一学生用蓝白斑做阳性克隆筛选，因为疏忽没有在选择性培养基中添加X-gal，结果长出的菌斑全为白色
1 不是。因为没有生色底物，阴性菌落虽然可以表达lacZ，但无法显色。2 全部转接至含X-gal的新鲜选择培养基上，培养后看是否为白色。要么以pcr法对所有菌落作鉴定。或者所有菌落转接至液体培养基扩增后抽质粒，看质粒大小。
效率很低或阳性克隆非常少，请问有哪些原因
可能感受态细胞转化效率太低，用质粒作为阳性对照检测感受态的转化效率；可以尝试提高载体或插入片段的纯度，对于平端连接需注意适当延长连接时间；可能载体酶切不够充分，用未经连接的载体转化作为阴性对照；连接体系不合适，如连接酶可能失活或活性下降，更换新的连接酶及Buffer；连接条件不合适，温度或反应时间不合理，请仔细参照连接酶的产品说明书。
克隆文库中，怎样检测阳性克隆子?
最常用的方法是在PCR之后 用Northern杂交的方式检测 这个效果很好的 当然了 如果实验室里面有专用的芯片就更好了
菌落阳性克隆pcr产物电泳条带在孔里，跑不下去是怎么回事
可能是因为你的DNA产物与酶进行结合了，导致堵在胶孔里跑不下来，你可以加一点SDS然后再跑胶图，就可以分开了，就不会堵在胶孔里了。
筛选完阳性克隆为什么要进行酶切鉴定
因为酶切鉴定比蓝白斑选择要可靠些，而且有好多质粒没有Lac-系统，此外蓝白斑不同的质粒显色效率也不一样。重组质粒也可采用PCR鉴定，最可靠的只直接测序。
基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
简单的说一下：扩增目的基因，比如通过PCR的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。
基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
简单的说一下：扩增目的基因，比如通过PCR的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPOTA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。
阳性克隆的介绍
含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子，如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子 。
筛选阳性克隆的方法和原理? 我需要至少两种方法和原理,两种.
最常见的就是蓝白斑筛选,详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm 方法很多,除蓝白斑筛选外,像 菌落PCR验证：详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm 从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切,电泳,观察条带是否和重组之前,目的基因电泳时条带所处的位置一致. 测序验证：送测序公司
筛选阳性克隆的方法和原理？
最常见的就是蓝白斑筛选，详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm方法很多，除蓝白斑筛选外，像菌落PCR验证：详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切，电泳，观察条带是否和重组之前，目的基因电泳时条带所处的位置一致。测序验证：送测序公司
双酶切鉴定阳性克隆时,选择两种内切酶的依据是？
:载体自身环化效率过高、琼脂平板上的抗生素失活或含量过低、载体 DNA 与插入片段 的分子比率过高
阳性克隆测序双峰是怎么回事
你用于克隆的插入片段如何得到？你挑选了几个单克隆用于测序？挑选克隆的时候，每个单克隆只代表所插入的那个片段，所以你选择的克隆可能不是你想要的那个
将得到的阳性克隆大量培养后提取质粒，然后以质粒为模板进行酶切，酶切产物为什么跑不出条带
你说跑出来不是想要的条带，可能是没有切开。另外，你给的信息太少了，不好分析。酶切后你跑出来了几条条带？单酶切还是双酶切？酶切后电泳时加原质粒对照了吗？最好发个电泳图给我，我再给你具体分析。
大肠杆菌GFP是什么菌?在实验室中如何筛选抗氨苄青霉素阳性克隆菌株?
GFP本身是绿色荧光蛋白(GreenFluorecentprotein)的缩写，至于你说的大肠杆菌GFP是个菌，要么是可以表达绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌，要么是你把蛋白和菌搞混了。筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单，将氨苄青霉素加到所用培养基中，终浓度100ug/ml，把要筛选的菌液涂布其上，能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株。要注意的是生长时间不可太长，因为水解氨苄青霉素的beta-内酰胺酶能分泌到细菌外，导致阳性菌周围的阴性菌也能生长，即所谓的卫星菌落。
目的基因与pBR322经BamH I酶切后进行重组如何筛选得到阳性克隆?
质粒载体pBR322具有两种抗生素抗性基因——氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，可供转化子的选择标记。把连接转化后的菌体培养物涂布在含有氨苄青霉素和四环素抗性的平板上倒置培养12～16h，长出来的单菌落进行PCR验证和酶切验证，验证为阳性的转化子再送去测序确认正确。为什么用单酶切呢？连反了多麻烦啊。
阳性克隆子扩繁的原理
实验原理。经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间通常说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。
琼脂糖凝胶电泳如何判别是阳性克隆?
1、琼脂糖凝胶电泳判别是阳性克隆琼脂糖凝胶电泳判别是阳性克隆根据重组子遗传重组表型改变的筛选法：利用抗生素抗性基因进行筛选，利用报告基因筛选克隆子，据重组子结构特征的筛选法，琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小。2、限制性内切酶分析。印迹杂交方法。PCR法。
阳性克隆的筛选实验目的
掌握碱裂解法提取技术。阳性克隆的筛选实验目的：通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术和克隆载体的筛选与鉴定方法，了解抗药性筛选互补筛选的原理。
大肠埃希菌转化实验中，出现假阳性克隆的原因可能是（）
大肠埃希菌转化实验中，出现假阳性克隆的原因可能是（） A.载体自身环化效率过高B.琼脂平板上的抗生素失活或含量过低C.载体DNA与插入片段的分子比率过高D.抗生素的浓度过高E.感受态细胞失活正确答案：ABC
基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
简单的说一下：1.扩增目的基因，比如通过PCR的方法。2.PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPOTA的方法插入到载体质粒。3.转染大肠杆菌4.筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。5.挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。
求助通用引物验证阳性克隆
做PCR都要考虑Tm值吧。M13引物一般是M13F,M13R；M13F(-47),M13R(-48)配对使用。如果做菌落PCR验证阳性克隆的话，如果只是把目的片段插入到多克隆位点处，这两对引物哪一对都可以的。如果是样品需要测序的话，由于接近引物的读出效果不好，如果克隆的位点接近CMS的两端，一般需要用M13F(-47),M13R(-48)来测序。
筛选阳性克隆的方法和原理？
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什么叫阳性克隆筛选法? 请打击帮帮忙!!
这是一种分子生物学的方法。比如，在大肠杆菌中导入一个目的基因，要怎样才知道有没有导入进去呢？所以要同时导入一个报告基因（目的基因和报告基因位于同一个载体上）。导入了报告基因的大肠杆菌在含抑制性物质的培养基上就可以生长，而不含报告基因的大肠杆菌（就是转化失败的）就不能生长。这样过了两三天后，在培养基上看见的菌落就是阳性科隆。这一过程就是阳性科隆筛选。一般选用的报告基因像青霉素抗性基因，链霉素抗性基因等等。如果还想了解得更详细，就去买本分子生物学实验书或入门书籍看看就明白了。
阳性克隆鉴定为什么要用氨苄霉素培养基,作用是什么
含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子，如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子 。氨苄霉素简称为氨苄，具有杀灭细菌的作用，如常见的大肠杆菌、DH5α这一类的感受态细胞。在未重组的情况下，他们是不具备抗氨苄的能力，一起培养会被氨苄杀死。如果在感受态细胞里重组加入像PUC18一类的具有抗氨苄性质的基因片段，在与氨苄一起培养生存下来的只有重组的这一种，其他的杂菌会被氨苄杀死，因此得到纯净的重组细菌。氨苄的作用就是筛选出来目的菌种即为重组的细菌。
如果将目的基因导入pBR322质粒中四环素基因片段中,如何筛选阳性克隆子?
你这种插法，阳性克隆子会失去抗性，死于四环素，正常情况没有这么筛选的。非要这么设计实验的话，那就先用不含四环素的培养基培养单菌落，然后每个单菌落进行扩增，逐个去涂含有四环素的培养基，无法存活的就是阳性克隆子。
质粒转化后得到的阳性克隆有哪些方法可以鉴定?并说明鉴定的依据。
1 菌落PCR。设计引物扩增质粒特有的目的片段，如果阳性克隆里面有改片段，则说明转化成功。2 快抽质粒。将阳性菌落划平板，几个小时后，富集菌，然后快速抽提。看质粒大小有没有插入目的片段。3 提质粒，酶切鉴定。4 提质粒测序。1,2 都是早期的快速鉴定，假阳性高；3,4慢，但是比较确信。一般组合来用。
如何进行重组DNA阳性克隆的鉴定
质粒被切以后，和目的基因放在一个体系中，加入dna连接酶，有可能质粒在切口处重新接上。这样的质粒上面有标记基因，但没有目的基因。因此，这样的质粒导入受体细胞后也有抗性。这就是假阳性。还有一种假阳性，就是目的基因和质粒在连接时，方向接反了。如何防止假阳性，方法有三种。第一，用同尾酶去切，可防止质粒自身环化；第二、用双标记基因法，如抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因两个标记基因，这个方法一句话给你说不清楚，先简单了解一点；第三、用基因探针去检测，这个方法是最可靠的。
为什么阳性克隆提不出质粒
原因可能是多方面的：1.你所说的阳性克隆仅仅是在抗性平板上生长的菌落吗？如果是，或许它是假阳性。因为抗性平板上抗生素的分布不均匀，部分降解等会造成抗生素的失效，从而出现没有转进质粒的假阳性菌落，这时当然提不出质粒来。2.如果能保证阳性菌落是正确的（确实转进质粒），那么质粒提不出来很可能是你所用的质粒快提试剂盒或者试剂有问题，这就需要重新配试剂或购买新试剂盒。
基因克隆中蓝白斑筛选法筛选阳性克隆的原理.
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。
筛选阳性克隆的方法和原理？
最常见的就是蓝白斑筛选，详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm方法很多，除蓝白斑筛选外，像菌落PCR验证：详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切，电泳，观察条带是否和重组之前，目的基因电泳时条带所处的位置一致。测序验证：送测序公司
大肠杆菌GFP是什么菌?在实验室中如何筛选抗氨苄青霉素阳性克隆菌株?
GFP本身是绿色荧光蛋白(Green Fluorecent protein)的缩写，至于你说的大肠杆菌GFP是个菌，要么是可以表达绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌，要么是你把蛋白和菌搞混了。筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单，将氨苄青霉素加到所用培养基中，终浓度100ug/ml，把要筛选的菌液涂布其上，能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株。要注意的是生长时间不可太长，因为水解氨苄青霉素的beta-内酰胺酶能分泌到细菌外，导致阳性菌周围的阴性菌也能生长，即所谓的卫星菌落。
筛选阳性克隆
BamH 1 的酶切位点在tet上，所以酶切重组后，质粒就不会再表达四环素抗性抗性了，筛选阳性克隆要挑选在Amp平板上生长的菌株，而在Tet平板上生长的菌株是插入失败的。
阳性克隆过程中筛选的目的
将载体转入大肠杆菌，在含有Amp的培养基上培养，蓝白斑筛选阳性克隆，再提取质粒DNA，PCR检测就可以了。
如何进行重组DNA阳性克隆的鉴定
首先，要了解重组DNA的大小；然后选择引物进行PCR；最后跑电泳，看在相应位置是否存在DNA带。