PCR技术中是否需要ATP

dttp的中文名称是脱氧胸苷三磷酸。脱氧胸苷三磷酸是一种治疗艾滋病的药品。适应症：本品适用于成年或6个月以上儿童较严重的艾滋病毒感染者或对齐多呋定不能耐受者及治疗期间有明显的恶化的艾滋病人。用量用法：体重在50～74kg者推荐剂量：片剂：每12小时服200mg；缓冲粉末剂：每12小时服250mg。对体重在50kg以下、74kg以上的成年病人和儿童，其推荐剂量可按每日每平方米体表面积200mg酌情增减。注意事项1、有些病人可出现麻刺感、灼烧感、疼痛、手脚麻木；亦有恶心、呕吐、腹痛、失眠、药疹、瘙痒的症状。少数病人呈忧郁、口炎、关节炎肝药酶升高。2、有胰腺炎或酒精中毒病史者忌用。3、使用本品期间应避免与已知对胰腺有毒性的药物（静注戊烷米）合用。4、本品应空腹时给药，除饮水外，服药前1小时或服药后2小时不宜吃或饮用其他东西。5、在服用本品2小时内，不能联用四环素、氟奎诺酮等。在服用本品前2小时避免用酮康唑，以免产生相互作用。6、本品不能与水果汁或其他含酸液体相混合，液体必须搅伴2～3分钟，直至缓冲粉末剂完全溶解，并且应立即饮下全部药液。片剂必须充分咀嚼、手工碾碎或分散在水中才服用。

dTTP在生物化学里是指脱氧胸苷三磷酸，它是由1 分子脱氧核糖、1分子胸腺嘧啶和3分子磷酸基团组成，结构与ATP相似，把ATP中的核糖换成脱氧核糖，腺嘌呤换成胸腺嘧啶就是dTTP。

DNA在复制的时候原料是dNTP的原因是：在 DNA 复制过程中，dNTP 的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的 dNMP，同时和上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为 DNA 聚合酶继续工作提供了能量。dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。

DCTP：脱氧胞苷三磷酸 DATP：三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸 DGTP：脱氧鸟苷三磷酸三钠 DTTP： 脱氧胸苷三磷酸

就是DNA中的C,A,G,T,这些会在大学的生物化学中。只是它们这样些更加的完整

你问的是四种脱氧核糖核苷酸吧，脱氧核糖核苷酸都是只有一分子的磷酸的，所以应该是d-GMP,d-AMP等等。M代表只有一个磷酸，D代表有两个磷酸，如ADP，T代表的是三个磷酸，如d-ATP,与ATP的区别就在前者含有的是脱氧核糖，后者含有的是核糖，后者是直接的能源物质。

这个方法是跟尿嘧啶糖苷酶（UNG）一起用的,先在PCR产物中引入DUTP,再用UNG去掉产物链中U的碱基,从而使它不能作为另一个PCR的模板.

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（三磷酸脱氧核糖核苷）的缩写。是dATP, dGTP, dTTP, dCTP的统称。在生物DNA合成，以及PCR聚合酶链反应中起原料作用。。

选BA DNA扩增过程需要ATP提供能量。。。。A正确C 80---100之间，DNA结构解解体，，降温又会结合的 此过程RNA转录D 正确

目的是为了区分原始模板和扩增产物，只有扩增产物中会含有U含U的扩增产物因为可以被UNG酶降解，从而实现一些特定目的

首先，DNA聚合，即复制，是DNA聚合酶催化进行的一个化学反应。因此，DNA聚合酶的特殊结构决定其底物。也就是说DNA聚合底物是dNTP而不是dNMP是DNA聚合酶的特异性决定的。当然，DNA聚合是需能的反应，而dNTP的高能磷酸键正好可以为聚合提供能量。至于怎样脱掉两个磷酸，实际上就是在形成磷酸二酯键的时候水解掉一分子的焦磷酸就可以了。

PCR扩增技术中用于当原料和提供能量

高中生物pcr技术中出现的dtnp是什么意思pcr(聚合酶链式反应）是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温（经常是60°c左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至dna聚合酶最适反应温度（72°c左右）,dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5"-3")的方向合成互补链.引物i和引物ii局部发生碱基互补配对这时引物就不能和单链结合,导致dna不能合成.课本中一对碱基互补不影响后续.

GTP: Guanosine-5"-triphosphate 三磷酸鸟[嘌呤]苷cAMP: 3"-5"-cyclic adenosine monophosphate 3",5"-环腺苷一磷酸ATP: adenosine triphosphate 三磷酸腺[嘌呤]苷dCDP: 2"-deoxycytidine diphosphate 2‘-脱氧胞（嘧啶）苷二磷酸dTTP: deoxythymidine triphosphate 2‘-脱氧胸（腺嘧啶）苷三磷酸UDP: uridine diphosphate 二磷酸尿(嘧啶)苷d 表示“脱氧”c 表示“环”状

TTP、TDP、TMP均不存在d表示的是脱氧

存在

（1）取囊胚中滋养层细胞进行性别鉴定，这样不会破坏胚胎．利用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件：模板（目的基因）、原料（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、一对引物、热稳定DNA聚合酶等．用SRY特异性探针对扩增产物进行检测，若形成杂交带，则说明其含有SRY基因（位于Y染色体上性别决定基因），则胚胎的性别为雄性． （2）胚胎甲为囊胚，对囊胚进行分割时，需注意将内细胞团均等分割，否则会影响胚胎进一步发育． 故答案为： （1）滋养层　 dATP、dTTP、dGTP、dCTP SRY 雄性 （2）将内细胞团均等分割

dUTP，dATP、dTTP、dCTP或dGTP之间的不同只在其中的碱基组成不同 ，而Dig探针只能是于尿嘧啶识别结合，而不能于其他碱基结合。 …………………… ……………………………… 更多具体材料请参考： 核酸印记 http://product.bio1000.com/100171/

脱氧尿嘧啶核苷三磷酸的意思。dUTP通过间臂联结类固醇半抗原异羟基洋地黄毒苷酸基，形成Dig-dUTP，杂交反应后，杂交的靶DNA通过酶联免疫法与一个抗体复合物抗异羟基洋地黄毒苷配基碱性磷酸酶复合物（Dig）Ap结合，接着在5-溴-4氯-3-吲哚磷酸盐（X-磷酸盐）和硝基四氮唑蓝（NBT）存在下，由酶催化反应，在杂交部位形成蓝紫色带或颗粒。扩展资料dutp的应用：Thermo Scientific dUTP（2"-脱氧尿苷5"-三磷酸）是高度稳定的核苷酸，以100 mM水溶液的形式提供，用NaOH滴定至pH 7.3-7.5。核苷酸纯度大于99%，无核酸酶活性，不含人和大肠杆菌DNA。它是为许多不同的分子生物学应用而设计的。参考资料来源：百度百科——非放射性Dig-dUTP

【浓度】20u/ul【性状】悬浮液，重组酶。末端转移酶(Terminal transferase,TdT)是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3"羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物。一般操作是:先在载体上打开一单个位点，把它与末端转移酶和某一dNTP(如dATP)一起保温以使添尾，另一待插入的外源DNA片段则用互补的用同法添dNTP(dTTP)用同法添尾。接着使上述两种都接上互补单链尾的DNA片段彼此退火，使形成一杂合载体来转化受体菌。杂合载体中的裂隙或切口可被受全菌所修复。随酶提供10×反应缓冲液和25mMCoCl2【来源】一般自牛胸腺中分离。【用途】生化研究。催化DNA的3"末端添加同聚物;DNA的3"末端标记。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。形成DNA骨干如前所述，DNA的主链由交替的磷酸和脱氧核糖基团组成。在dna的一条链上的相邻核苷酸之间形成的键是磷酸二酯键。当一个脱氧核糖的5"或3"碳原子与第一个磷酸上的氧键合时形成。这是从每个核苷酸中除去二磷酸的缩合反应。这就是为什么DNA中发现的核苷酸实际上是dNMPs（脱氧核糖核苷酸单磷酸酯）。

dntp是deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称。d指deoxidize，deoxy-，脱氧。N代指含氮碱基，代表A，T，G，C，U等中的一种。TP指triphosphate，三磷酸盐。dNTP在生物DNA，RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR，Real-time PCR）中起原料作用。dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制，如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的，都知道ATP含有高能磷酸键，dNTPs也含有高能磷酸键，这样就可以在PCR体系中提供能量。在PCR反应中，使用低dNTP浓度，可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中，4种dNTP的浓度为20μmol每L，可基本满足合成2.6μg，DNA或10pmol每L的400bp序列。使用低dNTP浓度（每种dNTP浓度为2μmol每L)，能够高度灵敏地（1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate(三磷酸脱氧核糖核苷酸)的缩写。是dATP, dGTP, dTTP, dCTP的统称，N代表变量指代A、T、G、C、U中的一种。d：deoxy ，“脱氧”的意思。

这个方法是跟尿嘧啶糖苷酶（UNG）一起用的，先在PCR产物中引入DUTP，再用UNG去掉产物链中U的碱基，从而使它不能作为另一个PCR的模板。

dNTP 是“脱氧核糖核苷三磷酸”的英文缩写。其英文原文为：deoxy-ribonucleoside triphosphate。dNTP包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP等在内的统称。其中，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。

D dAMP是脱氧核糖核苷酸中的腺苷酸 DNA复制的时候需要4种脱氧核糖核苷酸

提供。dATP含有高能磷酸键，能为细胞的某些反应提供能量。dATP、dGTP、dTTP、dCTP这四种都是脱氧核糖核苷酸,都是合成DNA的原料。

dsDNA:double-stranded DNA, 双链DNA。指DNA分子是由两条链组成的，这两条链通过碱基配对原则结合在一起。 比如，大多数生物的细胞核内的DNA就是dsDNA。ssDNA：single-stranded DNA, 单链DNA。两条链解开以后即成为单链DNA。dNTP：三磷酸脱氧核糖核苷酸，是dATP, dGTP, dTTP, dCTP的统称。是含有高能磷酸键的脱氧核糖核苷酸，能直接用于合成DNA。LB培养基：LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。是最常用的经典的培养工程菌（大肠杆菌）的培养基。RAPD：随机扩增多态性DNA标记,其基本原理与PCR技术一致。 RAPD 技术是建立在PCR (Polymerase Chain Reaction)基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。DNA本身是带负电的，这是因为其上的磷酸基团本身是带负电的。应该说蛋白质在高于等电点的PH溶液中带负电荷

1生命活动直接能源只有ATP吗？ 应该说细胞中生命活动的直接能源主要是ATP，但ATP并不是所有生命活动的唯一能源。在糖异生过程中草酰乙酸在磷酸丙酮酸羧化激酶的作用下生成磷酸烯醇式丙酮酸，是利用GTP(三磷酸鸟苷)水解供能。如2分子乳酸经糖异生转变为1分子葡萄糖需消耗4分子ATP和2分子GTP。绿色植物光合作用的光反应产生NADPH和ATP，NADPH既是还原C3的还原剂又可作为还原过程中的能源被利用。DNA复制时，dATP、dGTP、dCTP、dTTP既作为DNA半保留复制的原料，也作为复制时的部分能源来利用的。在蛋白质合成中，肽键的形成和延伸过程要利用GTP作为能源。 《生物学教学》2009年第2期

你问的应该是dNTP吧？PCR扩增中合成新的DNA链的原料，在引物结合模板以后，聚合酶识别双链启动扩增，这个时候就要靠dNTP合成出新的单链，达到目的基因扩增的作用。百度百科的解释比较全面：dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。http://baike.baidu.com/link?url=IQe1KfsUvjBWHPkPc5IOpPtUr59-TYxRfMyduHIBnIH_1bKK3R7BfNeZCCLhZfpt6IZSHb7nrF85tIU-6gDD4a

简单的说就是一段基因在染色体中重复的次数，就是一段特定的碱基序列在染色体中重复的次数，该序列只有一个叫单拷贝，有多个该序列就叫该序列的多拷贝。真核比原核多很多。意义推测是突变时当“备胎”做到有备无患吧

dAMP。DNA的基本单位：dAMP、dGMP、dCMP、dTMP（四种）

【答案】：D本试题考核DNA主要碱基组成。DNA碱基组成为A、G、C和T，自然合成时所需要的几种三磷酸脱氧核苷酸应为dATP、dGTP、dCTP和dTTP，而不需要dUTP。试题问“体内合成DNA不需要”的自然是dUTP，故正确选择是答案D。试题反应模式或历届考试经验表明，很多考生会发生“选择E答案”的错误。这种错误可能源于考生对“脱氧胸腺嘧啶核苷酸dT-MP是由脱氧尿嘧啶核苷酸dUMP经甲基化生成”概念过分强烈。须知，这里问的是“合成DNA的原料”，而非“核苷酸合成的原料”，应注意区别。

4xdNTP是四种dNTP（dATP, dGTP, dTTP, dCTP）的统称。dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸而不是脱氧核糖核苷酸）的缩写，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR中起原料作用。

dNTP是一个统称，其中N可以为尿嘧啶(U)，也可以为胞嘧啶(C)，鸟嘌呤(G)，腺嘌呤(A)，胸腺嘧啶(T) dUTP在RNA中，dTTP在DNA中

如果你指的是PCR技术的话，反应需要的物质：需要模板（要扩增的DNA）、引物（RNA,前后引物）、底物（dNTP,即dATP,dTTP,dGTP,dCTP）、DNA聚合酶（耐热，常用的是Taq酶）、合适的缓冲液。反应体系为：变性温度在90度以上，退火温度在52度左右，延伸温度在72度左右。聚合酶链式反应，简称PCR。又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。 由美国科学家PE（Perkin Elmer珀金-埃尔默）公司遗传部的Dr. Mullis发明，由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义，因此Mullis获得了1993年化学诺贝尔奖。 是一种体外快速扩增DNA的方法，用于放大特定的DNA片段，数小时内可使目的基因片段扩增到数百万个拷贝的分子生物学技术。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，常用于pcr原料。dNMP脱氧核糖核苷酸。包括dAMP,dGMP,dCMP,dTMP

ATP是细胞内的主要磷酸载体，ATP作为细胞的主要供能物质参与体内的许多代谢反应，还有一些反应需要UTP或CTP作供能物质，如UTP参与糖元合成和糖醛酸代谢，GTP参与糖异生和蛋白质合成，CTP参与磷脂合成过程，核酸合成中需要ATP、CTP、UTP和GTP作原料合成RNA，或以dATP、dCTP、dGTP和dTTP作原料合成DNA。?作为供能物质所需要的UTP、CTP和GTP可经下述反应再生：?UDP+ATP→UTP+ADPGDP+ATP→GTP+ADPCDP+ATP→CTP+ADP?dNTP由dNDP的生成过程也需要ATP供能：?dNDP+ATP→dNTP+ADP?

dATP既是合成脱氧核苷酸的原料，有因为有两个高能磷酸键因而可以在合成的同时供能，而dAMP效率不及dATP

用限制性内切酶制备T载体陆哲明,柯　杨△[北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室,北京　100034][关键词]T载体;DNA限制酶类;遗传载体;基因扩增[摘　要]目的:介绍一种制备T载体的方法。方法:用限制性内切酶XcmⅠ酶切,在两端产生T末端,制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。结果:PCR产物直接和T载体连接,用常规氯化钙法制备的感受态菌转化,对转化子提取质粒进行酶切鉴定,证明阳性率达80%。结论:制备T载体过程简单,质量稳定,产量高,并可扩增等优点。[中图分类号]Q342　　[文献标识码]A　　[文章编号]1671 167X(2002)06 0726 03 PCR是目前体外DNA扩增最常用的方法,对PCR产物进行快速有效的克隆是开展下游许多实验所要求的。目前TA克隆是一种快速的,一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的方法。而商品化的TA克隆系统由于售价高,质量批次间不稳定且无法进行循环使用等缺点,在实际应用中,限制了T载体的广泛使用。本文介绍了一种简单、高效,可在普通实验室中制备并可反复扩增的T载体制备方法,并经PCR产物克隆,酶切鉴定,得到了非常理想的结果。1　材料与方法1.1　制备SuperpGEM Teasy载体(简称pSP Teasy载体)1.1.1　制备pSP Teasy环化载体　以线性化的pGEM Teasy载体(Promega为模板,两边设计引物:F:GAATAAGCTTGTTCCCAGGTCAAGACTGGATCACTAGT 　　　　 HindⅢ　　　　　　XcmⅠGAATTCGCGR:GAACAAGCTTATTCCCAGTCTAGACCTGGATCGAATTC 　　　 　HindⅢ　　　　　　XcmⅠCCGCGGCCGCCA引物的5′端各插入HindⅢ和XcmⅠ位点,3′端与模板互补,在PfuDNA聚合酶的作用下扩增,扩增产物经HindⅢ酶切后,自身环化,挑选能被HindⅢ酶切的克隆即为阳性克隆,经测序进一步证实。1.1.2　制备pSP Teasy线性化载体　按照标准酶切体系,用XcmⅠ(NEB)酶切,酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后,玻璃奶回收,测量吸光度值(D260),调整质量浓度至50mg·L-1,此载体可直接用于克隆。3　讨论PCR技术是目前体外扩增DNA最常用的方法。有时需得到克隆化的DNA以便于杂交分析、高质量测序及从复杂PCR产物中分离目的片段。常用的方法有非定向克隆和定向克隆。定向克隆需在引物5′端引入限制性内切酶位点,PCR产物经适当内切酶酶切后产生粘端,连接到相应载体。非定向克隆有两种策略,一种是平末端克隆,在klenow和T4DNA聚合酶作用下修平PCR产物末端,但连接效率仅为粘端连接的1/50,且自身环化率高[1];另一种是TA克隆。TA克隆是一种快速的,一步到位的非定向克隆法,可以把PCR产物直接插入到质粒载体。TA克隆系统利用TaqDNA聚合酶的末端转移酶活性,在扩增DNA3′末端非模板依赖地加上一个核苷酸,通常为腺苷酸[2]。这个3′A突出端被用于把PCR产物插入到插入位点有一个3′T突出端的载体。制备好的载体,其关键部分是带有3′T突出端的线性分子。目前制备3′T载体的方法是先用平末端限制性内切酶(如EcoRⅤ)酶切载体,再用TaqDNA聚合酶在仅有dTTP的情况下,72～75℃反应,在3′末端添加一个T[1,3]。但是,实际反应过程中,由于3′末端加T为非优先聚合核苷酸,仅部分的3′端可添加T,或者有少量可能添加一个以上T,造成载体在克隆过程中自身环化高,必然增加筛选阳性克隆的难度。另外,每次生产T载体产量有限(一般为1μg),不适于大规模生产,造成批次间质量差异大。即使商品化TA克隆试剂盒也存在阳性率低和质量不稳定的缺点。因其价格昂贵,并且无法进行循环使用,在普及上存在一定困难。利用限制性内切酶制备T载体利用限制性内切酶特异性强,一次酶切产量高,质量稳定,易于操作等特点。在内切酶家族中,有一类称可变酶,它们的识别序列中的一个或几个核苷酸是可变的,如本文采用的XcmⅠ,它识别序列见图3a,在构建pSP Teasy载体时,利用其中间序列可变,在靠近T7启动子端,设计了XcmⅠ的识别序列见图3b,而在靠近SP6启动子端XcmⅠ的识别序列见图3c,这样在XcmⅠ酶切后,其剩余的序列如图1,在3′端分别产生T。经查NewEnglandBiolabs公司的目录,符合上述特征的酶列于表1。 　　我们在两个XcmⅠ之间引入HindⅢ位点有下列优点:(1)在构建pSP Teasy时提供方便;(2)经HindⅢ酶切后,可以防止载体中的XcmⅠ位点不完全酶切造成的自身环化;(3)两个XcmⅠ位点之间,提供保护的碱基,便于XcmⅠ酶切。用于克隆的PCR产物在连接前需经琼脂糖凝胶电泳,如条带锐利,则一般无需纯化即可直接用于连接;如产物有非特异扩增或引物二聚体浓度较高,最好先用低熔点胶或玻璃奶法纯化。如果扩增用具有保真功能的聚合酶,如PfuDNA聚合酶、PwoDNA聚合酶或TliDNA聚合酶,由于它们有3′～5′的外切酶活性,则PCR产物为平末端,需经纯化后用TaqDNA聚合酶在dATP存在下72℃加腺苷酸尾15～30min,即可达到相同效果。插入片段(PCR产物)与载体摩尔比一般要求在3∶1～1∶3之间,但按笔者经验,摩尔比不经优化亦可产生较好克隆效果,可能与pSP Teasy在原理上无法自身环化有关。pSP T是在Promega公司pGEM Teasy载体基础上构建而成的,它具有原载体的优点[4]:(1)用T7RNA聚合酶或SP6RNA聚合酶可正反两方向体外转录RNA;(2)载体克隆位置的两侧各有EcoRⅠ、NotⅠ和BstZⅠ等酶切位点,便于用单一酶切鉴定;(3)T7、SP6和M13等通用序列,便于测序。新的pSP Teasy不仅保留原载体所有的优点外,还具有(1)末端加有T的载体含量高,因为以往所加T为合成反应添加,不能保证每个末端均有T。而用内切酶法,利用其特异性识别酶切位点的特点,并经HindⅢ处理XcmⅠ酶切不完全的载体,则在原理上保证自身无法环化且均能产生T末端;(2)由于采用内切酶法,保证了质量的稳定性;(3)产量大,每次可产生10～20μg,而经典方法仅1～5μg;(4)方法简单,成本低廉,适合普通实验室制备。只需一步酶切,纯化后即制备完毕,步骤简单且耗时少。而传统方法需经酶切,纯化,加T,再纯化等步骤;(5)环化T载体可以扩增后循环使用。以上特有优点保证了克隆效果稳定,阳性率高。(a)CCANNNNN NNNNTGGGGTNNNN▲NNNNNACC(b)CCAGGTCT AGACTGGGGTCCAGATCTGACC(c)CCAGGTCA AGACTGGGGTCCAG▲TTCTGACC(a)RecognitionsiteofXcmⅠ;(b)5′ endrecognitionsiteofXcmⅠ;(c)3′ endrecognitionsiteofXcmⅠ.图3　在不同部位XcmⅠ识别序列Figure3　RecognitionsequenceofXcmⅠatdifferentsite

1、磷酸二酯键是一种化学基团，颂斗指一分子磷酸与两du个醇（羟基）酯化形成的两个酯键。磷酸二酯键成了两个醇之间的桥梁。2、磷酸二酯键是相邻的核苷酸（核糖核苷酸或脱氧核苷酸）相互连接成核苷酸链时而形成的化学基团，类似于相邻的氨基酸通过脱水缩合形成多肽时而形成的连接键即肽键。3、醇与羧酸或含氧无野慎磨机酸能够发生酯化反应产生酯，同时形成的连接键称为酯键。磷酸二酯键在实质上是一个磷酸与相邻的两个五碳糖（核糖或脱氧核糖）的羟基（-OH）通过酯化孝扒反应形成的两个磷酸酯键而构成的连接键。查看原文查看原文查看原文查看原文查看原文查看原文查看原文查看原文查看原文

T-A克隆法就是用改良碱裂解法抽提pBluescript SK(+)质粒，用EcoRⅤ将pBluescript SK(+)质粒切成平端，利用Taq DNA聚合酶及dTTP制备pBluescript SK(+) T-A载体. 将β-actin cDNA片段克隆入自制的pBluescript SK(+) T-A载体，经EcoRⅠ及HindⅢ双酶切得到与设定长度一致的β-actin cDNA片段.对PCR产物进行克隆是分子生物学领域以及基因工程领域里常用的方法. 以前对PCR产物进行克隆实验, 采用的方案有以下几种：一是将PCR产物切成两端平齐的双链DNA，然后克隆到切成平端的质粒载体上, 或在PCR产物的两端加上人工接头(linker)，经限制性内切酶处理后, 克隆到质粒载体的相应位点上；二是在设计PCR引物时, 使PCR引物的5′端含有可切成粘性末端的限制性内切酶酶切位点的识别序列，在PCR反应结束时, 将PCR产物再用相应的限制性内切酶进行处理，以便于克隆到含相应限制性内切酶酶切位点的质粒载体上. 这两种方法虽然有效,但均较繁琐. 本实验的目的在于利用pBluescript SK(+)质粒、Taq DNA聚合酶及dTTP自制T-A克隆载体, 对从RT-PCR中得到的β-actin cDNA片段进行克隆.1 材料与方法1.1 试剂 Taq DNA聚合酶、T4 DNA连接酶、EcoRⅤ、EcoRⅠ、HindⅢ等限制性内切酶及X-gal、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)、PCR扩增β-actin片段所用试剂等来自Promega公司,质粒载体用pBluescript SK(+), 来源于中国科学院细胞生物学研究所，琼脂糖由Sigma公司进口分装, 柱离心式胶回收试剂盒来源于Qiagen公司, 扩增β-actin cDNA片段长度为870 bp.1.2 DH5α感受态大肠杆菌的制备 按Cohen提出的方法〔1〕, 用0.1 mol/L CaCl2制备感受态细菌.1.3 自制T-A克隆载体的方法 将20 ng pBS质粒转化于自制的DH5α感受态菌, 用改良的碱裂法抽提pBS质粒. 取5 μg pBS质粒,用限制性内切酶EcoRⅤ切成平端后, 再用0.8%的琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切是否完全(图1),用柱离心式回收试剂进行回收. 在40 μl反应体系中, 加入 1 μg切成平端的pBS质粒, 2U Taq DNA聚合酶, 10×PCR反应缓冲液 4 μl, 10 mmol/L dTTP 4 μl, 75℃水浴2 h, 即成为3′端含单个胸腺嘧啶核苷酸(T)尾的开环T-A克隆载体.1：DNA分子质量标准ⅩⅥ(250 bp ladder, 0.25～3.0 kb);2，3：用EcoRⅤ酶切的pBS质粒；4：没有酶切的pBS质粒.1.4 β-actin cDNA片段的T-A克隆 取自制的T-A克隆载体20 ng，按插入DNA片段与载体摩尔数之比(3∶1)的比例，在T4 DNA连接酶的作用下,在10～14℃连接48 h,然后转化于自制的DH5α感受态菌,在含X-gal/IPTG的LB固体培养基上进行蓝白斑筛选并对抽提质粒后进行酶切鉴定.2 结果和讨论 对β-actin cDNA片段,从用T-A克隆载体进行克隆得到的蓝白斑中挑选1个蓝斑6个白斑,进行质粒提取及酶切鉴定.结果显示,从6个白斑中提取的质粒用限制性内切酶酶切后得到了与设定长度一致的β-actin cDNA片段(图2). 从含X-gal/IPTG的LB固体培养基上的蓝白斑筛选结果可以看到, 用自制T-A克隆载体进行克隆时，蓝斑较少而白斑较多(图3)，且从6个白斑中提取的质粒用限制性内切酶酶切后都含有插入片段，故对β-actin cDNA片段进行T-A克隆是一简便,而效率高的方法.1：DNA ⅩⅥ(250 bp ladder,0.25～3.0 kb)；2～7：从自制的T-A克隆白斑中抽提的质粒用EcoRⅠ及HindⅢ进行酶切后的结果；8：从克隆的蓝斑中抽提的质粒经EcoRⅠ及HindⅢ酶切后的结果.T-A克隆的原理是基于Taq DNA聚合酶具有非模板依赖性的活性, 可将PCR双链产物的每一条链的3′端加入单A核苷酸尾, 在70～75℃时，Taq DNA聚合酶的这种活性尤为显著, 而常规的PCR反应程序最后的步骤均为72℃延伸7～10 min, 故可满足PCR产物3′端为突出的单A核苷酸尾; 另一方面,在仅有适量的dTTP存在的情况下, Taq DNA聚合酶也可将切成平端的质粒的3′端加入单T核苷酸尾, 故用Taq DNA聚合酶也造成了切成平端的pBS质粒3′端产生了突出的单T核苷酸. PCR产物的3′末端单A核苷酸尾与切成平端的pBS质粒的3′末端突出的单T核苷酸实现了T-A互补, 称为T-A克隆, 它实际上是一种粘性末端连接, 因而具有较高的连接效率. 从一些生物工程公司(如美国的Invitrogen公司或Promega公司)可以购到已制备好的T-A克隆载体, 其制备原理与自制T-A克隆载体方法相似〔2,3〕, 但这类载体价格昂贵, 不利于广泛推广, 而且这种载体反复冻溶后连接效率也会降低;另一方面Invitrogen公司等提供的这类载体量较少, 进行大量的PCR产物克隆需用大量的T-A克隆载体,不能满足大量克隆的需要, 而我们自制的T-A克隆载体, 不但应用pBS质粒可行, 应用其他质粒也同样有效, 且操作简便, 可大量制备, 连接效率足以满足进行克隆操作的需要, 故值得推广应用. 另外,我们也将RT-PCR 扩增得到的含有369个bp的β-LH cDNA片段克隆入自制T-A载体，经自动测序证实，插入片段为370 bp（PCR产物3′端加入了一个A），序列全长与设计的PCR产物序列及大小完全一致. 在本实验中, 我们对用RT-PCR扩增的β-actin cDNA片段进行了T-A克隆,对一般的PCR产物应用此方法也同样可行.作者单位：上海医科大学生理学教研室

你好！DNA的基本组成单位是dNMP一分子碱基一分子脱氧核糖一分子磷酸你说的dNTP是DNA复制（生物合成）时的原料~~没审清楚题吧呵呵仅代表个人观点，不喜勿喷，谢谢。

在abi3730测序仪中，当激光照射放射性标记时，标记会发出荧光并在ccd上留下电信号。datp,dgtp,dctp,dttp四种荧光各不相同，所以通过分析不同的电信号就可以测出dna的序列。放射性标记只存在于dntp上。

DNA的生物合成有两种——（1）生物体内DNA 的自我复制,（2）某些有逆转录酶的病毒,如HIV寄生在宿主细胞后通过逆转录获得DNA.DNA 的人工合成也有两种——（1）以DNA复制为原理的多聚酶链式反应,PCR技术,实现体外的DNA扩增（注意是扩增,而不是从无到有,首先是有一个DNA分子提供模版的）；（2)用DNA合成仪,从无到有的生成一些小分子的DNA（这要求已知DNA的碱基排列顺序,然后将顺序输入到合成仪中,再在仪器内添加相关合成条件,如原料,酶等） 你具体问得是那种生物合成和那种人工合成的区别呢?我估计你是想问DNA复制和PCR扩增的区别,先给你分析这两个吧~（1）原理一样,都需要模版,都遵循碱基互补配对原则；（2）各步骤具体条件有一定差异.解旋：体内DNA复制,需解旋酶和ATP,有模版DNA；PCR没有使用解旋酶,而是通过高温（90~95℃）使氢键打开DNA模版链解旋,也没有加入 ATP；子链的生成：体内需RNA引物,DNA聚合酶,四种游离的脱氧核糖核苷酸（dAMP、dGMP、dCMP、dTMP）,ATP等；PVR也需引物,不过有RNA也有用DNA的,将解旋时的高温将至55~60℃使引物和模版结合,再加热至70~75℃,耐高温（热稳定）的DNA聚合酶（Taq酶）从引物起始进行互补链的合成,四种游离的脱氧核糖核苷酸作原料（dATP、dGTP、dCTP、dTTP,注意,这些原料具有高能磷酸键可以供能）.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

DATP是指三磷酸脱氧腺苷。组成：一分子脱氧核糖，三分子磷酸和一分子腺嘌呤组成的化合物，其中三个磷酸分子连在一起具有高能磷酸键。用途：生物用dATP来合成DNA。DNA中主要有四种类型脱氧核苷酸：dAMP、dGMP、dCMP和dTMP，合成前身物则是dATP、dGTP、dCTP和dTTP。

此标记反应体系的主要成分有DNA酶I，大肠杆菌DNA聚合酶，3种三磷酸脱氧核糖核苷酸如dATP、dTTP、dGTP，一种核素标记的核苷酸32P—dCTP，待标记DNA片段。在极微量DNA聚合酶的作用下，在双链DNA分子的一条链上随机切开若干个缺口而不是切断DNA或将其降解，然后，大肠杆菌DNA聚合酶I在切口的3"—OH端逐个加入新的核苷酸，同时由于该酶具有5，—3"外切酶的活性，它同时切除5，端游离的核苷酸，3"端核苷酸的加入和5，端核苷酸的切除同时进行导致切口沿着DNA链移动。新链核苷酸的合成是以另一互补链为模板，按碱基互补的原则合成，所以新旧链的核苷酸序列完全相同。由于反应体系中含有一种或两种核素标记的单核苷酸，使新合成的链带有核素标记，所以缺口平移实际上是核素标记的核苷酸取代了原DNA链中不带核素的同种核苷酸。DNaseI是在两条链的不同部位随机打开缺口，从而使两条链都被核素均匀地标记，使得标记的DNA具有较高的放射比活性。

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