如何用oligo设计基因敲除的引物
第一步：新建序列（或者通过Open直接打开序列）第二步：确定你要设计引物的起始位点,双击下面的序列可以选中一段（暂时先不要管引物长度）第三步：选择作为上游引物Select->Forward Primer,然后你会发现下面的序列上有相关引物第四步：编辑引物,Edit->Forward Primer,可以在文本框中对引物进行添加或删除（在此步骤中加入酶切位点或/和保护碱基）,最下面是发夹结构情况,没有发夹结构最好,参与配对形成发夹结构的碱基对越少越好（此窗口还有Tm等信息）第五步：分析引物Analyze->Duplex Formation->Forward Primer是上游引物形成二聚体情况,不形成最好,参与配对形成二聚体的碱基对越少越好；Analyze->****->Forward Primer（Analyze菜单中有很多可以对引物进行评估的功能,根据菜单名字便可知道）第六步：设计下游引物（同上游引物设计）第七步：将设计好的引物进行检查是否移码等等,然后从中Ctrl+C复制出来,
如何用oligo设计基因敲除的引物
第一步：新建序列（或者通过Open直接打开序列）第二步：确定你要设计引物的起始位点,双击下面的序列可以选中一段（暂时先不要管引物长度）第三步：选择作为上游引物Select->Forward Primer,然后你会发现下面的序列上有相关引物第四步：编辑引物,Edit->Forward Primer,可以在文本框中对引物进行添加或删除（在此步骤中加入酶切位点或/和保护碱基）,最下面是发夹结构情况,没有发夹结构最好,参与配对形成发夹结构的碱基对越少越好（此窗口还有Tm等信息）第五步：分析引物Analyze->Duplex Formation->Forward Primer是上游引物形成二聚体情况,不形成最好,参与配对形成二聚体的碱基对越少越好；Analyze->****->Forward Primer（Analyze菜单中有很多可以对引物进行评估的功能,根据菜单名字便可知道）第六步：设计下游引物（同上游引物设计）第七步：将设计好的引物进行检查是否移码等等,然后从中Ctrl+C复制出来,
基因敲除实现造血干细胞稳定重建
近日，解放军总医院第五医学中心造血干细胞移植科与北京大学、北京友安医院合作，艾滋病白血病患者基因编辑成人造血干细胞移植研究取得重要进展：建立了ccr5基因编辑技术体系，实现了基因编辑后的成人造血干细胞移植。人体造血干细胞长期稳定的造血系统重建为后续基因编辑治疗的安全性和有效性奠定了基础。相关研究成果最近发表在《国际医学杂志》、《新英格兰医学杂志》上。 2007年，柏林白血病患者接受了CCR5-DELTA32突变的造血干细胞移植，血清中的HIV病毒得到有效清除，实现了艾滋病的“功能治愈”。 解放军总医院第五医学中心陈虎、胡良奈、张斌等专家团队与北京大学密切合作，共同开发了crispr基因编辑造血干细胞技术。在前期实验研究的基础上，他们选择了一名艾滋病白血病患者，在中华骨髓库中找到了合适的健康供体。在体外使用crispr技术后，他们将正常临牀供体造血干细胞中的ccr5基因敲除。在造血干细胞移植科胡良甲教授的共同努力下，他们实现了临牀供体造血干细胞ccr5基因的敲除。从基因编辑供体获得的cd34+成人造血干细胞成功移植到患者体内。移植后4周患者病情完全缓解，供者型细胞嵌合率达100%。经过19个月的随访，患者的白血病处于持续完全缓解状态。病人的造血系统恢复了。经基因编辑的成体造血干细胞能在人体内长期稳定存在，无靶向丢失等副作用。 专家指出，本研究将进一步提高基因编辑效率或优化移植方案，有望加速基因编辑造血干细胞移植技术向临牀疾病治疗的转化。
基因敲除后是回复实验还是恢复实验
所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，通过致病力筛选，做了会更好，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉、胞外多糖分泌测定、比对获得全基因之后。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大、致病性测定等等，所谓的敲除不外乎有三种情况，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系。通过敲除来研究基因的功能，现在正在构建互补载体；2）抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后：1）单交换插入抗性基因使原基因失活、Tail-PCR获得侧翼序列、生长曲线
为什么要基因敲除,而不是直接用限制酶切掉基因呢？保证染色体结构吗？
1、敲除基因一般都是做的同框缺失，即保证整个序列不会出现移码突变，敲除掉的通常是从起始密码子开始三个三个的敲掉，这样的话被敲掉的基因不能正常表达了，但是不会影响后面无关基因的表达。2.同源重组是发生在同源序列上的，一般能够发生同源重组的载体都带有同基因序列同源的序列，这样这两段序列在体内就会结合在一起，从而有很高的几率发生交换从而重组。具体说的话就很长了，可以去找一本分子生物学方面的书，会讲得很详细的，有图看，会很好理解~~~祝早点解决疑惑哈~o(∩_∩)o ~~
pbt2质粒基因敲除原理
.实现基因敲除的多种原理1利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA 同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，**证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson**建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型[1]。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中*普遍的使用方法。
基因敲除技术的原理是什么？
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
基因敲除和基因干扰有什么区别？
基因敲除包括的面比较广，从DNA到RNA都有涉及，也就是说基因敲除包括DNA碱基对的替换和修饰，而基因干扰仅仅是在翻译水平上阻止RNA的翻译，降解特定的信使，对基因本身没有什么影响！
为什么基因敲除会导致基因表达量下降
基因敲除，顾名思义就是把基因移除，一个细胞里面，这个基因都没有了，当然是不能能表达这个基因多代表的蛋白。当然，每一个基因有许多个转录本，有的时候我们以为敲除了这个基因，但其实只是打靶到了这个基因的某个/些转录本，并没有打靶全部转录本。这样的话，有可能会出现基因还有表达的情况出现。这种情况下，可以使用红棉系统设计自己感兴趣的基因的敲除方案，红棉会把上述情况考虑进去的。
基因敲除技术怎麽回事？原理、应用？
简单的说，就是把特定的一个基因从基因组中去掉（knockout），然后看看有什么反应。如果出现了异常，说明敲掉的这个基因有相关的功能。敲掉的方法现在比较多，一般是通过同源重组，也有用RNA干扰之类。技术上面比较麻烦，做起来难度不小。应用目前基本上还仅仅局限在研究方面，从分子水平研究基因的功能。参考文献可以看看：http://www.cnpkm.com/web/user_info/hongdy/20060920181924512.dochttp://www.kpzs.net/rural/161/200612/38240.htmlhttp://www.gzkj.gov.cn/kjxcd/newsDetail.jsp?infoId=70475&clId=245&page=1&type=70
细胞基因敲除需要考虑等位基因吗
当然需要，基因敲除最理想的情况是这个基因完全不表达。所以做gRNA载体之前，最好验证一下自己靶位点的正确性，再根据靶位点的突变情况修改gRNA。靶位点验证是CRISPR-U预实验环节最基本的步骤。
基因敲除和基因干扰有什么区别
基因敲除和基因干扰的区别在于，基因敲除是根据需求敲除某个基因，而基因干扰是对这个基因进行干扰操作。基因敲除和基因嵌入技术是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。有基因敲除需要的可以联系苏州赛业。赛业生物已服务全球数万名科学家，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的学术论文。除了提供基因敲除、基因敲入、条件性基因敲除模型定制服务外，赛业生物还有专业的手术疾病模型团队，可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型；药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠；国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务，结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台，还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。
基因插入与基因敲除一样吗
不一样。基因插入（gene insertion）是指在一段DNA序列中插入一个或数个基因，通常插入位点的序列信息被干扰。而基因敲除（gene knock-out）则通常是用DNA重组互换的方法把目标序列上的某个或几个基因置换掉（即敲除掉）
基因敲除和 转染 是一个意思吗
这两个概念不仅不同，甚至有些相反。 基因敲除是指将某个基因从基因组中去掉。基因转染是指将某个基因转入细胞的过程，常用的技术有电转、磷酸钙转染、脂质体转染和病毒载体介导的转染。 从技术上讲，基因敲除是一套复杂的过程，需要用到许多生物技术，耗时长，通常要数月时间。转染就简单很多，只需要一到数天时间。
请问，什么是基因敲除小鼠？
基因敲除小鼠就是先在小鼠的胚胎干细胞上通过基因重组的办法进行基因修饰，是特定基因表达缺失。集萃药康专业定制基因敲除模型，品系资源丰富，可以百度了解的。
基因敲除和基因修饰的区别
基因敲除是指在基因组上把目的基因剔除使其不能正常工作，而基因修饰包括基因敲除、基因敲入、基因过表达。
基因表达量多少克视为基因敲除成功
24 基因敲除科学家运用基因工程删除了猪细胞中的对人产生排斥的基因,培育成可以用于人类进行器官如心脏移植的“基因敲除猪”.从变异角度来看,这种变异是x0dA、基因重组 B、染色体变异 C、基因突变 D、不遗传变异x0d25、科学家用纳米技术制造出一种“生物导弹”,可以携带DNA分子.把它注射入组织中,可以通过细胞的内吞作用的方式进入细胞内,DNA被释放出来,进入到细胞核内,最终整合到细胞染色体中,成为细胞基因组的一部分,DNA整合到细胞染色体中的过程,属于x0dA．基因突变 B．基因重组 C．基因互换 D．染色体变异
基因敲除和 转染 是一个意思吗
这两个概念不仅不同,甚至有些相反. 基因敲除是指将某个基因从基因组中去掉.基因转染是指将某个基因转入细胞的过程,常用的技术有电转、磷酸钙转染、脂质体转染和病毒载体介导的转染. 从技术上讲,基因敲除是...
基因敲除属于基因工程吗
24 基因敲除科学家运用基因工程删除了猪细胞中的对人产生排斥的基因，培育成可以用于人类进行器官如心脏移植的“基因敲除猪”。从变异角度来看，这种变异是 A、基因重组 B、染色体变异 C、基因突变 D、不遗传变异 25、科学家用纳米技术制造出一种“生物导弹”，可以携带DNA分子。把它注射入组织中，可以通过细胞的内吞作用的方式进入细胞内，DNA被释放出来，进入到细胞核内，最终整合到细胞染色体中，成为细胞基因组的一部分，DNA整合到细胞染色体中的过程，属于 A．基因突变 B．基因重组 C．基因互换 D．染色体变异
基因敲除与转基因的区别是什么
前者是将原有的基因去掉某一个或几个，后者是增加一个或多个原来没有的基因，这两种都是基因工程常用的方法
关于“基因敲除”的原理和本质？
我也不是很肯定，试着回答一下：A百度百科上关于基因敲除有如下话：基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。就此定义，A恰当一些。染色体变异：强调整个染色体的变化，其效果多用光镜就可以观察出来的，包括缺失，易位等，而题干中所谓敲除是基因水平的，排除；基因突变：由于核酸序列发生变化，包括缺失突变、定点突变、移框突变等，敲除应当是说往基因中加入另一段核苷酸序列，不是原核苷酸本身的改变，不太合适；不可遗传变异，直接排除，否则那些在研究所里一个一个敲基因的生物学家们就该哭了。综上，我认为选A。
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 1
这里我们先前已经完成： CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计 1.输入目标基因组DNA序列 我们提供在线CRISPR设计工具( http://tools.genome-engineering.org ) 可以输入序列（例如，来自目的区域的一个1KB基因片段），识别和排列合适的靶位点，计算预测每个指定靶标的off-target位点。或者，可以通过确认任何5"-NGG直接上游的20-bp序列手动选择引导序列。 2.用在线工具确定，订购需要的oligos和引物。如果手动确定分裂位点，oligos或引物应该按照fig4b.c设计 设计ssODN模板（任选） 1 h 我们没有选这个方法--略 3.设计和订购定做的ssODN。 4.重新溶解和稀释ssODN ultramers到终浓度10uM。 5.为了构建sgRNA表达结构，使用PCR表达cassette（选项A）或 以质粒为基础的步骤（选项B） --我们选择了方案B （A）通过PCR扩增构建sgRNA表达结构 2 h--没选这个方案，略 （B）sgRNA cloning进入pSpCas9（BB）质粒，与Cas9共表达 3 d Pause point：此处理后，反应可以储存在-20℃至少1周 感谢师兄DZ
请教基因敲除小鼠的问题
你这里遇到的是做组织特异性敲除小鼠。GGT是gamma glutamyl transpeptidase 即γ-谷氨酰转肽酶 ，这是一种只在肾脏近端小管(Proximal tubule)的上皮细胞中表达的酶，GGT-cre则表示在cre基因之前加上GGT的启动子，具有这种cre的小鼠只会在肾脏中表达cre。当带有这种cre基因的小鼠同时带有loxp位点（即/floxp/GGT-cre）时，该loxp位点中间的碱基序列就会特异性的在肾脏近端小管上皮细胞中被敲除，而其他组织器官不受到直接的影响。所以，UNC5B(-/flox) 表是在UNC5B基因中带有loxp位点的小鼠，可以把它当做基因敲除小鼠的对照组用，和野生型小鼠没有区别，而UNC5B(-/flox/GGT-cre) 则表示在肾脏近端小管上皮细胞中特性性敲除UNC5B基因的小鼠。
做微生物的基因敲除大概一个基因要多久
这个应该是没有一个标准时间的，取决于基因的位置，敲除的工具、熟练度等很多方面的问题吧。况且还有细胞培养的时间。基因敲除和基因嵌入技术是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。所谓胚胎干细胞(EmbryonicStem cell，ES)是从着床前胚胎(孕3—5天)分离出的内细胞团(Inner cellmass，ICM)细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化潜能，能在体外培养并保留发育的全能性。在体外进行遗传操作后，将它重新植回小鼠胚胎，它能发育成胚胎的各种组织。而基因同源重组是指当外源DNA片段大且与宿主基因片段同源性强者并互补结合时，结合区的任何部分都有与宿主的相应片段发生交换(即重组)的可能，这种重组称为同源重组。 爱莫能助......
基因敲除算不算转基因？
基因敲除是基因工程中常用的方法：基因敲除是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。它与普通的转基因技术还是有区别的：基因敲除是将原有的基因去掉某一个或几个，转基因是增加一个或多个原来没有的基因。二者的共同点是：都是基因工程中常用的方法。
CRISPR/Cas9基因敲除，敲入怎么做，原理
1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
怎样选择真菌基因敲除载体
1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
国内能做基因敲除小鼠的公司有哪些比较好的？
在国内能做基因敲除鼠的公司中，赛野生物是最好的一家。基因敲除(Gene knockout)是通过同源重组将外源基因整合到靶细胞基因组上的某一位点，从而达到修饰染色体上某一位点基因的目的的技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是修饰和改造生物遗传物质的理想方法。赛叶生物已服务全球数万名科学家，其产品和技术已直接应用于包括CNS(Cell，Nature，Science)在内的学术论文。赛野生物除了提供基因敲除、基因敲除、条件基因敲除模型的定制服务外，还拥有专业的外科疾病模型团队，可以为小动物提供多种复杂精细的外科疾病模型；药物筛选与评价小鼠平台可以提供从欧美行业领先企业进口的免疫缺陷小鼠和用于心血管和阿尔茨海默病研究的人源化小鼠。国际标准化无菌小鼠技术平台可提供基于无菌动物模型的各类产品和服务，如无菌小鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等。结合赛野生物成熟稳定的基因编辑鼠平台，还可以帮助你研究菌群与基因的相互作用机制。基因敲除的门槛低，转基因动物的自我准备相当耗时。一般可以在实验前查阅相关文献，看看有没有研究人员建立了你需要的品系动物，可以直接向对方求助。一般nice的研究人员都会和你分享。毕竟，北京柯睿生物技术有限公司是一个有技术保证的专家团队。国内能做敲除鼠的公司的楼主可以看看文献，里面都是成功的故事吧？肯定更好。
crispr cas9基因敲除原理是什么？
基本原理：CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR簇的启动子序列。重复序列区长度为21～48bp，含有回文序列，可形成发卡结构。基因编辑技术形式有：1、同源重组同源重组（Homologous recombination）是最早用来编辑细胞基因组的技术方法。同源重组是在DNA的两条相似（同源）链之间遗传信息的交换（重组）。2、核酸酶基因编辑的关键是在基因组内特定位点创建DSB。常用的限制酶在切割DNA方面是有效的，但它们通常在多个位点进行识别和切割，特异性较差。为了克服这一问题并创建特定位点的DSB。
请问基因敲除技术的应用及前景如何？
基因敲除技术的应用及前景：①．建立生物模型。在基因功能，代谢途径等研究中模型生物的建立非常重要。基因敲除技术就常常用于建立某种特定基因缺失的生物模型，从而进行相关的研究。这些模型可以是细胞，也可以是完整的动植物或微生物个体。最常见的是小鼠，家兔、猪、线虫、酵母和拟南芥等的基因敲除模型也常见于报道。②.疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗。通过基因敲除技术可以确定特定基因的性质以及研究它对机体的影响。这无论是对了解疾病的根源或者是寻找基因治疗的靶目标都有重大的意义。③. 提供廉价的异种移植器官。众所周知，器官来源稀少往往是人体器官移植的一大制约因素，而大量廉价的异种生物如猪等的器官却不能用于人体。这是因为异源生物的基因会产生一些能引起人体强烈免疫排斥的异源分子，如果能将产生这些异源分子的基因敲除，那么动物的器官将能用于人体的疾病治疗，这将为患者带来具大的福音。如：PPL Therapeutics 公司于1999 年已成功地在猪的体细胞中用基因敲除技术敲除了α－1，3GT 基因。使每只猪都缺乏产生a１－３半乳糖基转移酶的基因的２个拷贝。这些酶在细胞表面产生一种糖分子，人体的免疫系统可以立即辨认出这种糖分子为异源性，从而引发超急性免疫排斥反应。在缺乏这种酶的情况下，超急性排斥反应即不会再发生。④. 免疫学中的应用。同异源器官移植相似，异源的抗体用于人体时或多或少会有一定的免疫排斥，使得人用抗体类药物的生产和应用受阻。而如果将动物免疫分子基因敲除，换以人的相应基因，那么将产生人的抗体，从而解决人源抗体的生产问题。⑤改造生物、培育新的生物品种。细菌的基因工程技术是本世纪分子生物学史上的一个重大突破，而基因敲除技术则可能是遗传工程中的另一重大飞跃。它为定向改造生物，培育新型生物提供了重要的技术支持。…………更多内容参见on http://doc.bio1000.com/list-12.html 基因技术,Southern Blotting,DNA甲基化,基因组学,DNA技术,基因克隆,DNA测序
降低体内某蛋白表达除基因敲除还有哪些方法
基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。
哪位知道基因敲除的具体步骤？
ES细胞的获得 现在基因敲除一般应用于鼠，而最常用的鼠的种系是129及其杂合体，因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物。而其他遗传背景的胚胎干细胞系逐渐被发展应用，最近来自于C57BL/6×CBN/JNCrjF1小鼠的胚胎干细胞系成功地用于基因敲除。c57BL/6小鼠种系等已经广泛的应用于免疫学领域，并以此为背景建立了许多成功的转基因模型。基因载体的构建 把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA分子都重组到带有标记基因(如neo基因，TK基因等)的载体上，此重组载体即为打靶载体。因基因打靶的目的不同，此载体有不同的设计方法，可分为替换性载体和插入型载体。如为了把某一外源基因引入染色体DNA的某一位点上，这种情况下应设计的插入型载体要包括外源基因(即目的基因)、同源基因片段及标记基因等部分。如为了使某一基因失去其生理功能，这时所要设计的替换型打靶载体，应包括含有此靶基因的启动子及第一外显子的DNA片段及标记基因等诸成分。目的基因导入 将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达。一般地，显微注射命中率较高，但技术难度较大，电穿孔命中率比显微注射低，但便于使用。用选择性培养基筛选已击中的细胞 一般地，筛选使用正、负选择法，比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞，剩下的细胞为命中的细胞。将筛选出来的靶细胞导入鼠的囊胚中，再将此囊胚植人假孕母鼠体内，使其发育成嵌合体小鼠。观察生物学性状的改变 通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学性状的改变，达到研究目的基因的目的。
基因敲除，怎么做最简单？
通过同源重组使特定靶基因失活，以研究该基因的功能，称为基因敲除(gene knock-out)基因敲除的技术路线如下：（1）构建重组基因载体﹔（2）用电穿孔等方法把重组DNA转入受体细胞内﹔（3）用选择培养基筛选已击中的细胞﹔（4）分子生物学检测。据俺所知目前有RecA重组系统、Red重组系统1、RecA重组系统由RecA和RecBCD组成，必须以环形的质粒状态存在。2、Red同源重组系统由λ噬菌体exo、bet、gam三个基因组成,线性载体即可。目前用这种方法敲除大肠杆菌的已经非常成熟了。也有很多人用基因沉默来研究细菌（例如antisense RNA）
基因敲除的操作步骤
利用基因打靶技术产生转基因动物的程序一般为： 将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达。一般地，显微注射命中率较高，但技术难度较大，电穿孔命中率比显微注射低，但便于使用。用选择性培养基筛选已击中的细胞一般地，筛选使用正、负选择法，比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞，剩下的细胞为命中的细胞。由于用于TK筛选的Gancyclovir对小鼠的种系传递有影响，一般采用DTA(白喉毒素A亚基）进行阴性筛选。将筛选出来的靶细胞导入鼠的囊胚中，再将此囊胚植人假孕母鼠体内，使其发育成嵌合体小鼠。 通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学性状的改变，达到研究目的基因的目的。
基因敲除后通过基因敲入能证明基因的功能吗
转基因动物(Transgenic animal) 指基因组中整合有外源基因, 并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离, 使基因能在种系遥远的机体间流动, 既可加快家畜品种的改良力度, 提高畜产品品质, 又可生产珍稀药用蛋白.基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。如果你对这个答案有什么疑问，请追问，另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！
为什么基因敲除会导致基因表达量下降
基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。
动物nrf2基因敲除后为什么还会表达
基因敲除动物模型怎么做利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
相比于基因敲除，RNA干扰的优势在哪里？
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。
基因敲减与基因敲除有什么区别
应该说基因敲除是基因干扰的个手段，主要指将目标基因沉默的现象，但是基因干扰主要是医学领域的名词。
基因敲除技术的原理是什么？
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
基因敲除细胞怎么表示p53
基因敲除细胞怎么表示p53基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。
基因敲除都需要做什么，具体内容步骤？
说到基因敲除，先要了解CRISPR/Cas基因编辑系统CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。CRISPR/Cas9基因编辑示意图(图源：Wellcome Trust Sanger Institute,Sanger)然后我们再来看CRISPR/Cas基因敲除CRISPR/Cas9系统中sgRNA(smallguideRNA)识别并结合目标基因的靶向序列，引导Cas9对结合位点进行剪切，产生DNA双链断裂（double-strandbreak,DSB），机体自身通过非同源重组（non-homologousendjoining，NHEJ）的方式修复DSB，参与修复的蛋白经常会在DNA末端插入或删除几个碱基，修复后的基因由于产生突变而导致功能丧失，从而实现机体内的基因敲除。最后再来看看如何应用应用：基因敲除细胞系建立、基因敲除建立动物疾病模型。技术优势：相较于在mRNA水平“敲低”目的基因的RNAi而言，CRISPR/Cas9系统造成基因序列的缺失，从而能完全沉默（即敲除）目的基因。如果您正在研究或者学习神经科学，生物病毒，基因治疗等方向，或是正在使用各类工具病毒做科研实验，可以百度搜索布林凯斯braincase，官网上有更详细的案例分析和专业解读哦~
当前流行的基因敲除技术有哪些
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。 随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 1、利用基因同源重组进行基因 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。 2、诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。
基因敲除的意义是什么？
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程基因修饰技术，针对某个感兴趣的遗传基因，通过一定的基因改造过程，令特定的基因功能丧失，并研究可能进一步对相关生命现象造成的影响，进而推测该基因的生物学功能。主要是研究这个基因的功能的，我就做这个，敲除的是细菌的基因，有需要的话可以交流交流
基因敲除的技术应用
基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。近年来，牛、羊、猪、猴等大型哺乳动物实现了基因敲除。但由于狗的生殖生理较为特殊，基因敲除狗的培育难度大为增加，狗基因组的定点修饰一直未获成功。针对这一问题，研究团队设计了一个自体移植的策略，克服了供体胚胎与受体雌犬的生殖周期不同步的难题，大幅提高妊娠率，基因打靶狗得以诞生。2015年10月，中国科学院广州生物医药与健康研究院联合南京大学南京生物医药研究院、广州医药研究总院等科研单位共同培育的两只基因敲除狗比格犬“大力神”和“天狗”远比同龄小狗显得强壮矫健，它们是世界上首例基因敲除狗。被敲除了肌肉生长抑制素基因后，它们的肌肉生长发育能力增强，4个月时就比普通狗更为肌肉发达，成年后具有更强的运动能力。狗在营养代谢、生理解剖等方面与人类极其相似，是研究人体生理和疾病发生机理的理想实验动物。基因敲除狗的培育将为人类疾病治疗和药物研发提供新的实验动物模型，也将加速培育更多含优良遗传性状的新品系狗。
基因敲除小鼠的原理和方法
1.利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
当前流行的基因敲除技术有哪些
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。 随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 1、利用基因同源重组进行基因 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。 2、诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。
实验室做基因敲除一般用什么方法
实验室做基因敲除一般用什么方法本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，厚百上的好多试剂盒都可以做好几个点的突变！厚百提供试剂、耗材等全面实验室用品及实验技术服务，科研整体服务。基因敲除是将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。
什么是完全基因敲除和条件型基因敲除
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。
高中生物基因敲除
基因敲除 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。 基因敲除技术的缺陷 随着基因敲除技术的发展，早期技术中的许多不足和缺陷都已经解决，但基因敲除技术始终存在着一个难以克服的缺点，即敲掉一个基因并不一定就能获知该基因的功能，其原因包括：一方面，许多基因在功能上是冗余的， 敲掉一个在功能上冗余的基因，并不能造成容易识别的表型，因为基因家族的其他成员可以提供同样的功能；另一方面，对于某些必需基因，敲除后会造成细胞的致死性，也就无法对这些必需基因进行相应的研究了。 天性遗传病经过基因敲除后到下一代还会不会遗传，这个不确定。
什么是完全基因敲除和条件性基因敲除
基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT 系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版） 高等教育出版社
crispr cas9基因敲除原理是什么？
基本原理：CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR簇的启动子序列。重复序列区长度为21～48bp，含有回文序列，可形成发卡结构。基因编辑技术形式有：1、同源重组同源重组（Homologous recombination）是最早用来编辑细胞基因组的技术方法。同源重组是在DNA的两条相似（同源）链之间遗传信息的交换（重组）。2、核酸酶基因编辑的关键是在基因组内特定位点创建DSB。常用的限制酶在切割DNA方面是有效的，但它们通常在多个位点进行识别和切割，特异性较差。为了克服这一问题并创建特定位点的DSB。
基因敲除是怎样的？
基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。
集萃药康基因敲除小鼠多少钱一只？
基因敲除小鼠因为制作成本以及制作周期相对较长等原因，价格是比较高的。集萃药康为了加速基因敲除小鼠资源库构建，开展斑点鼠计划（Knock-out All Project，KOAP），在百度了解到现已获得接近22000品系资源，涵盖肿瘤、免疫、代谢、发育、感染等多个方向。为更好助力科学研究及生物医药发展，集萃药康斑点鼠价格大幅下调，KO小鼠一万元起，CKO小鼠2万元起，到手三只小鼠。
何谓基因敲除有什么作用
通过基因敲除可以研究特定基因的作用，敲除一个基因，看一下动物或细胞的表型变化，由此可以推测它的功能。
求助组织特异性基因敲除等几个问题
一般只要敲除编码区一小段（1/3-1/4基因全长）就可以达到目的,但是你干吗不全敲除了呢?留下那么一小段还会翻译出无活性蛋白片断或者副作用的什么产物,还浪fei细胞资源.启动子区域能不能被敲除要看这个基因是不是单独享用的这个启动子,一般在原核细胞是操纵子（多基因共用一个启动子）,那可是万万不能敲除的哦.道理你应该明白.
基因敲除片段要多大
同源臂长500~1000之间比较合适可以尝试overlapping
国内基因敲除小鼠公司都有哪些？
国内做基因敲除的公司有江苏集萃药康、上海南模生物还有赛业等等。集萃药康他们的斑点鼠计划就是专门做KO/CKO小鼠，品系资源非常多，可以在百度找他们的官网咨询了解！可以在他们的网站上检索。
基因敲除小鼠PCR鉴定的结果分析……求助攻……
你这个，有几个样品没有P出来，需要重新做，你可以调整一下PCR的反应体系，反应条件，改善一下模板质量，看能不能P出来。P出来的这些结果很明显的啊，两条带的是杂合体，一条带的是纯合体，看你引物设计时候的情况是怎么样的了，一般情况下，只有一条小的条带的是敲除的纯合体，只有一条大的条带的就是野生型的了。纯合体可以留下来保种或者拿去做实验，杂合体看情况，有需要的话就留着。
CRISPRCas9基因敲除需要加入donor DNA吗？
如果是细胞系做knockout的话，不需要加入donor，做Knockin或者mutation就需要；如果是菌的基因编辑，一般都是需要加donor。
基因敲除，互补，功能研究等实验怎么做
基因敲除，互补，功能研究等实验怎么做做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。
基因敲除是在Dna分子的一条链上进行的吗？
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响
基因敲除后通过基因敲入能证明基因的功能吗
转基因动物(Transgenicanimal)指基因组中整合有外源基因,并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离,使基因能在种系遥远的机体间流动,既可加快家畜品种的改良力度,提高畜产品品质,又可生产珍稀药用蛋白.基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。如果你对这个答案有什么疑问，请追问，另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！
细菌基因敲除，只要敲除编码区中少数几个，还是把整个编码区都敲除？或者连启动子区域也敲除？
一般只要敲除编码区一小段（1/3-1/4基因全长）就可以达到目的，但是你干吗不全敲除了呢？留下那么一小段还会翻译出无活性蛋白片断或者副作用的什么产物，还浪fei细胞资源。启动子区域 能不能被敲除 要看这个基因是不是单独享用的这个启动子，一般在原核细胞是操纵子（多基因共用一个启动子），那可是万万不能敲除的哦。。。。道理你应该明白。
以cre-loxp系统为例简述什么是条件性基因敲除
基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版）高等教育
如何让基因敲除
和RNA干扰技术，事实上基因敲除的一些原理也应用了RNA干扰技术具体的给你复制过来一点，有个大概，其余靠自己百度搜索好了基因敲除：是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。RNA干扰是与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。
转基因技术和基因敲除技术的主要区别有哪些
转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgenic technology）。人们常说的"遗传工程"、"基因工程"、"遗传转化"均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为"遗传修饰过的生物体"（Genetically modified organism，简称GMO）。Genetically Modified--转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。所谓胚胎干细胞(EmbryonicStem cell，ES)是从着床前胚胎(孕3-5天)分离出的内细胞团(Inner cellmass，ICM)细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化潜能，能在体外培养并保留发育的全能性。在体外进行遗传操作后，将它重新植回小鼠胚胎，它能发育成胚胎的各种组织。而基因同源重组是指当外源DNA片段大且与宿主基因片段同源性强者并互补结合时，结合区的任何部分都有与宿主的相应片段发生交换(即重组)的可能，这种重组称为同源重组。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因靶位时间和空间上的操作更加明确、效果更加精确、可靠，它的发展将为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段，具有广泛的应用前景和商业价值。现在基因敲除技术主要应用于动物模型的建立，而最成熟的实验动物是小鼠，对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。
基因敲除的介绍
基因敲除（knockout）是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。
基因删除是什么,和基因敲除有什么分别
基因敲除是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因目的的一种技术. 基因敲除就是重组 是基因的替换过程.如果象你说的只是删除了 那就是染色体变异了
基因敲除，rna干扰，基因沉默有什么关系
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。
基因敲除的意义是什么?
基因敲除(knockout)是指一种遗传工程基因修饰技术,针对某个感兴趣的遗传基因,通过一定的基因改造过程,令特定的基因功能丧失,并研究可能进一步对相关生命现象造成的影响,进而推测该基因的生物学功能. 主要是研究这个基因的功能的,我就做这个,敲除的是细菌的基因,有需要的话可以交流交流
同源重组的基因敲除
基因敲除（geneknockout），是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。基因敲除除可中止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。此后的几年中，基因敲除技术得到了进一步的发展和完善。基因敲除的技术路线如下：（1）构建重组基因载体﹔（2）用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔（3）用选择培养基筛选已击中的细胞﹔（4）将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物，对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞。基因敲除的技术路线虽不复杂，但由于高等真核细胞内外源DNA与靶细胞DNA序列自然发生同源重组的机率非常低，约为百万分之一，要把基因敲除成功的细胞筛选出来是一件非常困难的工作。因此，同源重组的筛选和检测就成了基因敲除技术所要解决的关键问题。目前已有多种筛选方法，其中1988年犹它大学的Capecchi教授的研究组发展的正负双向选择系统适用范围宽且效率较高。
基因敲除是怎么回事？
将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术。去除原核生物细胞、真核生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。广义的基因敲除包括某个或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因调控序列的敲除以及成段基因组序列的敲除。常用同源重组的方法。敲除的基因用以观察生物或细胞的表型变化，是研究基因功能的重要手段。 来源：http://baike.baidu.com/view/5933.htm
基因敲除gene knockout
简称KO，是一种生物体的其中部分基因不起作用的技术。也叫做敲除生物体或者仅仅劣汰。它们用于学习已知序列，不知功能的基因，调查基因缺失的影响。研究人员对敲除生物体和正常生物的不同得出结论。 方法 基因敲除融合各种技术。最初，源自自然界发生突变。之后，基因敲除或者失活通过DNA序列或者其他方法建立。KO直接的创造源自质粒，一种细菌的人造的染色体或者其他DNA序列，继续复制细胞培养。单个细胞基因上DNA结构被转染。通常目标是创造一种有可替代基因的转基因动物。这样做胚胎干细胞基因上变形并植入早期胚胎。造成动物在其胚胎基因的改变，也传递敲除的基因给子代。 为了创造敲除基因的苔藓，原生质体的转染是一种优选的方法。这种变形的苔藓原生质体直接再生成肥沃的苔藓植物。转染8周后，可以通过PCR扫描植物的基因靶点。 结构设计来重组目标基因，这是通过来自基因本身不合适的序列移植入宿主来实现的。然后重组发生在基因序列的一段区域里，造成外来序列的插入，破坏了基因。当序列被打断时，在大多苔藓中的替代基因将会被植入非功能区，如果被移植后。有条件的基因敲除使一种组织或者时间以特定的方式删除基因。这是通过引入基因周围的称作loxP的一段短序列实现的。这些序列将会通过相同的叫做基因敲除的机制引入胚系。这种胚系之后与另一种胚系杂交形成了移植物，这是病毒的酶识别了序列并重组了它们，删除了被这些序列夹击的基因。 因为基因重组的目标类型在大多数细胞和结构里是罕见的事件，目标的外来序列通常包括报告基因插入。这使在细胞和个体中成功的敲除变得简单。有时DNA结构植入染色体没有预期的与目的基因同源的重组。为了消除这种细胞，DNA结构通常包括DNA的第二序列来识别和消除这种细胞。 在二倍体组织中，大多数基因都包括两个等位基因，可能还包括几个相关的基因以同样的方式合作，当每种目标基因被敲除时，会发生几轮额外的转染和选择。选择的品种可能用来产生纯合子敲除动物。
基因敲除技术（gene knockout）
随着真菌基因组测序工作进度的不断推进，基因功能正成为真菌研究的重点之一。基因敲除技术，即是可以针对一个 DNA 碱基序列已知但功能未知的基因，通过抑制该基因的表达，分析突变体表型变化后来确定该基因的功能。通常意义上的基因敲除就是利用同源重组技术，将构建完成的基因敲除载体导入到受体细胞中，载体上碱基序列因为和受体细胞内目的基因 DNA 碱基序列同源而重组，将载体 DNA 定向整合到受体细胞基因组上某一个确定的位点处，从而来分析该基因的功能。 Ref： <基因敲除技术的应用现状与发展前景>
基因删除是什么，和基因敲除有什么分别
基因删除是什么，和基因敲除有什么分别基因敲除：又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。条件型基因敲除：例：Cre/LoxP和FLP/FRT 系统所开展的组织特异性敲除。优点：可以防止完全基因敲除导致胚胎死亡。来源：现代分子生物学（第三版） 高等教育出版社
什么是基因敲除？
就是利用一段与靶基因序列相似或相同的外源DNA片段，使该片段与靶基因发生重组，把靶基因从染色体上替换下来，从而使靶基因失活。
做基因敲除细胞株，怎么计算敲除效率
将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术.课题设计.获得F1代小鼠.利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；7、EGE技术（基于Crisprcas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术；4;Cas9mRNA；5；2，利用PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定.得到嵌合鼠.小鼠受精卵原核注射sgRNA/.按照课题设计，完成打靶载体设计和构建;2，基因敲除/，用G418筛选转染后的胚胎干细胞.体外转录sgRNA/。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，得到阳性克隆;敲入效率高，速度快;敲入，可实现多基因，最快2个月即可得到F0代阳性鼠.进一步通过PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，在生命科学;6.设计构建打靶载体；3.获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；3.设计构建识别靶序列的sgRNA，其实不然；4、利用EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠的流程1，5个月得到F1F1代杂合子小鼠、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用、基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程.将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中。基于胚胎干细胞的基因打靶技术？一，并获得F1阳性杂合子小鼠，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆，EGE技术（基于Crisprcas9技术）系统构建简单：1；5。虽然EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，而且其周期长工作量大，订购课题BAC菌.设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；8;Cas9mRNA和打靶载体，并植入到假孕小鼠的子宫内；6。二、多物种基因敲除/
基因敲除小鼠制备的流程
基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术（基于Crispr cas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的？一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程：1. 课题设计，订购课题BAC菌；2. 按照课题设计，完成打靶载体设计和构建；3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆；4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆；5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内；6. 得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。二、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠的流程1. 设计构建识别靶序列的sgRNA;2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；4. 设计构建打靶载体；5. 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA;6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体；7. 获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；8. 获得F1代小鼠，利用PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定。虽然EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，其实不然，EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单，基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，最快2个月即可得到F0代阳性鼠，5个月得到F1F1代杂合子小鼠。