如何降解双链DNA中的单链DNA

两者的区别：限制性内切酶的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染，而外切酶其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNMP，RNA为NMP）。核酸内切酶（endonuclease）：在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶，与核酸外切酶相对应。外切酶：即核酸外切酶（exonuclease ）核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。拓展资料：30多年前，当人们在对噬菌体（细菌病毒）的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，将基因切割成小的基因片段。限制性酶主要分为三种类型：Ⅰ型限制酶为复合功能酶，具有限制-修饰两种功能，但在 DNA链上没有固定的切割位点，一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割，不产生特异性片段。Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点，但这两类酶对 DNA酶切分析的意义不大，通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶，它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序，产生特异性的DNA片段。当限制性内切酶的应用在上世纪七十年代流传开来的时候，以NEB为代表的许多公司开始寻找更多的限制性内切酶。除了某些病毒以外，限制性内切酶只在原核生物中被发现。人们正在从数以千计的细菌及古细菌中寻找新的限制性内切酶。而对已测序的原核基因组数据分析表明，限制性内切酶在原核生物中普遍存在，所有自由生存的细菌和古细菌似乎都能编码限制性内切酶。单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子， 实际操作时需要配合解旋酶操作。双链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）、λ噬菌体核酸外切酶（λexo）以及T7噬菌体基因6核酸外切酶等。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）具有多种催化功能，可以降解双链DNA分子中的许多类型的磷酸二酯键。其中主要的催化活性是催化双链DNA按3′→5′的方向从3′-OH末端释放5′-单核苷酸。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）通过其3′→5′外切酶活性使双链DNA分子产生出单链区，经过这种修饰的DNA再配合使用Klenow酶，同时加进带放射性同位素的核苷酸，便可以制备特异性的放射性探针。限制性核酸内切酶分析技术是病原变异、毒株鉴别、分型及了解基因结构和进行流行病学研究的有效方法，对动物检疫有很重要的实用意义，尤其对区别进出境动物及动物产品携带病毒是疫苗毒还是野毒，以及推论其是本地毒还是外来毒有很重要的意义。

两者同属核酸酶,只是切割核酸的方式不一样而已。凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶，凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）。扩展资料：内切酶主要分成三大类。第一类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链,但是切割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的。这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因工程中没有多大用处,无法用于分析DNA结构或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。第二类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。所以总能得到同样核苷酸顺序的DNA片段,并能构建来自不同基因组的DNA片段,形成杂合DNA分子。因此,这种限制性内切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。第三类内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序,即有一个中心对称轴,从这个轴朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切割可以有两种方式。一是交错切割,结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为粘性末端。参考资料：百度百科-核酸外切酶

DNA聚合酶具有两种活性,一个是聚合酶活性,5"——3",意思是说在合成的单链或者引物链的3"加上与模板链互补的脱氧核苷酸 此外,DNA聚合酶还有一个外切酶活性位点,用来校正剪切掉错误的脱氧核苷酸.这个活性是3"——5"方向,所以可以将新链3"端的错误配对脱氧核苷酸去掉. 两个位点对于DNA的结合能力是不同的,正常情况（即配对正确）下,聚合酶位点的结合能力强,而外切酶位点结合能力弱,因此DNA聚合酶从5"向3"合成双链DNA；当合成时出现错配的情况,聚合酶位点与错配链的结合能力下降约100倍,而外切酶的结合能力不变,强于此时的聚合酶位点,所以DNA3"端移向外切酶位点,并剪切掉错误的配对；当错误配对被切掉后,相当于重新回到了正确配对的情况,故而聚合酶位点结合能力再次强于外切酶位点,DNA回到聚合酶位点,继续合成新链. 这是由我们分子生物学的课程中学来的,我们使用的教材是《molecular biology of genes》,由发现DNA双螺旋的Waston主编 如果你还是不懂,可以将邮箱发给我,我可以将我们上课的课件发给你

1、这是一类能从DNA分子中间水解磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNMP，RNA为NMP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

核酸内切酶 endonuclease 核酸内切酶是在核酸水解酶中,水解DNA分子链内部磷酸二酯键生成寡/寡聚核苷酸的酶.从对底物的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶；脾脏RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶；还有就是如链孢霉（Neurospora）核酸酶这类既分解DNA又分解RNA的酶.一般来说,大都不具碱基特异性,但也有诸如HindⅢ、EcoRⅠ等具有限制性的,能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶. 核酸外切酶exonuclease 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键,降解核苷酸的酶.其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNTP,RNA为NTP）.按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶. 单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）.核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA,产生出寡核苷酸短片段,而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶,是一种耐受性很强的核酸酶.核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置.它只切割末端有单链突出的DNA分子. 双链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）、λ噬菌体核酸外切酶（λexo）以及T7噬菌体基因6核酸外切酶等.大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）具有多种催化功能,可以降解双链DNA分子中的许多类型的磷酸二酯键.其中主要的催化活性是催化双链DNA按3′→5′的方向从3′-OH末端释放5′-单核苷酸.大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）通过其3′→5′外切酶活性使双链DNA分子产生出单链区,经过这种修饰的DNA再配合使用Klenow酶,同时加进带放射性同位素的核苷酸,便可以制备特异性的放射性探针. λ噬菌体核酸外切酶（λexo）最初是从感染了λ噬菌体的大肠杆菌细胞中纯化出来的.这种酶催化双链DNA分子从5′-P末端进行逐步的水解释放出5′-单核苷酸.但不能降解5′-OH末端.

肽链外切酶是从肽链的一端开始，一个接一个把氨基酸水解下来； 作用位点 ——端点核酸内切酶则从肽链中间特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断； 作用位点 ——中间特殊的肽链位点

35核酸外切酶和53核酸外切酶有以下三个区别：1、一条DNA有2端，就像一条绳子有两头一样，3‘5"核酸外切酶可以从3‘端开始降解DNA，而5"3‘核酸外切酶可以从5"端降解DNA；2、水解磷酸二酯键的3′端生成5′-单核苷酸的酶，有蛇毒磷酸二酯酶及大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等； 水解5′端生成3′-单核苷酸的酶有脾脏磷酸二酯酶、嗜酸乳杆菌（Lac-tobacillus acidophilus）核酸酶。3、从反应的角度看 区别只有反应的方向不一样，作用方式就是磷酸二酯键的水解作用，一般的是水解出3"游离羟基和5"游离磷酸基团，水作为亲核试剂对5"侧的磷原子进行亲和加成 形成不稳定中间体后 3"侧的羟基发生消除反应和一般的酯类水解类似。扩展资料：核酸内切酶与外切酶区别1、水解位置不同核酸内切酶是一类能从DNA分子中间水解磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。2、切点要求不同核酸内切酶的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序，即识别顺序。而核酸外切酶的切点要求比较低。3、分类不同核酸内切酶可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶，以及RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′-单核苷酸的酶，及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有蛇毒磷酸二酯酶及大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等；后者有脾脏磷酸二酯酶、嗜酸乳杆菌核酸酶。参考资料：百度百科—外切酶百度百科—核酸外切酶

外切酶：从核酸一端一个一个的水解掉核苷酸. 内切酶：从核酸内部特定位点切断核酸.

核酸外切酶是从双链核酸中的一条链的切口处，从5"端或者3"端逐个切下单核苷酸，即切断核酸的3",5"－磷酸二酯键，产生单核苷酸。（注：核酸就是右单核苷酸通过3",5"－磷酸二酯键连接而成）

核酸外切酶 就是将核酸序列3"游离端或者5"游离端逐一水解成减少一个核苷酸长度的核酸链和游离的核苷酸 区别就是水解的起点端不一样 3"→5"核酸外切酶就是从核酸的3"游离羟基端逐一水解核酸链 5"→3"是从5"游离磷酸基团端逐一水解核苷酸链 从反应的角度看 区别只有反应的方向不一样 作用方式就是磷酸二酯键的水解作用 一般的是水解出3"游离羟基和5"游离磷酸基团 具体细节的反应机理作用方式 参见有机化学的亲和取代吧 水作为亲核试剂对5"侧的磷原子进行亲和加成 形成不稳定中间体后 3"侧的羟基发生消除反应 和一般的酯类水解类似 不过是在酶的催化作用下完成的一般的水解酶中有Ser或者Tyr等含有羟基的活性位点 可以在代替水进行亲和进攻 常见的类似的磷酸酯键的水解还有 氯解磷定或碘解磷定对未老化的有机磷农药中毒的乙酰胆碱酯酶的解毒过程……

1、水解位置不同核酸内切酶是一类能从DNA分子中间水解磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。2、切点要求不同核酸内切酶的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序，即识别顺序。而核酸外切酶的切点要求比较低。3、分类不同核酸内切酶可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶，以及RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。可大致分为水解磷酸二酯键的3′端生成5′-单核苷酸的酶，及水解5′端生成3′-单核苷酸的酶。前者有蛇毒磷酸二酯酶及大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等；后者有脾脏磷酸二酯酶、嗜酸乳杆菌核酸酶。参考资料百度百科-核酸内切酶百度百科-核酸外切酶

核酸内切酶 endonuclease 核酸内切酶是在核酸水解酶中,水解DNA分子链内部磷酸二酯键生成寡/寡聚核苷酸的酶.从对底物的特异性来看,可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶；脾脏RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶；还有就是如链孢霉（Neurospora）核酸酶这类既分解DNA又分解RNA的酶.一般来说,大都不具碱基特异性,但也有诸如HindⅢ、EcoRⅠ等具有限制性的,能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶. 核酸外切酶exonuclease 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键,降解核苷酸的酶.其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNTP,RNA为NTP）.按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶. 核酸外切酶的作用：从核酸链的一端逐个水解下核苷酸. 限制性核酸内切酶的作用：识别特定的核苷酸序列,并在DNA分子内部的一定位点切割DNA .

核酸外切酶 就是将核酸序列3"游离端或者5"游离端逐一水解成减少一个核苷酸长度的核酸链和游离的核苷酸 区别就是水解的起点端不一样 3"→5"核酸外切酶就是从核酸的3"游离羟基端逐一水解核酸链 5"→3"是从5"游离磷酸基团端逐一水解核苷酸链 从反应的角度看 区别只有反应的方向不一样 作用方式就是磷酸二酯键的水解作用 一般的是水解出3"游离羟基和5"游离磷酸基团 具体细节的反应机理作用方式 参见有机化学的亲和取代吧 水作为亲核试剂对5"侧的磷原子进行亲和加成 形成不稳定中间体后 3"侧的羟基发生消除反应 和一般的酯类水解类似 不过是在酶的催化作用下完成的一般的水解酶中有Ser或者Tyr等含有羟基的活性位点 可以在代替水进行亲和进攻 常见的类似的磷酸酯键的水解还有 氯解磷定或碘解磷定对未老化的有机磷农药中毒的乙酰胆碱酯酶的解毒过程……

用于基因工程的工具酶一,限制性内切酶(Endonucleosase)(一)限制性内切酶(Endonucleosase)的发现与分类1) 50年代初发现细菌能将外来DNA片段在某些专一位点上切断,从而保证其不为外来噬菌体所感染,而其自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护,这种现象叫做限制-修饰,它们由三个基因位点所控制:hsd R, hsd M, hsd S, 十年后,人们搞清了细菌的限制与修饰分子机理: hsd R---限制性内切酶 hsd M---限制性甲基化酶 hsd S---控制两个系统的表达 1968年Smith等人从流感嗜血杆菌株中分离出两个类内切酶,Hind II和Hind III,为基因工程技术的诞生奠定了基础. 截止到目前为止,已经分离出400余种II类酶,搞清识别位点的有300种,商品化的约有一百种,而实验室常用的有二十种 .2)限制性核酸内切酶可分为三大类: I类 能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近切割双链,但切割序列没有专一性.II类 识别位点(回文序列)严格专一,并在识别位点内将双链切断 III类 识别位点严格专一(不是回文序列),但切点不专一,往往不在识别位点内部.因此在基因工程中具有实用价值的是II类限制性内切酶. (二)II类限制性内切酶的命名及特性 命名原则:取属名的第一个字母大写,取种名的前两个字母小写,构成基本名称.该种中发现的不同的酶按照顺序编号I, II, III等.如存在变种和品系,取变种或品系的一个字母.若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子.如,HindIII从Haemophilus Influenzue d株中分离的第三个酶.EcoRI表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上.(三)II类限制性内切酶的底物识别顺序及切割位点 绝大多数的II类限制性内切酶在底物DNA上的识别顺序长度为4,5,6碱基对,这些碱基对的顺序呈回文结构(Palindromic),而且切点就在其内部,如EcoRI 5"-GAATTC-3" .DNA被限制性内切酶切开之后,呈现两种断口:钝端(平端)如Pvu II, Alu I, EcoR V等粘端(粘性末端)如:EcoR I等图2-1 限制性内切酶产生的末端(四)识别位点在DNA分子中的频率对于特定的限制性酶在DNA分子中的识别位点数目是可以计算的,四碱基的酶平均大约每256个核苷酸(44)有一个识别位点,而六碱基的酶大约4096(46)个核苷酸有一个识别序列,计算是在假定核苷酸随机排列的情况下进行的.实践中这种方法不完全正确,如λ DNA长49kb,对于六碱基的酶应该有12个切割位点,实际上要少一些,如Bgl II只有6个,BamHI只有5个,而SalI只有2个.二,甲基化酶 在专一位点上甲基化,与限制性内切酶相对应.(一)大肠杆菌中的甲基化酶 dam甲基化酶: 可在5"GATC3"序列中的腺嘌呤N6位置上引入甲基,这样可使一些识别顺序中含有5"GATC3"的限制性内切酶不能切割来自大肠杆菌的DNA如Bcl I(TGATCA),但BamH I(GGATAA)则不会因为N6A的甲基化而失去活性,因为这两种酶对底物的特异性不同. dcm甲基化酶 此酶在序列5"CCAGG3"或5"CCTGG3"中的胞嘧啶C5上引入甲基,受其影响的限制性内切酶是EcoR II. (二) 甲基化酶在基因工程中用途许多II类限制性内切酶,都存在着相对的甲基化酶,它们可修饰限制酶识别顺序中的第三位腺嘌呤上,封闭酶切位点,从而使其免受切割.如:M.EcoRI催化s-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)的甲基转移到EcoRI识别顺序中的第三位腺嘌呤上,从而使DNA免受EcoRI的切割.三,T4-DNA连接酶(T4-DNA Ligase)来源于T4噬菌体感染的大肠杆菌,连接修复3"端羟基和5"端磷酸基因,脱水形成3"-5"磷酸二酯键连接双链DNA上的单链缺口(Nick),因此亦可连接限制内切酶所产生的粘性末端 连接RNA模板上的DNA链缺口连接平头双链DNA速度很慢,在高浓度的底物和酶的作用下方可进行,这属于分子之间的连接.图2-2 连接酶的作用方式四,核酸酶作用: 降解磷酸二酯键分为:外切酶 内切酶(一) Bal 31(来自于细菌Alteromonas espejiana) 单链特异的核酸内切酶活性,双链特异的内切酶活性.依赖于Ca2+用途:构建限制酶图谱产生末端缺失突变DNA超螺旋线性化(二)E. coli外切酶III只降解DNA分子的一条链,产生单链的DNA分子.(三)S1核酸酶(来源于米曲霉菌)特性:1. 降解单链DNA或RNA,降解DNA的速度大于降解的速度2. 降解发生的方式为内切和外切3. 酶切活性需4.0-4.5pH环境,Zn2+激活4. 酶量过大时会降解双链核酸,因为双链降解活性比单链低75000倍(四) DNase I: 来自于牛胰腺, 既可以降解单链也可以降解双链,没有特异性,产生单核苷酸或短链五,聚合酶(一)DNA聚合酶I5"-3"聚合酶活性3"-5"外切酶活性5"-3"外切酶活性核酸内切酶活性可以被枯草杆菌蛋白酶水解成:Klenow片段和N端具5"-3"外切酶活性的分子.图2-3 DNA聚合酶I(二) Klenow酶该酶无5"-3"外切活性,保留了5"-3"聚合活性及3"-5"外切活性,基因工程中利用该酶:修复限制性内切酶造成的5"突出的粘性末端标记DNA探针催化cDNA第二条链的合成末端终止法测序图2-4 Klenow 酶的作用方式(三) T4 DNA聚合酶与Klenow酶相似,外切酶活性更高.体外诱变反应中效率很高.(四)T7 DNA聚合酶测序酶(五) Taq DNA聚合酶耐高温,主要用于PCR反应.(六) 逆转录酶:将mRNA转录成cDNAAMV逆转录酶(鸟类成髓细胞性白血病病毒)DNA聚合酶活性RNase H活性DNA内切酶活性核酸结合活性M-MLV逆转录酶(Moloney鼠白血病病毒)两种逆转录酶的区别肽链的组成禽酶2条肽链,具聚合酶和很强的RNase H活性鼠酶1条,较弱的RNase H活性反应的最适温度禽酶42°C,二级结构丰富RNA,禽酶效率高反应的最适pH值禽酶pH 8.3鼠酶pH 7.6六,DNA修饰酶有大量的修饰酶,主要的有以下几种:1) 碱性磷酸酯酶(来自于大肠杆菌或小牛肠道)可以去掉DNA分子的5"端的磷酸基团.2) polynucleotide kinase: 来自于T4侵染的大肠杆菌,在5"端增加磷酸基团.3) 末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl tansferase) 来自于小牛胸腺组织,在DNA分子的3"端增加一个或多个脱氧核苷酸.4) Topoisomerase改变共价闭合双链DNA分子的结构第二节 DNA的切割反应一,缓冲系统的组成II类酶的酶活条件:Tris-HCl PH7.5, 25-50mM;10mM MgCl2 ;NaCl 0-150mM; DTT 1mM 根据不同酶对盐离子要求不同,可将缓冲液分为以下三种情况:高盐:100-150mM 中盐:50-100mM低盐:0-50mM 二,酶切操作DNA量的确定,加入酶量的确定,发应体积的确定(20μl),反应时间的确定,1-1.5hr,一般为37℃,但也有例外,如Taq I在65°C时活性最高.单位限制性内切酶定义为:在最佳缓冲系统和20μl体积中反应1小时,完全水解1μgDNA所需的酶量.三,酶切结果分析(一) 酶切片段的检测1) 通过凝胶电泳分离,根据分子量分离.根据凝胶的浓度可以分离不同分子量的片段,聚丙烯酰胺凝胶电泳可以分离1-300bp的分子.2) DNA分子的检测 a. 染色EB,DNA分子小于25ng,很难检测到b. 放射性自显影, 可以监测少到2ng DNA分子.(二)估计DNA分子的大小根据DNA分子的迁移率,可以用公式计算出分子量D=a-b(logM)D是移动的距离,M是分子量,a, b是恒量但随着电泳条件的改变而改变.也可以根据已知大小的片段进行比较,误差约在5%左右.四,多酶联合酶解对于对浓度要求相同的酶,原则上可以同时酶解;对于对浓度要求不同的酶,可以:1. 低盐浓度的酶先切,后补加NaCL2. 一种酶切后,换缓冲液,加5mM NaAc 0.1体积,2体积乙醇,冰浴5min,4℃离心10min,干燥五,定位酶切位点建立酶切图谱需要一系列的酶.首先确定每一种酶切后产生的分子量和片段的数目;然后进行双酶切;比较酶切和双酶切的结果,绘制酶切图谱;含糊的位点可以通过部分酶切解决,可以短时间的酶切或者在4°C条件下进行.六, 限制性内切酶的star活性在PH不合适,或甘油浓度过高≥10%时,限制性内切酶的切割位点会出现非专一性,因此应确保酶的体积为总体积的十分之一以下.第三节 DNA片段的连接重组DNA分子构建的最后一步是连接,通过连接酶完成.相对而言,钝端的连接效率较低,因此一般提高DNA浓度的方法增加接触的机会.而粘性末端的连接效率较高,因为两个粘性末端可以通过氢键碱基互补配对.这种暂时的,碱基配对结构可以提高连接的效率.在分子克隆的连接方式主要有以下几种:一,连接方式(一)相同粘性末端的连接来源:相同的酶同尾酶问题:极性有两种可能 同尾酶连接后,不能用任何一种酶酶切.称为"焊死". (二)平头末端的连接粘性末端--分子内部连接,平头末端--分子间的连接.提高连接效率的方法: 加大酶用量(10倍) 加大平头末端底物的浓度加入10%PEG(8000),促进分子间的有效作用 加入单价阳离子, 150-200mM NaCl提高反应温度平头连接同样存在两种极性 (三)不同粘性末端的连接突出5"末端Klenow补平,或S1核酸酶切平,然后平头连接突出3"末端T4-DNApol切平,然后平头连接突出末端不同 Klenow补平,或S1核酸酶切平 连接后,可能恢复限制性位点,甚至还可能产生新的位点.XbaI与HindIII( XbaI恢复), XbaI与EcoRI(均保留),BamHI与Bgl II(产生ClaI位点)(四)人工粘性末端的连接5"突出的末端 外源片段先用Klenow补平;然后用TdT补加polyC;载体片段也用Klenow补平,加polyG,退火不经连接即可转化.目的是:不使酶切位点遭受破坏. 3"突出的末端 外源片段先用TdT加polyG;载体片段加polyC;然后退火;再用Klenow补齐;连接 平头末端 可直接用TdT补加末端,但以加polyA/T为佳.这样稍微加热,AT区就会出现单链区域,然后用S1核酸酶水解即可回收片段 (五)粘端与平端的连接linker : 人工合成的,含有限制性内切酶识别序列的,短的双链DNA片段.– 连接的效率较高– 酶切时可能破坏DNA分子的完整.adaptor:人工合成的,具有粘性末端寡聚核苷酸.图 2-5 linker的连接方式(六)粘性末端的更换在DNA片段上某一酶切口处换成另一种酶切口– BamHI酶切片段用Klenow补平,或用S1酶切平;连接一段linker或Adaptor,使之产生EcoRI粘性末端.这样BamHI切口就换成了EcoRI切口 .– 由AluI更换EcoRI:AluI切开,T4-DNApol切平,另一段DNA EcoRI切开,Klenow补平,连接,原来含有AluI的片段变成含有EcoRI 二,重组率重组率:连接反应结束后,含有外源DNA片段的重组分子数与加入的载体分子数之比.较为理想的重组率为25-75% 提高重组率的方法: 连接反应条件 外源片段:载体=2:1-10:1(分子数),增加碰撞机会,减少自身环化. 载体除磷 (磷酸酯酶5"除磷).TdT在3"端增加人工粘性末端,防止载体自我环化 .

1、分类不同：（1）外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。（2）核酸内切酶可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。2、应用不同：（1）外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。（2）核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不同：（1）核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸。（2）核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。参考资料：百度百科——核酸外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

简单来说：内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。

单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子。 双链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）、λ噬菌体核酸外切酶（λexo）以及T7噬菌体基因6核酸外切酶等。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）具有多种催化功能，可以降解双链DNA分子中的许多类型的磷酸二酯键。其中主要的催化活性是催化双链DNA按3′→5′的方向从3′-OH末端释放5′-单核苷酸。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）通过其3′→5′外切酶活性使双链DNA分子产生出单链区，经过这种修饰的DNA再配合使用Klenow酶，同时加进带放射性同位素的核苷酸，便可以制备特异性的放射性探针。

DNA水解酶和外切酶有什么区别核酸内切酶 endonuclease 核酸内切酶是在核酸水解酶中,水解DNA分子链内部磷酸二按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶.核酸

核酸外切酶有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如，蛇毒磷酸二酯酶即是一种3′→5′外切酶，水解产物为5′核苷酸；核酸外切酶从5′端开始逐个水解核苷酸，称为5′→3′外切酶，例如：牛脾磷酸二酯酶即是一种5′→3′外切酶，水解产物为3′核苷酸。核酸内切酶核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5′磷酸二酯键，把磷酸基团留在3′位置上，称为5′-内切酶；而有些仅水解3′-磷酸二酯键，把磷酸基团留在5′位置上，称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专一性核酸内切酶，它作用于由嘧啶核苷酸C‘3处的羟基与下一个核苷酸C5"处的磷酸形成的3‘，5"-磷酸二脂键，产物为以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸和以5"核苷酸开头的低聚核苷酸。

Taq DNA聚合酶是一种耐热的依赖于DNA的DNA聚合酶，它最初是从极度嗜热的栖热水生菌Thermus aquaticus中纯化而来的，现在已经以基因工程方式生产。Taq聚合酶具有5‘-3"聚合酶活性和3‘-5"外切酶活性，需要Mg2+作辅助因子。对于DNA的聚合反应而言，该酶的具体作用温度取决于靶序列，最适温度为75-80℃。摘自：陈宏，基因工程原理与应用[J]，中国农业，2003.第28页。

核酸内切酶 endonuclease 核酸内切酶是在核酸水解酶中，水解DNA分子链内部磷酸二酯键生成寡/寡聚核苷酸的酶。从对底物的特异性来看，可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等仅分解DNA的酶；脾脏RNase、RNaseT1等仅分解RNA的酶；还有就是如链孢霉（Neurospora）核酸酶这类既分解DNA又分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如HindⅢ、EcoRⅠ等具有限制性的，能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。 核酸外切酶exonuclease 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNTP，RNA为NTP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。 核酸外切酶的作用：从核酸链的一端逐个水解下核苷酸。限制性核酸内切酶的作用：识别特定的核苷酸序列，并在DNA分子内部的一定位点切割DNA 。

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料限制核酸内切酶的分析：同一DNA用不同的限制酶进行切割，从而获得各种限制酶的切割位点，由此建立的位点图谱有助于对DNA的结构进行分析。限制性核酸内切酶分析技术是病原变异、毒株鉴别、分型及了解基因结构和进行流行病学研究的有效方法。对动物检疫有很重要的实用意义，尤其对区别进出境动物及动物产品携带病毒是疫苗毒还是野毒，以及推论其是本地毒还是外来毒有很重要的意义。外切酶中还可以区别出从分子链的3末端或5末端开始切断，对单链DNA或双链DNA具有特异作用的酶。可利用这些酶水解方式的差异来分析核酸结构。参考资料百度百科-外切酶百度百科-核酸内切酶

A、由题意知，蛋白质外切酶专门作用于肽链末端的肽键，四十九肽用蛋白外切酶处理会得到49个氨基酸，A正确；B、分析图题图可知，四十九肽用酶1处理得到短肽A、B、C，比四十九肽的氧原子数少1个，N原子数减少3个，B正确；C、分析可知，酶1和酶2均作用于肽链内部特定区域，属于蛋白内切酶，C正确；D、由题意知，蛋白酶2作用于赖氨酸（C6H14N2O2）氨基端的肽键，因此该酶的作用位点是赖氨酸氨基端的肽键，不能作用于羧基端肽键，所以该四十九肽中除了第22、49号位为赖氨酸外，其他位置可能含有赖氨酸，D错误．故选：D．

[1]聚合作用：在引物RNA"-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用.酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用.dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3"-OH与5"-PO4结合生成磷酸二酯键.若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3"-5"外切酶活性位点所识别并切除之. 　　[2]3"→5"外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸.当反应体系中没有反应底物dNTP时,由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象,从而被3"→5"外切酶活性所降解.如果提高反应体系的温度可以促进这种作用,这表明温度升高使DNA生长链3"末端与模板发生分离的机会更多,因而降解作用加强.当向反应体系加入dNTP,而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制,并继续进行DNA的合成.由此推论,3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用,当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除,以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸.在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低,而易发生突变,从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性很低.相反,另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性比野生型高得多,因此,其DNA复制真实性好,变异率低.可见,3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的. 　　[3]5"→3"外切酶活性──切除修复作用：5"→3"外切酶活性就是从5"→3"方向水解DNA生长链前方的DNA链,主要产生5"-脱氧核苷酸.这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用,方向是5"→3".每次能切除10个核苷酸,而且DNA的聚合作用能刺激5"→3"外切酶活力达10倍以上.因此,这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用.对冈崎片段5"末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性. 　　[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3"末端焦磷酸解DNA分子.这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链,可以认为是DNA聚合作用的逆反应,而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在.（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA 　　[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应.反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

总体而言： 1.真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α（定位于胞核,参与复制引发具5－3外切酶活性）,β（定位于核内,参与修复,具5－3外切酶活性）,γ（定位于线粒体,参与线粒体复制具5－3和3－5外切活性）,δ（定位核,参与复制,具有3－5和5－3外切活性）,ε（定位于核,参与损伤修复,具有3－5和5－3外切活性）. 2.原核细胞有3种DNA聚合酶,都与DNA链的延长有关.DNA聚合酶I是单链多肽,可催化单链或双链DNA 的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多,是促进DNA链延长的主要酶. 具体而言： （1）原核生物DNA聚合酶 DNA聚合酶Ⅰ.在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件.所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用. DNA PolⅠ还具有3′→5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基.这种活性在DNA复制中起了校对功能.DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用.DNA PolⅠ还具有5′→3′外切酶活性.5′→3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′→5′外切酶修正错误的作用.例如紫外照射产生的嘧啶二聚体,就是在其5′→3′切酶作用下切除的. DNA Pol Ⅲ结构中不对称的二聚体,同时分别催化着前导链和随从链的合成. DNA Pol Ⅲ也具有3′→5′外切酶活性,所以对于DNA复制也有校对的功能,可停止加入或除去错误的核苷酸然后继续加正确的核苷酸.因此,DNA PolⅢ配合DNAPolI可将复制的错误率大大地降低,从10-4降为10-6或更少.当此片段接近前方的片段时,由DNA Pol Ⅲ的5′→3′外切酶活性切除了RNA引物,造成了片段间的空间；继而DNA PolI催化进行5′→3′方向的聚合作用,填补了片段间的空隙. （2）真核生物DNA聚合酶.真核生物DNA Pol有α、β、γ、δ及 ε五种. 真核生物的DNA复制是在DNA聚合酶α与DNA聚合酶δ互配合下催化进行的,还有一些酶及蛋白质因子参与反应.DNA Polα与引发酶共同起引发作用,然后由DNA Polδ催化前导链及随从链的合成.DNA Polγ是线粒体中DNA复制酶. DNA Polδ及ε均有外切酶活性,因此也有编辑功能,校正复制中的错误.它们的5′→3′外切酶活性可能在切除引物RNA中有作用.

C、牛脾磷酸二酯酶

即核酸外切酶（exonuclease ）。 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸。可分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

合成方向是5-3，3端自然就是尾部了。3-5外切酶就是从3往5剪切。剪切的是新合成的DNA，用于校正错误

双链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）、λ噬菌体核酸外切酶（λexo）以及T7噬菌体基因6核酸外切酶等。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）具有多种催化功能，可以降解双链DNA分子中的许多类型的磷酸二酯键。其中主要的催化活性是催化双链DNA按3′→5′的方向从3′-OH末端释放5′-单核苷酸。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）通过其3′→5′外切酶活性使双链DNA分子产生出单链区，经过这种修饰的DNA再配合使用Klenow酶，同时加进带放射性同位素的核苷酸，便可以制备特异性的放射性探针。λ噬菌体核酸外切酶（λexo）最初是从感染了λ噬菌体的大肠杆菌细胞中纯化出来的。这种酶催化双链DNA分子从5′-P末端进行逐步的水解释放出5′-单核苷酸。但不能降解5′-OH末端。

不易受核酸外切酶水解。1、启动子通常位于转录基因的上游。2、能与RNA聚合酶结合。3、具有一些保守的核苷酸序列。4、原核及真核生物均存在。5、不易受核酸外切酶水解。

单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子， 实际操作时需要配合解旋酶操作。

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。扩展资料：外切酶即核酸外切酶（exonuclease ）。核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNMP，RNA为NMP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子， 实际操作时需要配合解旋酶操作。核酸内切酶限制性核酸内切酶(以下简称限制性酶)是一类识别双链DNA中特定核苷酸序列的DNA水解酶，以内切方式水解DNA，产生5"-P和3"-OH末端。 　1952年Luria等及1953年Bertani等研究噬菌体时发现了宿主控制性现象。Arber及其同事用放射性同位素标记证明，噬菌体在新品系中的损害伴随有其DNA的降解，但宿主自己的DNA并不降解，据此他们提出了限制 - 修饰酶假说。对于一个宿主细胞，限制性酶及 DNA甲基化酶是其细胞中的一对酶，它们对DNA底物有相同的识别顺序。但有相反的生物功能，限制性酶的功能是在DNA分子内部拆卸水解，甲基化酶是修饰，DNA分子经修饰后，就可逃避限制性酶的识别，而甲基化酶只修饰宿主自身的DNA，从而避免了限制性酶对自身DNA的破坏。限制性酶主要分为三种类型：Ⅰ型限制酶为复合功能酶，具有限制-修饰两种功能，但在 DNA链上没有固定的切割位点，一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割，不产生特异性片段。Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点。但这两类酶对 DNA酶切分析的意义不大，通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶，它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序，产生特异性的DNA片段。参考资料：百度百科——核酸内切酶参考资料：百度百科——核酸外切酶

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料：核酶是有催化活性的RNA, 即化学本质是RNA,却具有酶的催化功能。核酶的功能很包括切割RNA、切割DNA,、连接RNA、磷酸酶活性等。与蛋白质酶相比，核酶的催化效率较低，是一种较为原始的催化酶。核酶可降解特异的mRNA序列。核酶又称核酸类酶、酶RNA、核酶类酶RNA。 它的发现打破了酶是蛋白质的传统观念。有一些RNA分子同样具有催化功能。核酶的具体作用主要有：1、核苷酸转移作用。2、水解反应，即磷酸二酯酶作用。3、磷酸转移反应，类似磷酸转移酶作用。4、脱磷酸作用，即酸性磷酸酶作用。5、RNA内切反应，即RNA限制性内切酶作用。而核酸酶包括核酸外切酶和核酸内切酶、核酸连接酶，不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶(RNase)。有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶(DNase)，有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此统称为核酸酶(nuclease)。根据核酸酶作用的位置不同，又可将核酸酶分为核酸外切酶(exonuclease)和核酸内切酶(endonuclease)。主要作用于DNA和RNA，起到连接、切割DNA或RNA中碱基序列的作用，其本质一般为蛋白质。因此，核酶和核酸酶的主要区别就是核酸酶为蛋白质成分，可分解核酸，而核酶成分为RNA，起到微弱的核酸酶活性。参考资料：百度百科-核酸内切酶参考资料：百度百科-核酸外切酶

核酸内切酶与外切酶的区别有：1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料限制性酶主要分为三种类型：Ⅰ型限制酶为复合功能酶，具有限制-修饰两种功能，但在 DNA链上没有固定的切割位点，一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割，不产生特异性片段。Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点。但这两类酶对 DNA酶切分析的意义不大，通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶，它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序，产生特异性的DNA片段。参考资料：百度百科——核酸内切酶百度百科——核酸外切酶

1、分类不同：（1）外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。（2）核酸内切酶可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。2、应用不同：（1）外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。（2）核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不同：（1）核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸。（2）核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。参考资料：百度百科——核酸外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系，底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢，要使超螺旋构型DNA彻底降解，需要的酶量就大。对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用，Molloy等用EcoRI等8种酶切时，结果其 DNA链可被切割，但酶用量比双链DNA大20-50倍。部分限制性酶还可切割单链DNA，如 Hae Ⅲ等。参考资料：百度百科——核酸外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系，底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢，要使超螺旋构型DNA彻底降解，需要的酶量就大。对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用，Molloy等用EcoRI等8种酶切时，结果其 DNA链可被切割，但酶用量比双链DNA大20-50倍。部分限制性酶还可切割单链DNA，如 Hae Ⅲ等。参考资料：百度百科——核酸外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。扩展资料：限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。参考资料：百度百科-核酸内切酶参考资料：百度百科-外切酶

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料：核酸内切酶用途：1、用于DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程。2、限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是提高自身的防御能力.3、限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type I）、第二型（Type Ⅱ）及第三型（Type Ⅲ）。参考资料：百度百科-外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。扩展资料：限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。参考资料：百度百科-核酸内切酶参考资料：百度百科-外切酶

1、内切酶切的是指定的磷酸二酯键，目的是开链；外切酶切的是任意的磷酸二酯键，目的是水解DNA，获得单个的核苷酸。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。3、它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。扩展资料：限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶，多者在一属中就有几十种，例如在嗜血杆菌属中（Haemophilus）现已发现的就有22种。有的菌株含酶量极低，很难分离定性；然而在有的菌株中，酶含量极高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius(Hal Ⅲ酶）就是高产酶菌株。据报道从10g的H. aegyptius的细胞中，能分离提纯出可消化l0gλ噬茵体DNA的酶量。到目前为止，细菌是限制性内切酶，尤其是特异性非常强的I类限制性内切酶的主要来源。参考资料：百度百科-核酸内切酶参考资料：百度百科-外切酶

1、分类不同：（1）外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。（2）核酸内切酶可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般来说，大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。2、应用不同：（1）外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。（2）核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不同：（1）核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸。（2）核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。参考资料：百度百科——核酸外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

两者同属核酸酶,只是切割核酸的方式不一样而已。凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶，凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）。扩展资料：内切酶主要分成三大类。第一类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的双链,但是切割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的。这类限制性内切酶在DNA重组技术或基因工程中没有多大用处,无法用于分析DNA结构或克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。第二类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。所以总能得到同样核苷酸顺序的DNA片段,并能构建来自不同基因组的DNA片段,形成杂合DNA分子。因此,这种限制性内切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。第三类内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序,即有一个中心对称轴,从这个轴朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切割可以有两种方式。一是交错切割,结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为粘性末端。参考资料：百度百科-核酸外切酶

两者的区别：限制性内切酶的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染，而外切酶其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNMP，RNA为NMP）。核酸内切酶（endonuclease）：在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶，与核酸外切酶相对应。外切酶：即核酸外切酶（exonuclease ）核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。拓展资料：30多年前，当人们在对噬菌体（细菌病毒）的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，将基因切割成小的基因片段。限制性酶主要分为三种类型：Ⅰ型限制酶为复合功能酶，具有限制-修饰两种功能，但在 DNA链上没有固定的切割位点，一般在离切割位点1kb到几kb的地方随机切割，不产生特异性片段。Ⅲ型酶与Ⅰ型酶基本相似，不同的是Ⅲ型酶有特异性的切割位点，但这两类酶对 DNA酶切分析的意义不大，通常所说的限制性内切酶是指Ⅱ型酶，它能够识别与切割DNA链上的特定的核苷酸顺序，产生特异性的DNA片段。当限制性内切酶的应用在上世纪七十年代流传开来的时候，以NEB为代表的许多公司开始寻找更多的限制性内切酶。除了某些病毒以外，限制性内切酶只在原核生物中被发现。人们正在从数以千计的细菌及古细菌中寻找新的限制性内切酶。而对已测序的原核基因组数据分析表明，限制性内切酶在原核生物中普遍存在，所有自由生存的细菌和古细菌似乎都能编码限制性内切酶。单链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ（exoⅠ）和核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）能够从5′-末端或3′-末端呈单链状态的DNA分子上降解DNA，产生出寡核苷酸短片段，而且是唯一不需要Mg2+离子的活性酶，是一种耐受性很强的核酸酶。核酸外切酶Ⅶ（exoⅦ）可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。它只切割末端有单链突出的DNA分子， 实际操作时需要配合解旋酶操作。双链的核酸外切酶包括大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）、λ噬菌体核酸外切酶（λexo）以及T7噬菌体基因6核酸外切酶等。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exo Ⅲ）具有多种催化功能，可以降解双链DNA分子中的许多类型的磷酸二酯键。其中主要的催化活性是催化双链DNA按3′→5′的方向从3′-OH末端释放5′-单核苷酸。大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ（exoⅢ）通过其3′→5′外切酶活性使双链DNA分子产生出单链区，经过这种修饰的DNA再配合使用Klenow酶，同时加进带放射性同位素的核苷酸，便可以制备特异性的放射性探针。限制性核酸内切酶分析技术是病原变异、毒株鉴别、分型及了解基因结构和进行流行病学研究的有效方法，对动物检疫有很重要的实用意义，尤其对区别进出境动物及动物产品携带病毒是疫苗毒还是野毒，以及推论其是本地毒还是外来毒有很重要的意义。

DNA聚合酶具有两种活性,一个是聚合酶活性,5"——3",意思是说在合成的单链或者引物链的3"加上与模板链互补的脱氧核苷酸 此外,DNA聚合酶还有一个外切酶活性位点,用来校正剪切掉错误的脱氧核苷酸.这个活性是3"——5"方向,所以可以将新链3"端的错误配对脱氧核苷酸去掉. 两个位点对于DNA的结合能力是不同的,正常情况（即配对正确）下,聚合酶位点的结合能力强,而外切酶位点结合能力弱,因此DNA聚合酶从5"向3"合成双链DNA；当合成时出现错配的情况,聚合酶位点与错配链的结合能力下降约100倍,而外切酶的结合能力不变,强于此时的聚合酶位点,所以DNA3"端移向外切酶位点,并剪切掉错误的配对；当错误配对被切掉后,相当于重新回到了正确配对的情况,故而聚合酶位点结合能力再次强于外切酶位点,DNA回到聚合酶位点,继续合成新链. 这是由我们分子生物学的课程中学来的,我们使用的教材是《molecular biology of genes》,由发现DNA双螺旋的Waston主编 如果你还是不懂,可以将邮箱发给我,我可以将我们上课的课件发给你

1、分类不一样：外切酶按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。核酸内切酶分为DNaseⅠ和DNaseⅡ。2、应用不一样：外切酶可以用来测定基因组DNA中一些特殊的间隔序列和编码序列的位置。核酸内切酶可用于分析病原微生物DNA，通过酶切消化DNA，来了解到病原微生物遗传物质的一定特性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。3、概念不一样：外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。核酸内切酶是在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶。扩展资料：核酸内切酶的影响及因素：限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系，底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢，要使超螺旋构型DNA彻底降解，需要的酶量就大。对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用，Molloy等用EcoRI等8种酶切时，结果其 DNA链可被切割，但酶用量比双链DNA大20-50倍。部分限制性酶还可切割单链DNA，如 Hae Ⅲ等。核酸内切酶的应用：用限制性内切酶分析(Restriction EndonucleaseAnalysis REA)病原微生物DNA已成为一种常用的方法，通过酶切消化DNA，然后电泳染色呈现大小不一的片段，对这些片段的迁移率及数量进行分析，便可了解到病原微生物遗传物质的一定特性。在此基础上采用双酶切割或杂交等方法，则可推测出片段的排列顺序和酶切位点，从而推断出DNA间存在的相似性或差异性，对于动物病毒尤其是对疫苗毒、野毒及变异毒株的检测具有重要的意义。参考资料：百度百科-外切酶参考资料：百度百科-核酸内切酶

1、这是一类能从DNA分子中间水解磷酸二酯键,从而切断双链DNA的核酸水解酶。它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序——识别顺序。2、核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。其水解的最终产物是单个的核苷酸（DNA为dNMP，RNA为NMP）。按作用的特性差异可以将其分为单链的核酸外切酶和双链的核酸外切酶。

核酸外切酶 就是将核酸序列3"游离端或者5"游离端逐一水解成减少一个核苷酸长度的核酸链和游离的核苷酸 区别就是水解的起点端不一样 3"→5"核酸外切酶就是从核酸的3"游离羟基端逐一水解核酸链 5"→3"是从5"游离磷酸基团端逐一水解核苷酸链 从反应的角度看 区别只有反应的方向不一样 作用方式就是磷酸二酯键的水解作用 一般的是水解出3"游离羟基和5"游离磷酸基团 具体细节的反应机理作用方式 参见有机化学的亲和取代吧 水作为亲核试剂对5"侧的磷原子进行亲和加成 形成不稳定中间体后 3"侧的羟基发生消除反应 和一般的酯类水解类似 不过是在酶的催化作用下完成的一般的水解酶中有Ser或者Tyr等含有羟基的活性位点 可以在代替水进行亲和进攻 常见的类似的磷酸酯键的水解还有 氯解磷定或碘解磷定对未老化的有机磷农药中毒的乙酰胆碱酯酶的解毒过程……

DNA聚合酶具有两种活性，一个是聚合酶活性，5"——3"，意思是说在合成的单链或者引物链的3"加上与模板链互补的脱氧核苷酸此外，DNA聚合酶还有一个外切酶活性位点，用来校正剪切掉错误的脱氧核苷酸。这个活性是3"——5"方向，所以可以将新链3"端的错误配对脱氧核苷酸去掉。两个位点对于DNA的结合能力是不同的，正常情况（即配对正确）下，聚合酶位点的结合能力强，而外切酶位点结合能力弱，因此DNA聚合酶从5"向3"合成双链DNA；当合成时出现错配的情况，聚合酶位点与错配链的结合能力下降约100倍，而外切酶的结合能力不变，强于此时的聚合酶位点，所以DNA3"端移向外切酶位点，并剪切掉错误的配对；当错误配对被切掉后，相当于重新回到了正确配对的情况，故而聚合酶位点结合能力再次强于外切酶位点，DNA回到聚合酶位点，继续合成新链。这是由我们分子生物学的课程中学来的，我们使用的教材是《molecular biology of genes》，由发现DNA双螺旋的Waston主编如果你还是不懂，可以将邮箱发给我，我可以将我们上课的课件发给你

外切酶：从核酸一端一个一个的水解掉核苷酸。内切酶：从核酸内部特定位点切断核酸。聚合酶：将核苷酸聚合为核酸连接酶：将磷酸核糖骨架连接起来。