反转录的反转录酶与反转录过程
反转录过程由反转录酶催化,该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶(RDDP),即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA(cDNA)。反转录酶存在于一些RNA病毒中,可能与病毒的恶性转化有关。人类免疫缺陷病毒(HIV)也是一种RNA病毒,含有反转录酶。在小鼠及人的正常细胞和胚胎细胞中也有反转录酶,推测可能与细胞分化和胚胎发育有关。大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。除此之外,有些反转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库(cDNA library),从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法。反转录的简要过程表示如下:反转录酶的作用是以dNTP为底物,以RNA为模板,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3′桹H末端上,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA(complementary DNA, cDNA),它与RNA模板形成RNADNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此,完成由RNA指导的DNA合成过程。
反转录酶合成方向
反转录酶合成方向为5"→3"mRNA。转录过程包括RNA聚合酶与模板DNA结合,起始点由σ因子识别。转录起始,通常由pppG开始:5"-3"方向延长RNA链。链的终止,有特殊的终止信号区。
反转录酶有两种,它们的来源,功能有何区别
1 一种是来源于哺乳动物(M-MLV),另一种来源于鸟类(AMV)2 哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。3 M-MLV反转录酶比AMV反转录酶缺乏连续性,因此要获得像AMV反转录酶反应中产生同样量的cDNA就要求使用较多单位的M-MLV反转录酶。用1微克的mRNA起始合成第一条链的cDNA,要用8单位的M-MLV反转录酶才相当于1单位的AMV反转录酶的作用。 反转录酶该酶很容易被亚精胺(Spermidine)所抑制,该酶绝对不能用Promega的RiboprobeAMV反转录酶5X反应缓冲液,也不能用Promega的RiboclonecDNA第一条链缓冲液,因为这二种缓冲液均含有亚精胺。
反转录酶与逆转录酶是不是一种东西?
恩....反转录酶就是逆转录酶..只是翻译不一样而以.....英文名称:Reversetranscripatase由于其执行的功能相当于转录的逆过程,所以有翻译为逆转录酶.而其催化进行的过程是转录的反方向,是从RNA到DNA,所以也有翻译为反转录酶的.其实这两个名称都是指一样的东西...
端粒酶是否具有反转录酶的活性
有,它就是基于反转录酶的活性发挥作用的。
RT -PCR的反转录酶的选择
1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性,RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃。2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适作用温度为42℃。3.Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶:在Mn存在下,允许高温反转录RNA,以消除RNA模板的二级结构。4.MMLV反转录酶的RNase H突变体:商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA,这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
反转录酶具有哪些酶活性?( )
【答案】:A、B反转录酶是一种多功能酶,具有依赖于RNA的DNA聚合酶活性、依赖于DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH活性。
核酶和反转录酶的多功能性是否与酶的专一性矛盾
不矛盾。许多核酶的底物也是RNA,甚至就是其自身,其催化反应也具有专一性,核酶和反转录酶的多功能性不与酶的专一性矛盾,核酶所催化的反应都是不可逆的。核酶和核酸酶属于两种不同的物质,核酶属于催化剂类活性RNA,只有较弱的核酸酶特异性。
dna聚合酶,rna聚合酶,反转录酶的区别
DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板,从将DNA由5"端点开始复制到3"端的酶。DNA聚合酶的共同特点是:(1)需要提供合成模板;(2)不能起始新的DNA链,必须要有引物提供3"-OH;(3)合成的方向都是5"→3"(4)除聚合DNA外还有其它功能。所有原核和真核的DNA聚合酶都具有相同的合成活性,都可以在3"-OH上加核苷酸使链延伸,其速率为1000 Nt/min。加什么核苷酸是根据和模板链上的碱基互补的原则而定的。RNA聚合酶(RNA polymerase):以一条DNA链或RNA为模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。RNA聚合酶(RNA polymerase)的作用是转录RNA。有的RNA聚合酶有比较复杂的亚基结构。如大肠杆菌RNA聚合酶有四条多肽链,另有一个促进新RNA分子合成的σ因子,因此它的组成的是α2ββσ。这种结构称为全酶(holoenzyme),除去了σ因子的酶称为核心酶。噬菌体RNA聚合酶则没有亚基真核生物的RNA聚合酶分三类。RNA聚合酶Ⅰ存在于核仁中,转录rRNA顺序。RNA聚合酶Ⅱ存在于核质中,转录大多数基因,需要“TATA”框。RNA聚合酶Ⅲ存在于核质中,转录很少几种基因如tRNA基因如5SrRNA基因。有些重复顺序如Alu顺序可能也由这种酶转录。上面提到的“TATA”框又称Goldberg –Hogness顺序,是RNA聚合酶Ⅱ的接触点,是这种酶的转录单位所特有的。它在真核生物的转录基因的5"端一侧,在转录起点上游20至30个核苷酸之间有一段富含AT的顺序。如以转录起始点为0,则在-33到27个核苷酸与-27至21核苷酸之间,有一个“TATA”框。一般是7个核苷酸。原核生物中也类似“TATA”框的结构。RNA聚合酶作用在“TATAAT”(Pribnow)盒和“TTGA-CA”框附近。 反转录酶:RNA指导的DNA聚合酶,具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。在基因工程中起作用。
核心酶是反转录酶的一部分吗
不是。核心酶(core enzyme):大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由6个亚基组成(2αββ"ωσ)(即两个α亚基、β亚基、β′亚基、ω亚基和σ亚基),还含有两个锌原子。而无σ亚基的酶(2αββ"ω)叫核心酶。亦指DNA聚合酶Ⅲ中由α、ε、θ三种亚基组成全酶的核心酶(core enzyme)。
rna聚合酶和反转录酶分别作用于什么部位?是磷酸二酯键吗还是什么,要准确的!
都作用于五碳糖与磷酸基之间,使之形成磷酸二酯键是的
m-mlv反转录酶容易失活吗
反转录酶比较容易失活,用的时候一定要保持在低温条件下,要是方便的话可以直接在冰柜中迅速加到离心管中,如果需要拿出来也要放到冰盒上,时间不易过长,加完就放回到冰箱中,以免失活,一般酶类的东西都是需要注意的!一定要保持低温1
什么是反转录酶?
反转录酶(reverse:transcriptase)即依赖于RNA的DNA聚合酶,来自鸟类骨髓母细胞瘤病毒(avian:myeloblastosis:virus,AMV)或鼠白血病病毒(murine:leukosis:virus,MulV),具有5′→3′DNA合成活性和很强的RNAase:H活性,但是无3′→5′外切活性。反转录酶能以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)。
反转录酶的作用是
正确答案:C解析:反转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA的酶。分子生物学常用工具酶常见的主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、反转录酶、核酸酶等。C正确,故选C。
下列有关反转录酶的叙述,错误的
【答案】:C反转录酶也称逆转录酶,全称为依赖RNA的DNA聚合酶,催化的是反转录过程。反转录是指 在宿主细胞中,反转录病毒从单链RNA合成双链DNA(cDNA)的过程,它包括3步:①以病毒单链RNA 为模板,催化dNTP聚合生成DNA互补链,产物是RNA-DNA杂化双链,这是RNA指导的DNA合成反应, 此为反转录作用;②杂化双链中的RNA被反转录酶水解。③剩下的单链DNA再作模板,由反转录酶催 化合成第二条DNA互补链,这是指导的合成反应。DNA的合成方向是5" →3",在催化DNA 合成开始时需要有引物,此引物为存在于病毒颗粒中的tRNA(C错).因反转录酶可以催化RNA水解 (第②步反应),因此具有RNA酶(RNase)的活性。在催化第③步反应时,反转录酶没有3" →5"核酸外切 酶活性,因此它无校对功能,故反转录的错误率较高。
反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗?
逆转录酶有三种活性:RNA或DNA作模板的dNTP聚合活性和RNase活性. ①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程. ②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子. ③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子. 逆转录酶本身具有DNA聚合酶活性,应该不需要另加DNA聚合酶了
反转录酶的合成方向
5"-3"方向合成。反转录酶(也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶,该酶以RNA为模板,以dNTP为底物,tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物,在tRNA3"-OH末端上,根据碱基配对的原则,按5"-3"方向合成一条与RNA模板互补的DNA单链,这条DNA单链叫做互补DNA。
一些关于反转录酶的问题
反转录酶(Reverse transcripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子,当以mRNA为模板时,先合成单链DNA(ssDNA),再在反转录酶和DNA聚合酶Ⅰ作用下,以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA(dsDNA),再由核酸酶S1切成二条单链的双链DNA。因此,反转录酶可用来把任何基因的mRNA反转录成cDNA拷贝,然后可大量扩增插入载体后的cDNA。也可用来标记cDNA作为放射性的分子探针。 M-MLV RT)
反转录酶的作用是什么?
反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
反转录酶加多了有影响吗
有。反转录酶加多了会导致小片段产物(小于500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。反转录酶(reversetranscriptase,也可写成逆转录酶)又称为依赖RNA的DNA聚合酶。
反转录酶AMV使用说明(Promega)
1、产品简介 Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase (AMV RT,AMV 逆转录酶) 催化以DNA、RNA 或RNA-DNA 杂交体为模板的DNA 聚合反应。它需要引物(DNA 引物比RNA 引物效率更高)以及Mg2+ 或Mn2+。该酶具有固有的RNase H 活性,非离子表面活性剂和氢硫根化合物可在体外增加该酶的活性。 **2、特点 ** 3、应用 1)cDNA第一链和第二链的合成 2)引物延伸和RNA测序 3)RT-PCR (使用Taq DNA 聚合酶时,50μl PCR扩增体系加10μl 包含AMV RT和提供的AMV RT缓冲液的RT反应液。如果使用的是GoTaq DNA 聚合酶或者PCR Master Mix,50l PCR扩增体系加25?l的RT反应液)。 4、使用方法 1)以使用2g的RNA为例。首先准备无核酸酶的离心管,将模板RNA加入到管内,然后加入引物,引物加入比为0.5g/g RNA,总体积不得大于11?l。最好不要改变引物模板比。70℃加热5min,冰浴5min,短暂离心收集至管底。 2)将下列成分加入到上述退火后的引物-模板混合物中。 AMV RT 5×Reaction Buffer 5l dNTP mix 2.5l RNasin Ribonuclease Inhibitor 25units Sodium pyrophosphate,40mm(预热到42℃) 2.5l AMV RT 200units 无核酸水至最后体积 25l 3)轻弹混匀,从中取出5l加入到另一含有2-5[-32P]dCTP的试管中。剩余的20l先不要标记。注意:[-32P]dCTP配制时间不超过一周。 4)若使用的是Oligo(dT)引物则在42℃孵育60分钟,若使用的是随机六聚体引物则在37℃孵育60分钟。 5)将两管溶液分为标记的和未标记两种,放在冰上,添加95l的50mM EDTA溶液到标记管中(示踪者),总体积为100l,示踪管可用于核素掺入实验以及凝胶分析实验。 6)利用未标记管中的第一链产物进行第二链的合成反应(参照文献4、5)。 5、随酶提供的物品 dNTP mix 10mM 5×Reaction Buffer 6、参考文献 1. Kacian, D.L.(1977) Methods for assaying reverse transcriptase. Meth. Virol. 6 ,143. 2. Krug,M.S.and Berger,S.L.(1987) First-strand cDNA synthesis primed with Oligo(dT).Meth. Enzymol. 152, 316-25. 3. Mierendorf, R.C. and Pfeffer, D.(1987) Sequencing of RNA transcripts synthesized in vitro from plasmids containing bacteriophage promoters. Meth. Enzymol. 152, 563–6. 4. Universal RiboClone cDNA Synthesis System Technical Manual #TM038, Promega Corporation. 5. Sambrook, J. Fritsch, E.F. and Maniatis,T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 8.64.
人有反转录酶吗,有什么作用
没有,人类细胞中没有反转录酶。反转录酶也叫逆转录酶,又称为依赖RNA的DNA聚合酶。反转录酶是一类只存在于部分RNA病毒中、具有逆转录活性、能以单链RNA为模板合成DNA的酶。由逆转录酶催化逆转录合成的DNA称为互补DNA(cDNA)。通常情况下,细胞内的转录是以DNA为模板合成RNA的,所得RNA为信使RNA(mRNA)供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中,要实现自身的扩增,必须具有DNA,因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。人类是DNA生物(除部分RNA病毒外,所有生物都是DNA生物),本身就以DNA为遗传物质,所以不需要反转录酶。
反转录酶放了-80
反转录要-80度的原因是RNA样本高温容易降解。根据查询相关信息显示,RNA样本高温容易降解且必须要冻于-80℃,且不要超过3个月,反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程。
反转录酶的质量控制
1.切口酶:在与200单位酶37oC保温60分钟后,超螺旋质粒保留在90%以上。2.DNase测定:200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于1%。3.RNase测定:200单位酶与50ng3H-RNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于3%。4.第一链cDNA的反应:在标准化的反应中,200单位酶催化从1mg1.2kbRNA或1mg7.5kbRNA将同位素掺入到cDNA中,通过放射自显影,对于1.2kb的RNA,产物cDNA是单一的、全长的条带。对于7.5kb的RNA产物有部分是全长的条带。用这二种RNA放射性转换到cDNA中有12%。5.RNaseH活性:200单位酶与polyA:polydT37oC保温60分钟,释放出的放射性要低于1%。6.物理纯度:在SDS-PAGE上>90%纯。储存缓冲液:20mMTris-HClpH7.5;200mMNaCl;0.1mMEDTA;1mMDTT;0.01%NP-40(一种去垢剂)和50%甘油。反应缓冲液:250mMTris-HClpH8.3;375mMKCl;15mMMgCl2;50mMDTT(以Part#M531A供应)。
反转录酶具有哪些酶活性?( )
【答案】:A、B反转录酶是一种多功能酶,具有依赖于RNA的DNA聚合酶活性、依赖于DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH活性。
反转录酶是逆转录酶吗
反转录酶就是逆转录酶..只是翻译不一样而以..... 英文名称:Reverse transcripatase 由于其执行的功能相当于转录的逆过程,所以有翻译为逆转录酶.而其催化进行的过程是转录的反方向,是从RNA到DNA,所以也有翻译为反转录酶的.其实这两个名称都是指一样的东西
反转录酶的注意事项
反转录酶在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:1、RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。2、引物的选择OligodT选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。随机引物适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。特异性引物特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。
反转录酶的形成哪种化学键?
反转录酶把RNA变成DNA,形成的是磷酸二酯键。
反转录时所需的酶是反转录酶,那不需要DNA聚合酶吗
逆转录酶有三种活性:RNA或DNA作模板的dNTP聚合活性和RNase活性.①DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程.②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子.③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子.逆转录酶本身具有DNA聚合酶活性不需要另加DNA聚合酶了
反转录酶在室温放多久会失活
超过30分钟。根据相关资料查询得知,反转录酶属于RNA酶家族,其活性受到温度、pH、离子强度等因素的影响,反转录酶在室温下存放时间不应超过30分钟,否则会失活,且要在-20℃或更低的温度下储存,避免多次冻融,以确保其活性和稳定性。
有一条mRNA 我想要获得它的互补单链DNA 我该用RNA聚合酶还是反转录酶 为什么RNA聚合
肯定要用反转录酶.RNA聚合酶合成的原料是核糖核苷酸不能合成一条DNA单链
为什么说端粒酶是反转录酶
为什么说端粒酶是反转录酶只要是细胞,就得走向衰老,现代研究表明,细胞的衰老和端粒的变短有关系。端粒就是DNA,随着细胞分裂次数的增多,端粒在不断变短,端粒酶就是组织端粒变短的。然而正常细胞中,端粒酶的活性受抑制,端粒酶是怎么染端粒变长的呢?实际上端粒酶是由RNA组成的,可以根据碱基互补配对逆转形成DNA,使得变短的端粒变长。所以说端粒酶可以逆转录形成端粒,使端粒不减短!
反转录酶放-20有活性吗
反转录酶放-20有活性吗?您好,反转录酶放-20是有活性的,具有DNA聚合酶活性。
反转录酶的作用是
【答案】:C反转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA的酶。分子生物学常用工具酶常见的主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、反转录酶、核酸酶等。C正确,故选C。
反转录酶有什么特点?
反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→MRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?
反转录酶跟逆转录酶是同样的概念,只是翻译不一样而已。反转录酶:(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性:DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
反转录酶的作用是什么?
反转录酶(Reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。多反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性 。①RNA指导的DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。②RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。除此之外,有些反转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与病毒基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。反转录酶的发现对于遗传工程技术起了很大的推动作用,目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板,在反转录酶的作用下,合成出互补的DNA(cDNA),由此可构建出cDNA文库(cDNa library),从中筛选特异的目的基因,这是在基因工程技术中最常用的获得目的基因的方法
反转录酶的作用是什么?
反转录酶是能促使将遗传信息由RNA传递给DNA的酶,亦叫逆转录酶。此酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶,它以RNA为模板催化合成DNA。1970年从致癌RNA病毒中发现了反转录酶,并认为此酶与病毒的致癌性质有关。反转录酶也分布于某些正常细胞和胚胎细胞。反转录酶的发现表明不能把生物的遗传信息由DNA→mRNA→蛋白质绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到DNA。它促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,已成为研究这些学科的有力工具。
逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?
反转录酶跟逆转录酶是同样的概念,只是翻译不一样而已。反转录酶:(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性:DNA聚合酶活性;以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高 。RNase H活性;由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子 。DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。