pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选，酶切位点是NdeI和XhoI,可以用氨苄青霉素或蓝白斑筛选？
我晕，AMP是可以插入的，方法有很多，比如酶切，比如overlapping PCR，不过还是建议用卡那霉素筛选，蓝白斑也可以的。有lacI可以弄蓝白斑的。不过筛选出来的单克隆还是要酶切鉴定的哦~或者去送测个序列~保证是你要的而不是空载体
蓝白斑筛选重组质粒实验中为什么用IPTG做为诱导物
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ 基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。乳糖不是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质，半乳糖才是。
基因重组 重组DNA 重组质粒有什么关联？
基因重组 是基因的重新组合，可发生在减一后期，四分体时期，以及基因工程导入基因。重组DNA 是DNA，就是通过基因工程技术接上了新基因的DNA重组质粒 是质粒，是接上了目的基因的质粒。基因重组是理论名字，重组质粒是基因工程技术的中间物，是载体。重组DNA 是结果。
实验复盘四----重组质粒DNA小提
质粒小提试剂盒（TIANprep Mini Plasmid Kit 离心柱型）--碱裂解法 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异地结合溶液中的DNA。 碱裂解法抽提质粒主要的试剂为溶液P1,P2,P3，其在抽提质粒DNA中的作用如下： Prepare: 检查试剂盒里的试剂是不是都在，2mL灭菌离心管，涡旋振荡器，12000rpm离心机，ddH 2 O 65℃水浴锅预热，溶液P1保存在4℃冰箱中。 Reference: 1.分子生物学实验教程 2.天根质粒小提试剂盒说明书
基因表达载体和重组质粒的区别
很难从概念上去严格区分。个人认为可以从是否含有目的基因这一点上去区别，表达载体一般指的是空载体，而重组质粒指的是插入目的基因后的重组载体。
质粒和重组质粒中标记基因的作用分别是什么？
1、质粒中标记基因的作用是有利于对目的基因是否导入进行检测。2、重组质粒上的标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
基因工程中的重组质粒如果导入到植物细胞内，那么重组的基因应该存在于细胞哪呢？
你好我能回答你的问题、基因工程中的重组质粒如果导入到植物细胞内，首先是重组质粒，还是植物细胞。所以有DNA存在的地方就是导入的地方,DNA存在于细胞核，线粒体，叶绿体、、、但是重组质粒的导入要使细胞表达，所以重组质粒导入到细胞核中了。对于这个问题书上有明确的解释，你可以查阅课本。希望我的回答能让你满意！希望你能采纳！谢谢！
重组质粒是重组子吗
可以这么说，到重组子不单单指质粒
重组质粒的构建是否依赖于碱基互补配对
质粒是闭合环状双链DNA分子，重组质粒是外来基因与限制性内切酶切后的DNA通过连接酶使之形成新的闭环。也遵循碱基互补配对原则。
重组质粒除了目的基因
（1）过程①是基因表达载体的构建，需要使用限制酶和DNA连接酶，基因表达载体上含有目的基因、启动子、终止子和标记基因． （2）氨苄青霉素抗性基因使受体细胞具有抵抗氨苄青霉素的特性，因此，可以用含有氨苄青霉素的培养基来培养棉花细胞，在该培养基上能生长的细胞即含有重组质粒． （3）将目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法． （4）过程③④分别是脱分化和再分化，属于植物组织培养的两个步骤，植物组织培养所利用的原理是植物细胞的全能性． 故答案为： （1）限制酶和DNA连接酶 启动子和终止子 （2）将棉花细胞接种在含有氨苄青霉素的（完全）培养基上，在该培养基上能生长的棉花细胞即含有重组质粒 （3）农杆菌转化法 对棉花植株做抗虫的接种实验 （4）植物组织培养 植物细胞的全能性
基因重组 重组DNA 重组质粒 什么关系？
重组DNA 重组质粒是利用了基因重组原理。基因重组还包括了减数分裂第一阶段末期同源染色体分开，非同源染色体自由组合，这里是一个基因重组；还有就是受精也是基因重组。还有一个就是DNA 重组质粒，这也算是基因重组！
关于重组质粒的大小
有可能，不过这要看你载体和目的片段两端的酶切位点。如果是相同的末端或者末端是平末端，那就很有可能多段连接。至于能不能正常表达，还要看你连接的顺序等问题。要看promoter的位置。
基因工程中的,重组质粒上的复制原点有什么作用啊?
是质粒在细菌中复制扩增所必需的元件.
重组质粒 DNA 的转化实验时为什么先正置,后倒置
正置的原因是你本来涂板抹开了，但是你没有抹干，如果直接倒置会引起一体流动，结果你会发现，一大堆菌落挤在一起，你没有办法挑单克隆，你会痛不欲生的。在烘箱中正置30分钟是为了烘干液体，防止上述情况发生。而倒置是为了防止，细菌由于重力作用向培养基里面发展而非向上发展哦~
重组质粒进入受体细胞后在哪表达，表达之后质粒怎么变化，如果分解，是怎么分解的
这个问题要具体问题具体分析，真核细胞和原核细胞的表达过程完全不一样，若是在原核细胞中，质粒可以单独存在复制和表达，也可以整合到基因组中得到表达，在整合到基因组中是一个随即的过程，可能会由强启动子引导高表达，也可能不表达。如果未表达，则在细胞分裂时被DNA酶降解掉。在真核细胞中，质粒一般不能直接表达，但是如果选用的质粒载体上是含有转座子元件的，则有可能随即整合至基因组中，通过积阴德表达而共表达。
如何将目的基因和质粒结合成重组质粒
分子水平上，用人工的方法提取（或者合成）不同的生物的遗传物质，在体外切割拼接和重新组合，然后通过不同方法把重组的DNA分子引入受体细胞，使外源DNA在受体细胞进行复制与表达，按人的需要生产不同的产物或定向地创造生物的新性状，并使之稳定的遗传给下一代。 主要过程：提取目的基因——切割——拼接——繁殖——表达。
将重组质粒导入细菌目的
一是获得足够的基因片段拷贝，比如大批量提取目的基因或者质粒，去做分子生物学方面的实验；或者是让它表达出目的蛋白，去做蛋白方面的实验。
重组质粒测序的目的是什么
重组质粒测序一般是为了获得序列全长，尤其是引物区，也能保证测序序列更加准确。
含目的基因的重组质粒的组成成分主要是DNA和蛋白质 对么？
重组质粒主要是DNA，不含蛋白质。只有有核小体结构的（真核生物中），才是由DNA和蛋白质组成。
重组质粒构建的难点在哪里
我当初做实验的时候，其实最担心的就是构件号重组质粒之后，因PCR操作发生突变。但是也就同学遇到过一次而已。并不是很难的。 一般很难出现问题，这个技术已经很成熟了，并且有的公司比如我家，能够提供已经构建到哺乳动物细胞表达载体上的基因形式，其中还有ha、myc、gst、gfp、rfp、flag、his、v5标签可以选择。
重组质粒的形成是在细胞内完成的吗
A、重组质粒的形成是在细胞外完成的，A错误； B、基因工程常用的载体包括质粒、噬菌体和动植物病毒，B错误； C、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料，C正确； D、目的基因进入受体细胞不一定能成功表达，D错误． 故选：C．
人工合成的基因的途径一般有哪些 2、如何将目的基因和质粒结合成重组质粒
目前人工合成基因的方法主要有两条.一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模版,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基因. 另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对的原则,推测出它的基因的核苷酸序列,再通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因.如人的血红蛋白基因胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得.
致力与目的基因构建的重组质粒在受体细胞中有哪两种存在形式
在大肠杆菌等细菌中以质粒形式存在，分为严谨型和松弛型两种，严谨型质粒随细胞染色体复制而复制，松弛型质粒在染色体复制停止后可以继续进行自我复制。分子生物学实验在真核细胞中导入重组质粒通常分为随机插入和定向打靶，随机插入是将质粒上的基因信息随机插入整合到宿主染色体组上，表达情况未知，是否能够稳定遗传未知；定向打靶是通过目的基因两端特异性序列将目的基因定向插入到染色体已知位置，能够随宿主细胞染色体组稳定遗传。有什么问题可以追问。
构建重组质粒必须使用哪两种酶
限制性核酸内切酶和DNA连接酶。构建重组质粒，首先，需要把原来完整的质粒切开，就必须要用限制性核酸内切酶；然后，需要把目的基因片段连接到切开的质粒上，并把重组质粒重新连接好，就必须要用DNA连接酶。
质粒与目的基因构建的重组质粒在受体细胞中有哪两种存在形式
一种是和普通质粒一样游离存在于受体细胞的细胞质内另外一种是插入受体细胞基因组，以前病毒形式存在。
为什么目的基因都一定有质粒与它结合,重组质粒的质粒有很多类型吗?
目的基因与一定的质粒载体结合,是为了对目的基因的进一步研究.单独的外源目的基因不能在生物体内表达,必须借助载体上的其他基因序列使其可能在生物体内起作用. 质粒载体有很多类型：高拷贝数的质粒,低拷贝数的质粒,表达型质粒等.
重组质粒导入细胞
受体是细菌的话，是导入到细胞质即可。动植物细胞需进入细胞核重组质粒能自我复制，随细胞分离而分离，具随机性
重组质粒导入大肠杆菌的目的是?
目的是表达目的基因,获得代谢产物等.
利用ti质粒构建重组质粒的目的
与运载体结合用到了限制酶和DNA连接酶。利用ti质粒构建重组质粒的目的，酪蛋白基因与Ti质粒结合构成重组质粒，目的基因与运载体结合用到了限制酶和DNA连接酶。
重组质粒是全部整合到受体的染色体中还是部分
LZ您好答案是都不是，完全没有质粒会游离于细胞核之外，也就是不可能进入细胞核与受体染色体发生整合有点类似线粒体或者叶绿体，在有性遗传上遵循母系细胞质遗传，而不满足分离和自由组合！
目的基因和质粒能构建成重组质粒的根本原因是
你这题不是难，而是说不清。所以没人来答。基本原理肯定是碱基互补配对，就是说，先用限制性酶把环形质粒切两刀，切去一个片段，再把你的片段连进去就行了。具体操作时，也得用同种限制酶切目的基因片段，这样，它就能连进质粒中，形成完整环形质粒了。至于为什么要用同种限制性酶，是因为：同种酶切出来的豁口才能很好地匹配。
如何检测出是重组质粒？重组质粒和原质粒不都含有标记基因吗？
质粒上存在好几个基因，有你的目的基因和标记基因。一般都是标记基因都是有的，目的是为了筛选含有你的目标质粒的菌。标记基因一般都是抗性基因，用相应的抗生素去筛选。
什么是引物，限制酶，目的基因，载体，质粒，重组质粒，PCR技术？
引物相当于质粒、噬菌体的基因等基因载体，用于将目的基因一同带入细胞内。同载体限制酶全称限制性核酸内切酶，用于剪切特定的碱基对序列。目的基因即想要得到的性状对应的基因。重组质粒即载体基因与目的基因结合后形成的。PCR技术是模拟体内DNA的天然复制过程，在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术，主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
显微注射需要重组质粒吗?还是直接导入目的基因
显微注射只是一种技术手段不决定你要注射什么东西。我们还可以注射整个细胞核呢。。。是否导入质粒，要看你的实验原理和目的了，如果直接导入目的基因可达到你目的就不要用质粒，毕竟外源质粒进入细胞对细胞带来负担。但一般只导入基因片段是很难使其稳定存在于细胞内（会被降解掉）并重组进入染色体的，都得借用质粒（重组质粒）进行。
重组质粒表达蛋白时质粒上的基因是否也表达了呢
质粒存在细菌和真菌里，当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因，培养后植入发酵菌细胞中。发酵后就可以提取产物。质粒上原有的基因也会表达，重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白。三者混合在一起，要进行筛选（筛选方法自然很多）得到目的蛋白质。
在基因工程中 目的基因为什么可以和质粒结合成重组质粒啊
为什么不可以？你的疑问在哪里？基因和质粒其实都是DNA，相同的化学本质，只是序列不同所以叫法不同而已。不同DNA可以通过其他人所说方法连接成一条更长的DNA分子，所以目的基因和质粒自然也可以重组成一条更长的DNA。质粒是环状的，所以要先切开，再将线性的目的基因连上去，再重新连接成一个环状的分子，即更大的质粒。质粒的特点是可以在细菌里面自我复制，方便后续的对目的基因的操作。
重组质粒的组成要含有什么
重组质粒的组成要含有目的基因，标记基因，启动子，终止子，复制原点。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。
基因表达载体和重组质粒的区别
一、构成不同基因表达载体：构成包括启动子、终止子、标记基因、目的基因。重组质粒：构成包括目的基因片段、质粒、酶。二、对象不同基因表达载体：基因表达载体的对象通常是活细胞。重组质粒：重组质粒的对象通常是细菌。三、原理不同基因表达载体：将不同来源的基因在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞。重组质粒：用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 在体外使两者相连接, 得到重组质粒。扩展资料一、基因表达载体分为两大类：1、病毒载体病毒载体主要包括慢病毒、腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等。2、非病毒载体非病毒载体主要包括裸露DNA、脂质体、纳米载体等。二、基因表达载体的过程过程包括：过表达质粒选择、目的基因获取、引物设计、过表达质粒构建。在进行基因过表达过程中，可以选择不同的过表达载体。过表达载体与克隆载体比较而言，加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。参考资料来源：百度百科-基因表达载体百度百科-重组质粒
如何使目的基因与质粒结合形成重组质粒？
先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒。质粒是目的基因的运载体，在用鸟枪法或人工合成法提取目的基因后，用限制性内切酶将质粒切开，使目的基因与切开的质粒具有相同的粘性末端。它们的碱基恰好配对，氢键自动结合，再用DNA连接酶将切口补上，重组质粒就形成了。扩展资料有两种情况可使杂交后代出现新的基因组合的个体（重组体）：（1）非连锁基因的自由组合。例如纯合的非糯红米水稻品种与糯性白米水稻品种杂交，子二代有四种类型的植株，其中非糯红米和糯性白米的植株分别与两亲本的性状相同，称为亲本组合；另有非糯白米和糯性红米两种植株则是两亲本所没有的重新组合，即重组体。（2）连锁基因的交换。例如，已知玉米种子的有色对无色为显性，饱满对凹陷为显性，用纯种有色饱满玉米与无色凹陷玉米杂交，子一代种子均为有色饱满，以F1与双隐性（无色凹陷）亲本回交，结果也出现四种类型，其中有色饱满和无色凹陷为亲本组合，约占96%；有色凹陷和无色饱满为新组合（重组体），约占4%，后者就是同源染色体的非姊妹染色单体上部分基因发生了交换的结果。
重组质粒的定义
重组质粒：有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接.---（重组质粒是一个种动作，方法，不是一个名词）AB就是“重组的质粒”，是用重组质粒的方法弄成的BB没有质粒，不是“重组的质粒”AA没有目的基因，不是“重组的质粒”
重组质粒的构建步骤是(重组质粒的构建步骤)
您好,我就为大家解答关于重组质粒的构建步骤是，重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！1、目的基因是以生... 您好,我就为大家解答关于重组质粒的构建步骤是，重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！ 1、目的基因是以生物基因组DNA为模板，设计引物，PCR出来的。 2、目的产物的序列正确后，就可以构建重组载体。 3、主要方法就是酶切目的产物，连接目标载体，转化大肠杆菌感受态，最后鉴定一下单克隆是不是阳性克隆就OK了。
基因重组 重组DNA 重组质粒 什么关系？
基因重组是基因的重新组合，可发生在减一后期，四分体时期，以及基因工程导入基因。重组dna是dna，就是通过基因工程技术接上了新基因的dna重组质粒是质粒，是接上了目的基因的质粒。基因重组是理论名字，重组质粒是基因工程技术的中间物，是载体。重组dna是结果。
质粒载体和重组质粒的区别
质粒载体 即，在由限制性核酸内切酶修饰过的质粒DNA序列中插入外源的目的基因，以质粒为载体，将目的基因通过转化或转导的方法导进宿主细胞，进行重组、筛选、扩增的过程。重组质粒有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接就是重组质粒，重组质粒是一个种动作，方法，也是一个名词。简单地说，重组质粒包括了质粒载体
重组质粒和含目的基因的重组质粒的区别
含义不同。重组质粒是一种动作，方法。目的基因的重组质粒是名词，表示一种物质。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。
目的基因是指重组质粒吗
目的基因就是我们利用限制性内切酶获得的一段特定长度的DNA片段，这个片段可能是具有一定抗性、或者是控制一个优良性状的遗传信息等。重组质粒则是“体外将目的片段和经切割目的片段相同的限制性内切酶切割后的载体质粒连接后的重组质粒”，即目的片段+载体质粒片段。（因为DNA片段不能单独存在，一般都是保存于质粒中，所以要想两个不同的片段连接起来，必须用相同的内切酶对载体质粒、含目的DNA的质粒进行酶切后，二者才能连接。所以目的DNA只是个DNA片段，重组质粒是质粒，二者不同，原理如上~~~忘采纳~
重组质粒可以说是载体吗?
重组质粒指的是目的基因和载体（有的也称运载体）结合后的产物，也叫重组DNA分子，学名是：基因表达载体。望采纳
重组质粒的连接的目的?
方便研究。重组质粒的连接，可以把特定的基因序列插入到工程质粒中，构建成功后可以进行下一步研究，如基因对宿主的影响等，去目的是方便研究。有目的基因，有质粒，然后用酶使两者相接就是重组质粒，重组质粒是一个种动作，方法，也是一个名词。
构建重组质粒必须使用哪两种酶
限制性核酸内切酶 和 DNA连接酶. 构建重组质粒, 首先,需要把原来完整的质粒切开,就必须要用限制性核酸内切酶； 然后,需要把目的基因片段连接到切开的质粒上,并把重组质粒重新连接好,就必须要用DNA连接酶.
重组质粒更换载体
有些情况下，由于实验的需求，我们必须给重组质粒更换载体，为了使其标记颜色改变或者抗性改变或者其他，最简单的方法就是使用内切酶切下质粒中目标片段后，顺便用同样的内切酶切下新的载体，（这里要注意，新载体上有没有对应的酶切位点及其会不会切掉比较重要的组成部分）连接后使用。 目的：给 over expression的瞬时表达质粒（pflag-cMV），原载体为绿色荧光，换为红色荧光。 重组质粒：10ul； 5 μL 10x cut smart buffer 1 μL Cla1 1 μL kpn1 ddH2O补至50 μL 5 μg cheey载体 5 μL 10x cut smart buffer 1 μL Cla1 1 μL Kpn1 ddH2O补至50 μL 37度酶切过夜（菌落培养箱） 然后跑胶纯化，胶回收， DNA需要使用纯化试剂盒直接纯化，质粒需要电泳跑胶纯化（胶中的质粒必须在曝光仪器上观看，紫外容易导致突变） 质粒酶切的时候会出现单链断裂等情况，所以我们需要跑胶，进行胶回收，纯化。质粒需要用50ul水溶解，DNA片段需要使用20ul的水溶解。 将退火产物与线性化质粒进行T4连接酶连接，连接过夜。 15ul 目标DNA片段（如果使用20ul，则14ul就可以） 2ul 线性化质粒（如果使用50ul，3ul质粒） 2μL 10x NEB T4 DNA ligase buffer 1μL NEB T4 DNA连接酶 （16度 连接过夜） cheery 每个样品挑5个克隆 、ep管中加10uldd水 挑入克隆捶打混匀。取出八连管： mix ：10ul Flag-R：1ul ; mCheery-F：1ul ; 克隆混合液：3ul ; 程序 pcr：95 3min 95 15s 56 15s 72 90s 72 10min 4 持续 2-4 30个循环 完成后看切的条带大小，一般跑胶，在皮曝光机器下看，与自己目的蛋白一样大小的kb带出现则提示连接成功。注意marker的选择。 然后将剩余7ul的克隆混合液加入amp的lb培养基800ul的样子 在摇床中摇 。 跑完胶后发现正确的条带后，将摇床上正确条带的菌群，转移到15ml的摇菌管，摇菌过夜。 ？？
根据目的基因构建重组质粒的步骤
（1）用限制酶将质粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来． （2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中． （3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca 2+ 处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞． （4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌． （5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图： 故答案为： （1）限制酶 DNA连接酶 （2）脱氧核苷酸 氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞） Ca 2+ （4）2 （5）E 如下图所示（两点全圈出给分）． （1）限制酶 DNA连接酶 （2）氨苄青霉素抗性 （3）将重组质粒导入大肠杆菌（受体细胞） Ca 2+ （4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2 （5）E
如何检测重组质粒连接成功了没
重组质粒连接成功的常见方法，一般采用著名的限制性内切酶切割和酶联检测等。具体步骤如下：1.限制性内切酶切割：首先，用限制性内切酶对连接产物进行切割。如果连接成功，那么切割后可以得到预期长度的DNA片段；如果连接失败，那么你将得到不同于预期长度的DNA片段。2.电泳分析：将上述DNA片段通过电泳分析。如果连接成功，那么你将会看到预期长度的DNA条带出现；如果连接失败，那么你将会看到长度不正确或轻微多余的DNA条带出现。3.酶联检测：可以通过变性凝胶电泳、Southern blotting等方法来验证连接情况的准确性和可靠性。需要指出的是，在重组质粒连接
重组质粒的连接的目的和意义
重组质粒的连接的目的主要用于获得含有目的基因连接的重组子。利于目的基因进入受体细胞，利于目的基因在受体细胞内稳定存在和表达。它对肿瘤的诊断和治疗具有非常重要的意义，特别是恶心肿瘤共同表达的特异抗原性与肿瘤的发生、浸润和转移关系密切，能被作为肿瘤发生、发展和预后的指标。
重组质粒是否整合到宿主基因组中
你问的第二个问题有点模糊啊，不明白“所有的情况”指的到底是那些情况。不过，可以先回答你第一个问题，答案是，有些质粒的确可以将基因整合进宿主的基因组中。例如，大肠杆菌有一种质粒叫做f质粒（fplasmid），又称f因子、致育因子或性因子，是大肠杆菌等细菌决定性别并有转移能力的质粒。其基因组含有与质粒复制和转移有关的许多基因，其中近1/3是tra区，另外有orit（转移起始点）、oris（复制起始点）、inc（不相容群）、rep（复制功能）和一些转座因子，后者可整合到宿主核染色体上的一定部位，并导致各种hfr菌株的产生。
质粒与目的基因连接得到几种重组质粒 质粒与目的基因连接得的重组质粒
1、质粒与目的基因连接得到2种重组质粒。 2、如果是双酶切，而且两个酶切位点不能形成自连，那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒。 3、如果是单酶切，或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶，那么插入目的基因能获得两种重组质粒。
重组质粒和融合蛋白一样么
两者有一定的联系，但更多的是区别。基本上，现在所有的工程质粒，在使用时，都会插入外源片段，成为重组质粒（事实上，工程质粒本身就是重组而来）。融合蛋白，是指2个或多个蛋白的基因片段经拼接后表达，形成包含上述蛋白片段的蛋白。融合蛋白的表达一般都是要先构建重组质粒，再转入合适的表达体系（如细菌、酵母、细胞或组织中），表达产物就是融合蛋白。但还有很多的重组质粒，未必是用来表达融合蛋白的，比如，有些蛋白不需加标签，有些质粒只是为了转录出RNA，等等。个人见解，欢迎继续讨论，祝愉快！
重组质粒表达蛋白时质粒上的基因是否也表达了呢?所说的目的蛋白就是,目的基因表达的蛋白吗?
质粒存在细菌和真菌里,当提到取质粒基因用DNA剪切酶作用后得到的DNA序列段再与目的基因与DNA黏合酶作用下得到目的质粒基因,培养后植入发酵菌细胞中.发酵后就可以提取产物. 质粒上原有的基因也会表达,重组后的基因也会表达,目的蛋白和原有质粒基因蛋白、目的基因质粒基因蛋白.三者混合在一起,要进行筛选（筛选方法自然很多）得到目的蛋白质.
质粒和质粒结合算不算重组质粒？
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。 外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种： 1、带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是最容易克隆的DNA片段，一般情况下,常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切位点的载体，从而将外源片段定向地克隆到载体上。也可在PCR扩增时，在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。 2、带有相同的粘性末端 用相同的酶或同尾酶处理可得到这样的末端。 由于质粒载体也必须用同一种酶消化，亦得到同样的两个相同粘性末端，因此在连接反应中外源片段和质粒载体DNA均可能发生自身环化或几个分子串连形成寡聚物, 而且正反两种连接方向都可能有。所以，必须仔细调整连接反应中两种DNA的浓度, 以便使正确的连接产物的数量达到最高水平。还可将载体DNA的5"磷酸基团用碱性磷酸酯酶去掉, 最大限度地抑制质粒DNA的自身环化。带5"端磷酸的外源DNA片段可以有效地与去磷酸化的载体相连, 产生一个带有两个缺口的开环分子,在转入E. coli受体菌后的扩增过程中缺口可自动修复。 3、带有平末端 是由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生，或由DNA聚合酶补平所致。由于平端的连接效率比粘性末端要低得多，故在其连接反应中，T4 DNA连接酶的浓度和外源DNA及载体DNA浓度均要高得多。通常还需加入低浓度的聚乙二醇(PEG 8000)以促进DNA分子凝聚成聚集体的物质以提高转化效率。 特殊情况下，外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配,则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3"凹端,使不相匹配的末端转变为互补末端或转为平末端后再进行连接。
质粒与目的基因构建的重组质粒在受体细胞中有哪两种存在形式
一种是和普通质粒一样游离存在于受体细胞的细胞质内另外一种是插入受体细胞基因组，以前病毒形式存在。
重组质粒如何鉴定
是区分重组质粒与普通质粒吗？如果是，最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交另外还有种方法，当普通质粒上有两个或以上的标记基因，而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以如：普通质粒，抗青霉素也抗四环素，但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因，那么，双抗的就是导入普通质粒，只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒，都不抗的没有导入质粒。
基因工程中的，重组质粒上的复制原点有什么作用啊？
是质粒在细菌中复制扩增所必需的元件。
高中生物外源DNA必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制
启动子和终止子是帮助外源DNA表达的，就是控制转录过程的，要想进行复制，需要的是复制原点
重组质粒
1、完全切开是指DNA的两条链都断了2、连接后接口处会出现以下情况：－G>GATCX-—CCTAG>Y->代表双链的连接部位。只有当X为C时（Y为G）才能被II切。所以切开的概率是1／4，切不开的概率是3/4。3、重组质粒中的目的基因的两侧都会出现上述情况，所以酶Ⅱ切重组质粒会出现下列几种情况：只有目的基因右侧切开，左侧未开，概率是1/4*3/4=3/16只有目的基因左侧切开，右侧未开，概率是3/4*1/4=3/16目的基因左右两侧同时切开，概率是1/4*1/4=1/16目的基因左右两侧都未切开，概率是3/4*1/4=9/16前三种情况都是完全切开，所以重组质粒能够被限切酶Ⅱ完全切割开的概率是7/16这个题的概率计算，思路有点类似遗传病那‘家族中有甲乙两种遗传病，问某后代患病的概率是多少"，后代只患甲病、只患乙病和同时患甲乙病都是患病
重组质粒构建的注意事项？
重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。在国内先进的实验中，也大都是由实验员搞定。但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。在这里将我的心得分享于大家，这也是我本人几年来一线工作时的经验积累，以期能为谷友提供借鉴，让大家在实验中少走弯路。所涉及内容如下： 1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明上述问题同时，本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。 一、克隆基因的酶切位点问题 1、克隆位点选择的问题。首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析，列出其所含酶切位点清单。然后对照质粒多克隆位点，所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。这是常识，不赘述。 2、保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。 一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN段上。如NdeI就属这类，需要加入至少6个保护碱基，常用的HindIII也要三个。
重组质粒的组成要含有什么
重组质粒的组成要含有目的基因，标记基因，启动子，终止子，复制原点。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。
重组质粒如何鉴定
是区分重组质粒与普通质粒吗？如果是，最简单的方法就是用探针进行DNA分子杂交另外还有种方法，当普通质粒上有两个或以上的标记基因，而目的基因的拼接处正好破坏一个标记基因就可以如：普通质粒，抗青霉素也抗四环素，但目的基因正好插入时破坏了抗四环素基因，那么，双抗的就是导入普通质粒，只抗青霉素而不抗四环素的导入的就是重组质粒，都不抗的没有导入质粒。
重组质粒的基本简介
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。
重组质粒和融合蛋白一样么
两者有一定的联系，但更多的是区别。基本上，现在所有的工程质粒，在使用时，都会插入外源片段，成为重组质粒（事实上，工程质粒本身就是重组而来）。融合蛋白，是指2个或多个蛋白的基因片段经拼接后表达，形成包含上述蛋白片段的蛋白。融合蛋白的表达一般都是要先构建重组质粒，再转入合适的表达体系（如细菌、酵母、细胞或组织中），表达产物就是融合蛋白。但还有很多的重组质粒，未必是用来表达融合蛋白的，比如，有些蛋白不需加标签，有些质粒只是为了转录出RNA，等等。个人见解，欢迎继续讨论，祝愉快！
重组质粒的反应策略
外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：1、带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是最容易克隆的DNA片段，一般情况下,常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切位点的载体，从而将外源片段定向地克隆到载体上。也可在PCR扩增时，在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。 外源DNA分子的末端与所用的载体末端无法相互匹配,则可以在线状质粒载体末端或外源DNA片段末端接上合适的接头(linker)或衔接头(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3"凹端,使不相匹配的末端转变为互补末端或转为平末端后再进行连接。
省略构建重组质粒有何后果？会影响目的基因的复制，转录还是翻译？
省略构建重组质粒，会影响目的基因的翻译。翻译是蛋白质生物合成（基因表达中的一部分，基因表达还包括转录）过程中的第二步（转录为第一步），翻译是根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由DNA通过转录而生成）中“碱基的排列顺序”（核苷酸序列）解码，并生成对应的特定氨基酸序列的过程。但也有许多转录生成的RNA，如转运RNA（tRNA）、核糖体RNA（rRNA）和小核RNA（snRNA）等并不被翻译为氨基酸序列。翻译过程需要的原料：mRNA、tRNA、20种氨基酸、能量、酶、核糖体。翻译的过程大致可分作三个阶段：起始、延长、终止。翻译主要在细胞质内的核糖体中进行，氨基酸分子在氨基酰-tRNA合成酶的催化作用下与特定的转运RNA结合并被带到核糖体上。生成的多肽链（即氨基酸链）需要通过正确折叠形成蛋白质，许多蛋白质在翻译结束后还需要在内质网上进行翻译后修饰才能具有真正的生物学活性。游离的碱基以mRNA为直接模板，tRNA为氨基酸运载体，核蛋白体为装配场所，共同协调完成蛋白质生物合成的过程。在翻译过程中mRNA上的每个三联体密码子对应tRNA上的一个三联体反密码子，且这个反密码子只对应一个氨基酸，但是一个氨基酸可有多组密码子（密码子具有简并性）来表示。一个激活的tRNA进入核糖体的A位（A位用于接受氨基酸，可记忆为Accept）与mRNA相配，肽酰转移酶在邻近的氨基酸间建立一个肽键，此后在P位（peptidyl-tRNA site，即肽酰基位点，也叫做“供点”）上的氨基酸离开它的tRNA与A位上的tRNA结合，核糖体则相对于mRNA向前滑动，原来在A位上的tRNA移动到P位上，原来在P位上的空的tRNA移动到E位（释放位点，记忆为Emission）上，然后在下一个tRNA进入A位之前被释放。当核糖体沿着mRNA分子移动到A位出现终止密码子时，没有相应的氨酰tRNA与之对应，一种释放因子(Release Factor，RF)与终止密码子及核糖体A位结合，另一种释放因子随之结合，改变肽酰转移酶的特异性，催化P位肽酰tRNA水解，从而使肽链从核糖体上释放。希望我能帮助你解疑释惑。
要克隆一段基因,什么情况用PCR,什么情况用重组质粒分子克隆法?？
长片段用重组质粒克隆法.因为一般PCR无法扩增大至8Kb以上的片段.,5,该用PCR就用PCR，该用重组质粒分子克隆法就用重组质粒分子克隆法,2,PCR是大量克隆的时候才用，重组质粒分子法有更强的针对性和目标性。比如，用后者得到目的基因，如果需要更多，则用前者大量克隆。,2,PCR简单快速,0,如果经过酶切可以获得想要的目的基因和合适的粘性末端，就采用重组质粒，这样变异的可能性很少，用PCR扩增的时候，即使用高保真酶也会有万分之几的出错率，实在不行才用PCR。,0,pcr的主要意义在于随意的增加酶切位点，方便克隆。如果通过酶切质粒能产生可用的位点就不用pcr了，毕竟pcr会有突变的,0,