激光显微细胞分离技术原理和流程？

为了得到更纯的细胞组分通常采用的分离技术是：在均匀密度介质中不同离心力下沉降的细胞器组成不同或在梯度介质中离心后分布于不同密度层。细胞器的分离，一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。细胞器（organelle）一般认为是散布在细胞质内具有一定形态和功能的微结构或微器官。但对于“细胞器”这一名词的范围，还存在着某些不同意见。 细胞中的细胞器主要有：线粒体、内质网、中心体、叶绿体，高尔基体、核糖体等。它们组成了细胞的基本结构，使细胞能正常的工作，运转。细胞组分的分离方法:离心,包括差速离心、密度梯度离心、速度沉降、等密 度沉降,流式细胞术分选,层析技术、电泳技术等。细胞组分的分析方法:定性分析法包括组织化学技术、免疫荧光技术、免疫电 镜技术等;定量分析法有分光光度法、流式细胞术等。大分子在细胞内的定性与定位研究方法有:免疫荧光技术、免疫电镜技术和原 位杂交等。生物大分子相互作用的研究技术:荧光漂白恢复技术、酵母双杂交技术、荧光 共振能量转移技术等。

将细胞分离的原理有机械法、化学法、酶消化法、酶消化法、流式细胞术。各有优点和缺点。1、机械法：利用物理外力，如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法，将细胞分离开。优点：操作简单，不使用有毒和致癌物质。缺点：对于细胞脆弱的情况，会造成细胞损伤。2、化学法：利用化学试剂溶解细胞间粘连物和细胞本身的粘附物，让细胞分离开。优点：分离效果好，易于扩大规模。缺点：化学试剂对细胞产生毒性和副作用。3、酶消化法：用特定酶对细胞的胞膜和基质进行消化，使细胞释放出来。优点：可以选择特定的酶，在具有选择性的条件下将目标细胞分离出来。缺点：目标细胞因受到消化酶的损伤而死亡。4、酶消化法：利用离心机对不同密度的细胞进行分离。优点：分离效果好，速度快。缺点：离心需要繁琐的操作，不能完全分离所需的细胞类型。5、流式细胞术：利用流式细胞仪对细胞进行单个分选。优点：技术先进，可快速、准确的分离出目标细胞。缺点：设备价格昂贵，需要专业操作人员。

细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。细胞电泳是指在一定PH 值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动

原代细胞是直接取自活组织 例如活组织检查材料 的细胞，并建立用于体外生长。这些细胞经历了非常少的群体倍增，因此与连续 肿瘤或人工永生化 细胞系相比，它们更能代表它们所衍生组织的主要功能成分，使得原代细胞成为更具代表性的体内模型。 原代细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程，获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一，原代细胞分离的方法有很多种：悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等。 人或动物体内 或胚胎组织 由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3 的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、 羊水、胸水或腹水的悬液材料， 最简单的方法是采用 1000r/min 的低速离心 10 分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁 PBS 洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法 物理裂解 和消化分离法。 一 机械分散法 所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内 用九号针 ，使细胞通过针头压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤 常用注射器钝端 使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。 二 消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块 或糊状 ，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。 消化分离法的操作步骤 1 剪切把组织块剪碎，呈 1~5mm3 大小的组织块。 2 加液漂洗 将碎组织块在平皿 或三角烧瓶 中用无钙镁 PBS 洗 2-3 次 采用倾斜，自然沉降法 。 3 消化 加入消化液 胰蛋白酶或胶原酶或 EDTA 于 37℃水浴中作用适当时间 中间可轻摇 1~2 次 ，若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。胰蛋白酶消化时间不宜过长。 4 弃去消化液 采用倾斜自然沉降或低速离心法尽量弃去消化液。 5 漂洗 将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入，中止消化反应，采用漂洗法洗 2-3 次后，加入完全培养基。 6 机械分散 采用吸管吹打或振荡法，使细胞充分散开后用纱网或 3~4 层无菌纱布过滤后分瓶培养，若要求不高可采用倾斜自然沉降 5~10 分钟，吸上层细胞悬液进行分瓶培养。 注意事项如下 1 组织块必须漂洗 2-3 次以除去组织中的钙、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA 的抑制作用。 2 胰蛋白浓度不宜过高，作用时间不能太长，以避免毒性作用。 3 消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免毒性产生，而且动作要轻，以避免膨松的细胞随漂洗而丢失 三、酶消化法 1）无菌 确保使用无菌设备、试剂和技术收集和处理组织。使用个人防护设备以避免污染。使用0.22微米的膜无菌过滤所有酶和试剂。 2）切块 用无菌剪刀或手术刀将组织标本切成小块 通常为2×4mm ，然后将小块放入选定的缓冲液、培养基或盐溶液中。 3）加酶 将组织清洗三次以消除多余的血液蛋白，然后加入您选择的酶如胶原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，约0.5 mg/ml～1.5mg/ml的酶。 4）孵育 将组织样本在其最佳温度下孵育，通常在37℃下孵育30～90分钟。定期混合或轻轻摇动标本。 5）洗涤 通过轻轻移液来分散细胞 也称为研磨 ，然后，使用细网过滤细胞悬浮液。让细胞沉淀并滗出多余的含液酶;洗两到三次。含有FBS，BSA或其他抑制剂的洗涤溶液也可用于阻止酶消化。 6）分析 将细胞重悬于正确的培养基或缓冲液中，然后定量测定细胞产量和活力。这是细胞分离过程中的重要步骤，因此您可以评估解离技术的结果。大多数研究人员使用血细胞计数器测定细胞产量，并使用台盼蓝重氮染料测量细胞活力。

细胞分离方法在科学和临床实验室中被广泛推广，用于研究、诊断、或临床应用。大多数这些方法被限制于仅小量细胞。对于从大量非靶细胞分离细胞，磁性细胞分选或密度梯度离心是已经建立的技术。一种特别具有挑战性的分离方法是从全血中分离细胞，例如从全血中分离T细胞。为此，在分离或纯化靶细胞之前必须将红细胞排出。例如通过密度梯度离心可进行红细胞的清除；例如通过多功能抗体、多糖、聚乙烯吡咯烷酮、或聚氧乙烯和随后的离心进行外周血单核细胞(PBMC)样本制备、红细胞裂解、或聚集。在靶细胞分离之前排出红细胞的方法例如被公开于EP2597153A1中。在清除红细胞或另外不期需的细胞之后，需要采用接续的分离靶细胞的工艺步骤。

分类: 教育/科学 >> 科学技术 问题描述: 细胞培养、细胞工程、生物学实验中的细胞分离是什么定义？操作过程如何？ 解析: 体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（an culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。 细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养过程中细胞不再形成组织。发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。 1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织； 1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养； 1907年Harrison培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法； 1910、1912年Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法； 1924年Maximow采用双盖片悬滴培养法； 1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。 Earle等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤细胞的细胞株。至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。 组织培养从二十世纪40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出现了很多革新。 在培养容器方面, 由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来，塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。 在培养基方面，从50年代初，Parke、Eagle等设计出合成培养基后，从纯天然培养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清（促细胞生长物），直至60年代设计出无血清培养基。 首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液，以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank"s在1949年设计了Hank"s氏盐溶液。 在培养技术方法方面，革新进展更为迅猛，Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系。 1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。 1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。 1961年Hayflick首建人二倍体细胞系25种，开辟了应用新方向。 从50年代末开始，组织培养技术应用进入了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。 诱变建立遗传缺陷细胞株、杂交瘤技术制备单抗、发展细胞大量培养技术、利用重组技术构建工程细胞株，已成为生物工程的重要生产手段。 在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L一次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68为培养基，最高活细胞密度超过1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2×107cells/ml；2004年德国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。 在流加悬浮培养工艺方面，美国麻省理工Xie Liangzhi等人2000年报道在2L生物反应器中流加培养杂交瘤细胞，通过营养控制降低氨和乳酸的比生成速率，补充培养基包括营养成分、胎牛血清和痕量金属，最大活细胞密度达到1.7×107cells/mL。 细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法，将生物组织分离为单细胞分散系的过程。 一般动物组织经培养，其细胞会延培养基表面平铺生长，自行达到细胞分离的目的。还可用胶原酶处理分离。 而植物组织培养后会形成愈伤组织，要用化学方法才能获得单个细胞（一般用纤维素酶）。

细胞器的分离：制备某种生物大分子时，往往需要采用细胞中某一部分为材料；或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子，通常破碎细胞后，先分离各组分，以防干扰，这对制备—些高难度和高纯度的生物大分子是必要的，细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。

超速离心技术、显色技术、荧光标记技术、免疫电镜技术、原位杂交技术、放射自显影技术、流式细胞仪、显微分光光度测定技术

⑴CD4 细胞的分离：将一定量的T 细胞悬液通过一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85%的CD4 细胞。⑵CD8 细胞分离：用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG（浓度为10μg/m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS 洗净。然后将已标记有抗CD8 单克隆抗体的T 细胞（细胞浓度为1×l07/m1)3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。 用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。研究表明，以肠道双歧杆菌、乳酸杆菌为代表的有益菌群具有广谱的免疫原性，能刺激负责人体免疫的淋巴细胞分裂繁殖，同时还能调动非特异性免疫系统，去“吃”掉包括病毒、细菌、衣原体等在内的各种可致病的外来微生物，产生多种抗体，提高人体免疫能力。对于健康人来说，不妨“食疗”，多吃些乳酸菌饮料；而健康边缘人群，可以用微生态制剂来调节体内微生态平衡。能提高免疫力的食品 1.灵芝：灵芝可增强人体的免疫力，这是因为灵芝含有抗癌效能的多糖体，此外，还含有丰富的锗元素。锗能加速身体的新陈代谢，延缓细胞的衰老，能通过诱导人体产生干扰素而发挥其抗癌作用； 2.新鲜萝卜：因其含有丰富的干扰素诱导剂而具有免疫作用； 3.人参蜂王浆：能提高机体免疫力及内分泌的调节能力，并含具有防癌作用的蜂乳酸； 4.蘑菇、猴头菇、草菇、黑木耳、银耳、车养、百合等：都有明显增强免疫力的作用； 5.香菇：香菇所含的香菇多糖能增强人体免疫力。

细胞剥离技术的实现原理就是利用比头发丝还细的无针头微针，将医用无菌注射水（生理盐水）直接输送到皮下，通过水动力软性剥离作用，定点、定层、定量，精准、精细、精微在表皮、真皮、及皮下破坏衰老迟缓色素堆积的旧细胞来形成微创面（水液会自动避开毛细血管和神经）。皮肤因微创面而启动自愈系统，在修复皮下微创面的过程中，会产生多种细胞修复因子，各类因子相互协作，促进不同层次的细胞再生（胶原蛋白细胞、网状纤维细胞、弹力纤维细胞）。新生的细胞健康有活力水分玻尿酸（ps：人体是含有玻尿酸）充足，而且新生的胶原纤维和黏性蛋白，也称作细胞与细胞之间的粘合剂，通过疗程（1~2次），不断增加皮下的厚度，从而达皱纹抚平、凹陷饱满、松弛收紧、脱垂提升的效果。这也是细胞剥离技术不开刀，无填充祛皱的原因细胞剥离技术可以解决脸部皮肤的五大问题：1、皱纹（如鱼尾纹、抬头纹、法令纹）2、凹陷（皮肤凹陷，细纹）3、脱垂（苹果肌下垂，皮肤下拉）4、松弛5、疤痕但是细胞剥离技术恢复期长，需要操作三次（每月一次），要三个月的恢复期来让效果达到最佳，比玻尿酸注射之后只需4~7天的恢复时间长很多，虽然玻尿酸也能达到除皱的相同的效果，但无填充、自然、肌肤是再生的的优点也是玻尿酸不能掩盖的，具体如何选择，还是要看小姐妹们自己的选择。

免疫细胞（immunecell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术x0dx0a1、淋巴细胞的分离x0dx0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。x0dx0a2、T细胞及B细胞的分离x0dx0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMIl640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。x0dx0ax0dx0a3、CD4细胞及CD8细胞的分离x0dx0a（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。x0dx0a（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1PBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMIl640培基中备用。CD4细胞亦可用此法分离。x0dx0a4、单核巨噬细胞的分离x0dx0a单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃C02温箱内温育1小时，然后用RPMI1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

一、悬浮细胞的分离方法：利用离心方法对细胞进行分离。二、实体组织材料的细胞分离方法：对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法( 物理裂解)和消化分离法。

细胞剥离是一种新型的医疗美容技术，这与生物细胞分离原理（将组织材料分散制成细胞悬液，从中提取目标细胞）并不相同。剥离的专利技术在于定点收紧皮肤的同时，剥离是通过特制无针头微针将小分子盐水，直接输送到皮下，通过水液的软性剥离能力，把皮肤逐层分开，破坏衰老迟缓的细胞在皮下形成微创面，刺激人体自愈自我修复功能，促使新生细胞分裂，不断产生新的细胞和修复物质（人体细胞都有一定的治愈能力）。完全打开剥离通道后，配合自己的营养素活细胞，再次提供细胞修复，皮肤健康所需的营养素直接传达到真皮层，有效地使皮肤凹陷自然生长，从而达到抚平皱纹，皮肤饱满，使皮肤圆润，不再松弛的效果。细胞剥离在生物学上指的是，生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。相比传统拉皮的切口相当的大，需要剃发并且切头皮，容易在耳后形成非常长的一个连续性的疤痕，并且恢复期比较长，并且剥离范围比较广，会容易出现剥离不精准的情况出现，多余的皮肤会被切除，而小切口提升是精准剥离，微创切口，损伤轻，不切头皮，不剃发，术后几乎不留疤痕，并且手术的痛感也大大减少，恢复期也大大缩短。

就是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离，原理就是细胞膜的流动性和透过性

分离细胞器的方法如下：一、分离细胞器的方法为差速离心或密度梯度离心。二、线粒体：结构包括线粒体内膜、外膜（上分布有基粒）、线粒体基质.线粒体内膜和线粒体基质中含有氧。叶绿体：结构包括叶绿体外被、类囊体和基质3部分组成,外被上分布着光合作用需要的色素,类囊体和基质上有光合作用需要的酶,含有少量的DNA和RNA。内质网：功能是合成分泌蛋白质。高尔基体：功能是将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装,然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。溶酶体：内部含有多种酸性水解酶,功能是溶解或消化,为细胞内的消化器官。液泡：内有细胞液,其中含有糖类、无机盐、色素和蛋白质等物质。核糖体：成分包括蛋白质和核糖体RNA（rRNA）,功能是：核糖体是合成蛋白质的地方。中心体：分布在动物细胞和某些低等植物细胞,由两个互相垂直的中心粒及周围物质组成,与细胞的有丝分裂有关。细胞器是细胞质中具有特定形态结构和功能的微器官，也称为拟器官或亚结构。其中质体与液泡在光镜下即可分辨，其他细胞器一般需借助电子显微镜方可观察。细胞器（organelle）一般认为是散布在细胞质内具有一定形态和功能的微结构或微器官。但对于“细胞器”这一名词的范围，还存在着某些不同意见。细胞中的细胞器主要有：线粒体、内质网、中心体、叶绿体，高尔基体、核糖体等。它们组成了细胞的基本结构，使细胞能正常的工作，运转。

免疫细胞（immunecell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术x0dx0a1、淋巴细胞的分离x0dx0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。x0dx0a2、T细胞及B细胞的分离x0dx0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMIl640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。x0dx0ax0dx0a3、CD4细胞及CD8细胞的分离x0dx0a（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。x0dx0a（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1PBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMIl640培基中备用。CD4细胞亦可用此法分离。x0dx0a4、单核巨噬细胞的分离x0dx0a单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃C02温箱内温育1小时，然后用RPMI1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

在诱导物作用下，相互靠近的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞。结果应该是有蛋白质，DNA，脂类物质。涂片的不同应该是细胞核的有无，染色后的分布。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。扩展资料：在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。参考资料来源：百度百科-细胞分离技术

汽车暖风系统不热可以分为两方面的原因，一是暖风的控制机构工作不良导致汽车暖风不热的，一是发动机冷却系统造成汽车暖风不热的。在维修时，我们要先判定是哪一方面原因引起汽车暖风不热的，再进行相应的维修。判别造成汽车暖风不热原因的方法很简单，看一下暖风小水箱的两个进水管温度，如果两根管都够热，说明是风量控制机构问题，反之，如果两根水管都凉，或者是一根热一根凉，说明是冷却系统问题。

嗯，是的。流式可以分选计数或分选收集不同大小、不同表面抗原、不同标记等的各类细胞

网上流行的细胞剥离美容术基本原理：利用水动力软性剥离细胞 达到抗衰去皱纹的效果，从原理上看安全问题不大，生理盐水作为剥离的介质，目前医美市场上比较混乱，需要仔细甄别，选择一家品牌服务。你指的的是医美技术细胞剥离吗？　原理1：深层激活，利用头发丝一样zhi细的微针将盐水直接输送到dao皮下，通过水液的软性剥离作用，在皮下形成创面，水液会自动避开毛细血管和神经，神经在修复过程当中会不断产生新的胶原纤维和黏性蛋白，也称作细胞与细胞之间的粘合剂，通过疗程3次，不断增加皮下的厚度，从而达到饱满，去皱紧致提升的效果。原理2：多层修复，定点激活，在皮肤的各个层面把皮肤所需要的营养成分（专配产品）透皮导入，打开皮肤的营养通道，给皮肤补充营养。

利用纳米SiO2微粒实现细胞分离的新技术的基本原理和过程是：先制备SiO2纳米微粒，尺寸大小控制在15～20nm。结构一般为非晶态，再将其表面包覆单分子层。包覆层的选择主要依据所要分离的细胞种类而定，一般选择与所要分离细胞有亲和作用的物质作为附着层。这种SiO2纳米粒子包覆后所形成复合体的尺寸约为30nm；第二步是制取含有多种细胞的聚乙烯吡咯烷酮胶体溶液，适当控制胶体溶液浓度；第三步是将纳米SiO2包覆粒子均匀分散到含有多种细胞的聚乙烯吡咯烷酮胶体溶液中，再通过离心技术，利用密度梯度原理，使所需要的细胞很快分离出来。

目前常用于分离CD34+细胞的方法主要是免疫吸附法。这指的应该是用流式细胞仪，对冻存的骨髓或脐带血（脐带血几率大一些，含量0.1%-1%）进行检测的一种方法或手段，如分离出一批符合标准的CD34造血干细胞，或以此为设定此类细胞的标准。在生理学上，CD分子有许多用途，通常用作细胞的重要受体或配体。不仅可作为表面标志用于细胞的鉴定和分离。

可通过特定序列的探针检测样品中是否含有与之同源的核酸序列。基因克隆的筛选,酶切图谱制作,基因组中特定基因序列的定量和定性检测,基因突变分析,疾病的诊断、微生物病原体检测。根据杂交对象的不同可分为：DNA与DNA；RNA与DNA另外：Westernbl。

超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物。光学和电子显微镜可以对细胞进行定性和定位研究，如免疫荧光技术，冰冻蚀刻技术，同位素示踪技术。

影响细胞分离的因素：能量（atp），细胞膜上的糖蛋白；影响计数的因素：认为操作误差、仪器误差。根据查询百度题库题目：影响细胞分离的因素有哪些?答案：能量（atp），细胞膜上的糖蛋白。细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。

问题一：用作药物载体的纳米粒有哪些优点 1）纳米药物载体可经过血液循环进入毛细血管，还可透过内皮细胞间隙，进入病灶，被细胞以胞饮的方式吸收，实现靶向用药，提高了药物的生物利用率。 2）纳米载体粒径较小，拥有较高的比表面，可以包埋疏水性药物，提高其溶解性，减少常规用药中助溶剂的副作用。 3）纳米药物载体经靶向基团修饰后可实现靶向药物给药，可减少用药剂量，降低其副作用，如叶酸修饰载药纳米粒、磁性载药纳米粒等。 4）纳米载体可延长药物的消除半衰期（t1/2β），提高有效血药浓度时间，提高药效，降低用药频率，减少其毒副作用。 5）纳米载体可透过机体屏障对药物作用的限制，如血脑屏障、血眼屏障及细胞生物膜屏障等，使药物到达病灶，提高药效。 问题二：纳米药物载体投哪些英文期刊 Advances in Nanoparticles 问题三：纳米材料在生物医学上有什么应用和优势 纳米材料在生物医学上有什么应用和优势 纳米技术对医学发展具有重要的推动作用，疾病诊断、预防和治疗的实际需求对纳米技术提出了获得更先进的药物传输系统和早期检测与诊断技术的期望，如早期诊断和预警、代谢产物中的生物标志物的发现、及其微量或痕迹量或瞬间的样品量的检测技术，适于大量或批量的实用检测技术平台，载体的效率和容量，靶向、缓释、可控的药物载体，药靶确证和药物筛选，甚至是突变或个体化差异的检测、诊治等。利用DNA分子的自组装特性，可以获得新型的纳米结构材料，用于发展全新的生物检测技术，实现基因治疗的关键因素之一是发展安全有效的基因运载系统，利用纳米技术发展新型医学传感器，利用纳米技术发展新型活细胞检测技术。另外纳米技术对再生医学的发展具有重要影响和推动作用，纳米技术为模仿和构建天然组织里不同种类的细胞外基质提供了全新的视角和方法，纳米技术将有助于探索和确定成体干细胞中的信号系统，以激发成体干细胞中巨大的自我修复潜能，纳米技术在医学科学中的应用，如单分子、单细胞体内成像应用、单一癌症细胞检测、药物释放直观技术等。 纳米技术在传染病防治中也有广阔的应用，我国是乙肝大国，平均有8%乙肝病人或携带者，在偏远农村远远高于这个比例。进展期肝病病人在中国的死亡率比较高，在大城市有60％的死亡率，在小的城市死亡率更是高达80％。虽然乙肝疫苗在乙肝病毒的传染方面发挥了很大的作用，但是研究表明乙肝病毒的变异也是非常高的，而且目前一些治疗乙肝的药物的抗药性在我国已经显现出来，所以在中国开展乙肝病的纳米医药研究尤其重要，探测活体细胞的功能，在分子的水平上认识和理解病变机理，做到早期诊断，实现早期治疗。 纳米药物及其药理学 目前国内外已开发并上市了许多纳米药物制剂，以提高原制剂的口服生物利用度、降低药物不良反应和提高治疗指数等，但是国际和国内纳米技术标准化却还没有建立，所以在纳米医药开发的过程中不可避免会受到制约和影响。所以，对于纳米药物学及其药理学研究的基础科学问题和近、中、长期的目标设定非常重要。 例如，肿瘤生长机制及阿霉素胶束自组装分子的抗肿瘤活性研究。肿瘤的微环境对其生长及对药物输运有着巨大影响，肿瘤组织内部静液压高、低氧、低PH值等微环境使得药物分子只能聚集在血管细胞周围，不能达到肿瘤细胞，影响了药物的使用效果。PEG－PE包裹阿霉素形成的胶束自组装分子在治疗肿瘤方面有着很好的效果，使用后肿瘤尺寸明显减小。 “用于肿瘤诊断与治疗的纳米医药的材料发展潜力”的研究指出，纳米生物技术在肿瘤的早期诊断和治疗中可以发挥很大作用。研究结果表明，抗体修饰的脂质体纳米复合载药体系不仅可以对肿瘤进行靶向治疗，结合纳米粒子修饰的纳米复合给药体系还可以对转移的肿瘤细胞进行诊断和靶向治疗，而且纳米胶囊的尺寸适中（50-200nm）时效果最好。“脂质分子自组装系统及其作为药物载体的应用”的研究认为，脂质分子作为生物体组成的主要成分具有无可比拟的生物相容性，自组装形成的纳米结构无论从均一性、稳定性，以及重复性方面，都有很大的优势，而且小肽修饰的脂质体对肿瘤有一定的靶向作用。 在这一议题中，专家们就目前纳米医药中其安全性评价和标准研究方法的问题进行了热烈的讨论。一致认为目前纳米医药研究应该规范化，推行“力量集成、资源整合和有限目标”的策略。纳米药物学近期或近中期目标可以是通过药物的直接纳米化或纳米载药系统(NanoDDS)，研制一批旨在提高生物利用度、延长药物作用时间、降低药物不良反应，或提高制剂顺应性等的纳米药物制剂。在纳米效应研究基础上，针对我国重大疾病(如肿瘤、心......>> 问题四：纳米在生物学上都有哪些应用 纳米生物学主要包含两个方面： 一，利用新兴的纳米技术来解决研究和生物学问题； 二，利用生物大分子制造分子器件，模仿和制造类似生物大分子的分子机器。纳米科技的最终目的是制造分子机器，而分子机器的启发来源于生物体系中存在的大量的生物大分子，它们被费曼等人看作是自然界的分子机器。从这个意义上说，纳米生物学应该是纳米科技中的一个核心领域。 利用DNA和某些特殊的蛋白质的特殊性质，有可能制造出分子器件。目前研究的热点在分子马达、硅－神经细胞体系和DNA相关的纳米体系与器件。利用纳米技术，人们已经可以操纵单个的生物大分子。操纵生物大分子，被认为是有可能引发第二次生物学革命的重要技术之一。 在生物和医学上的应用 纳米微粒的尺寸一般比生物体内的细胞、红血球小得多，这就为生物学研究提供了一个新的研究途径，即利用纳米微粒进行细胞分离、细胞染色及利用纳米微粒制成特殊药物或新型抗体进行局部定向治疗等。关于这方面的研究现在处于初始阶段，但却有广阔的应用前景。 细胞分离 生物细胞分离是生物细胞学研究中一种十分重要的技术，它关系到研究所需要的细胞标本能不能快速获得的关键问题。这种细胞分离技术在医疗临床诊断上有广阔的应用前景。例如，在妇女怀孕8星期左右，其血液中就开始出现非常少量的胎儿细胞，为判断胎儿是否有遗传缺陷,过去常常采用价格昂贵并对人身有害的技术，如羊水诊断等。用纳米微粒很容易将血样中极少量胎儿细胞分离出来，方法简便，价钱便宜，并能准确地判断胎儿细胞是否有遗传缺陷。美国等先进国家已采用这种技术用于临床诊断。癌症的早期诊断一直是医学界急待解决的难题。美国科学家利贝蒂指出，利用纳米微粒进行细胞分离技术很可能在肿瘤早期的血液中检查出癌细胞，实现癌症的早期诊断和治疗。同时他们还正在研究实现用纳米微粒检查血液中的心肌蛋白，以帮助治疗心脏病。纳米细胞分离技术将给人们带来福音。以往的细胞分离技术主要采用离心法，利用密度梯度原理进行分离，时间长效果差。80年代初，人们开始利用纳米微粒进行细胞分离，建立了用纳米SiO2微粒实现细胞分离的新技术。其基本原理和过程是：先制备SiO2纳米微粒，尺寸控制在15～20nm，结构一般为非晶态，再将其表面包覆单分子层，包覆层的选择主要依据所要分离的细胞种类而定，一般选择与所要分离细胞有亲和作用的物质作为附着层。这种Si02纳米粒子包覆后所形成复合体的尺寸约为30nm。第二步是制取含有多种细胞的聚乙烯吡咯烷酮胶体溶液，适当控制胶体溶液浓度。第三步是将纳米SiO2包覆粒子均匀分散到含有多种细胞的聚乙烯吡咯烷酮胶体溶液中，再通过离心技术，利用密度梯度原理，使所需要的细胞很快分离出来。此方法的优点是： 1．易形成密度梯度。纳米包覆体尺寸约30nm，因而胶体溶液在离心作用下很容易产生密度梯度. 2．易实现纳米Sio2粒子与细胞的分离。这是因为纳米SiO2微粒是属于无机玻璃的范畴性能稳定，一般不与胶体溶液和生物溶液反应，既不会沾污生物细胞，也容易把它们分开。 细胞内部染色 细胞内部的染色对用光学显微镜和电子显微镜研究细胞内各种组织是十分重要的一种技术。它在研究细胞生物学中占有极为重要的作用。细胞中存在各种器官和细丝。器官有线粒体、核和小胞腔等。细丝主要有三种，直径约为6―20nm。它们纵横交错在细胞内构成了细胞骨骼体系，而这种组织保持了细胞的形态，控制细胞的变化、运动、分裂、细胞内器官的移动和原生质流动等。未加染色的细胞由于衬度很低，很难用光学显微镜和电子显微镜进行观察，细胞内的器官和骨骼体系很难观察和分辨,为了解决这一问题，物理学家已......>> 问题五：做生物纳米材料作药物载体方面的研究，申请美国学校什么专业比较好申请？ 建议通过查 Nano-pharmaceuticals 了解哪些大学开设这类专业。有药学院的学校应该会有这类专业的学位。 先查大学的药学院（college of pharmacy，或 school of pharmaceutical science） 然后找纳米药物（Nano-pharmaceuticals） 祝你成功！ 问题六：纳米药物载体，纳米生物传感器和成像技术英语怎么说 纳米药物载体,纳米生物传感器和成像技术 Nano drug carriers, nano biosensors and imaging technology 问题七：是不是有种抗肺癌药物叫什么易纳米的 是一种很贵的抗癌药 不是易纳米。德国科学家最近开发出了一种治疗肺癌的全新方法，利用微小的纳米颗粒作为药物载体，将药物定向送到肺部癌细胞处，阻断癌细胞的生长。 肺癌目前属于还比较难治愈和死亡率较高的癌症，德国每年平均约4.6万人死于肺癌。德国萨尔布吕肯大学生物医药和制药技术研究所的克劳斯u30fb雷哈教授致力于研究纳米颗粒来治疗癌症，他介绍说，纳米颗粒比头发丝还细千倍，很容易在肺部活动，因此可以作为药物载体携带药物进到肺部癌症部位，并慢慢释放药物。 科学家将这个原理利用到人体染色体端粒套上，染色体端粒携带有遗传信息，就像鞋带头上的塑料套一样，起到穿针引线的作用。正常情况下染色体端粒随着时间的推移会变得不稳定，细胞死亡后，分裂过程就会停止。而癌细胞会使染色体端粒发生变化，会不断补充染色体端粒，使癌细胞分裂一直持续。为了阻碍染色体端粒使癌细胞死亡，科学家应用了“反分子”原理，使染色体端钉携带的部分遗传信息受到阻隔。“反分子”的有效成分被放在作为药物载体的聚乳或聚乙二醇酸有机物颗粒中，从呼吸道可以直接进入人体肺部。 雷哈教授认为，利用纳米药物载体携带药物进入人体的方法也可以治疗其他疾病，如进入人体皮肤、黏膜和胃肠，纳米药物载体可以是球状、针尖状或管状。利用纳米载体进入人体定向缓释药物的研究还只是刚刚开始，有专家也希望对其后果进行谨慎评估。

1、主要采用细水涨破法使细胞破裂（一般用动物细胞植被细胞膜，如果用植物细胞的话首先必须使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，过程繁琐，一般不用植物细胞）；2、从细胞破裂后得到的细胞匀浆中利用差速离心法，分离其中的物质，因为其密度较小（细胞膜主要成分是磷脂），因此分布在上清液中。对complicatedqq 这位同仁再追问中的回答，我纠正一下：1、植物细胞壁的主要成分才是纤维素和果胶，而非植物细胞膜（最大错误）；2、不同的细胞膜的相同点和不同点有哪些？（1）不同的细胞膜的相同点：它们都是以磷脂、蛋白质为主要组成物质，此外还含有少量糖类；（2）不同的细胞膜的不同点：主要体现在膜上的蛋白质种类和数量上存在差异，其中尤其以载体蛋白的种类和数量差异较大。希望提问者“逝痕xyx| ”能够看到后纠正一下，在这里只是出于一种相互学习探讨的目的。

关于“纳米医学发展的NIH路线图”的报告介绍说，NIH路线图的目标是在活体和纳米尺度控制和操纵生物学，可以分为以下三步：定量地表征细胞中的纳米机器和生物分子的物理和化学性质；理解活体细胞的工程原理来创造分子、细胞和组织等；利用这种性质和设计原理开发新的技术、器件和复合结构，从而进行组织修复，疾病的控制和治疗。美国针对威胁人类健康的肿瘤疾病成立了肿瘤研究的纳米技术联盟，其纳米技术表征实验室作为一个平台对联盟的成员开放，针对肿瘤的早期诊断、实时有效评估、多渠道治疗方法、分子改变监测、症候管理和靶向治疗等方面展开合作研究。 纳米技术对医学发展具有重要的推动作用，疾病诊断、预防和治疗的实际需求对纳米技术提出了获得更先进的药物传输系统和早期检测与诊断技术的期望，如早期诊断和预警、代谢产物中的生物标志物的发现、及其微量或痕迹量或瞬间的样品量的检测技术，适于大量或批量的实用检测技术平台，载体的效率和容量，靶向、缓释、可控的药物载体，药靶确证和药物筛选，甚至是突变或个体化差异的检测、诊治等。利用DNA分子的自组装特性，可以获得新型的纳米结构材料，用于发展全新的生物检测技术，实现基因治疗的关键因素之一是发展安全有效的基因运载系统，利用纳米技术发展新型医学传感器，利用纳米技术发展新型活细胞检测技术。另外纳米技术对再生医学的发展具有重要影响和推动作用，纳米技术为模仿和构建天然组织里不同种类的细胞外基质提供了全新的视角和方法，纳米技术将有助于探索和确定成体干细胞中的信号系统，以激发成体干细胞中巨大的自我修复潜能，纳米技术在医学科学中的应用，如单分子、单细胞体内成像应用、单一癌症细胞检测、药物释放直观技术等。 纳米技术在传染病防治中也有广阔的应用，我国是乙肝大国，平均有8%乙肝病人或携带者，在偏远农村远远高于这个比例。进展期肝病病人在中国的死亡率比较高，在大城市有60％的死亡率，在小的城市死亡率更是高达80％。虽然乙肝疫苗在乙肝病毒的传染方面发挥了很大的作用，但是研究表明乙肝病毒的变异也是非常高的，而且目前一些治疗乙肝的药物的抗药性在我国已经显现出来，所以在中国开展乙肝病的纳米医药研究尤其重要，探测活体细胞的功能，在分子的水平上认识和理解病变机理，做到早期诊断，实现早期治疗。 纳米药物及其药理学 目前国内外已开发并上市了许多纳米药物制剂，以提高原制剂的口服生物利用度、降低药物不良反应和提高治疗指数等，但是国际和国内纳米技术标准化却还没有建立，所以在纳米医药开发的过程中不可避免会受到制约和影响。所以，对于纳米药物学及其药理学研究的基础科学问题和近、中、长期的目标设定非常重要。 例如，肿瘤生长机制及阿霉素胶束自组装分子的抗肿瘤活性研究。肿瘤的微环境对其生长及对药物输运有着巨大影响，肿瘤组织内部静液压高、低氧、低PH值等微环境使得药物分子只能聚集在血管细胞周围，不能达到肿瘤细胞，影响了药物的使用效果。PEG－PE包裹阿霉素形成的胶束自组装分子在治疗肿瘤方面有着很好的效果，使用后肿瘤尺寸明显减小。 “用于肿瘤诊断与治疗的纳米医药的材料发展潜力”的研究指出，纳米生物技术在肿瘤的早期诊断和治疗中可以发挥很大作用。研究结果表明，抗体修饰的脂质体纳米复合载药体系不仅可以对肿瘤进行靶向治疗，结合纳米粒子修饰的纳米复合给药体系还可以对转移的肿瘤细胞进行诊断和靶向治疗，而且纳米胶囊的尺寸适中（50-200nm）时效果最好。“脂质分子自组装系统及其作为药物载体的应用”的研究认为，脂质分子作为生物体组成的主要成分具有无可比拟的生物相容性，自组装形成的纳米结构无论从均一性、稳定性，以及重复性方面，都有很大的优势，而且小肽修饰的脂质体对肿瘤有一定的靶向作用。 在这一议题中，专家们就目前纳米医药中其安全性评价和标准研究方法的问题进行了热烈的讨论。一致认为目前纳米医药研究应该规范化，推行“力量集成、资源整合和有限目标”的策略。纳米药物学近期或近中期目标可以是通过药物的直接纳米化或纳米载药系统(NanoDDS)，研制一批旨在提高生物利用度、延长药物作用时间、降低药物不良反应，或提高制剂顺应性等的纳米药物制剂。在纳米效应研究基础上，针对我国重大疾病(如肿瘤、心血管疾病、肝炎、艾滋病、神经退行性疾病等)，通过汲取这些疾病的病理学、生理学研究成果，研究和开发一批创新纳米药物制剂，并阐明与此相关联的深层次科学问题，包括纳米药物的长循环机理、纳米粒肿瘤药物的EPR效应机理、纳米药物对微循环影响机理、基因非病毒纳米载体的组装、转染机理、纳米智能载药系统的传感技术与药物控制释放技术的整合等。 生物传感与医学示踪 恶性肿瘤和心血管疾病等重大疾病严重威胁人类的健康，是当前医学研究领域所面临的一个重大挑战。我国自上世纪70年代以来，恶性肿瘤和急性冠状动脉综合症的发病率和死亡率一直呈上升趋势，已经成为危及人群健康及带来巨大经济负担的社会问题。目前癌症病人和心血管病人死亡率居高不下的一个最主要原因，是现有技术还很难实现真正的疾病早期检测，所以生物传感和医学示踪技术至关重要，特别是纳米生物传感技术和纳米材料在分子影像技术中的应用等是当前的研究热点。 “生物医学用磁性纳米材料及器件”的中心议题报告中介绍了生物医学用磁性纳米材料及器件在生物学与生物技术、医学以及药学等方面的应用及发展；同时，也提出了在这个发展过程中存在的一些急需研究的问题：(1)还有哪些新奇的性质可以应用？对不同分子探针的组装、联合及效能等；（2）磁性纳米材料究竟是在什么水平，如究竟是在细胞层次还是在组织层次上，对生物产生综合影响；（3）影像对磁性纳米材料对比剂尺寸和其他性质的依赖程度；（4）磁性纳米材料在生物体内的分散及循环问题；（5）磁性纳米材料的生物安全性、生物相容性等。 《生物微纳传感技术》的报告，对建立在纳米材料的生物相容性、磁性、催化性能等特性基础上的新型传感技术进行了综述和探讨，如纳米单通道技术利用随机传感形成的电流脉冲信号来实现DNA测序、单核苷多态性、特异序列DNA等的识别分析。此外，纳米阵列通道技术、纳米阵列电极、纳米微流控通道、纳米间隙等技术对基因识别、蛋白质的结构及修饰特征、药物作用靶标的发现与确证、药物筛选等方面的研究有着广阔的应用前景。 纳米技术的生物效应及安全性 “纳米生物环境健康效应与纳米安全性”的研究发现，由于小尺寸效应、量子效应和巨大比表面积等，纳米材料具有特殊的物理化学性质，在进入生命体和环境以后，它们与生命体相互作用所产生的化学特性和生物活性与化学成分相同的常规物质有很大不同。一方面要充分评价其安全性问题，比如对人类健康以及生态环境等造成不利影响。另一方面，对纳米颗粒与生命过程的相互作用过程的研究，发现纳米颗粒对生命过程的调控功能和正面的影响，也是纳米医学发展高效诊断和治疗的关键。与会专家一致认为对于纳米技术安全性的评价是为了保障纳米技术在纳米医学和纳米生物学方面的更好的应用，更好地将纳米技术应用到现实生活中去。 “纳米材料安全评价的研究战略和碳纳米管的生物分布”的专题报告，对目前国际上纳米材料安全评价的研究进行了综述，指出纳米安全性的研究并不是要阻碍纳米科技的发展，而是为纳米技术的快速高效发展铺平道路。

突破一：Recell分离治疗术细胞再生时间仅需20分钟，白斑区黑素细胞完成成活时间仅需2小时，2~3周后即可见到治疗效果——治疗部位颜色加深，上皮逐渐恢复到正常厚度。相比传统疗法而言，在治疗时间和康复时间上有了重大突破。突破二：Recell细胞分离术以黑色素细胞自体体外再生为主，综合运用生物分子学、细胞学、物理学、免疫学、遗传学等多种学科知识，综合考虑白癜风多种发病因素，辅以中西医结合多种方式，分型分类分期分性有针对性治疗。突破三：Recell细胞分离治疗术结合立体多维治疗技术，在白斑治疗面积有重大突破，人性化的活性治疗方式突破性的解决了传统单一疗法只针对小面积、局限某一范围治疗的难题。其安全的治疗方式，能使黑素细胞迅速成活，皮肤恢复正常色素沉着。突破四：Recell细胞分离术运用综合疗法增加黑素细胞内酪氨酸酶活性，使黑素细胞增多，同时抑制基化合物中的谷光甘肽与铜离子络合，使皮肤细胞获得更强的自身免疫能力，既能使得皮肤颜色恢复正常，又能治标治本。突破五：传统单一的治疗方法有一定的局限性，通常难以奏效，病情往往反复发作。Recell细胞分离术采用辨证施治，多种方法综合运用的方式，解析病因病理，提倡早治疗早康复，提高康复率，也使得疗效空前增强。突破六：传统疗法因为技术或者其它各类不可避免的原因，所以有多种并发症的可能，且保养稍不注意，便容易有瘢痕。Recell细胞分离术以其无创无痛和无炎症无感染的优势，增强了安全系数，同时采用自体再生，皮肤颜色无色差。

脾细胞分离纯化是一种重要的细胞分离技术，其分离出的细胞在体外培养后可以用于多种实验和研究。在进行脾细胞的分离纯化时，先加不完全培养基可以去除多余的非细胞成分，如浮游细胞和死亡细胞等。这样可以减少对细胞的不利影响和混杂污染，保证细胞的健康性和纯度。然后再加完全培养基，提供全部的必需营养物，促进细胞的增殖和存活。因此，先加不完全培养基再加完全培养基可以有效地提高脾细胞的分离纯化效果。

分离用的是差速离心啊，定性用的是细胞内各组分的鉴别方法，常见的就是染色或者是一些产生颜色的反应

全书共十章，包括发酵液的预处理、细胞的分离、沉淀、萃取、膜技术、吸附与离子交换、色谱技术、离心、生物产品的浓缩结晶与干燥等生物产品分离纯化过程所涉及的全部技术内容。本书通俗易懂、深入浅出，可读性较强。本书可作为高等院校相关专业本科生的教材，也可供从事生物分离工程工作及研究的有关人员参考。前言第一章 绪论第一节 生物分离工程的性质、内容与分类一、生物分离工程的性质二、生物分离工程的研究内容三、生物分离过程的分类第二节 生物分离工程的一般流程一、发酵液的预处理二、产物的提取三、产物的精制四、成品的加工处理五、生物分离纯化工艺过程的选择依据第三节 生物分离过程的特点一、生物分离过程的体系特殊二、生物分离过程的工艺流程特殊三、生物分离过程的成本特殊第四节 生物分离工程的发展趋势一、生物分离工程的发展趋势二、生物分离工程研究应注意的问题思考题第二章 发酵液的预处理第一节 发酵液预处理的方法一、发酵液的一般特征二、发酵液预处理的目的和要求三、发酵液预处理的方法第二节 发酵液的过滤，一、发酵液过滤的目的二、影响发酵液过滤的因素三、发酵液过滤的方法四、提高过滤性能的方法五、过滤介质的选择六、过滤操作条件优化七、过滤设备思考题第三章 细胞分离技术第一节 细胞分离一、过滤二、离心沉降第二节 细胞破碎一、细胞壁的结构二、细胞破碎动力学三、细胞破碎的方法第三节 胞内产物的溶解及复性一、包含体及其形成二、包含体的分离和溶解三、蛋白质复性思考题第四章 沉淀技术第一节 概述第二节 蛋白质表面性质一、蛋白质表面的亲水性和疏水性二、蛋白质表面的电荷三、蛋白质胶体的稳定性第三节 蛋白质沉淀方法一、盐析法二、有机溶剂沉淀法三、等电点沉淀法四、非离子多聚物沉淀法五、变性沉淀六、生成盐类复合物的沉淀七、亲和沉淀八、SIS聚合物与亲和沉淀第四节 沉淀技术应用一、蛋白质二、多糖三、茶皂甙纯化工艺研究四、杜仲水提液中氯原酸的提取思考题第五章 萃取技术第一节 基本概念一、萃取的概念、特点及分类二、分配定律三、分配系数、相比、分离系数第二节 液液萃取的基本理论与过程一、液液萃取的基本原理二、液液萃取类型及工艺计算第三节 有机溶剂萃取一、有机溶剂萃取分配平衡二、影响有机溶剂萃取的因素三、有机溶剂萃取的设备及工艺过程第四节 双水相萃取一、双水相体系的形成二、相图三、双水相中的分配平衡四、影响双水相分配系数的主要因素五、双水相萃取的设备及工艺过程第五节 液膜萃取一、液膜及其分类二、液膜萃取机理三、液膜分离操作四、乳化液膜分离技术的工艺流程五、液膜分离过程潜在问题六、液膜分离技术的应用第六节 反胶团萃取一、胶团与反胶团二、反胶团萃取三、反胶团制备四、反胶团萃取的应用第七节 液固萃取一、液固萃取过程二、液固萃取类型三、浸取的影响因素四、浸取的其他问题五、浸取的工业应用第八节 超临界流体萃取一、超临界流体二、超临界流体萃取三、超临界萃取的实验装置与萃取方式四、超临界流体萃取条件的选择五、超临界流体萃取的基本过程六、超临界流体萃取的应用实例第九节 萃取技术应用及研究进展一、双水相萃取技术应用及研究进展二、液膜萃取技术应用及研究进展三、反胶团萃取技术应用及研究进展四、超临界流体萃取技术应用及研究进展思考题第六章 膜分离过程第一节 概述一、膜分离过程的概念和特征二、膜过程分类三、分离膜第二节 压力驱动膜过程一、反渗透和纳滤二、超滤和微滤第三节 电推动膜过程——电渗析一、电渗析的基本原理二、电渗析传递过程及影响因素三、电渗析膜四、应用第四节 膜接触器——膜萃取一、膜萃取的基本原理二、膜萃取的传质过程三、膜萃取过程影响因素四、应用第五节 其他膜分离过程一、浓差推动膜过程——渗透蒸发二、温差推动膜过程——膜蒸馏第六节 膜分离过程装置一、滤筒式膜组件二、板框式膜组件三、螺旋卷式膜组件四、管式膜组件五、毛细管式膜组件六、中空纤维式膜组件思考题第七章 吸附与离子交换第一节 概述一、吸附过程二、吸附与离子交换的特点第二节 吸附分离介质一、吸附剂二、离子交换剂第三节 吸附与离子交换的基本理论一、吸附平衡理论二、影响吸附的主要因素三、离子交换平衡理论第四节 基本设备与操作一、固定床吸附操作二、移动床吸附器三、膨胀床吸附操作四、流化床吸附操作五、吸附器净化效率的计算与选择思考题第八章 色谱分离技术第一节 色谱分离技术概述一、色谱技术的基本概念二、色谱法的分类三、色谱系统的操作方法第二节 吸附色谱法一、吸附色谱基本原理二、吸附薄层色谱法三、吸附柱色谱法第三节 分配色谱法一、基本原理二、分配色谱条件三、分配色谱基本操作四、分配色谱法的应用第四节 离子交换色谱法一、离子交换色谱技术的基本原理二、离子交换剂的类型与结构三、离子交换剂的理化性能四、离子交换色谱基本操作五、离子交换色谱的应用第五节 亲和色谱一、亲和色谱概述二、亲和色谱原理三、亲和色谱介质四、亲和色谱介质的制备五、亲和色谱的操作过程六、影响亲和色谱的因素第六节 色谱分离技术的应用一、亲和色谱的应用二、离子交换色谱的应用三、吸附色谱的应用四、分配色谱的应用五、多种色谱技术的组合应用思考题第九章 离心技术第一节 离心分离原理一、离心沉降原理二、离心过滤原理第二节 离心分离设备一、离心分离设备概述二、离心沉降设备三、离心过滤设备四、离心分离设备的放大第三节 超离心技术一、超速离心技术原理二、超速离心技术分类三、超速离心设备第四节 离心技术在生物分离中的应用一、离心技术在生物分离应用中的注意事项二、离心分离的优缺点三、离心机的选择四、离心在生物分离中的应用思考题第十章 浓缩、结晶与干燥第一节 蒸发浓缩工艺原理与设备一、蒸发浓缩工艺二、蒸发浓缩设备第二节 结晶工艺原理和设备一、结晶操作工艺原理二、结晶设备第三节 干燥工艺原理与设备一、干燥工艺原理二、干燥设备思考题

1、取得完全无血液残留的肺脏：实验前将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏。2、消化肺组织：常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞[9]。胰蛋白酶消化没有选择性，会带来像内皮细胞和间质细胞等一些不能在后面的分离步骤中去除的杂质细胞，因此弹性蛋白酶更有助于提高上皮细胞的纯度和产量。与此相反，Cunningham A C等发现，与弹性蛋白酶相比，用胰蛋白酶可以获得更大产量的Ⅱ型上皮细胞[10]。胶原酶可以用来辅助消化细胞间质。用几种酶混合的方法比单一酶消化效果更好，但目前还没有文献定量描述最优化的酶消化方法。Finkelstein J N等发现可以通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。作者在自己的实验中也证实了通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化效果更好。3、分离纯化细胞：上皮细胞的分离纯化技术经过二三十年的发展日渐成熟，呈现多样化的特点。目前对细胞的分离纯化主要有以下几种方法：(1)密度梯度离心：密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。这是最早用于分离Ⅱ型上皮细胞的方法，至今仍在使用。用ficoll或percoll不连续梯度离心，猪肺泡Ⅱ型细胞最终纯度可以达到70%-85%左右[11-12]。沉降系数与细胞的直径和天然密度有关。由于Ⅱ型细胞与其他细胞存在密度和大小的交叉(如巨噬细胞)，仅仅通过离心并不能有效去除杂细胞。Kikkawa(1974)让巨噬细胞吞噬一些重颗粒(如硫酸钡)，改变其密度，可以帮助区分巨噬细胞和上皮细胞。离心后的纯度达到94%,但产量明显减少[8]。上皮细胞的大小和密度变化范围较大，用密度梯度离心要丢掉和其他细胞重叠的细胞层，这必然会造成某些密度大的Ⅱ型细胞损失，产量大大降低。(2)滤膜分离：滤膜分离的原理是根据细胞的大小不同来进行分离。Ⅱ型上皮细胞约10μm，比巨噬细胞(约25μm)和Ⅰ型细胞(50μm-100μm)小，用150μm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片，30 μm ～40 μm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞[13]，采用15μm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单，它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。(3)流式细胞技术：流式细胞技术分离的原理是根据不同细胞之间的荧光差异。根据不同种细胞的特征识别，用荧光物质标记筛选。上皮细胞内含有丰富的脂类物质，用亲脂性荧光素标记，可以得到纯度很高的细胞。Funkhouser J D等用抗Ⅱ型上皮细胞的单抗进行免疫荧光标记，再用流式细胞仪进行筛选，得到96%的Ⅱ型上皮细胞[14]。但荧光素对被标记细胞有害。Rochat T R等发现自然荧光和直角光散射可以区分巨噬细胞和单核细胞，这给不经荧光标记分离上皮细胞提供了可能[15]。流式技术分离细胞的产量很低，但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。(4)免疫黏附：免疫黏附的原理是各种细胞的膜表面有不同的免疫活性物质。巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞表面都有IgG上的Fc片段的受体。Uhal(1989)用IgG包被塑料板，把细胞悬液置于板上，巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞因为含有Fc片段的受体而与IgG结合，吸附到板上，不黏附的Ⅱ型细胞被冲洗下来[16]。经过多年的摸索，这种方法近几年已开始应用，简便易行，可除去绝大多数的巨噬细胞，有效的提高上皮细胞的纯度。(5)贴壁选择：贴壁选择的原理是各种细胞完成贴壁的时间不同，这种特性用在培养时做筛选。根据最终目的，综合其中几种方法能达到较好的效果。例如先用滤膜过滤，再用IgG包被法

那个说的不是透析，而是白细胞单采，就是一种血细胞分离技术。在白血病产生白细胞淤滞的时候所用。血细胞分离技术是一种通过血细胞分离仪对白细胞、红细胞、血小板等血液成分进行分离、单采、交换、去除，从而迅速减轻、缓解高细胞血症及肿瘤溶解综合征的技术。还可以进行血浆置换，除了用于血液科外，广泛应用于多种风湿免疫、神经内分泌等多种学科疾病的治疗。 对于白血病病人来说，血液里充斥异常分化的白细胞，这些白细胞是没有正常生理功能的。相反，会堵塞血管，造成出血等病理结果。这时，借助血细胞分离仪，引用梯度分离的原理，可以把白细胞采集到一起，然后丢弃，这样，得到相对低浓度白细胞的血液，减少病理反应。除了白细胞外，还可以单采血小板等单一的血液成分。

现在可以用显微注射的方法！当然也可以用离心法

生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。细胞电泳是指在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动

免疫细胞（immunecell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术x0dx0a1、淋巴细胞的分离x0dx0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。x0dx0a2、T细胞及B细胞的分离x0dx0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMIl640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。x0dx0ax0dx0a3、CD4细胞及CD8细胞的分离x0dx0a（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。x0dx0a（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1PBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMIl640培基中备用。CD4细胞亦可用此法分离。x0dx0a4、单核巨噬细胞的分离x0dx0a单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃C02温箱内温育1小时，然后用RPMI1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。细胞电泳是指在一定PH 值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动

细胞器的分离,一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理,分离出所需组分,分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。 分离细胞器常用的方法是什么 分离细胞器主要会用到差速离心，主要是利用细胞的不同，比如细胞的大小和质量和组分不同。 在离心管不一样的区域的原理，然后我们再分离出所需要的组分，最后得到的细胞器。 一般破碎了细胞之后，我们要先分离各组分，防止干扰，这对—些高难度或者高纯度的生物大分子是有一定的必要的。 我们可以通过电子显微镜或者是定标志酶活力又或者是免疫学法来进行纯度的鉴定。

免疫细胞（immunecell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术x0dx0a1、淋巴细胞的分离x0dx0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。x0dx0a2、T细胞及B细胞的分离x0dx0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMIl640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。x0dx0ax0dx0a3、CD4细胞及CD8细胞的分离x0dx0a（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。x0dx0a（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1PBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMIl640培基中备用。CD4细胞亦可用此法分离。x0dx0a4、单核巨噬细胞的分离x0dx0a单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃C02温箱内温育1小时，然后用RPMI1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

这个问题提的挺好的，好在现在在网络上了解过一些有关知识，这个给大家讲解一下吧~希望能够帮助到各位~基茵美细胞剥离技术原理深层激活：利用比头发丝还细的微针，将医用无菌注射水（无菌水）直接输送到皮下，通过REBORN基茵美水剥离水动力软性剥离作用，定点、定层、定量，精准、精细、精微在表皮、真皮、及皮下形成微创面（水液会自动避开毛细血管和神经）。皮肤因微创而启动自愈系统，在修复皮下微创面的过程中，会产生多种细胞修复因子，各类因子相互协作，促进不同层次的细胞再生（胶原蛋白细胞、网状纤维细胞、弹力纤维细胞）。新生的胶原纤维和粘性蛋白，也称作细胞与细胞之间的粘合剂，通过疗程（1~2次），不断增加皮下的厚度，从而达皱纹抚平、凹陷饱满、松弛收紧、脱垂提升的效果。细胞剥离技术可以解决五大问题：1、皱纹2、凹陷3、脱垂4、松弛5、疤痕

1、分离细胞器的方法为差速离心或密度梯度离心. 2、 线粒体：结构包括线粒体内膜、外膜（上分布有基粒）、线粒体基质.线粒体内膜和线粒体基质中含有氧. 叶绿体：结构包括叶绿体外被、类囊体和基质3部分组成,外被上分布着光合作用需要的色素,类囊体和基质上有光合作用需要的酶,含有少量的DNA和RNA. 内质网：功能是合成分泌蛋白质. 高尔基体：功能是将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装,然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外. 溶酶体：内部含有多种酸性水解酶,功能是溶解或消化,为细胞内的消化器官. 液泡：内有细胞液,其中含有糖类、无机盐、色素和蛋白质等物质. 核糖体：成分包括蛋白质和核糖体RNA（rRNA）,功能是：核糖体是合成蛋白质的地方. 中心体：分布在动物细胞和某些低等植物细胞,由两个互相垂直的中心粒及周围物质组成,与细胞的有丝分裂有关.

在诱导物作用下，相互靠近的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞。结果应该是有蛋白质，DNA，脂类物质。涂片的不同应该是细胞核的有无，染色后的分布。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。扩展资料：在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。参考资料来源：百度百科-细胞分离技术

离心技术、流式细胞术和细胞电泳。1、离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。2、流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。3、细胞电泳是指在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动。

1、取得完全无血液残留的肺脏：实验前将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏。2、消化肺组织：常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞[9]。胰蛋白酶消化没有选择性，会带来像内皮细胞和间质细胞等一些不能在后面的分离步骤中去除的杂质细胞，因此弹性蛋白酶更有助于提高上皮细胞的纯度和产量。与此相反，Cunningham A C等发现，与弹性蛋白酶相比，用胰蛋白酶可以获得更大产量的Ⅱ型上皮细胞[10]。胶原酶可以用来辅助消化细胞间质。用几种酶混合的方法比单一酶消化效果更好，但目前还没有文献定量描述最优化的酶消化方法。Finkelstein J N等发现可以通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。作者在自己的实验中也证实了通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化效果更好。3、分离纯化细胞：上皮细胞的分离纯化技术经过二三十年的发展日渐成熟，呈现多样化的特点。目前对细胞的分离纯化主要有以下几种方法：(1)密度梯度离心：密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。这是最早用于分离Ⅱ型上皮细胞的方法，至今仍在使用。用ficoll或percoll不连续梯度离心，猪肺泡Ⅱ型细胞最终纯度可以达到70%-85%左右[11-12]。沉降系数与细胞的直径和天然密度有关。由于Ⅱ型细胞与其他细胞存在密度和大小的交叉(如巨噬细胞)，仅仅通过离心并不能有效去除杂细胞。Kikkawa(1974)让巨噬细胞吞噬一些重颗粒(如硫酸钡)，改变其密度，可以帮助区分巨噬细胞和上皮细胞。离心后的纯度达到94%,但产量明显减少[8]。上皮细胞的大小和密度变化范围较大，用密度梯度离心要丢掉和其他细胞重叠的细胞层，这必然会造成某些密度大的Ⅱ型细胞损失，产量大大降低。(2)滤膜分离：滤膜分离的原理是根据细胞的大小不同来进行分离。Ⅱ型上皮细胞约10μm，比巨噬细胞(约25μm)和Ⅰ型细胞(50μm-100μm)小，用150μm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片，30 μm ～40 μm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞[13]，采用15μm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单，它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。(3)流式细胞技术：流式细胞技术分离的原理是根据不同细胞之间的荧光差异。根据不同种细胞的特征识别，用荧光物质标记筛选。上皮细胞内含有丰富的脂类物质，用亲脂性荧光素标记，可以得到纯度很高的细胞。Funkhouser J D等用抗Ⅱ型上皮细胞的单抗进行免疫荧光标记，再用流式细胞仪进行筛选，得到96%的Ⅱ型上皮细胞[14]。但荧光素对被标记细胞有害。Rochat T R等发现自然荧光和直角光散射可以区分巨噬细胞和单核细胞，这给不经荧光标记分离上皮细胞提供了可能[15]。流式技术分离细胞的产量很低，但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。(4)免疫黏附：免疫黏附的原理是各种细胞的膜表面有不同的免疫活性物质。巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞表面都有IgG上的Fc片段的受体。Uhal(1989)用IgG包被塑料板，把细胞悬液置于板上，巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞因为含有Fc片段的受体而与IgG结合，吸附到板上，不黏附的Ⅱ型细胞被冲洗下来[16]。经过多年的摸索，这种方法近几年已开始应用，简便易行，可除去绝大多数的巨噬细胞，有效的提高上皮细胞的纯度。(5)贴壁选择：贴壁选择的原理是各种细胞完成贴壁的时间不同，这种特性用在培养时做筛选。根据最终目的，综合其中几种方法能达到较好的效果。例如先用滤膜过滤，再用IgG包被法。

外周血中单个核细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同。淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075∽1.090之间而近似于等渗的溶液，用它做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

PVC段用于细胞分离的原理是基于非特异性吸附原理。PVC段的表面拥有自身的化学性质，表面上的有机化合物可吸附有生命特征的物质，如蛋白质、酶、荷尔蒙、受体等等。这种吸附力不同于离子交换和亲和层析等分离手段，但通过改变PVD段的表面性质，也可以通过这些分离手段来实现对于特定生物物质的分离。这一原理实现细胞分离的方法主要是通过制成PVC支架进行细胞培养，从而使细胞沿PVC段表面生长，形成细胞层，之后对其进行分离。

A．分离各种细胞器常用差速离心法，A正确； B．研究分泌蛋白的合成与分泌时，利用放射性同位素标记法氨基酸，观察与之相关细胞器，B正确； C、高度分化的动物细胞的细胞核仍然具有全能性，因此体细胞核移植技术来培养得到器官，C正确； D、模型的形式很多，真核细胞的三维结构模型属于物理模型，D错误． 故选：D．

有关系，粒子小

免疫磁珠分选技术免疫磁珠分选技术（MACS）是高效简捷的血小板分离纯化方法。MACS是利用血小板表面标志CD61进行分离的。将单克隆抗CD61-PE包被在磁珠上，然后包被上单克隆抗体的磁珠与血小板特异性结合。磁珠携带着与之结合的血小板吸附于分离柱上，没有与磁珠结合的阴性细胞流出，从而实现了血小板的分离。用MACS细胞分选系统可以分离出非常纯的血小板，纯度可以达到80%-99%，连续两次过柱分选可进一步提高血小板纯度，通常可大达95%-99%，回收率在90%以上。而且，由于微型磁珠的体积极小，其直径只有50nm，所以不会对血小板造成机械性压力，而且使孵育时间短，操作过程快。MicroBeads形成一个稳定的胶体液，它们在磁场中既不沉淀又不凝聚。微型磁珠的大和它的组成成分（氧化铁和多糖）使其可被生物降解，且不会激活细胞或影响细胞的功能和活力，细胞的生理功能也不会改变。磁珠不需要去除，因此，阳性分选出的细胞可立即用于分析和随后的实验。如果操作得当，其分离效果与流式细胞术的血小板分离效果基本处于同一水平，并还具有比流式细胞仪的分离更省时，费用低，及操作简单等优势。流式细胞术流式细胞分选技术是目前最先进的分离纯化技术之一。血液中的血小板在激光束的照射下发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，经计算机处理，被确认为CD61阳性细胞，超声压电晶体通电后发生高频震动，使细胞流动室喷咀流出的液流束断成一连串均匀的液滴，每秒钟形成液滴上万个，每个液滴包含着一个样品细胞。CD61阳性的血小板被充电，在通过偏转的高压静电场时向左或向右偏转被收集在指定的容器中。阴性细胞不发生偏转进入中间废液收集器中，从而实现了分选。流式细胞仪分离细胞速度大概为4500000个每小时，经分选可获得高纯度、高回收率及高活细胞率，所分离的血小板仍然可保持无菌、原有结构和生物活性。上述特点决定流式细胞术分离血小板无疑可获得最佳效果。但该方法的限制性，首先在于费用昂贵，需要流式细胞仪这样的特殊设备，其次所需时间相对较长，如加大压力和流速，则造成了细胞的损失，因此，人们常常在流式细胞分选血小板前，作其分离的预分离，分离出富血小板血浆，以提高血小板在样本中所占的比例，从而可以提高压力和流速，节省时间。