CarieVinne -
说到基因敲除，先要了解CRISPR/Cas基因编辑系统
CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。
CRISPR/Cas9基因编辑示意图
(图源：Wellcome Trust Sanger Institute,Sanger)
然后我们再来看CRISPR/Cas基因敲除
CRISPR/Cas9系统中sgRNA(smallguideRNA)识别并结合目标基因的靶向序列，引导Cas9对结合位点进行剪切，产生DNA双链断裂（double-strandbreak,DSB），机体自身通过非同源重组（non-homologousendjoining，NHEJ）的方式修复DSB，参与修复的蛋白经常会在DNA末端插入或删除几个碱基，修复后的基因由于产生突变而导致功能丧失，从而实现机体内的基因敲除。
最后再来看看如何应用
应用：基因敲除细胞系建立、基因敲除建立动物疾病模型。
技术优势：相较于在mRNA水平“敲低”目的基因的RNAi而言，CRISPR/Cas9系统造成基因序列的缺失，从而能完全沉默（即敲除）目的基因。如果您正在研究或者学习神经科学，生物病毒，基因治疗等方向，或是正在使用各类工具病毒做科研实验，可以百度搜索布林凯斯braincase，官网上有更详细的案例分析和专业解读哦~
真颛 -
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ES细胞的获得
现在基因敲除一般应用于鼠，而最常用的鼠的种系是129及其杂合体，因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物。而其他遗传背景的胚胎干细胞系逐渐被发展应用，最近来自于C57BL/6×CBN/JNCrjF1小鼠的胚胎干细胞系成功地用于基因敲除。由于这些远交系遗传背景复杂，所得到的模式小鼠往往不能得到重复性好的实验结果，所以也需要在C57BL/6等近交系小鼠上做回交。 另一方面，因为回交次数不一样，也会造成实验结果重复性差。这对生物科研，尤其是医药企业，安评中心，药检部门等，是一个很大的缺点。这对开发制作标准模式动物也是一个很大的缺陷。所以，如果能够直接用C57BL/6 ES 细胞进行基因打靶，就将直接获得C57BL/6品系的模式小鼠。c57BL/6小鼠种系等已经广泛的应用于免疫学，神经学，癌症，等几乎所有研究领域。目前已经有一些公司或科研机构已经开始用C57BL/6遗传背景的ES细胞进行基因打靶。
基因载体的构建
把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA分子都重组到带有标记基因(如neo基因，TK基因等)的载体上，此重组载体即为打靶载体。因基因打靶的目的不同，此载体有不同的设计方法，可分为替换性载体和插入型载体。如为了把某一外源基因引入染色体DNA的某一位点上，这种情况下应设计的插入型载体要包括外源基因(即目的基因)、同源基因片段及标记基因等部分。如为了使某一基因失去其生理功能，这时所要设计的替换型打靶载体，应包括含有此靶基因的启动子及第一外显子的DNA片段及标记基因等诸成分。根据实验目的不同，打靶载体分为全基因敲除，条件性基因敲除，基因敲进，诱导性基因敲除等打靶载体。
目的基因导入
将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达。一般地，显微注射命中率较高，但技术难度较大，电穿孔命中率比显微注射低，但便于使用。
用选择性培养基筛选已击中的细胞
一般地，筛选使用正、负选择法，比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞，剩下的细胞为命中的细胞。由于用于TK筛选的Gancyclovir对小鼠的种系传递有影响，最近5年来一般采用DTA(白喉毒素A亚基）进行阴性筛选。将筛选出来的靶细胞导入鼠的囊胚中，再将此囊胚植人假孕母鼠体内，使其发育成嵌合体小鼠。
观察生物学性状的改变
通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学性状的改变，达到研究目的基因的目的。
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基因删除是什么，和基因敲除有什么分别基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT 系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版） 高等教育出版社2023-06-30 15:15:521
什么是基因敲除？
就是利用一段与靶基因序列相似或相同的外源DNA片段，使该片段与靶基因发生重组，把靶基因从染色体上替换下来，从而使靶基因失活。2023-06-30 15:16:012
基因敲除gene knockout
简称KO，是一种生物体的其中部分基因不起作用的技术。也叫做敲除生物体或者仅仅劣汰。它们用于学习已知序列，不知功能的基因，调查基因缺失的影响。研究人员对敲除生物体和正常生物的不同得出结论。 方法 基因敲除融合各种技术。最初，源自自然界发生突变。之后，基因敲除或者失活通过DNA序列或者其他方法建立。KO直接的创造源自质粒，一种细菌的人造的染色体或者其他DNA序列，继续复制细胞培养。单个细胞基因上DNA结构被转染。通常目标是创造一种有可替代基因的转基因动物。这样做胚胎干细胞基因上变形并植入早期胚胎。造成动物在其胚胎基因的改变，也传递敲除的基因给子代。 为了创造敲除基因的苔藓，原生质体的转染是一种优选的方法。这种变形的苔藓原生质体直接再生成肥沃的苔藓植物。转染8周后，可以通过PCR扫描植物的基因靶点。 结构设计来重组目标基因，这是通过来自基因本身不合适的序列移植入宿主来实现的。然后重组发生在基因序列的一段区域里，造成外来序列的插入，破坏了基因。当序列被打断时，在大多苔藓中的替代基因将会被植入非功能区，如果被移植后。有条件的基因敲除使一种组织或者时间以特定的方式删除基因。这是通过引入基因周围的称作loxP的一段短序列实现的。这些序列将会通过相同的叫做基因敲除的机制引入胚系。这种胚系之后与另一种胚系杂交形成了移植物，这是病毒的酶识别了序列并重组了它们，删除了被这些序列夹击的基因。 因为基因重组的目标类型在大多数细胞和结构里是罕见的事件，目标的外来序列通常包括报告基因插入。这使在细胞和个体中成功的敲除变得简单。有时DNA结构植入染色体没有预期的与目的基因同源的重组。为了消除这种细胞，DNA结构通常包括DNA的第二序列来识别和消除这种细胞。 在二倍体组织中，大多数基因都包括两个等位基因，可能还包括几个相关的基因以同样的方式合作，当每种目标基因被敲除时，会发生几轮额外的转染和选择。选择的品种可能用来产生纯合子敲除动物。2023-06-30 15:16:171
基因敲除技术（gene knockout）
随着真菌基因组测序工作进度的不断推进，基因功能正成为真菌研究的重点之一。基因敲除技术，即是可以针对一个 DNA 碱基序列已知但功能未知的基因，通过抑制该基因的表达，分析突变体表型变化后来确定该基因的功能。通常意义上的基因敲除就是利用同源重组技术，将构建完成的基因敲除载体导入到受体细胞中，载体上碱基序列因为和受体细胞内目的基因 DNA 碱基序列同源而重组，将载体 DNA 定向整合到受体细胞基因组上某一个确定的位点处，从而来分析该基因的功能。 Ref： <基因敲除技术的应用现状与发展前景>2023-06-30 15:16:231
同源重组的基因敲除
基因敲除（geneknockout），是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。基因敲除除可中止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中，基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。基因敲除的技术路线如下：（1）构建重组基因载体﹔（2）用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔（3）用选择培养基筛选已击中的细胞﹔（4）将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物，对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂，但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低，约为百万分之一，要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此，同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛选方法，其中1988年犹它大学的Capecchi教授的研究组发展的正负双向选择系统适用范围宽且效率较高。2023-06-30 15:16:311
基因敲除是怎么回事？
将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。 来源：http://baike.baidu.com/view/5933.htm2023-06-30 15:16:521
基因敲除，rna干扰，基因沉默有什么关系
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。2023-06-30 15:17:022
基因敲除的意义是什么?
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程基因修饰技术,针对某个感兴趣的遗传基因,通过一定的基因改造过程,令特定的基因功能丧失,并研究可能进一步对相关生命现象造成的影响,进而推测该基因的生物学功能. 主要是研究这个基因的功能的,我就做这个,敲除的是细菌的基因,有需要的话可以交流交流2023-06-30 15:17:111
基因敲除的介绍
基因敲除（knockout）是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。2023-06-30 15:17:191
基因删除是什么,和基因敲除有什么分别
基因敲除是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因目的的一种技术. 基因敲除就是重组 是基因的替换过程.如果象你说的只是删除了 那就是染色体变异了2023-06-30 15:17:501
如何让基因敲除
和RNA干扰技术，事实上基因敲除的一些原理也应用了RNA干扰技术具体的给你复制过来一点，有个大概，其余靠自己百度搜索好了基因敲除：是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。RNA干扰是与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。2023-06-30 15:17:591
转基因技术和基因敲除技术的主要区别有哪些
转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgenic technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。Genetically Modified--转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。所谓胚胎干细胞(EmbryonicStem cell，ES)是从着床前胚胎(孕3-5天)分离出的内细胞团(Inner cellmass，ICM)细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化潜能，能在体外培养并保留发育的全能性。在体外进行遗传操作后，将它重新植回小鼠胚胎，它能发育成胚胎的各种组织。而基因同源重组是指当外源DNA片段大且与宿主基因片段同源性强者并互补结合时，结合区的任何部分都有与宿主的相应片段发生交换(即重组)的可能，这种重组称为同源重组。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因靶位时间和空间上的操作更加明确、效果更加精确、可靠，它的发展将为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段，具有广泛的应用前景和商业价值。现在基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。2023-06-30 15:18:092
细菌基因敲除，只要敲除编码区中少数几个，还是把整个编码区都敲除？或者连启动子区域也敲除？
一般只要敲除编码区一小段（1/3-1/4基因全长）就可以达到目的，但是你干吗不全敲除了呢？留下那么一小段还会翻译出无活性蛋白片断或者副作用的什么产物，还浪fei细胞资源。启动子区域 能不能被敲除 要看这个基因是不是单独享用的这个启动子，一般在原核细胞是操纵子（多基因共用一个启动子），那可是万万不能敲除的哦。。。。道理你应该明白。2023-06-30 15:18:162
以cre-loxp系统为例简述什么是条件性基因敲除
基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版）高等教育2023-06-30 15:18:241
基因敲除后通过基因敲入能证明基因的功能吗
转基因动物(Transgenicanimal)指基因组中整合有外源基因,并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离,使基因能在种系遥远的机体间流动,既可加快家畜品种的改良力度,提高畜产品品质,又可生产珍稀药用蛋白.基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。如果你对这个答案有什么疑问，请追问，另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！2023-06-30 15:18:311
基因敲除，互补，功能研究等实验怎么做
基因敲除，互补，功能研究等实验怎么做做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。2023-06-30 15:18:411
基因敲除是在Dna分子的一条链上进行的吗？
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响2023-06-30 15:18:491
CRISPRCas9基因敲除需要加入donor DNA吗？
如果是细胞系做knockout的话，不需要加入donor，做Knockin或者mutation就需要；如果是菌的基因编辑，一般都是需要加donor。2023-06-30 15:18:581
一般来说，实验室购买的敲除基因的小鼠，是完全敲除还是只敲除外显子
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。2023-06-30 15:19:071
国内基因敲除小鼠公司都有哪些？
国内做基因敲除的公司有江苏集萃药康、上海南模生物还有赛业等等。集萃药康他们的斑点鼠计划就是专门做KO/CKO小鼠，品系资源非常多，可以在百度找他们的官网咨询了解！可以在他们的网站上检索。2023-06-30 15:19:251
基因敲除小鼠PCR鉴定的结果分析……求助攻……
你这个，有几个样品没有P出来，需要重新做，你可以调整一下PCR的反应体系，反应条件，改善一下模板质量，看能不能P出来。P出来的这些结果很明显的啊，两条带的是杂合体，一条带的是纯合体，看你引物设计时候的情况是怎么样的了，一般情况下，只有一条小的条带的是敲除的纯合体，只有一条大的条带的就是野生型的了。纯合体可以留下来保种或者拿去做实验，杂合体看情况，有需要的话就留着。2023-06-30 15:19:351
求助组织特异性基因敲除等几个问题
一般只要敲除编码区一小段（1/3-1/4基因全长）就可以达到目的,但是你干吗不全敲除了呢?留下那么一小段还会翻译出无活性蛋白片断或者副作用的什么产物,还浪fei细胞资源.启动子区域能不能被敲除要看这个基因是不是单独享用的这个启动子,一般在原核细胞是操纵子（多基因共用一个启动子）,那可是万万不能敲除的哦.道理你应该明白.2023-06-30 15:19:442
基因敲除片段要多大
同源臂长500~1000之间比较合适可以尝试overlapping2023-06-30 15:19:571
基因上标的意思 fl
您好，这个表示基因的单敲除和双敲除，你说的这个应该是哺乳细胞中的基因敲除，哺乳细胞细胞含有等位基因，一般敲除分为单敲，即敲除一个基因，很多表示+/-；双敲，即敲除两个基因，表示为-/-。fl/-和fl/fl这个是一样的道理，一般基因敲除都是用的同源重组的方法（现在有些技术是无痕敲除，如cas-9敲除系统），敲除的同时都会用另外一个片段或者筛选基因替换掉靶基因，以便于筛选阳性克隆。如果我理解没错的话，这个fl应该是敲入的片段或者marker。~.~2023-06-30 15:20:212
何谓基因敲除有什么作用
通过基因敲除可以研究特定基因的作用，敲除一个基因，看一下动物或细胞的表型变化，由此可以推测它的功能。2023-06-30 15:20:281
neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用
neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程：1. 课题设计，订购课题BAC菌；2. 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建；3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆；4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆；5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内；6. 得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。二、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程1. 设计构建识别靶序列的sgRNA;2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；4. 设计构建打靶载体；5. 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA;6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体；7. 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；8. 获得F1代小鼠，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。2023-06-30 15:20:371
集萃药康基因敲除小鼠多少钱一只？
基因敲除小鼠因为制作成本以及制作周期相对较长等原因，价格是比较高的。集萃药康为了加速基因敲除小鼠资源库构建，开展斑点鼠计划（Knock-out All Project，KOAP），在百度了解到现已获得接近22000品系资源，涵盖肿瘤、免疫、代谢、发育、感染等多个方向。为更好助力科学研究及生物医药发展，集萃药康斑点鼠价格大幅下调，KO小鼠一万元起，CKO小鼠2万元起，到手三只小鼠。2023-06-30 15:20:441
crispr cas9基因敲除原理是什么？
基本原理：CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR簇的启动子序列。重复序列区长度为21～48bp，含有回文序列，可形成发卡结构。基因编辑技术形式有：1、同源重组同源重组（Homologous recombination）是最早用来编辑细胞基因组的技术方法。同源重组是在DNA的两条相似（同源）链之间遗传信息的交换（重组）。2、核酸酶基因编辑的关键是在基因组内特定位点创建DSB。常用的限制酶在切割DNA方面是有效的，但它们通常在多个位点进行识别和切割，特异性较差。为了克服这一问题并创建特定位点的DSB。2023-06-30 15:20:512
基因敲除是怎样的？
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。2023-06-30 15:21:392
什么是完全基因敲除和条件性基因敲除
基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT 系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版） 高等教育出版社2023-06-30 15:21:521
基因敲降的方法
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA ，它们同样可以达到基因敲除的目的。二.实现基因敲除的多种原理和方法：1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA 同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2023-06-30 15:22:011
高中生物基因敲除
基因敲除 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 基因敲除技术的缺陷 随着基因敲除技术的发展，早期技术中的许多不足和缺陷都已经解决，但基因敲除技术始终存在着一个难以克服的缺点，即敲掉一个基因并不一定就能获知该基因的功能，其原因包括：一方面，许多基因在功能上是冗余的， 敲掉一个在功能上冗余的基因，并不能造成容易识别的表型，因为基因家族的其他成员可以提供同样的功能；另一方面，对于某些必需基因，敲除后会造成细胞的致死性，也就无法对这些必需基因进行相应的研究了。 天性遗传病经过基因敲除后到下一代还会不会遗传，这个不确定。2023-06-30 15:22:112
怎样敲除基因
可以直接以靶基因的敲除位点为模板做PCR，如果是阴性，就是敲除成功。或者是提RNA后做RT-PCR。由于基因敲除往往不是敲除的整段基因，所以引物设计的时候要针对敲除的那个部位。2023-06-30 15:22:201
什么是完全基因敲除和条件型基因敲除
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。2023-06-30 15:22:302
当前流行的基因敲除技术有哪些
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。 随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 1、利用基因同源重组进行基因 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。 2、诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。2023-06-30 15:22:381
实验室做基因敲除一般用什么方法
实验室做基因敲除一般用什么方法本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，厚百上的好多试剂盒都可以做好几个点的突变！厚百提供试剂、耗材等全面实验室用品及实验技术服务，科研整体服务。基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。2023-06-30 15:22:481
基因敲除的技术应用
基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。近年来，牛、羊、猪、猴等大型哺乳动物实现了基因敲除。但由于狗的生殖生理较为特殊，基因敲除狗的培育难度大为增加，狗基因组的定点修饰一直未获成功。针对这一问题，研究团队设计了一个自体移植的策略，克服了供体胚胎与受体雌犬的生殖周期不同步的难题，大幅提高妊娠率，基因打靶狗得以诞生。2015年10月，中国科学院广州生物医药与健康研究院联合南京大学南京生物医药研究院、广州医药研究总院等科研单位共同培育的两只基因敲除狗比格犬“大力神”和“天狗”远比同龄小狗显得强壮矫健，它们是世界上首例基因敲除狗。被敲除了肌肉生长抑制素基因后，它们的肌肉生长发育能力增强，4个月时就比普通狗更为肌肉发达，成年后具有更强的运动能力。狗在营养代谢、生理解剖等方面与人类极其相似，是研究人体生理和疾病发生机理的理想实验动物。基因敲除狗的培育将为人类疾病治疗和药物研发提供新的实验动物模型，也将加速培育更多含优良遗传性状的新品系狗。2023-06-30 15:22:571
基因敲除小鼠的原理和方法
1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。2023-06-30 15:23:281
当前流行的基因敲除技术有哪些
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。 随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 1、利用基因同源重组进行基因 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。 2、诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。2023-06-30 15:23:462
基因敲除的意义是什么？
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程基因修饰技术，针对某个感兴趣的遗传基因，通过一定的基因改造过程，令特定的基因功能丧失，并研究可能进一步对相关生命现象造成的影响，进而推测该基因的生物学功能。主要是研究这个基因的功能的，我就做这个，敲除的是细菌的基因，有需要的话可以交流交流2023-06-30 15:23:561
基因敲除细胞怎么表示p53
基因敲除细胞怎么表示p53基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。2023-06-30 15:24:051
基因敲减与基因敲除有什么区别
应该说基因敲除是基因干扰的个手段，主要指将目标基因沉默的现象，但是基因干扰主要是医学领域的名词。2023-06-30 15:24:291
基因敲除技术的原理是什么？
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。2023-06-30 15:24:391
动物nrf2基因敲除后为什么还会表达
基因敲除动物模型怎么做利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。2023-06-30 15:24:481
相比于基因敲除，RNA干扰的优势在哪里？
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。2023-06-30 15:24:571
基因敲除后通过基因敲入能证明基因的功能吗
转基因动物(Transgenic animal) 指基因组中整合有外源基因, 并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离, 使基因能在种系遥远的机体间流动, 既可加快家畜品种的改良力度, 提高畜产品品质, 又可生产珍稀药用蛋白.基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。如果你对这个答案有什么疑问，请追问，另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！2023-06-30 15:25:192
为什么基因敲除会导致基因表达量下降
基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。2023-06-30 15:25:281
基因敲除，怎么做最简单？
通过同源重组使特定靶基因失活，以研究该基因的功能，称为基因敲除(gene knock-out)基因敲除的技术路线如下：（1）构建重组基因载体﹔（2）用电穿孔等方法把重组DNA转入受体细胞内﹔（3）用选择培养基筛选已击中的细胞﹔（4）分子生物学检测。据俺所知目前有RecA重组系统、Red重组系统1、RecA重组系统由RecA和RecBCD组成，必须以环形的质粒状态存在。2、Red同源重组系统由λ噬菌体exo、bet、gam三个基因组成,线性载体即可。目前用这种方法敲除大肠杆菌的已经非常成熟了。也有很多人用基因沉默来研究细菌（例如antisense RNA）2023-06-30 15:25:351
基因敲除的操作步骤
利用基因打靶技术产生转基因动物的程序一般为： 将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达。一般地，显微注射命中率较高，但技术难度较大，电穿孔命中率比显微注射低，但便于使用。用选择性培养基筛选已击中的细胞一般地，筛选使用正、负选择法，比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞，剩下的细胞为命中的细胞。由于用于TK筛选的Gancyclovir对小鼠的种系传递有影响，一般采用DTA(白喉毒素A亚基）进行阴性筛选。将筛选出来的靶细胞导入鼠的囊胚中，再将此囊胚植人假孕母鼠体内，使其发育成嵌合体小鼠。 通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学性状的改变，达到研究目的基因的目的。2023-06-30 15:25:441
降低体内某蛋白表达除基因敲除还有哪些方法
基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。2023-06-30 15:25:581