免疫组化做得是基因表达还是基因突变

免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。

问题一：免疫组化是什么意思 免疫组化就是看看癌肿细胞是什么类型的。因为不同类型肿瘤对放化疗敏感程度不同。 问题二：什么是免疫组化检查 免疫组化是免疫组织化学方法的简称。临床上的免疫组化检查是指应用免疫学基本原理――抗原与抗体特异性结合，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），并对其进行定位、定性及定量。 乳腺癌诊断过程中的免疫组化检查就是指应用上述免疫组化技术来检测乳腺癌组织细胞中的某些特定蛋白质。这些蛋白质的存在与否，不仅有助于确定肿瘤是哪种类型，还能够为临床医师提供乳腺癌分子分型的重要依据。这些免疫组化的检测结果反映了乳腺癌的生物学特点，具有非常重要的预测预后意义与指导治疗的价值。每一位患者的肿瘤乃至同一肿瘤的不同部分，其免疫组化的表达可能都不同。因此，乳腺癌的治疗方案不是人人相同，做免疫组化检查正是为了了解肿瘤是否具备某些特性，用以针对性地制订治疗方案，以达到最好的治疗效果。免疫组化检查结果也是评估患者复发转移风险的重要指标之一，临床医师根据这些结果综合判断手术后的后续治疗是否需要化疗、内分泌治疗或靶向治疗。如果需要化疗，那么什么药、怎么用药、用几个疗程等等问题。都需要参考包括免疫组化报告在内的各项指标来确定。因此，临床医师在制订治疗方案之前需要阅读免疫组化报告。 问题三：做免疫组化的意思是什么？ 免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学它 是组织化学的分支它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术故其准确性比较高免疫组化是根据阳性的指标来诊断肿瘤的免疫组化比起镜检诊断更加准确客观您上面有CK（++）CK10（+++） Vim(+++) 这三项是阳性如果取自肾脏约两公分的包块说明可能与肾脏有关但这个要由病理科医生来诊断 问题四：什么是免疫组化 免疫组化，是应用免疫学基本原理――抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 问题五：免疫组化结果是什么意思 p16基肿瘤抑制基p16基发突变缺失导致细胞异增殖终形肿瘤该病p16基阳性提示系恶性肿瘤 p53基抑癌基物体内种抑制细胞转变癌细胞基功能降癌症能发 Ki-67作细胞增殖标记物病理报告指数高低与许肿瘤化程度、浸润、转移及预密切相关数值越高恶性程度越高 CerbB-2基种原癌基该病阴性需用赫赛汀 TOP2A基阳性提示细胞增殖S期晚期G2/M期表达增加提示蒽环类药物化疗效（表阿霉素）制定化疗案参考用 ER/PR别雌激素受体孕激素受体提示否需要内泌治疗该病应该做内泌治疗 CK56种基底细胞角蛋白鳞状皮发层细胞、肌皮细胞、间皮细胞阳性腺皮细胞阴性 p40腺癌阳性率 问题六：什么叫免疫组化？ 什么叫免疫组化。 请问是免疫组织化学法，或者是免疫组织化学技术的简写吗？ 问题七：免疫组化是什么意思 免疫组化是目前临床上常用的病理学检测方法，多用于鉴别形态很相似的疾病或肿瘤，确定组织来源及研究肿瘤组织代谢改变，它包括细胞内酶学的变化、糖原的变化、核酸的变化。您的免疫组化检查结果可能是为了检测是否患有恶性淋巴瘤，淋巴细胞反应性增生可能是最后的诊断结果，即在某种因素的 *** 下诱发了淋巴细胞的增生；也可能是淋巴瘤引发的。前者是一个良性的过程，而后者则是恶性疾病。所以，针对您的具体情况应作具体分析。也可以密切观察病情变化。 问题八：免疫组化是什么意思 应用免疫学基本原理――抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 问题九：免疫组化是什么意思 免疫组化就是看看癌肿细胞是什么类型的。因为不同类型肿瘤对放化疗敏感程度不同。 问题十：什么是免疫组化检查 免疫组化是免疫组织化学方法的简称。临床上的免疫组化检查是指应用免疫学基本原理――抗原与抗体特异性结合，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），并对其进行定位、定性及定量。 乳腺癌诊断过程中的免疫组化检查就是指应用上述免疫组化技术来检测乳腺癌组织细胞中的某些特定蛋白质。这些蛋白质的存在与否，不仅有助于确定肿瘤是哪种类型，还能够为临床医师提供乳腺癌分子分型的重要依据。这些免疫组化的检测结果反映了乳腺癌的生物学特点，具有非常重要的预测预后意义与指导治疗的价值。每一位患者的肿瘤乃至同一肿瘤的不同部分，其免疫组化的表达可能都不同。因此，乳腺癌的治疗方案不是人人相同，做免疫组化检查正是为了了解肿瘤是否具备某些特性，用以针对性地制订治疗方案，以达到最好的治疗效果。免疫组化检查结果也是评估患者复发转移风险的重要指标之一，临床医师根据这些结果综合判断手术后的后续治疗是否需要化疗、内分泌治疗或靶向治疗。如果需要化疗，那么什么药、怎么用药、用几个疗程等等问题。都需要参考包括免疫组化报告在内的各项指标来确定。因此，临床医师在制订治疗方案之前需要阅读免疫组化报告。

免疫组化的原理就是通过一些标记物找出肿瘤中表达而正常组织不会表达的蛋白质类物质。你上面所列的P63(+)、Ck8/18(+)就是p16和ck8两种免疫标记蛋白阳性，在送检的标本中有表达，D2-40(-)、Calretinin(-)、CgA(-)、Syn(-)就是阴性不表达，Ki-67(+10%)小部分表达。

免疫组化是病是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，P16基因是一个抑癌基因，可以抑制杀灭肿瘤细胞的增殖。P16基因位于人类的第9号染色体短臂2区1带（9p21），由2个内含子及3个外显子组成，第1外显子由126bp组成，第2外显子由307bp组成，第3外显子11bp组成。免疫组化是先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。扩展资料免疫组化原理免疫组化免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色。因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。参考资料来源：百度百科—免疫组化参考资料来源：百度百科—P16基因

　　ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。　　(一) 原理　　ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。　　(二) 操作步骤　　方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:　　1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。　　2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。　　3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。　　4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。　　5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。　　方法二 用于检测未知抗体的间接法：　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，　　每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。　　↓　　加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔　　中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)　　↓　　于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，　　37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。　　↓　　其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。　　(三) 试剂器材　　1. 试剂　　(1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):　　NaCO3 1.59克　　NaHCO3 2.93克　　加蒸馏水至1000ml　　(2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M　　KH2PO4 0.2克　　Na2HPO4·12H2O 2.9克　　NaCl 8.0克　　KCl 0.2克　　Tween-20 0.05％ 0.5ml　　加蒸馏水至1000ml　　(3) 稀释液：　　牛血清白蛋白(BSA) 0.1克　　加洗涤缓冲液至100ml　　或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。　　(4) 终止液(2M H2SO4）：　　蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98％)21.7ml。　　(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):　　0.2M Na2HPO4(28.4克／L) 25.7ml　　0.1M 柠檬酸(19.2克／L) 24.3ml　　加蒸馏水50ml。　　(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:　　TMB(10mg／5ml无水乙醇) 0.5ml　　底物缓冲液(PH5.5) 10ml　　0.75％H2O2 32μl　　(7) ABTS使用液:　　ABTS 0.5mg　　底物缓冲液(PH5.5) 1ml　　3％H2O2 2μl　　(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。　　(9) 正常人血清和阳性对照血清。　　2. 器材:　　(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。　　(2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。　　(3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。　　(四) 注意事项　　1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。　　2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:　　(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。　　（2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。　　(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。　　(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

是肺鳞癌。P40(+)【抑癌基因】肺鳞癌时阳性。TTF-1(-)【甲状腺转录因子-1】肺腺癌时阳性。NapsiNA(-)肺腺癌时阳性。Ki-67(约70%)【细胞增值的一种标记】70%提示恶性程度高。免疫组化应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。扩展资料：免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。参考资料来源：百度百科-免疫组化

是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

将荧光素标记的已知抗体(或抗原)与切片(印片)中相应抗原(或抗体)直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原(或抗体)。

是病理学诊断方法，尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型；（4）软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；（5）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。（6）为临床提供治疗方案的选择。

被石蜡包埋的组织切片在二甲苯中脱去石蜡并逐级水化后，进行内源性的过氧化物酶淬灭。内源性过氧化物酶可以被甲醇或Zymed"s Peroxo-Block （目录号:00-2115）中的3%的过氧化氢所抑制。说明：非免疫血清用来去除非特异性背景。孵育一抗后，加入二抗，再经过一步冲洗，加入链霉亲和素过氧化物酶藕联物。

DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一，能被催化生成水不溶性的棕黄色产物，能直观地观察到，适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒，试剂盒里的选色液都是配置好直接用的，可以根据实验需要选择不同的颜色

多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理，选用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗抗体，对试剂盒中的荧光染料进行活化，将信号共价结合到抗原上，我们用的是absin品牌有多色荧光免疫组化染色试剂盒

总之，免疫组化技术在医学领域中具有不可替代的重要性。它可以帮助医生更加准确地诊断疾病、制定治疗方案，也可以帮助药物研发人员更加高效地开发新药。我们相信，在未来，免疫组化技术将会得到更加广泛的应用和发展。二、药物研发免疫组化是一种检测技术，利用抗体与特定抗原结合的原理，对组织或细胞中的特定蛋白进行定位和鉴定。在医学领域中，免疫组化技术广泛应用于疾病的诊断和治疗。本文将探究免疫组化在医学领域中的重要性。免疫组化技术可以用于药物的研发和评价。药物研发人员可以利用免疫组化技术检测药物对特定蛋白的作用，从而确定药物的作用机制和疗效。一、疾病的诊断

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）。显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。传统分为三级：轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生按WHO标准：分为三级：CIN1、CIN2、CIN3。按细胞学的TBS诊断标准：癌前病变（SIL）一般分为低度病变（LSIL）和高度病变（HSIL）三者对应关系如下：传统CIN分级TBS标准轻度不典型增生CIN1低度病变（LSIL）。扩展资料：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。参考资料来源：百度百科-免疫组化

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。还可以表达为：p16基肿瘤抑制基p16基发突变缺失导致细胞异增殖终形肿瘤该病p16基阳性提示系恶性肿瘤 p53基抑癌基物体内种抑制细胞转变癌细胞基功能降癌症能发 Ki-67作细胞增殖标记物病理报告指数高低与许肿瘤化程度、浸润、转移及预密切相关数值越高恶性程度越高 CerbB-2基种原癌基该病阴性需用赫赛汀 TOP2A基阳性提示细胞增殖S期晚期G2/M期表达增加提示蒽环类药物化疗效（表阿霉素）制定化疗案参考用 ER/PR别雌激素受体孕激素受体提示否需要内泌治疗该病应该做内泌治疗 CK5∕6种基底细胞角蛋白鳞状皮发层细胞、肌皮细胞、间皮细胞阳性腺皮细胞阴性 p40腺癌阳性率基本原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。分类：免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下：1. 免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.2. 免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究．3. 免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究．作用：标本实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。常用染色方法根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。参考资料百度百科：https://baike.baidu.com/item/%E5%85%8D%E7%96%AB%E7%BB%84%E5%8C%96/10004329?fr=aladdin

做免疫组化前需要注意的方面：1、抗原有无丢失主要看组织切片的新鲜程度，一般切片室温保存超过3-6个月，可能切片内的抗原丢失很严重，此时可以通过重新用石蜡块切片来进一步验证（蜡块需要低温保存）。2、石蜡切片在制作过程中可能因醛基对抗原决定族的封闭，这需要通过抗原修复来充分暴露，从而增加抗原抗体结合反应，提高阳性率，一般用6min*4次中火微波抗原修复，用枸橼酸钠缓冲液。3、注意检查抗体有无选择错误和抗体孵育条件是否不适。4、抗选择单克隆抗体易出现阴性结果，因为灵敏度低但特异性好；一抗的speciesreactivity中无检测组织的种属，这是比较常见的错误；一抗选择rat，而二抗是抗mouse/rabbit等均有可能出现阴性结果。5、抗体孵育时间过短，容易导致阴性结果。一般一抗我建议4℃孵育过夜和37℃复温45min；二抗我一般37℃30min。我不喜欢参照二抗染色试剂盒说明书。6、抗体浓度过低。这是阴性结果的最可能原因。必须提高稀释度，我一般初次做一种新抗体，喜欢先用说明书建议的低浓度和高浓度做一次，然后决定是向高还是低方向摸索。一般先决定二抗的浓度（工作液就好办了，直接滴加），重点摸索一抗的最适浓度。注意：免疫反应中存在前带和后带效应，这提示不是浓度越高，阳性率就越高，反之亦然。7、血清封闭时间也可相应缩短。一般10-30min，但这个时间可以调整，封闭主要是降低切片的总体背景着色。8、细胞通透也不可忽视。许多战友认为石蜡切片一般不需细胞通透，因为切片时可能已经把细胞切开了，但对于胞核蛋白，建议还是通透一下，促进抗体等试剂充分进入参与反应。扩展资料：一、免疫组化的分类：1、免疫荧光细胞化学技术：将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光，从而可以确定组织中的抗原定位或定量。2、免疫酶细胞化学技术：是目前免疫组织化学研究中最常用的技术，基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。3、免疫胶体金技术：就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究。由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究。二、免疫组化的原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。参考资料来源：百度百科-免疫组化

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化

免疫组化P16和Ki67是针对宫颈活检来做的免疫组化项目，做这两项免疫组化的目的是为了区别低级别鳞状上皮内病变和高级别鳞状上皮内病变。如果P16和Ki67阳性都超过鳞状上皮2／3层，那么就是高级别病变，若是两者只是阳性不超过1／3就是低级别，要是都是基底阳性就是正常情况。免疫组化是利用抗原与特异性结合的原理，通过化学反应使标记的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验中常用的抗体为单抗体和多抗体。单抗体是一个B淋巴细胞分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。扩展资料：免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。参考资料：百度百科-免疫组化

免疫组化利用的抗原抗体结合的原理，病理诊断时仅依靠HE染色无法明确诊断肿瘤的病理亚型，尤其是低分化或者需要确定原发病灶的时候，就需要用免疫组化来判断，不同部位不同分化不同类型的肿瘤有特异的蛋白表达！

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。elisa（酶联免疫吸附试验） 用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

抗原反应。免疫组化ncr(-)是免疫组织化学的简称，它是应用免疫学的基本原理，也就是抗原抗体反应，即抗原和抗体能够特异性结合的原理，来确定组织细胞内的抗原（多肽、蛋白质）并对其进行定位、定性以及相对定量进行研究。因此，称之为免疫组织化学技术，简称免疫组化ncr(-)，是病理学检查的常用技术。基本原理就是利用人体内抗体和抗原之间具有高度特异性结合的原理。

两者都是基于抗原与抗体之间能发生特异性结合这一基本原理。免疫组化是对组织标本或细胞标本中的抗原类物质如细胞中的病原体、蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、酶、激素、核酸等进行定位或定量检测，检测材料是石蜡切片或细胞涂片，检测时用到的抗体可以用酶标记，也可以用荧光素标记。酶联免疫吸附试验既可以检测抗原也可以检测抗体，若检测抗体，则酶标板需要用抗原包被；若检测抗原，则酶标板需要用抗体包被。

因为快速液盖膜单独温控是免疫组化检查过程中一种特殊的操作方法。它是确认患者有无癌症的重要依据。因此都是它是确诊前包含在免疫组化检查里一起做的。免疫组化的原理是利用抗体和抗原具有高度特异性结合的原理。

免疫组化：Ck1/3（十），Vimentin（一），CEA（十），CR（少量十），p53（十），syn（一），Ck7（十），CK20（偶十），V_1l_n（一），CDX一2（十）免疫组化：应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。扩展资料：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以期达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。参考资料来源：百度百科-免疫组化

免疫组化染色是一种检查方法，是可以辨别疾病预后情况的，现在的情况如果是是免疫组化预后良好，一般是不会恶变的，只要是积极治疗就可以的

Ki67作为标记细胞增殖状态的抗原，10%弱阳性说明癌细胞增殖不活跃，发展速度较慢，预后较好。Ki67是一种增殖细胞相关的核抗原，功能与有丝分裂密切相关，在细胞增殖中是不可缺少，但其确切机制尚不清楚，Ki67作为标记细胞增殖状态的抗原。免疫组化时一般用于检测细胞增殖程度。阳性说明癌细胞增殖活跃。Ki67(<10% )说明癌细胞增殖不太活跃。扩展资料：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以期达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。参考资料来源：百度百科-免疫组化

免疫组化结果CD68+，此病要三分治疗七分养，需要平时注意规律饮食，禁烟酒，禁生冷酸辣食物，不要暴饮暴食，同时看看中医，中医辨证施治，注意定期复查。

这谁到处贴的实验步骤啊真是害死个人。这只是发贴这个人自己实验室用的两种不同方法罢了，不是正规的分类。两个方法用的试剂是不同厂商生产的罢了，前一个是试剂盒，后一个可能是自己配的，原理和步骤都差不多。LP是厂商取的产品名，没有解释什么意思，跟内容也没有关系，就好像诺基亚3260为什么叫3260不叫阿诺三号对使用者来说没有关系，只有产品功能有关系。这个试剂盒我们也用，不错。产品信息给链接了。

· 标本制备恰当，是免疫组化成功的首要条件· 免疫组化对组织和细胞标本的要求– 保持所检标本原有的结构、形态；– 在原位最大程度地保持待测抗原(或抗体)的免疫活性，既不淬灭、流失或弥散，也不被隐蔽。· 免疫组化的组织和细胞标本，制作流程与常规处理方法基本相同，但对组织、细胞的处理又有其特殊要求及注意事项。– 各种抗原由于其含量及特性的差异对标本处理方式常有不同要求，因此要选择适用于本实验的最佳方法。免疫组化中常用的组织和细胞标本· 组织标本– 石蜡切片– 冰冻切片· 细胞标本– 组织印片– 细胞培养片(细胞爬片)– 细胞涂片 · 石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法– 最大优点是组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；– 石蜡块还能长期存档，供回顾研究。· 石蜡切片制作过程对组织内抗原显现有一定的影响，但可通过某些措施予以改善，因而它是大多数免疫组化中首选的组织标本制作方法。1、取材的特殊要求及注意事项· 标本新鲜：一般在2h以内进行，超过2h，组织将有不同程度的自溶，其抗原或变性消失，或严重弥散。· 取材部位：除取病灶或含待检抗原部位外，还应取病灶与正常交界处，即所取组织切片中同时应有抗原阳性和阴性区，以形成自身对照。– 细胞坏死后，不仅抗原弥散或消失，而且常引起非特异着色，干扰观察，因此取材时应尽可能避开坏死区。1、取材的特殊要求及注意事项(续)· 避免挤压：取材时组织受挤压可使边缘部细胞形态改变并加深非特异着色，因而取材时应使用锋利的刀刃；– 镊取组织动作要轻；– 经窥镜直接钳取的组织往往有过度挤压，观察结果时应有所考虑。2、固定及常用的固定液· 取材后的组织需立刻投于固定剂中– 固定使组织和细胞的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态；– 对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。· 常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。– 醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）– 醇类（常用乙醇）– 其它 （丙酮）(1) 醛类· 甲醛(福尔马林)应用最广– 原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。– 优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。– 缺点：· 甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；· 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍；· 分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。– 注意事项：· 缩短固定时间，降低固定温度(4uf0b0C)，为此组织块不宜过厚。· 改用中性缓冲福尔马林，以pH值7.2～7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液，减少固定液pH的变化。· 固定后充分水洗以减少分子间交联。· 切片在作免疫组化染色前，先经预处理使抗原再现(抗原修复)。· 戊二醛：– 穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。· 多聚甲醛(常用4%)：– 可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。· 主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。(2) 醇类· 最常用的醇类固定剂是乙醇。– 其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。– 优点：穿透性强、抗原性保存好。– 缺点：· 脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。· 乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。(3) 其它固定剂· 丙酮：– 对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少 用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。3、抗原修复——原因· 常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得：– 抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇；– 蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。· 要求：在染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。3、抗原修复——方法· 化学方法· 加热方法– 水浴加热法– 微波照射法– 高压加热法– 酸水解法(1) 化学方法· 主要是通过一些酶的作用，使抗原决定簇暴露。常用的酶有：胰蛋白酶、胃蛋白酶等。– 胰蛋白酶：一般使用浓度为0.05%～0.1%，消化时间为37uf0b0C，10～40min，主要用于细胞内抗原的显示；– 胃蛋白酶：一般使用浓度为0.1%～0.4%，消化时间为37uf0b0C、30～180min，主要用于细胞间质抗原的显示。· 例如：Laminin、CollagenIV(2) 水浴加热法· 将玻片放入装有抗原修复液的容器中，加热至沸腾，持续10～15分钟。– 优点：操作简单、经济，适用于所有的实验室，– 缺点：对封闭牢固的抗原决定簇暴露不理想。(3) 微波照射法· 将玻片放入装有抗原修复液的容器中，置微波炉加热至95℃以上，持续l0～15分钟，冷却后，按免疫组化染色步骤进行。· 此方法由于微波场内极性分子、离子高速运动，撞击交联的网链，使抗原异常的构想恢复正常，且因分子运动产热、效率高、时间短，对抗原再现效果好。(4) 高压加热法暴露抗原· 将玻片浸入抗原修复液内，置高压锅中高压2～3min，可取得极好的效果。· 由于高压下受热均匀，特别使用于大批量标本的染色。(1) 酸水解法· 酸水解可使交联断裂、暴露抗原。· 将玻片浸入1mol/L HCl 溶液中，室温作用20min(温度升高，作用时间缩短)。· 此法能增强特异性染色，降低背景，但需注意水解过度将破坏抗原性及形态结构。加热法的注意事项· 达到规定的温度(92～95uf0b0C以上)；· 维持一定的时间；· 避免切片干涸 (抗原可能完全丢失)；· 加热后必须经过室温自然冷却20～30分钟，使未折叠的蛋白分子链恢复天然构型；· 修复液：– 最常用的是pH6.0的0.01mol/L的枸橼酸盐缓冲液；– 最新研究表明碱性修复液更有效，推荐使用1mM的EDTA缓冲液(pH8.0)。4、载玻片的处理· 抗原修复过程中，由于高温、高压等诸多固素的影响，极易造成脱片。为防止脱片，常用粘附剂处理载玻片。– 新载玻片上有油污，要用洗液浸泡12～24h，自来水冲洗后再用蒸馏水清洗；用绸布擦干或烤箱烤干。清洁的载玻片再用粘附剂处理。· 常用的粘附剂有：– APES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）– Polv-L-Lysine（多聚赖氨酸）– 铬明胶溶液APES(3-aminopropyltriethoxysilane)3-氨丙基三乙氧基硅烷· 现用现配。用纯丙酮或甲醇配制2%APES(v/v);· 将洗净的玻片浸于此液中20～30秒钟；· 取出稍停片刻，再入纯丙酮酮溶液洗去未结合的APES，置通风橱中晾干或60uf0b0C烤箱烤干。Polv-L-Lysine (多聚赖氨酸)· 将清洁玻片浸于100uf06dg/ml(10%w/v)的多聚赖氨酸溶液中(去离子水稀释)，37uf0b0C放置30min，然后60uf0b0C烤箱烘烤1h或室温过夜干燥。装盒备用。铬明胶溶液· 试剂：铬明矾(chrome alum) 0.25g明胶(gelatine) 2.5g蒸馏水 500ml· 先将铬明矾溶解于40uf0b0C少量蒸馏水中，再加入明胶及蒸馏水，可在70 uf0b0C水浴中使明胶溶化，搅拌均匀后，即可使用。如有残渣，可过滤后再用。· 用时稍加溶化，切片浸入2～3min，过夜晾干。 · 冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接切片。· 在切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程。– 缩短了制片时间– 抗原性不受损失· 对稳定性差的抗原，如淋巴细胞表面抗原尤其适合。· 组织冻结过程中，细胞内、外的水分会形成冰晶，冻结的速度愈慢，冰晶颗粒愈大，可严重影响组织、细胞的形态结构。因此制备冻块时要求低温、速冻。1、冰冻组织块的常用方法· 液氮中冰冻：组织投入液氮中 (一196uf0b0C)中10～20sec；· 干冰中加入丙酮(或异戊烷)，液体立即气化起泡，温度降至一70uf0b0C ，将组织投入，若在干冰丙酮中置一盛有异戊烷的容器，组织投入该容器内结冻则更好；– 上述组织在速冻时应浸埋于OCT包埋剂或甲基纤维素糊状液内，以保护组织。– 制成冻块后若需保存，应以铝箔或塑料薄膜封包，贮存于-70 uf0b0C冰箱。2、切片· 供免疫组化用的冰冻切片同样要求附贴平整，并有连续性。· 载玻片也应清洁无油污，但一般无需涂抹粘附剂；· 切片时，使用恒温冷冻切片机，在箱内温度-25 uf0b0C 。切片厚度一般为4～8uf06dm。3、切片后处理· 切好的冰冻切片，室温下自然晾干1～2h后，入4uf0b0C丙酮固定10min，待干燥后作免疫组化染色或封存于-20℃。· 冰冻切片由于切片技术要求较高，不易得到连续性很好的切片，其形态结构亦不如石蜡片，且冻块和切片不便于长期贮存，因此冰冻切片的应用受限。 · 贴壁细胞培养时，置盖片于培养瓶中，使细胞在盖片上生长，达适当密度后取出固定(丙酮-20uf0b0C固定10～20min)，再进行免疫染色。– 盖片的处理方法同载玻片的处理，但泡酸时间2h即可。– 为了防止细胞脱片，可用多聚赖氨酸处理。 · 大多数细胞涂片由细胞悬液制成，包括：– 血液、尿液、脑脊液；– 体腔积液；– 组织穿刺吸取，如骨髓、淋巴结或其他实质性组织– 悬浮培养的细胞或贴壁细胞经消化后形成的悬液。 · 细胞涂片的方法：– 手涂法· 将细胞浓度调节到106/ml左右，可直接涂于载玻片上，但要均匀、不重叠。· 图片范围应小于1cm直径，以节约试剂。– 涂片机涂片法· 将细胞样品制成2×105～6/ml 细胞悬液，吸取50～100uf06dl (1～2×104～5cells) 加入涂片机内，1000rpm离心2min后细胞就均匀分布于玻片上。

免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。 1）做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色，因为那样会掩盖阳性着色的结果；而且用苏木素复染细胞核也是淡染，若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变，除非有非常典型的表现，一般是有很大的难度的。 2）你是培养的细胞做免疫组化吗？如果是的话，那就每个样本只有一张片子吧？唯一的办法是进行免疫双染，同时做CD34和AFP（甲胎蛋白）。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。 3）用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化，也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是：早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片，重要的是看其组织学结构，对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞，还是培养的细胞，染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。 4）如果是切片，也就是说每个样本可以有多张切片，那可以在连续切片上分别染CD34和AFP，拍照时选择相同视野，也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。 5）用双染最大的问题在于：这两者都表达在胞浆中，染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下，可不可以用免疫荧光双染？这样也很有说服力的

组织化学，外文名histochemistry，是指以常用的组织化学技术，对细胞内主要化学成分和活性的粗略(一般性)的研究，研究身体细胞和组织的化学构成，可利用于特异的显色反应，显微分光法，荧光抗体法，放射自显影法等。中文名组织化学外文名histochemistry类型研究身体细胞和组织的化学构成方法主要特点histochemistry组织化学histochemistry 为在组织水平，对组织内存在的各种物质进行定性、定量以及其局部的和移动的部位分析的方法。与细胞化学同样，可利用于特异的显色反应，显微分光法，荧光抗体法，放射自显影法等。The branch of science that deals with the chemical composition of the cells and tissues of the body.组织化学：研究身体细胞和组织的化学构成的一门科学

一． 空白到入门第一步：病理技术、组织学、病理解剖学方法：先实践后理论，再实践再理论反复循环。先理论后实践，再理论再实践反复循环。一般而言，前者的效果好于后者。就个人的经验而言，我学习多数其它的知识都是运用先理论，后实践方法。唯有病理我发现先理论后实践效果的不好。进入病理科后，一般有三个月左右的时间学习病理技术。这三个月对你非常重要。你会遇到你以前从来没有接触过的仪器、名词、规范、试剂、工作流程等，当然还有各色各样的病理人。这时你要以最快的速度溶入病理科，病理科开展的项目、工作流程、科内的人员，各种仪器的名称及用途，显微镜的使用（学会用双目显微镜阅片可能需要半天时间甚至更长）等等。这些都需要在一周时间内了解。通过用心观察、向不同的人请教、看病理技术人员的操作，最好是在医、技师指导下亲自地去动手操作，这一周一般不难渡过。三个月中余下的时间就要付出一点努力了，你要学会组织处理原理、病理常规切片、冰冻切片、免疫组化、特殊染色、病理档案的整理和归档、病理科的各项工作制度和操作常规、复习组织学、病理学教科书、掌握电脑的使用（包括电脑打字）等。请有经验的老师订一个计划会是一个好的方法。但我们不可能要求每一个病理科主任都能给一个病理新兵制订一个科学合理的计划。没关系，以下是我们科里毕业生新入病理科前二个月的学习计划（附后），大家可以拿回去参考，再根据自身的特点加以修改。不同的医院不可能有完全相同的计划，自己也可以根据实际情况来调整计划，有了计划就要按照计划去实施，在实施过程中允许进行微调。按计划实施的方法：五多：多看，这里的看不是（watch而是observation），前者是不动脑子的随便看看，在看过以后不会有多少收获。而后者是用心地去观察；多动脑（如何？为什么？这样是不是行？）这些“？”要始终伴随着你，试着自己去消灭这些“？”，消灭一个问号就进了一步，你应该感到高兴；多提问，在病理科，对不懂或不明白的事要多问有经验的技师或医师，不提问有些问题你可能永远也不会明白，或者要花很多时间才能明白；多动手，亲自去设置一下脱水机的程序，再把它回复到以前的状态、亲自去切片、做冰冻、更换染色液、配制苏木素、在指导下做一次免疫组化、对着书配制特殊染色染液，并做出几种常用的特殊染色片等等。只有亲手操作过才会有深刻的体验。病理技术靠读书或者是看别人操作是学不会的。在学病理技术的时候一定要注意操作的规范，养成按规范操作的好习惯。你所在的病理科的操作可能并不规范（据我的了解，目前至少有一半的病理科的组织处理方法是不规范的，如省略组织水洗、用硬脂酸石蜡透明、用酸性福尔马林固定等），当然你学到的操作也是不规范的。你是新兵，你不知道也不可能去要求你们的主任改变目前的操作方法。但你应知道什么样的操作是规范的。如果真是这样，你也不用着急地“一步到位”，只要你是一个有心人，在以后的工作或学习中你会逐步了解什么是正确规范的操作；多读书，这期间所需读的书为病理技术书、《组织学》和《病理解剖学》。病理技术书不需要通读，应结合科室内开展的项目有目的地查阅，每当你学习了某种操作后，可以查阅书上的相关章节，以印证你所做的操作是否规范。组织学同样不需要通读，而应对照教学切片，识别和消化切片中各种器官组织的形态。病理解剖学是病理医生的必读书，要求通读。这本书主要利用业余时间来读，读这本书同样有技巧，有些年轻人可以把这本书背熟，但会背书的人不一定能在实际工作中灵活运用所背的理论。这本书的重点是绪论和总论，绪论部分介绍的病理学的定义、病理学的内容和和任务、病理学在医学中的地位、病理学的研究方法、病理学的历史等。总论部分介绍了细胞和组织的损伤、损伤的修复、炎症、肿瘤、血液循环障碍、免疫病理、遗传性疾病等，这一部分介绍了各种疾病（肿瘤）的普遍规律。各论部分讲述的是各系统器官的特殊规律，这些特殊规律也同样遵循普遍规律。学习时先掌握普遍的规律，再了解各系统的特殊规律，并从中强化总论的普遍规律。例如从总论中学到炎症主要有变质、渗出和增生三种变化，在各论中你可能会学到肺结核，那么回忆一下，结核是否也具备上述三种变化。在以后病理学的学习中如果能从普遍（一般）――特殊这样的方式来思考，你将会事半功倍。学习《病理解剖学》，每一种疾病或肿瘤，其形态特点当然重要，但在读这本书时应尽量谈化形态改变而应理解各种病变的概念、病因、发病机理、发生发展规律、预后及转归等。第二步：巨检、取材三个月结束了，终于接触到了病理诊断。第一关就是活检标本的固定、巨检和取材。固定、巨检描述和取材和同样需要规范。固定液一般采用10%的中性福尔马林，固定液与标本体积之比1：5－10，固定时间16－24小时。胃肠等空腔脏器剪开后钉在木板上，较大的实质性肿瘤和脏器沿最大面剖开，每隔1CM作多个平等切面，脾、肾等实质性脏器从皮质向脏器门部剖开，然后浸入固定液，肺用灌注法或真空抽气法固定。巨检描述要求正确、全面、客观、测量正确、必要时对肿瘤称重（如内分泌肿瘤）、禁用诊断性语言，最好摄影留档，一千字的描述不如一张照片（广告语）。巨检描述方法与技巧：1、 描述内容和技巧：①标本名称。②形态、大小（重量）、数量、手感。③表面情况（颜色、包膜、是否光整等）。④切面情况（形态、颜色、境界、质地，空腔脏器和囊性肿块描写内表面情况）。⑤病变与周围正常组织的关系。⑥病变的解剖定位。⑦对病变部位及取材部位应画图并标记。2、 描述的顺序：①先表面后切面，先浆膜后粘膜。②有几个脏器时应先描写一个脏器，再描写另一个脏器。③有几块组织或肿块时分别描述。取材：不同脏器、不同标本和不同的病变组织有不同的取材规范。取材宁多勿少，必要时作补充取材。不同标本的取材规范见《阿克曼外科病量学》书后的附件。第三步：常见病的病理诊断：这个过程相对简单，主要以大量阅片来主，配上一本简单的外科病理学参考书查阅相关内容，不需要去“啃”大部头书。最常用的方法是把本院以前发过报告的档案片和申请单调出来阅片。一台显微镜、一抽屉的档案片、一叠申请单、一本书、一本笔记本，有这几样东西就够了。白天要干活，可能没有时间，那就晚上把。一例一例地看过去，先看片，再猜是什么病，再看申请单底稿上的诊断，对了，PASS；如果不对，自问一下为什么？再去查书，查书后懂了，又可以PASS；不懂，记下来，明天请教你的上级医师。这一阶段主要培养对形态的感知能力，在查书过程中也主要着重于大体和镜下形态的改变。同时，在读申请单底稿时你也同时强化和掌握了巨检描述、镜下形态描述和病理报告的格式和规范。更多的理论知识可以放到下一步去学习，如果你刻苦一点，也就需要2－3个月的时间，80%以上的常见病的形态特点和报告格式你就可以掌握了，如阑尾炎、胆囊炎、胃癌、乳腺癌等等都是最常见的疾病和肿瘤。这一阶段过后，你的日常工作就会轻松一点，因为你已经掌握了80%以上的常见病，上级知师复阅你的诊断也很轻松，每天遇到的不会诊断的病只是少数，这少数中一部分还可能是灰色病变（灰色病变的诊断下面会专门讲），那么，实际上你每天要学习的以前未见过的病例可能只有几例，你可以利用上班的时间争取当天解决问题。三个月的技术组，三个月的常见病学习结束了。如此，半年过去了，病理入门了吗？没有，还需努力。常见病，典型的病容易掌握，因为太多见了，几乎天天见到，不会忘记。但相对少见的疾病和肿瘤可能几个月甚至几年才有一例，即使这次理解了，几个月以后又遇到同样的疾病或肿瘤时，你又忘记了。另外，你会诊断发报告，并不能说明你已掌握了病理，因为病理的任务不仅仅是诊断，你还需要掌握疾病的病因、发病机理、发生发展的规律、预后、疾病的转归、免疫组化的表达情况和目前主要的治疗手段和治疗效果。病理医生，是一个医生，而不是只会从形态到诊断的看片匠。实际上，在工作中经常会有临床医生或病人来问类似病因、预后、治疗……等上述提及的问题。你不知道，你如何面对临床医生和病人？在以后的工作中，在掌握常见病形态改变的基础上，着重点应放在常见病的理论学习上。病理形态的改变只是一个表象，为什么这种病会有这样的形态改变？疾病发生发展不同时期为什么会有不同的形态改变？一般而言，都有其病因学、病理生理等的基础和机理，了解了这些机理，就能更快地理解和记忆形态的改变。在此期间还应不断地积累少见病的知识。一年以后，如果你努力，你就可以入门了。二． 入门到深入第一步：掌握少见病例，疑难病例的病理诊断因为少，平时工作中不容易见到，要掌握少见疑难病例的诊断相对困难，以下是几种常用的技巧。1． 遇到一例，吃透一例，记录一例，绝不放过（因为那是金子啊）。就此还不够，还应掌握相关疾病和易混淆疾病的鉴别诊断，最好在查阅相关书籍和文献的基础上写一篇读书笔记或个案报导。这时候，你遇到的少见病或疑难病并非是真真意义上的少见或疑难病，写个案报导不一定能发表，这并不重要，重要的是通过“写”的过程，你能完全地掌握该病例的临床病理知识。这就是“写”的目的。2． 阅读科内教学切片。如果科内有教学切片，先读完并掌握教学切片的病例。3． 大量阅读读片会的切片。由浅入深地阅读档案读片会切片。有一点历史的医院都积累有大量的各级病理读片会切片材料，一般都有最终的诊断结果。这些档案对新兵是非常宝贵的财富，一开始可以读市级或地区级的读片会切片，这些切片难度较小，以后可根据自身的情况阅读省级的读片会切片。经过大量读片会切片的训练，知识面将大大扩展。业务能力也可明显提高，特别是在工作中遇到了读片会切片中已阅读过的病例，而又对此作出了正确的诊断，你就会产生一种成就感。如果真有过这种“成就感”的经历。恭喜你，你已经对病理产生了兴趣，这是你事业成功的第一步，也是最关键的一步。4． 不要放过每天的每一张切片。如果你在大一点的医院工作，恭喜你! 大医院往往会有多名医生，你不可能每天都当班，但无论你是否当班，都应把当天的切片全部“扫”一遍，已掌握的快速PASS，未见过的弄个水落石出。5． 上网。不多说了，上中国病理学网就不错。不用怕，有什么问题就提，有什么病例就贴。这里的老师都是好人。如此，又是一年过去了，或许需要二年或更多的时间，你已是一个理论诊断均不错的病理医生了。第二步：进修又是事业成功与否的关键，进修一般都会选择省级的大医院，那里不但有很多的病例，也有理论水平很好的老师。一般而言，教学片是很多的，会有定期或不定期的分系统病理讲座，免疫组化、分子病理、电镜等先进的病理技术都会用于病理诊断，制片操作和报告都比较规范，还有成人尸检。那就好好学吧！进修的一年，对多数病理医生来说，一生也只有一次进修的机会，好好把握吧。进修的技巧：1、“搞定老师”。这是进修效果好坏的关键。不但要“搞定老师”，还要与病理科的其它人员（包括技师和其它进修人员）搞好关系。如何“搞定老师”不同的老师有不同的方法，这是一个公共关系学的课题。以下是几条原则①不要只干病理，更要干卫生，干杂活。②老师交办的事一定要在规定时间内保质保量地完成。③取材要规范和到位，尽可能地减少补充取材；描述、报告要规范，减少老师修改的工作量。④工作要注重效率和速度。⑤在工作前做好充分的准备。⑥在上级医师复片前做好充分的准备，如补充病史，开出免疫组化单等。⑦注意个人仪表。⑧其它（因人而异）。2、 每天的切片过目一遍。不管是否是你班上的切片，也不管是常规切片，还是冰冻切片，免疫组化片，阳性的细胞学片等，如果有时间，会诊片也不要放过。这些都建议在当天消化吸收，不能理解的病例记录下来找机会请教老师。这里的老师往往理论水平比较高，他们讲一个病可能只有几分钟，但效果很好，容易记忆。3、 讲课时做好笔记。主要记录了各种疾病（肿瘤）的要点，还有老师本人的经验，有时复习笔记比查书更有效。4、 对教学切片“大扫除”。最初进修的1－2个月，对进修医院的教学切片通读一遍，方法同前。5、 学习正确的技术操作和诊断规范。把上级医院良好的操作和诊断规范记录下来，带回到你的医院。这是一笔宝贵的财富。6、 拾遗补缺，档案大搜索。在进修后期，你的水平将会有明显提高，书本上的大部分肿瘤（或疾病）可能你都遇到过了，但总还有一部分你没见过的肿瘤（或疾病）。拿一本《外科病理学》，从第一页一直翻到最后一页，把没见过的肿瘤（或疾病）都记录下来，然后到电脑上去搜这些病例，搜到后调出切片慢慢消化。7、 学习处理灰色病变和可能引发纠纷病例的技巧。注意二个方面，一为冰冻切片诊断中度的掌握，掌握什么时候应该延迟诊断；二为灰色病变的处理。第三步：从大病理到专科病理如果一切顺利，可能也就是5年多的时间吧。当你已基本掌握了大病理以后，可以进入专科病理的深入学习。选择一个你们医院的临床强项专科，深入学习，不断地积累经验，不断地总结。专科病理的深入是没有止境的，需要掌握的内容至少有，该系统肿瘤的各种分类，各种特殊类型、亚型的临床病理理论（很多的内容），历史上对它们的认识过程，当前国内国际的最新研究进展，以及你个人对于专科病理范围内的独到的见解等。学好专科病理三要点：首先需要积累大量的病例，其次需要阅读大量的文献，第三要做大量的研究。三． 从深入到专家因为我不是专家，无法谈这方面的体会。很想成为专家，但也许终我一生也成不了专家。这个问题最好请JI来作一次专题讲座。如果可能，我想以下几条将有助于你成为专家：1、 利用一切机会接触疑难罕见病例2、 利用一切手段搜索深入的理论3、 利用一切病理技术进行研究4、 其它……临床病理学习工作中的几点技巧：1、 记忆临床病理要点：每一种疾病都有一系列的临床病理改变，其中有些是非特异性的，而有些是特有的。那么记住后者吧。例如，软组织梭形细胞肿瘤，梭形细胞是非特异性的形态，而波浪状纤细的梭形细胞是神经来源肿瘤特点，而栅栏状排列和有完整包膜又是神经鞘瘤的特点。梭形细胞加大量的胶原化浸润性生长和发生于腹壁这是韧带样瘤的特点。在诊断是否是淋巴瘤时，是否有淋巴结结构的破坏是特点，而淋巴细胞是否有异型往往会让人误入歧途。在区别是T细胞淋巴瘤还是B细胞淋巴瘤时，是否有血管（上皮样小静脉）的增生往往比区分细胞形态更容易。在诊断高分化软骨肉瘤时临床的发生部位和肿瘤大小比单纯从细胞异型性上判断更为准确。2、 纵横交错，织成知识网络：知识形成了网络就不容易遗忘，所谓的举一反三就是织网的方法。如甲状腺癌的诊断不能以肿瘤细胞异型性的大小来判断，而应找到包膜、血管的浸润或远处转移为依据。在肾上腺等其它内分泌肿瘤，这个原则同样适用。唾液腺的腺样囊性癌有特殊的形态特点，在肺内、乳腺内、胆囊内也可以发生腺样囊性癌。3、 通过胚胎发生学帮助记忆：大部分肿瘤都有一定的好发部位，而要记住这些好发部位很困难，如果能够理解其胚胎发生，机械机忆就变成了理解记忆。如脊索瘤好发于斜坡（40%）和骶骨（45%），其它都沿着脊椎生长……。如果你了解了胚胎的脊索结构位于中线。再也不用死记以上的一套发生部位了。又如脂肪肉瘤的形态多变，有很多亚型，还有各种脂形态的脂母细胞……记忆这些形态改变也很费劲。如果了解成熟的脂肪组织是从原始的间叶组织发生的过程及各阶段的形态，记忆这些形态改变就很容易了。4、 灰色病变的学习和处理：灰色病变很多，灰色病变不仅是指界于良恶性之间的那一类病变，还有很多良性的灰色病变。如形态不典型的结核，结核的误诊将导致不必要的抗结核治疗。同样，是否是子宫内膜增生也是灰色病变，因为这可能引起不必要的内分泌治疗，甚至子宫切除。还有，是否是HPV感染的诊断可能给病人带上性病的“帽子”。学习灰色病变没有什么巧门，也没有什么理论（如果真有理论也就是书上写的那一通形态描述）。掌握灰色病变只有多看多练，培养一种对灰色病变形态的感知力。当你还是一个新手，又不得不面对灰色病变时，处理这类病变的技巧就变得很重要，一是建议临床再次取材活检，二是拿出去会诊，三是用疑为…、见少量异型细胞…、不除外… 、考虑为…可能性大这样的描述性述语。有一位资深的病理医生曾说过“宁可让临床医生说我们笨，也不要往前冲。”5、 “地雷”的排除：病理工作中有一些公认的“雷区”，事实上很多病理医生都有过“触雷”的经历。找到“雷区”是排除“地雷”的前提，只要能识别出“地雷”，排除就不是难题。常见的“地雷”有：骨肉瘤与骨痂；结节性筯膜炎与肉瘤；高分化软骨肉瘤与软骨瘤；乳腺小管癌与乳腺腺病；脂肪瘤与脂肪瘤样脂肪肉瘤；传染性单核细胞增多症与淋巴瘤等6、 减少冰冻风险的技巧：补充病史、多部位取材、做快速石蜡切片、了解作出诊断后临床是否会扩大切除范围、与临床医生一起面对面地与家属沟通谈话、最终延迟诊断。以上都是减少病理医生风险的常用手段。延迟诊断过多往往会引起临床医生的不满，对于冰冻延迟诊断的病例，我们往往常规也“延迟”（与临床医生说要做免疫组化，或者建议上级医院会诊），这样可证明这确实是个疑难病例，因为常规也不能明确诊断，冰冻当然要延迟诊断了。7、 整理好思路：遇到疑难病例，诊断的思路很重要，思路正确往往导致正确的诊断。正确的思路又往往不是第一感，怎么办？那就用缓兵之计吧。我经常会遇到这样的情况，下级医师拿过来一张切片，在镜下一看，唔！好像不太好吗？没好的思路，又不好意思当着下级医师的面查书（丢不起那个脸啊：）　）。让他们先去：再取几块看看、或者去问一下有…病史、要不然考虑…建议做免疫组化…先这样把报告发了…。回到家里，再慢慢思考，翻翻书或查查文献。有了思路，有了诊断，第二天就可以对他们1234一大套理论。8、 病理与概率：好发年龄、好发部位、发病率等这些都是概率。常见病、好发部位、好发年龄总是多数，你不可能总是有“好运气”，概率对每个人都是公平的。因此，当你诊断一个不常见的病或者一个不是好发部位或好发年龄的病时，请一定小心了。只有确定排除了那些常见的疾病或肿瘤以后而又有明确的诊断依据时才以作出罕见病的诊断。还是那句话“你不可能总有好运气”。掌握概率，可以减少大部分的误诊。病理中“一元论”，和“二元论”的问题也是一个概率问题。没有把握的情况下总是用一元论来解释病变，而“二元论”的病例往往是很少的。9、 免疫组化的合理应用：免疫组化不是万能的，没有免疫组化是万万不能的。一位著名的病理学家曾说过以下几句话：没有任何生物标志物对所有肿瘤和细胞都完全适用。没有任何因定液对所有抗体都适合。切片内所有组织都阳性实际无阳性。免疫组化不能比使用者对它的认识更高明。选择合适的抗体、严格规范的操作、对免疫组化结果的正确理解和解释、同类抗体的联合应用是免疫组化技术运用成功与否的关键。10、 补充取材，连续切片，补充病史：充分利用这些简单的手段吧，可以减少相当一部分的会诊。11、 会诊尺度的把握：会诊是不可避免的，但不可过多，动不动发“建议上级医院会诊”这样的报告，会让临床和院长看低了你。但也不要逞强，毕竟安全第一，这个度只有自己掌握了。12、 细胞学的学习，找干细胞老师吧13、 上网吧，中国病理学网是一所非常好的学校。14、 积极参加读片会，并积极参与讨论。附：我科病理医生技术组培训计划（二月）1． 组织学，常规切片：三周。要求用兔子制作一套组织学教学片，包括2－3种特殊当染色。制作显微摄影。2． 记录、登记、病理档案，一周：掌握大体记录，病例登记，病理各种档案的归档。3． 冰冻切片、大体摄影一周：掌握冰冻制片及大体摄影技术。4． 细胞学：一周。掌握各种细胞学制片及染色方法。5． 免疫组化：一周。了解免疫组化原理、在临床病理学上的应用，了解免疫组化的操作技巧，制作一次免疫组化片。6． 特殊染色：一周。了解特殊染色的原理及其在病理学中的应用，掌握2－3种特殊染色方法。要求自已配制特殊染色液，自己制片。7． 学习《病理解剖学》及《组织学》本科教材。镜下能识别各脏器正常组织结构及细胞形态。8． 熟练掌握电脑打字技巧。9． 了解病理科各项制度及操作规程。

算。免疫组化是一种用于诊断和治疗的重要技术，对样本进行检测的时间会在5到7天，二十几天没结果是不正常的，该医生是算失责的。免疫组化是免疫组织化学的简称，它是应用免疫学的基本原理，也就是抗原抗体反应，即抗原和抗体能够特异性结合的原理，来确定组织细胞内的抗原(多肽、蛋白质)并对其进行定位、定性以及相对定量进行研究。

近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位；⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型；⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。

看懂免疫组化结果方法如下：对照染色——定位——半定位——图像分析仪免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：1、恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；2、确定转移性恶性肿瘤的原发部位；3、对某类肿瘤进行进一步的病理分型；4、软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；5、发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。6、为临床提供治疗方案的选择。

P40(+)【抑癌基因】肺鳞癌时阳性。TTF-1(-)【甲状腺转录因子-1】肺腺癌时阳性。NapsiNA(-)肺腺癌时阳性。Ki-67(约70%)【细胞增值的一种标记】70%提示恶性程度高。患者是肺鳞癌。免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 · 具有特异性高和亲和力强的抗体是实验成功的首要条件。– 对抗体的要求：纯度高、比活性强；· 高度特异性抗体的获得，取决于抗原的纯度。– 对抗原的要求：纯度高，免疫原性强，稳定无变化。 · 抗原的概念：凡是在机体内引起体液免疫和(或)细胞免疫反应的物质，称为抗原。抗原具有两个方面的特性：– 免疫原性：引起机体产生抗体和(或)致敏淋细胞的特性；– 免疫反应性：抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。· 根据抗原是否显示免疫原性分为：– 完全抗原：分子量较大，一般在10kDa以上，并具有较复杂的化学组成。· 免疫原性最强的是蛋白质抗原，多糖次之；脂类和核酸必需和蛋白质及多糖形成复合物才具有良好的免疫原性。– 半抗原：又称为不完全抗原，分子量较小。例如：某些短肽、多糖、类脂和药物等。· 半抗原必需与载体结合，才能获得免疫原性。载 体· 通常是具有高度免疫原性的大分子物质，具有将免疫原性传递给耦联的半抗原能力。– 常用的载体有钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。– 用戊二醛或碳化二亚胺作为交联剂通过功能基团-NH2、-COOH等将半抗原结合到载体上。结合比例为5kDa结合5～25个分子的小肽。 1、抗体的概念：· 机体受到抗原刺激后，由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白，被称为抗体。– 抗体主要存在于血清内；– 抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗体。– 免疫球蛋白根据重链的结构及抗原特异性不同分为五种，既IgG、 IgD、IgE、 IgA、IgM。2、免疫组化实验中常用的抗体：单克隆抗体和多克隆抗体。· 单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，是应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备的。– 特异性强、抗体产量高。· 多克隆抗体：是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。– 特异性低，会产生抗体的交叉反应。– 多克隆抗体广泛应用于石蜡包埋组织切片，可减少假阴性染色机会。– 抗原与抗体的结合，要求量保持一定比例，当抗原或抗体过量时，是不能聚合成大颗粒。3、抗体的制备——多克隆抗体的制备· 动物的选择· 佐剂(adjuvant)· 免疫方法· 免疫剂量· 抗体效价的测定· 放血或定期抽血(1) 动物的选择选择什么动物来免疫取决于：· 所需抗血清的量– 小鼠只能提供1.0～1.5ml的血液，而山羊能提供几升。· 能供免疫用的抗原量– 小鼠50μg足够，而山羊需要几毫克。(1) 动物的选择(续)· 动物的品系：免疫动物与提供抗原的动物之间的种系差异越大越好。– 例如哺乳动物的抗原可选择非哺乳动物来制备抗体。– 常用的动物有兔、羊、马、猪等，以兔(新西兰兔，年轻，健壮，体重在2.5kg左右，雄性)为最常用。(2) 佐剂 (adjuvant)· 一般可溶性抗原注射后，迅速从注射部位扩散、吸收代谢。佐剂可延长滞留时间，且延长免疫刺激作用。因此在制备抗体的过程中，常将抗原和佐剂一起注射。· 最常用的佐剂是弗氏佐剂，又分为：– 弗氏不完全佐剂(Freund"s incomplete adjuvant)– 弗氏完全佐剂(Freund"s complete adjuvant)弗氏不完全佐剂(Freund"s incomplete adjuvant, FIA)· 是由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂(羊毛脂或Tween80)混合而成，比例为1:1、2:1、3:1或5:1，可根据需要而定，通常2:1。· 使用时与水溶性抗原按1:1比例充分混合，使抗原分散在佐剂中形成油包水乳剂。弗氏完全佐剂 (Freund"s complete adjuvant, FCA)· 在弗氏不完全佐剂中加入活卡介苗或死的结核分枝杆菌(终浓度为2～20mg/ml)，即成为FCA。· 免疫动物时，将弗氏佐剂与抗原按体积 1:1 混合乳化后(油包水)注入动物。– 一般首次注射时用完全佐剂乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。佐剂与抗原乳化的方法· 研磨法：适于制备大量的佐剂抗原– 先将不完全佐剂加热，取1.73ml放人无菌玻璃研钵内；缓缓滴入0.23ml活卡介苗，边滴边按同一方向研磨，使菌体完全分散。– 按同样方法滴人抗原，每加一滴应研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人后，应成为乳白色粘稠的油包水乳剂。· 缺点：研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大，对微量或难得抗原不宜采用。佐剂与抗原乳化的方法(续)· 注射器混合法– 将等量的完全佐剂和抗原分别吸人两个5ml注射器内，然后插入三通管内，交替推动针管混匀，往复操作直至形成粘稠的乳剂为止。· 优点：无菌操作，节省抗原或佐剂。· 缺点：不易乳化，时间长。佐剂与抗原乳化的方法(续)· 快速乳化法：利用超声波粉碎器可快速乳化抗原和佐剂混合物。– 将抗原和佐剂按所需量加入一离心管中，置于超声波粉碎器上，粉碎头浸入液面下 0.5cm，离瓶底0.5cm左右，以免打碎离心管。– 每次乳化 10～15s，然后置冰箱lmin左右。反复乳化3～4次即可完全乳化。管内残余量800r/min离心5～10min收集。· 优点：简单、快速、节省材料。乳化剂的鉴定· 判断乳化是否充分，可将一滴乳化好的液体滴在水面上(冷水中)，如能长时间保持圆珠形而不散开，表示乳化达到要求。(3) 免疫方法——免疫途径· 常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、皮内、淋巴结、脚掌等注射。· 一般采用多点注射方法– 常在足、掌、腋窝淋巴结周围、背部两侧、颌下、耳后等处的皮内或皮下。– 皮内易引起细胞免疫反应，有利于提高抗体的效价。(3) 免疫方法——免疫途径 (续)· 几点说明：– 大动物一般不用腹腔注射– 颗粒抗原和使用佐剂时不能静脉注射– 抗原宝贵可采用淋巴结内微量注射法，只需10～100uf06dg抗原即可获得较好的免疫效果。– 皮内注射较困难，特别是天冷时更难注入。(3) 免疫方法——次数及间隔时间· 次数一般为2～3次(初次免疫和加强免疫)– 首次注射后，10～15天再加强注射；– 剂量同首次或为首次的一半，用不全佐剂或不用佐剂。· 间隔时间，一般而言，动物越大，间隔越长– 豚鼠、大鼠为7～8天，兔子为10～15天，羊为14～28天；– 第三次注射的间隔时间更长些，效果更好。举例1：家兔的免疫· 初次免疫– 用50～200uf06dg Ag加入FCA，在背部皮下注射6～8点，每点0.1～0.2ml，也可肌肉内或皮内注射；· 两周后，加强免疫– 将50～200uf06dg Ag于PBS或FIA中，在肌肉、皮下、静脉或腹腔内注射；· 抗体效价的检测：加强免疫一周后，耳缘静脉采血– 抗体效价测定可用环状沉淀试验、琼脂双向扩散法等方法。前者抗体效价在1:4000以上，后者在1:16以上，即可采血，取血清进一步提纯。举例2：微量抗原淋巴结内注射免疫家兔· 一般选择2.5～3.0kg的新西兰种公兔– 先在其两脚垫注射完全福氏佐剂0.2ml(卡介苗每兔合5mg)；– 10天后，见胭窝淋巴结肿大，然后将抗原注射至肿大的淋巴结内，第一次注射抗原用完全福氏佐剂混合乳化；– 以后每隔20天用不完全福氏佐剂乳化抗原，以同样方法加强2次，各次注射的抗原均为25～50uf06dg；– 末次注射两周后兔耳放血测价 (可达1:128)。举例3：豚鼠和大鼠的免疫· 初次免疫– 用10～100uf06dg Ag加入FCA，在背部皮内注射4～6点，每点 0.lml，也可肌肉内或皮下注射；· 加强免疫– 每隔 7～8天，将10～50uf06dg Ag于 PBS或FIA中。在肌肉、皮下或静脉注射；· 抗体效价的检测(4) 免疫剂量· 抗原性强的抗原量应小，过大反会引起免疫抑制；· 免疫周期长的动物可少量多次注射，短的可大量少次。(4) 免疫剂量 (续)· 各种动物首次免疫抗原剂量和加强免疫的剂量(5) 抗体效价的检测多采免疫双向扩散法【基本原理】· 指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。– 将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。· 优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。免疫双向扩散法的操作步骤· 将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。· 将l % agar 融化后，置56uf0b0C水浴。· 在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。· 中心孔加5uf06dl 抗原样品，周围孔内每孔加5uf06dl 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。· 凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。· 观察结果。抗体效价检测的其它方法· 环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；· 对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；· 酶联免疫吸附试验 (ELISA)。(6) 放血或定期抽血常用以下3种方法· 颈动脉放血法：放血量较多，动物不易中途死亡。例如：2.5kg白兔可放血约80ml。家兔、山羊、绵羊等动物采血常用此法。· 心脏采血法：常用于家兔、豚鼠、大白鼠、鸡等小动物，但操作不当易引起动物死亡。· 静脉采血：家兔可用耳缘静脉采血；山羊、绵羊、马和驴可用颈静脉采血，这种放血法可隔日1次，有时可采集多量血液。(6) 放血或定期抽血 (续)· 采血过程中，动作要轻柔，尽量避免溶血· 血液凝固后，及时离心收集血清，否则细胞溶解释放的杂蛋白(例如蛋白水解酶)将污染抗体并将抗体水解，降低效价；· 加叠氮化钠，分装，低温保存，也可加一定的保护剂如BSA、甘油等。

是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先 60 度 20min，然后立即二甲苯 1-3 分别 10min（这个时间是由二甲苯新鲜程度和室温等综合决定的），但当天制好的切片一般先 60 度 3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。 现在有很多公司可以帮忙代做免疫组化实验了，可以来百替生物看看。：）网址：http://www.100biotech.com/index.php

软组织肿瘤类型很多，由于普通病理切片还不能确定是哪种类型的肿瘤，因此通过一些特异性表达某种肿瘤的抗体进行标记，有望获得明确的病理诊断，所以要借助于免疫组化及特殊染色。经过上述技术，明确诊断后才能分析是否良恶性，所以还得等待结果。如有结果，我可以进一步帮你进行分析。祝好运！

说明没出现转移早期，现在正是抗癌控制癌细胞生长的好时机。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。免疫组织化学又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。直接法，荧光素直接标记特异性抗体（—抗）上，标记抗体与抗原结合（在切片上）荧光显微镜下观察→检测抗原。

两者是不同的检测手段。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，是蛋白水平的检测。基因检测是指通过基因芯片等方法对被测者细胞中的DNA分子进行检测，并分析被检测者所含致病基因、疾病易感性基因等情况的一种技术。目前基因检测的方法主要有：荧光定量PCR、基因芯片、液态生物芯片与微流控技术等。

免疫组化S100是神经类的表达，阳性说明是神经来源的肿瘤（神经鞘瘤或神经纤维瘤），或者是皮肤黑色素肿瘤。Desmin意思是肌间线蛋白，在很多哺乳动物中的横纹肌和各种平滑肌及其来源的肿瘤组织中都有表达。阳性说明一般是平滑肌瘤。CD68是巨噬细胞来源的，阳性可能是滑膜巨噬细胞或单核巨噬细胞来源的肿瘤。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先把组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法把抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。

胰腺炎和胰腺癌区分需活检，当然症状不太一样，但如要确诊只能活检。免疫组化在临床工作的意义 近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。 免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面： (1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； (2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位； (3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型； （4）软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的； （5）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。 （6）为临床提供治疗方案的选择。

意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义。免疫组化，是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。

通常葡萄胎病理中的免疫组化项目：p57：鉴别部分性葡萄胎与完全性葡萄胎，倘若阳性就是部分性葡萄胎；ki67：增殖指数，愈高说明增殖愈快；p53：突变蛋白，越高表明恶变可能性越大。当然也有不一样医院检查项目不一样的可能。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，就是抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（金属离子、荧光素、同位素、酶）显色来确定组织细胞内抗原（多肽与蛋白质），对其进行定位、定性以及相对定量的研究，叫作免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或者免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

一、疾病的诊断一、疾病的诊断总之，免疫组化技术在医学领域中具有不可替代的重要性。它可以帮助医生更加准确地诊断疾病、制定治疗方案，也可以帮助药物研发人员更加高效地开发新药。我们相信，在未来，免疫组化技术将会得到更加广泛的应用和发展。免疫组化是一种检测技术，利用抗体与特定抗原结合的原理，对组织或细胞中的特定蛋白进行定位和鉴定。在医学领域中，免疫组化技术广泛应用于疾病的诊断和治疗。本文将探究免疫组化在医学领域中的重要性。免疫组化技术可以通过检测组织中的肿瘤标志物，帮助医生确定癌症的类型和分级。通过检测乳腺癌组织中的雌激素受体和孕激素受体，可以确定患者是否适合接受内分泌治疗。此外，免疫组化技术还可以检测肿瘤细胞中的一些特定基因突变，帮助医生制定更加精准的治疗方案。免疫组化技术可以检测免疫疾病中免疫球蛋白的沉积情况，如肾小球肾炎中的IgG、IgM、IgA等，从而帮助医生确诊疾病类型和程度。

1、“免疫组化CD20”的意思如下：（1）诊断上的意思是：确定是B细胞起源。（2）治疗上的意思是：可以应用抗CD20单克隆抗体治疗。2、“CD20”的定义：白细胞分化抗原重要分布在B细胞中，免疫组化检测时前B细胞后期和浆细胞之前的B细胞呈阳性。因此在恶性淋巴瘤尤其是T细胞或B细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的B细胞标记。3、免疫组化的定义是：是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。4、免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。

p16(2/3层 )，提示为中重度不典型增生，需要采取物理治疗（如冷冻、激光等），或者考虑宫颈锥切术。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究。抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。扩展资料免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。这些常用免疫组织化学方法的原理如下：1、免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量。2、免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。3、免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究。参考资料来源：百度百科-免疫组化

看懂免疫组化结果方法如下：对照染色——定位——半定位——图像分析仪免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：1、恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；2、确定转移性恶性肿瘤的原发部位；3、对某类肿瘤进行进一步的病理分型；4、软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；5、发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。6、为临床提供治疗方案的选择。

提示肺鳞癌恶性程度高。免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先把组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法把抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；确定转移性恶性肿瘤的原发部位；对某类肿瘤进行进一步的病理分型；软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定；为临床提供治疗方案的选择。