电脑有限公司，成立于2001年，是一家以IT、IA为主业，以电脑技术开发为核心，集研发、生产、销售为一体的高科技企业。在11年的时间里，神舟电脑走过了一条从创立自有品牌的电脑整机，到实现自主研发生产高性能笔记本电脑、台式电脑、屏式电脑、平板电脑、液晶显示器和智能电视及其周边设备的发展之路。神舟笔记本以高性价比得到了消费者的喜爱，神舟如今的笔记本细分为天运、承运、优雅、精盾、战神、超级战神以及小本系列。　　

4月1日至20日之间 复活节国性节假日除圣诞节、复活节、元旦、国际劳动节、耶稣降临日、国庆日等之外，德国的主要民间与民俗节日有基尔周狂欢节、耶稣受难戏剧节、兰茨胡特君主的婚礼戏剧节、啤酒节、乡村节等。以上的几个节日都是举世闻名的。德国全年法定节假日有：新年（1月1日）；国际劳动节（5月1日）；耶酥开天节（复活节后的第七个星期日）；德国统一日（10月3日）；忏悔节（11月）；圣诞节（12月25日-26日）；慕尼黑啤酒节（每年9月最后一周 至10月第一周）；基本法颁布日（5月23日）。 游客应注意，圣诞节，复活节前后两周勿访。

弗兰能力更加全面，并且在外围有一脚远射，而且抢点能力也不错。进球的效率也很高。而米利托正像楼上几位说的那样，机会主义者，并且大器晚成，技术动作比较实用。与弗兰相比，他的突破和远射相对差点，但技术动作实用，往往能用最简单的方式进球。弗兰能自己带也能抢点，在曼联没有闪光很遗憾。

阿根廷竞技北京时间2014年，阿根廷竞技队官方宣布，合同到期的国米前锋迭戈-米利托自由身加盟球队，但是俱乐部并未透露合同具体内容。这位35岁的国米功勋老臣也得以荣归故里，回到最初效力的球队。1979年出生的迭戈米利托，1999年出道于阿根廷竞技队，在2003年夏天，米利托登陆意甲，加盟热那亚队。由于水土不服，迭戈-米利托被热那亚租借到西甲萨拉戈萨效力三年，并在2009年夏天被国米买断。在加盟国米的首个赛季，已经30岁的阿根廷人在联赛中为球队出场34轮，并打入22粒进球。也是在这个赛季，国米杀入冠军杯决赛，在伯纳乌球场，米利托包办国米两粒进球，蓝黑军团2-0完胜拜仁慕尼黑，时隔45年重返欧洲之巅。但是在随后几个赛季，由于受到伤病折磨，米利托并未得到很多出场机会，在2013-2014赛季，迭戈-米利托仅仅在联赛中出场17次，打进2球。在赛季即将结束时，米利托也宣布不会与国米续约，将在赛季结束后自由身离队。

英特尔酷睿i5-10200H是一款快速四核处理器，适用于基于Comet Lake-H系列（第四代Skylake架构）的四核笔记本电脑处理器。借助超线程技术，该处理器的频率在2.4GHz至4.1GHz之间，并且可以同时执行多达八个线程。和i5-10300H相比，默认主频从2.5GHz降为了2.4GHz，最高（单核）睿频加速频率从4.5GHz降为了4.1GHz，综合性能下降了大约10%不到，却换来了更低的采购价格。根据英特尔官方的说法，CPU采用14纳米（14纳米++）工艺制造。与2019年类似的Core i5-9300H相比，10200H支持更快的DDR4-2933RAM（9300H则为2666）。Comet Lake的架构与Coffee Lake相似，具有相同的功能，并且采用相同的14nm工艺生产。 除了提高频率速率外，存储控制器现在还支持更快的DDR4-2933RAM。由于支持更快的DDR4-2933 RAM，因此性能仅比Core i5-9300H好一点。 这意味着，该CPU非常适合要求苛刻的任务，尽管更快的版本可提供更高的Turbo Boost频率速度，从而可以更快地执行单核。扩展资料：Core i5-10200H不支持vPro，TXT或SIPP。 这些业务功能可在速度更快（并随后发布）的Core i5-10400H（2.6-4.6GHz）中使用。Core i5-10200H集成的Intel UHD Graphics 630 iGPU应该提供与Core i5-9300H中的UHD630类似的性能。 作为低端解决方案，可能只会以减少的细节平稳地运行当前游戏。另外，英特尔指定TDP的功耗为45瓦，因此i5仅适用于具有良好散热解决方案的大型笔记本电脑。 使用cTDP-down，CPU也可以配置为35瓦，从而导致性能降低。

1、云吞面，面条劲道搭配完整的鲜虾云吞，汤料鲜美醇厚。还叫做馄饨面（福建又称扁食面），是一种在香港的代表面食。香港的云吞面，无论是云吞、还是面，都与北方的馄饨有很大区别。香港云吞面的传统馅料比例是七分鲜虾三分肉，面条采用的是富有弹性又有嚼劲的全蛋面，现在还有部分店家保留传统的制面方法制作手打竹升面。2、咖喱鱼蛋，弹牙的鱼蛋，遇上浓烈的咖喱，是滋味十足的绝味小食。3、蛋挞，外酥里嫩，咬下一口满嘴留香。4、港式奶茶，是香港独有的一种饮品，港式奶茶入口先苦涩后甘甜，最后是满口留香。港式奶茶俗称为“丝袜奶茶”，是香港的特色饮品。 “丝袜奶茶”，就是把煮好的红茶用所谓的“丝袜”过滤，作用除了滤走茶渣以外，也使红茶更香滑，然后再加入淡奶和糖。一杯好的奶茶，除了配料的比例要得宜，还得靠师傅的“撞茶”功夫，该项技艺已被加入香港非物质文化遗产。5、牛腩是香港人爱吃的牛肉部位，所以大小粉面店都具备牛腩菜品。牛腩粉的主要食材就是牛腩和米粉，再依据各家粉面店的秘制方法添加配料，这款平价美食看似平淡，但各家各法，有的汤底清甜不腻，有的牛腩爽口软糯，适合每家粉面店都品尝一番。

世界最具盛名的三大啤酒节是英国伦敦啤酒节、美国丹佛啤酒节和德国慕尼黑啤酒节，他们在国外家喻户晓，被欧美的啤酒专家们誉为是——每一个啤酒爱好者都该至少要去一次的狂欢。 　　啤酒节源于德国，1810年的十月，为了庆祝巴伐利亚的路德维格王子和萨克森国的希尔斯公主的婚礼而举行的盛大庆典。自那以后，十月啤酒节就作为巴伐利亚的一个传统的民间节日保留下来。此后民众持续这种热烈的情绪，年复一年地举办该项活动。 　　啤酒节一般为美食节的盛会，包括美食，演出，娱乐嘉年华，一般在夏季举办。是一个地方标志性的节日盛会，对带动地方旅游及经济有着独特的促进作用。 世界各地的啤酒节　　2009年8月27日～9月6日 中国·昆山第五届国际啤酒节 　　 2009中国·昆山第五届国际啤酒节6月15日～30日 绿兰莎啤酒节 为期15天 　　中国国际啤酒节，每年7月的最后一个周四开幕，为期12天 　　6月11日～7月12日 首都北京——北京CRD国际啤酒节（世界杯期间） 　　7月16日～30日 中国啤酒的故乡——哈尔滨啤酒节 　　7月17日～8月15日 首都北京——北京国际啤酒节（蟹岛） 　　7月27日～8月7日 大连国际啤酒节 　　8月1日～5日 大不列颠啤酒节 　　8月12日～27日 青岛啤酒节 （一般8月第二个周末开始，为期16天） 　　9月16日～10月1日 慕尼黑啤酒节 　　9月28日～30日，10月5日～7日 斯德哥尔摩啤酒节 啤酒节由来　　啤酒节源于德国，已有100多年的历史，它的起源一般有两种说法。一说是在1810年，马伐利亚的卢德亲王结婚，举行赛马活动，赛马活动结束后，人们痛饮啤酒以示庆贺，这个庆典沿袭下来后，就成为今天的啤酒节。还有一说是当地农民为庆祝大麦和啤酒花的丰收而大喝啤酒而产生的。 　　1810年巴伐利亚加冕王子路德维希和特蕾瑟公主于当年10月完婚，官方的庆祝活动持续了５天。人们聚集到慕尼黑城外的大草坪上，唱歌、跳舞、观看赛马和痛饮啤酒。从此，这个深受欢迎的活动便被延续下来，流传至今，每年9月的第三个星期六至10月第一个星期日就固定成为啤酒节。截至到2004年，除因战争和霍乱中断外，慕尼黑啤酒节已整整举办了170届。

宫崎骏获终身成就奖，真的是实至名归。从小就看他的动画，一直非常喜欢，成年之后，只要心情不好，还会回看他以前的动画。宫崎骏的动画之所以好看，我认为主要有下面几个原因：第一，他给我们描绘了一个纯真的世界比如《阿尔卑斯山的少女》里面的美好世界。海蒂与爷爷的亲情，以富家少女克拉拉之间的友情，这都是我们现实生活十分渴望的纯净世界。比如我们从《哈尔的移动城堡》中，看到了爱情的力量，也看到了团结的力量。我们的生活都需要这个。第二，他用最直白的方式教会了我们生活的哲理比如《千与千寻》中教会我们：勿忘自我，不要贪婪。比如我们从《幽灵公主》中，看到了情爱，看到了环保，甚至看到了社会发展。他借这部片子，告诉我们，人和大自然、人和自己的内心，还有人和人之间也都应该平衡，不应该有矛盾。第三，他给了我们生活的勇气比如《龙猫》中，达郎和他两个女儿的勇敢，不顾一切战胜困难的勇气。比如《风之谷》中，公主娜乌西卡的勇敢，让我们始终相信正义终将战胜邪恶。第四，他的每部片子的画面、音乐都很美关于画面，感觉很少有人能做出他那样美的意境，多次获得好莱坞电影奖，意大利电影奖等。全部都是因为画面。还有音乐，宫崎骏的很多片尾音乐都非常的美。特别是《天空之城》、《千与千寻》、《龙猫》夫人片尾曲都非常经典，百听不厌。总之，宫崎骏这个人，真是前无古人啊。

人文景观可分为以下四类：　　1　文物古迹 　　包括古文化遗址、历史遗址和古墓、古建筑、古园林、古石窟、摩岩石刻、古代文化设施和其它古代经济、文化、科学、军事活动遗物、遗址和纪念物。例如，北京的故宫、北海，西安的兵马俑，甘肃莫高窟石刻以及象征我们民族精神的古长城等等这些闻名于世的游览胜地，都是前人为我们留下的宝贵人文景观。 　　2　革命活动地 　　现代革命家和人民群众从事革命活动的纪念地、战场遗址、遗物、纪念物等。例如，新兴的旅游地井岗山除也具有如画的风景外，“中国革命的发源地、老一辈革命家曾战斗过的地方”这些人文因素，无疑使其成为特殊的人文景观。而大打“鲁迅牌”的旅游城市绍兴，起主导作用的鲁迅故居、三味书屋、鲁迅纪念堂等旅游点也都是这类人文景观。 　　3　现代经济、技术、文化、艺术、科学活动场所形成的景观 　　例如，高水准的音乐厅、剧院及各种展览馆、博物馆。像农业示范园、农业观光园这样把科研、科普、观赏、参与结合为一体的符合新时代要求的观光地也是此类人文景观的一种。 　　4　地区和民族的特殊人文景观 　　包括地区特殊风俗习惯、民族风俗，特殊的生产、贸易、文化、艺术、体育和节目活动，民居、村寨、音乐、舞蹈、壁画、雕塑艺术及手工艺成就等丰富多彩的风土民情和地方风情。例如，近几年的旅游“旺地”云南，除得天独厚的自然条件外，还有赖于居住于此的各民族独特的婚俗习惯、劳作习俗、不同的村寨民居形式、服饰、节日活动等。傣族的泼水节、彝族的火把节、白族服饰上的“风花雪月”、石林和蝴蝶泉壮丽的爱情故事，这些都为如画的风景披上了一层神秘的面纱，正因为这些独特的人文景观，才使得云南更具魅力。所以慕尼黑啤酒节算

千 和 千寻 是荻野千寻的两个名字 千寻是他在人类界的名字 千是他在汤屋 的名字我觉得用千与千寻做题目 是因为 想用这两个不同的名字体现千寻的两种不同的性格 在2个不同世界的经历 象征了初入职场人原有的价值、底线会受环境影响改变 记住名字就是把握住自己最初的原则。至于 神隐 网上有人说是失踪 有人说是神隐的意思——山本回到人间那集 还有消失、失踪 个人觉得可以解释为迷失 失踪 这应该是翻译过来就这样的 好像说翻译过来是 失踪的少女。我去看了下百度百科 上面有对剧情的解析 建议可以去看看写的挺好下面是一段资料：千与千寻影评人的优秀评论。 烂番茄的平均评分8.5/10 有97%的支持率，在156的评论的基础上。它提供了一致意见：“千与千寻是一个令人眼花缭乱，迷人，华丽的童话故事画这将会使观众多了几分好奇并着迷我们的世界。在Metacritic，这部电影取得了平均94分的平均分，满分100，根据37条点评，寓意着“的普遍赞誉”。罗杰·艾伯特的芝加哥太阳时报(当地知名报纸)给了影片一个完整的四星级和称赞这部电影是宫崎骏的方向.千与千寻在烂番茄上排名第十三称为最好的动画电影关于千寻与小千“忘了名字就回不去了。”——白龙汤屋在影片中被比喻为充满诱惑、欲望、嫉妒和排挤的现实社会，千寻其实是一个刚刚从象牙塔中走出的女孩，名字在这里其实指的是人最初的价值观。初到汤屋，“千寻”被改成了“小千”，象征了初入职场人原有的价值、底线会受环境影响改变。记住名字就是把握住自己最初的原则。忘了名字就是忘了自己的原则，被环境改变着。回不去指失去了自我，找不到最初的理想，偏离了航线。1．影片中的汤屋被比喻成现实社会，虽充满肮脏与混乱，却也能让我们在当中找到生命的真善美。2．影片中的河神形象一直是大家所讨论的话题——为什么河神是那么肮脏，浑身充满垃圾，以至于被误认为腐烂神。而最后却是千寻这个小女孩净化了他？也许，这正象征着人类对自然的破坏，对江河的污染，而要千寻去净化他，也是说明人类所造成的结果，需要人类自己来解决。3．千与千寻是主人公在两个世界的不同名字。喻示着两个不同性格的千寻。现实中，她懒惰，胆小；在另一个世界中，她坚强，勇敢，激发出无限潜力。《千与千寻》是日本著名动画大师宫崎骏献给曾经有过10岁和即将进入10岁的观众的一部影片，它以现代的日本社会作为舞台，讲述了10岁的小女孩千寻为了拯救双亲，在神灵世界中经历了友爱、成长、修行的冒险过程后，终于回到了人类世界的故事。佛教说，入世的生活是物质的、感情的、人群的生活，《千与千寻》正是借由小女孩千寻的经历，在积极探索一条入世的道路。千寻由一个物质世界跌入一个对于她来说全然陌生和充满着困境的神灵的世界，“回归”将是一切努力的终极目标，取胜的魔法只有一句话——“为了他人而做一件事”，不屈的千寻最终发现了自身存在的意义，她于是努力以成长的主题去实现自己对世界的怀疑与期待。“在万物重生的早晨，来到静寂无声的窗前，一切归零之后渐渐充实，不再去追寻海的彼岸，耀眼的宝物一直就在这里，在我身上就可以发现。”宫崎骏没有迪斯尼那么花哨，他甚至有些落伍，直到现在，他还坚持用手工绘画而不是电脑绘图来完成自己的卡通片。但他懂得一部卡通片，或者说是一部电影，用什么去打动别人，这就是人文。所以，宫崎骏笔下的形象是一个个人，而不是一个个没有知觉的卡通。“电影的力量在于动人，卡通的力量在于纯真，宫崎骏掌握了这些力量，他取得了理所当然的胜利”。——《新闻晚报》“这是一个没有武器和超能力打斗的冒险故事，它描述的不是正义和邪恶的斗争，而是在善恶交错的社会里如何生存。学习人类的友爱，发挥人本身的智慧，最终千寻回到了人类社会，但这并非因为她彻底打败了恶势力，而是由于她挖掘出了自身蕴涵的生命力的缘故。现在的日本社会越来越暧昧，好恶难辨，用动画世界里的人物来讲述生活的理由和力量，这就是我制作电影时所考虑的。”——本片导演　宫崎骏望采纳。

大米利托是跟晚期克雷斯波一个类型的，在禁区抢点有一手，身高1.83，没克雷斯波壮，门前感觉还行，正好和伊布互补，又比巴洛特里成熟。不过年龄有点大。现在国米要他，有一定风险，要是状态能像克鲁兹保持的那样好就行了。