为什么冰冻切片免疫组化固定液是冷丙酮

非特异性多聚甲醛固定液是一种利用多聚甲醛来捕获非特异性抗原的抗原捕获技术。它可用于检测向多种多聚甲醛衍生物绑定的非特异性抗原，以及促进抗原间的可选择性结合。多聚甲醛固定液主要由水、凝胶和多聚甲醛组成，多聚甲醛有自组装的能力，因此形成均匀的一层膜，分子量大小的多聚甲醛分子以及脂肪酸酯成分可形成多层的涂层，从而减少不必要的反应，提高检测敏感度。如果多聚甲醛组织固定液加入特异性的抗原，可以增加抗原结合的效率，而非特异性结合抗原不会有这种效果。

4%多聚甲醛怎么配4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。多聚甲醛(Paraformalclehyde)又称固体甲醛，是一类线型短链的聚氧甲撑二醇HO(CH2O)nH(式中的n=8--100)混合物，其中还含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性状为甲醛的固体聚合物。白色无定型粉末，有辛辣气味。其配制方法如下：（1）4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛　　　　　　　　　　40g0.1mol/L磷酸缓冲液　　　　　　　　至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末*溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，zui后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较*保存。（2）4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢yang化钠试剂：A液：多聚甲醛　　　　40g蒸馏水　　　　　　　　　　400mlB液：Na2HPO4·2H2O　　　　16.88g蒸馏水　　　　　　　　　　300mlC液：NaOH　　　　　　　　　3.86g蒸馏水　　　　　　　　　　200m配制方法：A液在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛*溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，zui后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的*保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

视情况而定。固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。多聚甲醛主要用于除草剂的生产和使用。多聚甲醛也可以用于制药工业及药房、衣服和被褥等的消毒等。

有。4%多聚甲醛固定液是有毒的，一般都是买huayueyang配好的，-20 度保存。多聚甲醛不是固定剂。它必须在溶液中解聚成甲醛。在细胞培养中，典型的甲醛固定程序将涉及使用4%甲醛溶液，磷酸盐缓冲溶液 （PBS）在冰上放置10分钟。

百分之4多聚甲醛固定液是无色。根据查询相关公开信息百分之4多聚甲醛固定液主要由多聚甲醛粉末、去离子水组成，显示颜色是无色，适合于绝大多数人体、动物组织的固定，实验室最常用的固定液之一。

1、石蜡切片1.1、取材要求1）、组织固定越新鲜越好，组织离体后，需及时固定。原则上动物死亡后15分钟内完成取材并及时固定组织。2）、组织标本不宜过大。由于所有的固定液都具有穿透力不强、侵透度不大等特点，凡是需要固定的组织，都不应太大太厚。1.2、固定要求1）、固定液的选择：10%福尔马林（4%甲醛）或10%中性甲醛是病理切片常规使用 的固定液，可以兼顾常规染色和免疫组织化学。2）、固定液的用量：一般加入固定液的量与组织体积比为10：1～20：1。3）、组织固定：固定时间不宜太短，也不宜太长。固定时间太短，会影响组织固定的效果；时间太长，福尔马林会形成聚甲醛，影响核的染色。固定时间主要根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。1.3、切片保存

4%多聚甲醛固定液有甲醛。4%多聚甲醛主要是多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成，pH为7.4，该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定。

2.5%戊二醛和4%多聚甲醛固定液要4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛。要灌注固定，即选择4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛的混合固定液，这两种固定剂优缺点可以互相补充。多聚甲醛与戊二醛相比，其渗透力强、固定迅速、价格低。

多聚甲醛流水冲洗和浸泡。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。3.对于组织块样品,浸泡入4%多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2到24小时。

多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果，和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。多聚甲醛多制成多聚甲醛固定液来进行固定，多聚甲醛液的配方决定了多聚甲醛的固定性，多聚甲醛液中含有pbs溶液，HCL，这些溶液和多聚甲醛按照一定的方法混合在一起就具有了个定作用。

小鼠脑组织的多聚甲醛固定及脱水步骤如下：1. 将小鼠脑组织切成薄片，放入多聚甲醛固定液中，固定24小时左右。2. 之后将脑组织取出，用PBS缓冲液进行清洗。3. 脱水步骤使用30%蔗糖，具体方法是将脑组织放入蔗糖溶液中，逐渐增加蔗糖浓度至30%，每次更换蔗糖溶液后需要等待一段时间，让脑组织充分脱水。4. 最后将脑组织放入石蜡切片盒中进行石蜡包埋和切片。需要注意的是，固定的时间和温度、脱水的时间和浓度等参数可能会因实验室环境等因素而有所不同，需要根据实际情况进行调整。

动物脏器多聚甲醛固定后储存条件：常温下储存。4%多聚甲醛固定时间不要太久，固定后可以放在梯度蔗糖中脱水，4度保存。多聚甲醛固定时间是不能太久的，24-48小时足够了。固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露。

4%多聚甲醛和现成的细胞固定液相比4%多聚甲醛好。根据查询相关公开信息显示：4%多聚甲醛的价格比现成的细胞固定液便宜，二者的效果类似，现成的细胞固定液使用方便，相比之下4%多聚甲醛好。

不需要。甲醛有效浓度为4%, 渗透性强，组织固定均匀、收缩小低渗的磷酸盐缓冲体系，对细胞损伤小，并有利于维持pH稳定，中性pH，抑制甲醛多聚物产生。

一、多聚甲醛和甲醛的区别1、两者呈现的形态是不一样的，甲醛是一种有害气体，存在于装修板材、油漆、壁纸当中，多聚甲醛呈现的是粉末，一般是固体的状态，甲醛则是一种水溶液。2、使用方式不同，甲醛在我们的日常生活中无处不在，尤其是家里面刚刚装修，有可能就会存在甲醛。如果在装修的过程中，有一些板材用的是胶和制作而成，就会释放出甲醛，有的时候会有刺激性的味道。多聚甲醛不能够直接使用，要解聚之后才能够用，也会有甲醛的气味，溶于热水，这时候就会释放出甲醛。

4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1L。如果加液1L，40gPFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。至于用PBS、PB、生理盐水或蒸馏水，当然理论上维持渗透压最好，尤其在对固定要求高，或没有灌注，组织块较大，达到固定效果的时间较长时可能有所差异；但对于灌注固定或很小组织块，浸入后很快就能达到固定效果，用蒸馏水配也是可以的。

甲醛、多聚甲醛这些固定液的固定时间是不能太久的，一般24-48小时足够了。如果固定时间超过1星期，固定液中的醛类物质会与蛋白形成共价结合，这种结合会导致无论你用什么修复方法，蛋白的抗原表位都无法暴露（也就是说你在做组化或者免疫荧光时抗原修复这一步骤没有用了）。这种组织做出来的结果，要么得不到阳性，要么各种假阳性。但是做HE或者其他不涉及抗原抗体结合的染色还是可以的。

标本固定液甲醛溶度是多少？答：甲醛含量为35%至40%(一般是37%)的水溶液，也加入10%~15%的甲醇防止聚合。具有防腐、消毒和漂白的功能，又称为福尔马林固定液。名词解释：福尔马林固定液是有刺激性气味的无色液体。福尔马林的主要成分是甲醛，它是一种易溶于水的高刺激性有毒气体，具有易燃性及腐蚀性，在空气里一般能测出微量。在甲醛制造方面通常利用氧化甲醇的化工方法制得。甲醇氧化之后可得甲醛，而甲醛继续氧化之后可得甲酸。三者皆为毒性物质，在剂量相同的情形下，以对人体的毒性而言，毒性比为甲醇：甲醛：甲酸 = 1：30：6，即甲酸的毒性为甲醇之六倍，而甲醛的毒性为甲醇之三十倍。福尔马林即甲醛的水溶液，一般含有37～40%甲醛气体，在其中加入8～15%甲醇(methylalcoh01)，可防止甲醛的聚合。它是无色液体，有强烈的刺激性气味，沸点为96℃，相对密度(比重)为1．081～1．086，呈弱酸性，若将它放置在冰箱内贮存或在室温下贮存较久，水溶液中可析出白色沉淀，即多聚甲醛，若将其加热又可变成液体，因此福尔马林不适宜在冰箱中冷藏，否则容易发生凝聚[3] 。福尔马林不可接触强氧化剂、强碱、酚类、尿素等物质，易引起化学反应造成危险，药理作用 ：35～40%的甲醛水溶液叫做福尔马林，阻止细胞核蛋白的合成，抑制细胞分裂及抑制细胞核和细胞浆的合成，导致微生物的死亡[2] 。用途：能有效地杀死细菌繁殖体，也能杀死芽胞（如炭疽芽胞），以及抵抗力强的结核杆菌、病毒[4] 。多用于畜禽棚舍、仓库、卵化室、皮毛、衣物、器具等的熏蒸消毒和标本、尸体防腐；也用于胃肠道制酵

柠檬酸/丙酮/甲醛固定液与4%多聚甲醛有什么区别甲醛变成多聚甲醛很困难，多聚甲醛能变成甲醛很容易。一般情况下甲醛液体在较冷时久贮易混浊，在低温时则形成三聚甲醛沉淀。蒸发时有一部分甲醛逸出，但多数变成三聚甲醛。本品为强还原剂，在微量碱性时还原性更强。在空气中能缓慢氧化成甲酸。能与水、乙醇、丙酮等有机溶剂按任意混溶。pH 2.8～4.0。相对密度（d2525）1.081～1.085。熔点-118℃，沸点-19.5℃。折光率（n20D）1.3746。闪点60℃。易燃。低毒，半数致死量（大鼠，经口）800mG/kG。其蒸气能强烈刺激粘膜、具有致癌致性、属于高毒物。 你是哪个省市的？我看看能不能给你检测去、。

只要密封，甲醛不要太多的挥发掉就没有问题，因为只是短期防腐固定。甲醛含量为35%至40%(一般是37%)的水溶液，也加入10%~15%的甲醇防止聚合。具有防腐、消毒和漂白的功能，主要成分是甲醛，它是一种易溶于水的高刺激性有毒气体，具有易燃性及腐蚀性，在空气里一般能测出微量。在甲醛制造方面通常利用氧化甲醇的化工方法制得。甲醇氧化之后可得甲醛，而甲醛继续氧化之后可得甲酸。扩展资料：植物对空气中的甲醛更敏感，如果甲醛含量超过，就会出现变黄现象。有吸收甲醛能力的植物如果长期停留在甲醛环境中，也会进行“罢工”。两种装置的去除醛的原理相同，利用自身的快速旋转，引导周围空气的快速流动，吹甲醛。但是，这两台机器的功耗更高，因此用户需要考虑。

固定剂用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如下。1．醛类固定剂　　双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透性强，收缩性小。有人认为它对IgM、IgA、J链、K链和λ链的标记效果良好，背景清晰，是常用的固定剂。（1）10%钙-福尔马林液（浓甲醛10ml，饱和碳酸钙90ml）。（2）10%中性缓冲福尔马林液（浓甲醋10ml，0.01mol/L pH7.4 PBS 90ml）。（3）4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛40g, 0.1mol/L PBS液pH7.4 500ml，两者混合加热至60℃，搅拌并滴加1N NaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml）。（4）戊二醛-甲醛液（戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml）。戊二醛是二醛基化合物，交联结合力比甲醛大，Bullock认为交联过强，可出现组织改变和空间遮蔽现象，影响组织的抗原性。但McDonald等认为，该试剂用于PAP法免疫酶标记效果仍满意。（5）甲醛升汞固定液（即B5固定液。浓甲醛10ml，氯化汞6g,醋酸钠1.25g ,蒸馏水90ml）。有人认为此固定液悬液是较理想的固定液，标记IgA、IgM、IgG等抗原效果良好。也有人认为它减弱细胞的抗原性，上皮细胞可产生非特异性荧光，故不宜用于免疫荧光标记。氯化汞是一种强蛋白凝固剂，但对组织穿透性弱，且使组织收缩，故与甲醛混合使用。（6）醋酸-甲醛液（浓甲醛10ml，冰醋酸3ml，生理盐水加至100ml）。Bullock等认为此液固定效果良好，组织可不经消化，胞浆IgA、IgG、IgM、IgD和K、λ、J链标记均呈阳性，且背景染色极淡。如标记IgG用PAP法第一抗体仅为甲醛升汞液的1/10。此液内醋酸既可防止组织收缩，又可暴露胞浆免疫球蛋白抗原决定簇。（7）Bouin"s液。该固定液为组织学、病理学常用固定剂之一，对组织穿透力较强而收缩性较小，比单独醛类固定更适合免疫组化染色。Kayhko认为用于标记B细胞的J链较好，但Bullock则认为它可导致IgG γ重链变性，故必需加大第一抗体的浓度。（8）Zamboni"s液。该固定液可用于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存优于纯甲醛，也适用于光镜免疫细胞化学研究。采用2.5%多聚甲醛和30%饱和苦味酸，更可增加对组织穿透力和固定效果，以保存更多的组织抗原。固定时间6-18h。（9）PLP液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液）。该固定剂适用于富含糖类的组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基，通过赖氨酸的双价氧基与醛基结合，从而与糖形成交联。组织抗原大多数是由蛋白质和糖两部分构成，抗原决定簇位于蛋白部分，故该固定液有选择性地使糖类固定，既稳定缺的，又不影响其在组织中的位置（固定剂7-9配制法见附录1）。

选择最佳固定液标准是： （1）最好地保持细胞和组织的形态结构； （2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的； （3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光； （4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。 单纯固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。 甲醛（40%） 100ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml （2）乙醇固定液：使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。 （3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。 混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 甲醛（40%） 100ml 95%乙醇 900ml （2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。 无水醋酸钠 1.25g升汞 6.0g蒸馏水 90ml 使用前加入甲醛 10ml （3）Bouin固定液：非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。 饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml（4）Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。 无水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml （5） Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。 升汞 　　　　　　　　 5.0g 重铬酸钾 　　　　　　　2.5g 蒸馏水（加至）　　　　100ml

多聚甲醛和波恩试剂制作切片的区别1.灌注完后，将组织直接放到梯度蔗糖中足够时间，观察组织块，待其沉淀即可。当然，如果组织已经经过甲醛固定，且必须要制作冷冻切片，掌握了对组织的处理技术也能制作出良好的冰冻切片。（如果要方法，可以给你）2.用多聚甲醛固定，要看你所取的组织大小，一般以厚度5毫米，长宽不超过15*15毫米为宜。小组织一般48小时，如果比较大的组织最好延长时间。当然，软组织或者较大组织可先经2-3小时固定后在修整成小块投入新配置的固定液继续固定。我们解剖室稍微大点的组织一般就是固定一周左右或者更长，如果不急用的话。（个人观点仅供参考）

固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟，即可去除1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。冰冻切片可以直接用丙酮固定。其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。

HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。 HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的 常规染色方法。一张好的HE切片是保证正确病理诊断的关键。切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。作为一个合格的实验技术员，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的一门重要功课。 HE染色的实验原理及注意事项 一、细胞核染色原理： 苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。 二、细胞浆染色原理： 细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。 三、分化作用： 染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此，在HE染色中分化是极为关键的一步。 四、返蓝作用： 分化之后，苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色，在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而终止分化，再用弱碱性水（0.2%氨水）使苏木精染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。 实验材料 固定液：常用95%乙醇和冰丙酮 苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。 伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。 稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸。 系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。 培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。 实验步骤 样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS 洗涤3次。 样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。 染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。 分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。 染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。 吹干或自然晾干细胞 爬片后，中性树胶封片。 若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。 实验结果及注意事项 ** 实验结果** 细胞核呈蓝色，细胞质，肌纤维，胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色 注意事项： 1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。 2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。 3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

　　我们都知道新房装修好都会存在一定甲醛的，而甲醛对人的身体会带来伤害，所以会对甲醛进行处理。那么，在甲醛里，有一种叫做多聚甲醛，这是什么呢?下面跟随小编一起来了解吧!　　说起多聚甲醛，其实它可以代替普通工业甲醛水溶液，在合成农药、合成树脂、涂料及制取熏蒸消毒剂等多种多样的甲醛下游产品中，既可减少脱水的能耗，又可大大减少废水处理量，这是一项利国利民绿色环保工程。　　健康危害　　侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。　　健康危害：本品对呼吸道有强烈刺激性，引起鼻炎、咽喉炎、肺炎和肺水肿。对呼吸道有致敏作用。如果眼直接接触可致灼伤。对皮肤有刺激性，引起皮肤红肿。口服的话，会强烈刺激皮肤长期反复接触引起干燥、皲裂、脱屑。　　毒理学资料及环境行为　　急性毒性：LD501600mg/kg(大鼠经口)　　危险特性：遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧的危险。受热分解放出易燃气体能与空气形成爆炸性混合物。粉体与空气可形成爆炸性混合物，当达到一定浓度时，遇火星会发生爆炸。　　急救措施　　皮肤接触：要赶紧脱去衣服，用肥皂水和清水彻底的清洗。　　眼睛接触：这个是很危险的，要赶紧提起眼睑，用生理盐水或者是流动清水冲洗眼睛十五分钟，然后到医院就医。　　吸入：如果不小心吸入，要迅速离开现场，到一个空气清新的地方，保持呼吸道通畅。如果呼吸困难的话就要输氧，呼吸停止，进行人工呼吸，赶紧就医。　　食入：是这样的情况的话，就要给误服者喝大量的温水，达到催吐的效果，然后送到医院就医。　　它的用途　　其实多聚甲醛主要是用于除草剂的生产和使用,还用于制取合成树脂(如人造角制品或人造象牙)与胶粘剂。多聚甲醛同时用于制药工业及药房、衣服和被褥等的消毒,多聚甲醛也可用作熏蒸消毒剂、杀菌剂和杀虫剂。　　由此可见，多聚甲醛是有毒的，所以对人的身体也是很有害的，请大家一定要注意安全使用，做好防护措施。毕竟身体健康很重要，个人安全也很重要。　　甲醛相关文章推荐：　　装修知识：甲醛污染防治小知识　　三大妙招轻松解决家具中的甲醛　　板式家具甲醛超标怎么办　　七个妙招教您去除装修甲醛　　4个技巧去除装修中的甲醛打造健康家居

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1：甲醛，易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％ 4：戊二醛，穿透性强，微细结构保存好

在4℃溶解于 100ml PBS，保存半年应该没问题。

1：甲醛，易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％4：戊二醛，穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。

4%的多聚甲醛可以放室温一个月。根据查询相关信息显示，4%的多聚甲醛放室温4℃保存，最多只能保存一个月，长期储存需要置于零下20℃。多聚甲醛是免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学（ICC)研究中最常用的固定剂之一。该固定剂较为温和，能很好地保存组织的抗原性和细微结构，适于组织标本和细胞片的较长期保存，非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。

使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48hours,固定时间太久组织会变脆如果是在温度4°以下最多可以放一个月,但是肯定会损失抗原的还有，多聚甲醛的具体配法是什么呢？我是用来做细胞涂片固定用。60度加热多久就可以？还是一直加热着？我是电炉子加热，温度一到60度就关电炉子，然后磁力搅拌器搅拌4个小时左右。

4%多聚甲醛配法如下：1、第一步，使用电子天平称取4克多聚甲醛固体粉末；2、第二步，将称量好的多聚甲醛固体粉末转移到烧杯中，并加入100毫升，pH7.4的0.1摩尔/升的PBS溶液，进行搅拌；3、第三步，将烧杯置于磁力搅拌器上，加热搅拌溶解（温度控制在60度以下）；4、第四步，调剂溶液的酸碱度，使其成7.4左右，转移保存，操作完成！聚甲醛(POM)，又名缩醛树脂、聚氧化亚甲基，聚缩醛，是热塑性结晶性高分子聚合物，被誉为“超钢”或者“赛钢”。1955年前后美国杜邦公司由甲醛聚合得到甲醛的均聚物。聚甲醛很易结晶，结晶度70%以上。均聚甲醛的熔融温度为180℃左右。它是继聚酰胺之后又一种综合性能优良的工程塑料，具有高的力学性能，如强度、模量、耐磨性、韧性、耐疲劳性和抗蠕变性，还具有优良的电绝缘性、耐溶剂性和可加工性，是五大通用工程塑料之一。缩醛树脂的热降解有四种机理。第一种是热或碱催化的链解聚；结果是释出甲醛，聚合物的端基割闭可减少这种倾向；第二种是氧进攻聚合物的无规则位萱也导敛解聚，采 用抗氧剂可减少这种降解机理的发生，共聚也有助于降低这种倾向。第三种机理是缩醛树脂链被酸断裂。第四种降解是当温崖超过270℃时发生热解聚，这一点很重要，它告诫操作者加工温度要保持270℃以下，以避免聚合物降解。

多聚甲醛溶液变黄的原因是吸收甲醛。根据查询相关公开信息显示，多聚甲醛溶液吸收甲醛前是白色，吸收甲醛后变为黄色，有效成分是乙酰丙酮，发生显色反应也是甲醛在酸性条件下和乙酰丙酮发生络合反应的结果。

triton X-100是非离子型表面活性剂,在4%多聚甲醛固定过程中起着增加细胞膜通透性的作用!

先加热水（多聚甲醛易溶于热水， 并放出甲醛），再加热使之熔化（多聚甲醛熔点120～170℃），注意：多聚甲醛属于易燃固体，处理的时候一定要注意。

1、甲醛和尿素在催化剂的作用下，经过一定的化学反应可以得到一种物质——脲醛树脂，脲醛树脂可以用来制造塑料、合成纤维、涂料、粘合剂等多种材料。2、由于脲醛树脂原料丰富、生产工艺简单、成本低廉、粘合强度高，由其制成的粘合剂用途十分广泛。尤其是在木材加工业中，制造各种人造板材所使用的粘合剂有90%都是用脲醛树脂及其经过改性的产品制成的。3、生产粘合剂时，为增加脲醛树脂的稳定性，甲醛的用量比例会适当增加，因此会有部分未参与反应的甲醛残留，造成日后甲醛释放。4、甲醛和尿素生成脲醛树脂的这一过程是可逆的，也就是说在一定条件下（比如受热、老化等）脲醛树脂又可以分解出甲醛来，所以使用脲醛树脂制造的人造板材释放甲醛的周期也会比较长，可以长达3-15年。5、使用脲醛树脂制造的人造板材是造成室内甲醛污染的主要来源，如橱柜、衣柜、书柜、隔断等，此外含脲醛树脂的涂料、墙纸胶水等也会释放大量甲醛。扩展资料有关资料表明：室内空气污染比室外高5～10倍，污染物多达500多种。室内空气污染已成为多种疾病的诱因，而甲醛则是造成室内空气污染的一个主要方面。1、刺激作用：甲醛的主要危害表现为对皮肤黏膜的刺激作用，甲醛是原浆毒物质，能与蛋白质结合、高浓度吸入时出现呼吸道严重的刺激和水肿、眼刺激、头痛。2、致敏作用：皮肤直接接触甲醛可引起过敏性皮炎、色斑、坏死，吸入高浓度甲醛时可诱发支气管哮喘。3、致突变作用：高浓度甲醛还是一种基因毒性物质。实验动物在实验室高浓度吸入的情况下，可引起鼻咽肿瘤。4、突出表现：头痛、头晕、乏力、恶心、呕吐、胸闷、眼痛、嗓子痛、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻、记忆力减退以及植物神经紊乱等。孕妇长期吸入可能导致胎儿畸形，甚至死亡；男子长期吸入可导致男子精子畸形、死亡等。参考资料来源：百度百科-甲醛

我做的一个试验用到多聚甲醛，加的盐酸使其解聚。如果想得到单纯甲醛水溶液，我觉得应该加入硫酸解聚，然后蒸馏。不能加盐酸，易挥发。

一、成纤维细胞微丝的染色及其对细胞松驰素B的反应(一)原理微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状。(二)细胞松驰素B处理成纤维细胞与染色观察1、在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。2、在有两片的平皿内加100μg/ml的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。3、将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理，另一张用培养液洗五次（在平皿内换五次培养液，每次都要摇动），继续培养、观察。两小时后细胞形状恢复，接近正常。4、对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。5、染色处理①将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片，换液三次，每次3分钟，洗去培养液。②将盖片移入2％Triton X-100液，置37℃恒温箱内处理20～30分钟，以提取骨架以外的蛋白质，使骨架图像清晰。③立刻将盖片移入M-缓冲液，换洗三次，每次3分钟。M一缓冲液有稳定细胞骨架的作用。④将盖片移入3％戊二醛固定15分钟。⑤将盖片移入0.2％考马斯亮兰染液中，染色15分钟。然后小心地用自来水冲洗，空气干燥。(三)结果光镜观察，微丝聚集成的张力纤维束被染成蓝色。在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列；用细胞松驰素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回，多数细胞形状变圆；用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚台形成微丝，细胞形状恢复正常。二、丽藻细胞内胞质环流及其对细胞松弛素B的反应(一)原理丽藻细胞大，整个细胞的中央为大液泡占据。靠近液泡是一层溶胶样流动的内质，在内质与质膜之间，为静止的外质，其中含有叶绿体。内质中含有许多颗粒，可以清楚地看到胞质环流。在丽藻细胞中的微丝与胞质环流有密切关系。成束的微丝出现在外质与内质接口(溶胶和凝胶接口)并交织一起，与环流方向平行。用细胞松弛素B处理后，就可抑制胞质的环流运动。

多聚甲醛甲醛含量的测定通常采用碘量法、酸碱滴定法。 碘量法是多聚甲醛在碱性介质中用碘酸钠使之氧化成蚁酸，反应机理如下： 3I2+6NaOH→NaIO3+3H2O+5NaI （HCOH）3+NaIO3+3NaOH→3HCOONa+NaI+3H2O 1）仪器：250mL锥形瓶，100mL容量瓶。 2）试剂：0.1N碘的碘化钾溶液，1N盐酸溶液，1N氢氧化钠溶液，0.1N硫代硫酸钠溶液，1%淀粉指示剂。 3）实验步骤：称取0.2g聚甲醛在100mL的容量瓶内溶于30mL的1N苛性钠溶液中，并用蒸馏水使体积加至刻度。取出25mL所得溶液放置在250mL 锥形瓶中，加入50mL的0.1N碘的碘化钾溶液，将烧瓶盖好，混合物放置30min。然后用10mL的1N盐酸溶液酸化，加入3～4滴1%的淀粉溶液用0.1N的溶液滴定过量的碘。同时进行没有聚甲醛的空白实验。 4）计算：聚甲醛的百分含量X 按以下公式计算： X=(a-b)k×0.001501×100×100/(25×0.2) 式中：a-空白实验滴定时所消耗的硫代硫酸钠毫升数； b-实验溶液滴定时所消耗的硫代硫酸钠毫升数； k-硫代硫酸钠的当量浓度，mol/L； 其中0.001501相当于1 mL0.1N碘溶液的甲醛量，g。 酸碱滴定法测定甲醛含量 多聚甲醛在过量的氢氧化钠溶液中与过氧化氢反应生成甲酸钠，然后再用硫酸标准溶液反滴过量的氢氧化钠溶液，反应机理如下： CH2O+H2O+NaOH→HCOONa+2H2O 2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O 1）仪器：250mL锥形瓶，50mL 滴定管（分度值0.1mL），50mL大肚移液管。 2）试剂：硫酸标准溶液（C1/2H2SO4=1mol/L ），氢氧化钠标准溶液（CNaOH=1 mol/L），3%过氧化氢溶液（用9 体积的蒸馏水稀释1体积的30%的过氧化氢），溴百里酚蓝指示液（10 g/L）。 3）实验步骤：称取0.6 g 样品，称准至0.0001g，置于250mL锥形瓶中，准确加入50.0 mL的1mol/L的标准氢氧化钠滴定溶液，再慢慢加入50mL新配制的3%的过氧化氢溶液，不时地轻轻摇动锥形瓶至反应完全。冷却静置10min。然后加入6 滴溴百里酚蓝指示液，用硫酸标准溶液滴定至蓝绿色，同时做空白实验。 4）计算： X=(V0-V)C×3.003×100/m 式中：X-多聚甲醛含量（以甲醛计）； V0-滴定空白消耗的硫酸标准溶液的体积，mL； V-滴定样品消耗的硫酸标准溶液的体积，mL； C-硫酸标准溶液的浓度，mol/L； m-样品的质量,g； 其中3.003与1.00 mL 硫酸标准溶液相当于以克表示的甲醛的质量，g。 2, 6- 二乙基苯胺(简称DEA)的分析方法 仪器: 气相色谱仪(Agilent 6890N, 配氢火焰离子检测器和色谱数据处理机)、色谱柱(30m×0.25mm,壁涂HP-1, 膜厚0.25μm),旋转蒸发仪。 试剂: 丙酮、乙醚、二氯甲烷、石油醚( 以上试剂均为AR, 并经过一次蒸馏) ; DEA 标品( 纯度98.0%) 、DEA 标准溶液( 准确称取适量DEA 标品,用丙酮溶解配成浓度为1000mg/L的贮备液, 然后根据需要稀释成适当浓度的标准工作液; 二次蒸馏水) 。 气相色谱操作条件的选择 柱温: 280℃; 气化温度: 300℃; 检测器温度: 300℃; 气体流速(mL/min) : 载气( 氮气) :约2.0、氢气约30、空气约400; 分流比: 10∶1;进样量: 1μL。 在上述色谱条件下, DEA 保留时间( tR) 为3.1 min, 在此保留时间附近无其它色谱峰. 采用外标-标准曲线法进行定量分析 在上述的色谱操作条件下, 待仪器基线稳定后,连续注入数针标样溶液, 计算各针相对响应值的重复性, 直至相邻两针的响应值变化不大于10%, 按标样溶液、待测溶液、待测溶液、标样溶液顺序进样分析。将测得的两针有机相溶液以及前后两针标样溶液中DEA 峰面积( 峰高) 分别进行平均, 待测样中的DEA 浓度按下式计算。 C=A×E/AE 式中: C-待测样中DEA的浓度(mg/L) ; E-标样中DEA 的浓度(mg/L) ; AE- 标样中测得DEA的峰高或峰面积; A- 待测液中DEA的峰高或峰面积;最低检测量为10-9 g, 最低检测浓度为0.01mg/L。

4%多聚甲醛固定液需要现配现用。先配现用，多聚甲醛容易挥发。上午使用，前一天下午配置。下午使用，当天上午配置。

4的甲醛作为单纯固定液的缺点为有毒。4%多聚甲醛固定液是有毒的，都是买huayueyang配好的，-20度保存。多聚甲醛不是固定剂。必须在溶液中解聚成甲醛。在细胞培养中，典型的甲醛固定程序将涉及使用4%甲醛溶液，磷酸盐缓冲溶液（PBS）在冰上放置10分钟。

4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。

4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。至于用PBS、PB、生理盐水或蒸馏水，当然理论上维持渗透压最好，尤其在对固定要求高，或没有灌注，组织块较大，达到固定效果的时间较长时可能有所差异；但对于灌注固定或很小组织块，浸入后很快就能达到固定效果，用蒸馏水配也是可以的。

1、两者呈现的形态是不一样的，甲醛是一种有害气体，存在于装修板材、油漆、壁纸当中，多聚甲醛呈现的是粉末，一般是固体的状态，甲醛则是一种水溶液。2、使用方式不同，甲醛在我们的日常生活中无处不在，尤其是家里面刚刚装修，有可能就会存在甲醛。如果在装修的过程中，有一些板材用的是胶和制作而成，就会释放出甲醛，有的时候会有刺激性的味道。多聚甲醛不能够直接使用，要解聚之后才能够用，也会有甲醛的气味，溶于热水，这时候就会释放出甲醛。

多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果，和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。多聚甲醛多制成多聚甲醛固定液来进行固定，多聚甲醛液的配方决定了多聚甲醛的固定性，多聚甲醛液中含有pbs溶液，HCL，这些溶液和多聚甲醛按照一定的方法混合在一起就具有了个定作用。

4%的多聚甲醛溶液和4%的甲醛溶液有区别吗4%的甲醛溶液实际上指的是10%甲醛溶液,因为甲醛溶液本身含量为39%,一般用水稀释配成10%的溶液用作组织固定用。习惯上叫10%甲醛溶液,实际上含甲醛

标本固定液甲醛溶度是多少？答：甲醛含量为35%至40%(一般是37%)的水溶液，也加入10%~15%的甲醇防止聚合。具有防腐、消毒和漂白的功能，又称为福尔马林固定液。名词解释：福尔马林固定液是有刺激性气味的无色液体。福尔马林的主要成分是甲醛，它是一种易溶于水的高刺激性有毒气体，具有易燃性及腐蚀性，在空气里一般能测出微量。在甲醛制造方面通常利用氧化甲醇的化工方法制得。甲醇氧化之后可得甲醛，而甲醛继续氧化之后可得甲酸。三者皆为毒性物质，在剂量相同的情形下，以对人体的毒性而言，毒性比为甲醇：甲醛：甲酸 = 1：30：6，即甲酸的毒性为甲醇之六倍，而甲醛的毒性为甲醇之三十倍。福尔马林即甲醛的水溶液，一般含有37～40%甲醛气体，在其中加入8～15%甲醇(methylalcoh01)，可防止甲醛的聚合。它是无色液体，有强烈的刺激性气味，沸点为96℃，相对密度(比重)为1．081～1．086，呈弱酸性，若将它放置在冰箱内贮存或在室温下贮存较久，水溶液中可析出白色沉淀，即多聚甲醛，若将其加热又可变成液体，因此福尔马林不适宜在冰箱中冷藏，否则容易发生凝聚[3] 。福尔马林不可接触强氧化剂、强碱、酚类、尿素等物质，易引起化学反应造成危险，药理作用 ：35～40%的甲醛水溶液叫做福尔马林，阻止细胞核蛋白的合成，抑制细胞分裂及抑制细胞核和细胞浆的合成，导致微生物的死亡[2] 。用途：能有效地杀死细菌繁殖体，也能杀死芽胞（如炭疽芽胞），以及抵抗力强的结核杆菌、病毒[4] 。多用于畜禽棚舍、仓库、卵化室、皮毛、衣物、器具等的熏蒸消毒和标本、尸体防腐；也用于胃肠道制酵

1、两者呈现的形态是不一样的，甲醛是一种有害气体，存在于装修板材、油漆、壁纸当中，多聚甲醛呈现的是粉末，一般是固体的状态，甲醛则是一种水溶液。2、使用方式不同，甲醛在我们的日常生活中无处不在，尤其是家里面刚刚装修，有可能就会存在甲醛。如果在装修的过程中，有一些板材用的是胶和制作而成，就会释放出甲醛，有的时候会有刺激性的味道。多聚甲醛不能够直接使用，要解聚之后才能够用，也会有甲醛的气味，溶于热水，这时候就会释放出甲醛。

多聚甲醛又称固体甲醛，是一类线型短链的聚氧甲撑二醇HO(CH2O)nH（式中的n=8-100）混合物，其中还含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性状为甲醛的固体聚合物。白色无定型粉末，有辛辣气味。 其配制方法如下：一、方法1：4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）。试剂为多聚甲醛40g，0.1mol/L磷酸缓冲液1000ml。1、配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1nNaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。2、该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。二、方法2：4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠。试剂A液为多聚甲醛40g，蒸馏水400ml；B液Na2HPO4·2H2O16.88g，蒸馏水300ml；C液NaOH3.86g，蒸馏水200ml。1、配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1nNaOH或1NHCl 将pH调至7.2～7.4，最后补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。2、该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。