大肠杆菌

大肠杆菌在普通琼脂培养基上面都是一样的,圆形边缘整齐，表面光滑，半透明，小凸起；典型的大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征为：深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽的圆形菌落。大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定条件下引起疾病 。大肠杆菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等。扩展资料：大肠杆菌的特征：1、理化特性大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状；大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢。2、生化特性大肠杆菌的生化代谢非常活跃。大肠杆菌可以发酵葡萄糖产酸、产气，个别菌株不产气，大肠杆菌还能发酵多种碳水化合物，也可以利用多种有机酸盐。大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，吲哚产生和乳糖发酵是阳性。3、致病作用特性对人和多种动物来讲，由于病原大肠杆菌常常倾向具有一定的宿主特异性，对人有致病作用的菌株常常是很少引起动物的感染，反之亦然，据此可将病原大肠杆菌大致上将其划分为两种。参考资料来源：百度百科—大肠杆菌百度百科—菌落

大肠杆菌是革兰氏阴性菌，大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状；大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛。扩展资料：大肠杆菌中毒是典型的“病从口入”。生的或未煮熟的肉制品和乳制品是致病性大肠杆菌污染风险最高的食物。果蔬在种植或处理过程中可能被粪便污染，生吃也容易导致感染。另外，使用受污染的水，以及食物制备过程中的交叉污染，也是导致感染的原因。儿童、老人、孕妇和免疫力较低者是致病性大肠杆菌感染的高危人群。虽然多数患者短期可康复，但部分致病性大肠杆菌的危害不可小觑。参考资料来源：百度百科——大肠杆菌参考资料来源：人民健康网——大肠杆菌为何老惹事

大肠杆菌的解释寄生在人或高等 动物 大肠内的一种 细菌 。在肠内 生活 时对人或动物一般无危害，但如 进入 肾、胆囊等器官内，则会引起发炎。 词语分解 大肠的解释 肠的一部分，上连小肠，下通 * ，较小肠粗而短。分盲肠、结肠、直肠三部分。主要作用是吸取水分和形成粪便。中医列为六腑 之一 。《素问·灵兰秘典论》：“大肠者，传道之官，变化出焉。” 杆菌的解释 任何直杆状细菌;;区别于球菌和螺菌详细解释形状像圆木棒的细菌。有 许多 种类，白喉、麻风、结核病、破伤风等都是由 不同 的杆菌所引起的疾病。

　　大肠杆菌是人和动物肠道中最主要和数量最多的一种细菌,主要寄生于大肠内。大肠杆菌的危害有哪些呢？本文是我整理的大肠杆菌的危害，欢迎阅读。 　　大肠杆菌的危害 　　大肠杆菌是原核生物,构造相对简单,遗传背景清晰,培养操作容易,因此也常常被作为基因工程的对象加以利用:研究者常常将外源基因导入质粒,将质粒整合入大肠杆菌基因,这样,大肠杆菌就能够表达基因重组后的蛋白。此外,大肠杆菌还常常作为模型生物参与细胞学实验。虽然绝大多数大肠杆菌与人类有着良好合作,但是仍有少部分特殊类型的大肠杆菌具有相当强的毒力,一旦感染,将造成严重疫情。其中最具代表性的就是代号为O157:H7的大肠杆菌,它是EHEC(肠出血性大肠杆菌)家族中的一员。 　　大肠杆菌的防治方法 　　保持地方及厨房器皿清洁,并把垃圾妥为弃置;保持双手清洁,经常修剪指甲;进食或处理食物前,应用肥皂及清水洗净双手,如厕或更换尿片后亦应洗手;食水应采用自来水,并最好煮沸后才饮用;应从可靠的地方购买新鲜食物,不要光顾无牌小贩;避免进食高危食物,例如未经低温消毒法处理的牛奶,以及未熟透的汉堡扒、碎牛肉和其它肉类食品;烹调食物时,应穿清洁、可洗涤的围裙,并戴上帽子;食物应彻底清洗;易腐坏食物应用盖盖好,存放于雪柜中;生的食物及熟食,尤其是牛肉及牛的内脏,应分开处理和存放(雪柜上层存放熟食,下层存放生的食物),避免交叉污染。 　　大肠杆菌的特点 　　周身鞭毛,能运动,无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气,是人和动物肠道中的正常栖居菌,婴儿出生后即随哺乳进入肠道,与人终身相伴,其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长,减少蛋白质分解产物对人体的危害,还能合成维生素B和K,以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖,几占粪便干重的1/3。在环境卫生不良的情况下,常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌,可认为是被粪便污染的指标,从而可能有肠道病原菌的存在。 　　大肠杆菌的致病物质 　　定居因子:也称粘附素,即大肠杆菌的菌毛。致病大肠杆菌须先粘附于宿主肠壁,以免被肠蠕动和肠分泌液清除;大肠杆菌具有很多毒力因子,包括内毒素,荚膜,〣型分泌系统,黏附素和外毒素等;黏附素 能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上,避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除;外毒素大肠杆菌能产多种的外毒素,包括:志贺毒素〡和〢;耐热肠毒素〡和〢;不耐热肠毒素〡和〢。此外,溶血素A在尿路致病性大肠杆菌所致疾病中有重要作用;肠毒素:是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外毒素,分为耐热和不耐热两种。肠产毒性大肠杆菌的有些菌株只产生一种肠毒素,即LT或ST;有些则两种均可可产生。有些致病大肠杆菌还可产生vero毒素。 　　大肠杆菌超标的危害 　　1、大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 　　2、大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。 　　3、如果食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。而大肠菌群超标，也同样会引起腹泻、肠胃感染等。 　　大肠杆菌怎样传播 　　1、肠出血性大肠杆菌主要通过被污染的食物传播，目前尚未发现人与人之间的接触导致广泛传播的证据。 　　2、大肠杆菌O157:H7主要通过食用污染的食物向人类传播，例如生的或未煮熟的碎肉制品和生鲜奶。受粪便污染的水和其它食物以及食物制备期间的交叉污染(与牛肉和其它肉制品、受污染的板面和厨房用具)也将导致感染。导致O157:H7大肠杆菌疫情的食物包括未煮熟的汉堡包、风干肠、未施行巴氏消毒的新鲜压榨苹果酒、酸奶、由生鲜奶制作的奶酪。推荐阅读：警惕食物传播大肠杆菌 　　3、越来越多的疫情与食用水果和蔬菜(芽苗菜、菠菜、莴苣、酸卷心菜丝、生菜)有关，由于种植或处理期间的某一阶段接触到家畜或野生动物的粪便而可能造成污染。也从水体(池塘、溪水)、井和水槽中分离出肠出血性大肠杆菌，并发现该菌在粪便和水槽沉淀物中能够存活数月。来自被污染的饮用水和游憩用水的水源性传播均有报告。

1、大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。2、大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。3、人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。4、在培养基培养时无需添加生长因子，向培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。5、大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。6、大肠杆菌在生态系统中的地位：假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。7、它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子，同时可以有多个环状质粒DNA。8、大肠杆菌细胞的拟核有1个DNA分子，长度约为4 700 000个碱基对，在DNA分子上分布着大约4 400个基因，每个基因的平均长度约为1 000个碱基对。扩展资料：大肠杆菌为埃希氏菌属代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。参考资料来源：百度百科-大肠杆菌

大肠杆菌测定 伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板，在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管，(36士1)0C培养24h 后观察结果。大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法靛基质试验:滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合，静置，观察结果。出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。甲基 红(MR)试验:滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合，观察结果。出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。维 培(VP)试验:滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀，再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀，静置，观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化，出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。大肠杆菌鉴定结果靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定＋－ ＋＋ －－ —－ 典型大肠艾希氏杆菌非典型大肠艾希氏杆菌＋－ ＋＋ －－ ＋＋ 典型柠檬酸盐杆菌非典型柠檬酸盐杆菌－＋ －－ －－ ＋＋ 典型产气肠杆菌非典型产气肠杆菌如出现表1以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。结果报告1M Vic 试 验结果为++一一、一+一一和乳糖发酵管产气者，查其EC肉汤产气管数及其稀释倍数，对照附录B(资料性附录)中MPN检索表报告样品中大肠埃希氏杆菌MPN /a (mL)值

它有成串排列的三个13bp重复序列，四个供DnaA蛋白结合的四个不连续的9bp序列。十分保守。

A、大肠杆菌复制的唯一一个复制原点叫oriC，所以位置是固定的，A错误；B、大肠杆菌复制起始点的特点是保守序列AT含量较高，B正确；C、复制时，首先结合起始点的是ATP?DnaC蛋白，C错误；D、复制起始点通常AT含量较高，D错误．E、由以上可知B正确。

大肠杆菌的启动子必须和复制机器结合后才能启动复制，复制机器是蛋白质复合物。从实验角度来说，可以用染色质免疫沉淀技术（ChromatinImmunoprecipitation，简称ChIP)，其原理是在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。也就是说能够和目的蛋白相结合的DNA片段就是大肠杆菌的启动子序列。

【答案】：进行合成的所有分子都将完成合成，但剩余的分子不会起始。因而，生长周期中随机分散的一群细胞将继续合成一代DNA。$由于在氨基酸饥饿期间，所有分子都已完成合成，所以没有合成发生。

是cDNA文库的基因,大肠杆菌本身是原核生物,真核生物基因组基因往往含有内含子,在真核生物中转录后会被修饰,剪切下来的,而在大肠杆菌中,不能被剪切,所以转基因的时候最好转的是cDNA文库的基因,已切除内含子.另外,不是所有外源基因都适合用大肠做表达菌的,还要具体问题具体分析哦~

GFP本身是绿色荧光蛋白(GreenFluorecentprotein)的缩写，至于你说的大肠杆菌GFP是个菌，要么是可以表达绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌，要么是你把蛋白和菌搞混了。筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单，将氨苄青霉素加到所用培养基中，终浓度100ug/ml，把要筛选的菌液涂布其上，能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株。要注意的是生长时间不可太长，因为水解氨苄青霉素的beta-内酰胺酶能分泌到细菌外，导致阳性菌周围的阴性菌也能生长，即所谓的卫星菌落。

涂个板看看，有没有噬菌斑。

【答案】：噬菌体在基因cⅠ、cⅡ、cⅢ中的一个为琥珀突变，且链B(非A)含有琥珀抑制基因。

GFP本身是绿色荧光蛋白(Green Fluorecent protein)的缩写，至于你说的大肠杆菌GFP是个菌，要么是可以表达绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌，要么是你把蛋白和菌搞混了。筛选氨苄青霉素抗性的阳性克隆很简单，将氨苄青霉素加到所用培养基中，终浓度100ug/ml，把要筛选的菌液涂布其上，能长出的就是氨苄青霉素阳性菌株。要注意的是生长时间不可太长，因为水解氨苄青霉素的beta-内酰胺酶能分泌到细菌外，导致阳性菌周围的阴性菌也能生长，即所谓的卫星菌落。

噬菌体是由D.Herelle和Twort各自独立发现的。噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身的生长和增殖。一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。 噬菌体分布极广，凡是有细菌的场所，就可能有相应噬菌体的存在。在人和动物的排泄物或污染的井水、河水中，常含有肠道菌的噬菌体。在土壤中，可找到土壤细菌的噬菌体。噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居在易感宿主菌体内，故可利用噬菌体进行细菌的流行病学鉴定与分型，以追查传染源。由于噬菌体结构简单、基因数少，是分子生物学与基因工程的良好实验系统。 噬菌体颗粒在结构上有很大差别，一般可分成三种类型，即无尾部结构的二十面体，有尾部结构的二十面体和线状体，迄今已知的噬菌体大多数是有尾部结构的二十面体。 噬菌体有毒（烈）性噬菌体和温和噬菌体两种类型。侵入宿主细胞后，随即引起宿主细胞裂解的噬菌体称作毒性噬菌体。毒性噬菌体被看作正常表现的噬菌体。温和噬菌体则是：当它侵入宿主细胞后，其核酸附着并整合在宿主染色体上，和宿主核酸同步复制，宿主细胞不裂解而继续生长。这种不引起宿主细胞裂解的噬菌体称作温和噬菌体。 噬菌体颗粒感染一个细菌细胞后可迅速生成几百个子代噬菌体颗粒，每个子代颗粒又可感染细菌细胞，再生成几百个子代噬菌体颗粒。如此重复只需4次，一个噬菌体颗粒便可使几十亿个细菌感染而死亡。当把细菌涂布在培养基上，长成一层菌苔时，一个噬菌体感染其中一个细菌时，便会同上面所说的那样，把该细菌周围的成千上万个细菌感染致死，在培养基的菌苔上出现一个由于细菌被噬菌体裂解后造成的空斑，这便称为噬菌斑(plaque)。每一噬菌体除了能使宿主细菌裂解死亡外，还有一些噬菌体感染细菌后，并不使细胞死亡，称为温和噬菌体，这些噬菌体感染细菌后，将其自身的基因组整合进宿主细胞的基因组，此时，这种宿主细菌称为溶原性细菌。溶原性细菌内存在的整套噬菌体DNA基因组称为原噬菌体(prophage)，溶原性细菌不会产生许多子噬菌体颗粒，也不会裂解；但当条件改变使溶原周期终止时，宿主细胞就会因原噬菌体的增殖而裂解死亡，释放出许多子代噬菌体颗粒。 溶原性细菌有两个特点。第一，溶原性细菌在被噬菌体感染并溶原化后，不会被同种噬菌体再次感染，这是超感染免疫性。第二，经过若干世代后，溶原性细菌会开始进入溶菌周期，即溶原性细菌的诱发。此时，原噬菌体从宿主基因组上切离下来进行增殖。 λ噬菌体载体不具有质粒载体的抗生素抗性的标记基因；因此，对λ重组分子的选择主要有下面几种方法。 ① cI基因功能选择 cI基因编码的阻遏蛋白可使感染了λ噬菌体的大肠杆菌进入溶原化状态。如果在插入型载体的克隆位点上，或是置换型载体的可置换片段中，放上一个cI基因，当外源DNA插入或取代时，便破坏了cI基因，使出现cI-表型。此时，λ重组分子生成的是透亮的噬菌斑，而未重组的λ噬菌体由于仍保有cI基因，所以宿主细菌是溶原化的，就生成混沌的噬菌斑。 ②lac Z基因功能选择 lac Z基因的产物为卢—半乳糖苷酶，在Xgal—IPTG培养基上显现蓝色。在插入型载体的lac Z基因序列中引入限制性内切核酸酶的切点，外源DNA插入这个克隆位点就会破坏lac Z基因，于是在上述培养基上出现无色的噬菌斑。如果没有同外源DNA形成λ重组分子，则lac Z基因未遭破坏，在培养基上出现蓝色的噬菌斑。 ③spi-选择 λ噬菌体的red和gam基因产物可抑制噬菌体在宿主细菌中正常生长，red-和gam-突变型λ噬菌体则可正常生长。当置换型载体的可置换片段中放上red和gam基因后，外源DNA片段取代了置换片段，则同时除去了red、gam基因，就可在宿主菌中生长，否则就不能正常生长。 早在1958年，我国第一位细菌学博士余贺教授，就利用噬菌体成功治疗了绿脓杆菌对烧伤病人的感染，成为微生物学界的一段佳话。这件事情还被拍成了一部名为《春满人间》的电影。 噬菌体有时有益，有时有害，益是因为它会“吃”掉某些在人体内的病菌，可能起到治病的效果。害是因为它可能会“吃”掉一些益菌或其它本身属于害菌但被人利用做一些有益的事的细菌（如：大肠杆菌、葡萄球菌、酵母菌等）造成很大的经济损失。

大肠杆菌产生胰岛素并进行批量生产的原理是运用到了现代生物技术的转基因技术，它是先将人胰岛素基因从人的染色体上分离出来，插入从细菌细胞中提取出来的质粒(一种小圆环状DNA)中，再将这个合并起来的、带有胰岛素基因的质粒，转移入大肠杆菌的细胞中，随后该胰岛素基因会指导大肠杆菌细胞产生胰岛素，人类即可将这些胰岛素提取并收集出来，用于治疗糖尿病病人。 那么如何利用大肠杆菌生产胰岛素 呢？下面从基因工程角度说一下。 1.提取目的基因: 既从人的DNA中提取胰岛素基因,可使用限制性内切酶将目的基因从原DNA中分离. 2.提取质粒: 使用细胞工程,培养大肠杆菌,从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状. 3.基因重组: 取出目的基因与质粒,先利用同种限制性内切酶将质粒切开,再使用DNA连接酶将目的基因与质粒"缝合",形成一个能表达出胰岛素的DNA质粒. 4.将质粒送回大肠杆菌: 再大肠杆菌的培养液中加入含有Ca+的物质,如CaCl2,这使细胞会吸收外源基因.此时将重组的质粒也放入培养液中,大肠杆菌便会将重组质粒吸收. 5.胰岛素的产生: 再大肠杆菌内,质粒通过表达转录与翻译后,便产生出胰岛素蛋白质.通过大肠杆菌的大量繁衍,便可大量生产出胰岛素!

（1）获取目的基因的方法，一是从供体细胞的DNA中直接分离基因；二是人工合成基因．由图可知，过程（1）表示以生长素的RNA为模板反转录合成目的基因．（2）图中（1）过程是以原mRNA为模板，逆转录形成DNA单链，再进一步合成DNA双链．（3）先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合形成重组质粒．（4）过程③表示借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径将目的基因导入受体细胞．受体细胞是微生物时，一般用Cacl2（Ca2+）处理，以增大细胞壁的通透性，使细胞成为感受态细胞，易于含有目的基因的重组质粒进入受体细胞．（5）由图可知，质粒上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素的抗性基因．构建基因表达载体时，破环了质粒上的四环素抗性基因，但没有破环氨苄青霉素的抗性基因，所以导入普通质粒或重组质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，都能在含有氨苄青霉素的培养基上生长．（6）由第五小题分析可知，把已经导入了普通质粒或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，导入普通质粒的大肠杆菌能生长，导入重组质粒的大肠杆菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能．故答案为：（1）从供体细胞的DNA中直接分离基因； 人工合成基因． 逆转录（2）mRNA 逆转录（3）先用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，露出相对应的粘性末端，再用DNA连接酶使两者的粘性末端结合（4）侵染 CaCl2（5）将得到的大肠杆菌B涂布在含有氨苄青霉素的培养基上培养，能够生长的，说明已经导入了质粒或重组质粒；反之，则没有导入 普通质粒和重组质粒上有抗氨苄青霉素基因（6）有的生长，有的不生长 导入普通质粒A的细菌生长，因为普通质粒A上有四环素抗性基因；导入重组质粒的细菌不生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因上，破坏了其结构功能

目的是表达目的基因,获得代谢产物等.

1、分析得知：全部人类基因组约有2.91Gbp，约有39000多个基因；平均的基因大小有27kbp；其中G+C含量偏低，仅占38%，而2号染色体中G+C的含量最多；到目前仍有9%的碱基对序列未被确定，19号染色体是含基因最丰富的染色体，而13号染色体含基因量最少等等（具体信息可参见cmbi特别报道：生命科学的重大进展）。2、目前已经发现和定位了26000多个功能基因，其中尚有42%的基因尚不知道功能，在已知基因中酶占10.28%，核酸酶占7.5%，信号传导占12.2%，转录因子占6.0%，信号分子占1.2%，受体分子占5.3%，选择性调节分子占3.2%，等。发现并了解这些功能基因的作用对于基因功能和新药的筛选都具有重要的意义。3、基因数量少得惊人：一些研究人员曾经预测人类约有14万个基因，但Celera公司将人类基因总数定在2.6383万到3.9114万个之间，不超过40,000，只是线虫或果蝇基因数量的两倍，人有而鼠没有的基因只有300个。如此少的基因数目，而能产生如此复杂的功能，说明基因组的大小和基因的数量在生命进化上可能不具有特别重大的意义，也说明人类的基因较其他生物体更"有效"，人类某些基因的功能和控制蛋白质产生的能力与其他生物的不同。这将对我们目前的许多观念产生重大的挑战，它为后基因组时代中生物医学的发展提供新的非凡的机遇。但由于基因剪切，EST数据库的重复以及一些技术和方法上的误差，将来亦可能人类的基因数会多于4万。4、人类单核苷酸多态性的比例约为1/1250bp，不同人群仅有140万个核苷酸差异，人与人之间99.99％的基因密码是相同的。并且发现，来自不同人种的人比来自同一人种的人在基因上更为相似。在整个基因组序列中，人与人之间的变异仅为万分之一，从而说明人类不同“种属”之间并没有本质上的区别。5、人类基因组中存在"热点"和大片"荒漠"。在染色体上有基因成簇密集分布的区域，也有大片的区域只有“无用DNA”——不包含或含有极少基因的成分。基因组上大约有1／4的区域没有基因的片段。在所有的DNA中，只有1%-1.5%DNA能编码蛋白，在人类基因组中98%以上序列都是所谓的“无用DNA”，分布着300多万个长片断重复序列。这些重复的“无用”序列，决不是无用的，它一定蕴含着人类基因的新功能和奥秘，包含着人类演化和差异的信息。经典分子生物学认为一个基因只能表达一种蛋白质，而人体中存在着非常复杂繁多的蛋白质，提示一个基因可以编码多种蛋白质，蛋白质比基因具有更为重要的意义6、男性的基因突变率是女性的两倍，而且大部分人类遗传疾病是在Y染色体上进行的。所以，可能男性在人类的遗传中起着更重要的作用。7、人类基因组中大约有200多个基因是来自于插入人类祖先基因组的细菌基因。这种插入基因在无脊椎动物是很罕见的，说明是在人类进化晚期才插入我们基因组的。可能是在我们人类的免疫防御系统建立起来前，寄生于机体中的细菌在共生过程中发生了与人类基因组的基因交换。8、发现了大约一百四十万个单核苷酸多态性，并进行了精确的定位，初步确定了30多种致病基因。随着进一步分析，我们不仅可以确定遗传病、肿瘤、心血管病、糖尿病等危害人类生命健康最严重疾病的致病基因，寻找出个体化的防治药物和方法，同时对进一步了解人类的进化产生重大的作用。9、人类基因组编码的全套蛋白质（蛋白质组）比无脊椎动物编码的蛋白质组更复杂。人类和其他脊椎动物重排了已有蛋白质的结构域，形成了新的结构。也就是说人类的进化和特征不仅靠产生全新的蛋白质，更重要的是要靠重排和扩展已有的蛋白质，以实现蛋白质种类和功能的多样性。有人推测一个基因平均可以编码2-10种蛋白质，以适应人类复杂的功能。

乳糖（lac）操纵子由调节基因，启动基因、操纵基因和三个结构基因lacZ、lacY、lacA组成。 调节基因lacI组成型表达，编码阻遏蛋白，既有与操纵基因lacO结合的位点，也有与诱导物结合的位点。当诱导物与阻遏蛋白结合时，可改变阻遏蛋白的构象，使其无法与lacO结合。阻遏蛋白具有阻止转录和识别小分子诱导物的双重性，因此它的活性状态直接决定启动基因是开启或关闭。 当缺乏乳糖时，阻遏蛋白以活性状态结合在lacO上，这就影响了RNA聚合酶与lacP的结合，并阻碍RNA聚合酶通过lacO，这样结构基因就无法转录；当乳糖存在时，因作为诱导物的乳糖与阻遏蛋白结合，改变了它的构象，成为失活构象而脱离lacO，于是RNA聚合酶就可以与启动基因结合并开始转录。

①解旋：复制刚开始时，DNA分子首先利用细胞提供的能量，在解旋酶的作用下，把两条螺旋的双链解开，这个过程叫做解旋。②复制：以解开的每一段母链为模板，以周围环境中游离的4种脱氧核苷酸（分别是腺嘌呤脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和胸腺嘧啶脱氧核苷酸4种）为原料，按照碱基互补配对原则，在有关酶的作用下，各自合成与母链互补的一段子链。③复旋：随着解旋过程的进行，新合成的子链也不断延伸，同时每条子链与其对应的母链盘绕成双螺旋结构，从而各形成一个新的DNA分子。这就是DNA分子的复制过程，复制结束后，一个DNA分子就形成了两个完全相同的DNA分子。新复制出的两个子代DNA分子，通过细胞分裂分配到子细胞中去。扩展资料：DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程，复制的结果是一条双链变成两条一样的双链（如果复制过程正常的话），每条双链都与原来的双链一样。这个过程是通过名为半保留复制的机制来得以顺利完成的。DNA复制不能沿滞后链进行，也就是说，从头到尾的DNA链，直到已经复制了足够长度的DNA分子，否则DNA复制不会继续沿着模本链进行复制，DNA复制于是从新合成复制叉处分开。在复制过程中必须暂停并等待更多的亲本DNA链片段，而此时整个长度只是沿着开始到结束方向前进了一小段距离。DNA复制为边解旋边复制，原核生物一般是单个复制起点，真核生物多个复制起点。旋转酶的作用是解开由解旋酶切断DNA链产生的超螺旋化，解旋酶使DNA链旋转并释放超螺旋体，使它们重新加入到DNA链中。旋转酶最常见于复制叉的上游，形成超螺旋的位置。由于DNA聚合酶只能连接DNA链（不能开始），所以由引物酶引导指导链进行复制。引物酶将与模本链互补的RNA引物加到DNA链上开始复制冈崎片段。单链结合蛋白绑定在暴露的碱基上竭力防止DNA链的不稳定并保证单链DNA之间不会由氢键形成危险的发夹结构。DNA合成酶包含一个校对机制，通常指的是“外切核酸酶活性”，即将错误添加的核酸去除掉。参考资料来源：百度百科——DNA复制

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称，作为病毒的一种，噬菌体具有病毒特有的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。噬菌体不能单独存活，通常寄生在细菌体内，当然也会寄生在大肠杆菌体内

在工程菌的培育过程中选择大肠杆菌作为受体细胞的目的是利用大肠杆菌具有繁殖速度快的优点。例如，将控制合成胰岛素的基因转入大肠杆菌内，使大肠杆菌大量生产胰岛素。

遗传背景清楚 ;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养（培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强）、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。缺点：表达产物缺少饭以后的修饰（如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等）；同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性，而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白，可能混在产物里，应用受限。真核基因在大肠杆菌中表达：1，真核生物的启动子不能被原核细胞（大肠杆菌）的RNA聚合酶识别；2，真核生物的mRNA上没有SD序列，因此不能被原核细胞核糖体结合；3，真核生物的基因含有内含子，原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制；4，真核细胞的基因产物，往往需要翻译后加工，真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶；5，真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解。

遗传背景清楚 ;目标基因表达水平高;表达系统成熟完善;易于培养（培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强）、成本低;被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物.缺点：表达产物缺少饭以后的修饰（如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等）；同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性,而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混在产物里,应用受限.真核基因在大肠杆菌中表达：1,真核生物的启动子不能被原核细胞（大肠杆菌）的RNA聚合酶识别；2,真核生物的mRNA上没有SD序列,因此不能被原核细胞核糖体结合；3,真核生物的基因含有内含子,原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制；4,真核细胞的基因产物,往往需要翻译后加工,真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶；5,真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解.

大肠杆菌作为基因工程受体菌的特点：1、发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率。2、菌株能利用常用的碳源，并可进行连续发酵。3、菌株不是致病株，也不产内毒素。4、代谢控制容易进行。5、能进行适当的DNA重组，并且稳定。扩展资料：检验方法：1、发酵法：这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。采用这样的方式方法，还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。2、滤膜法：该方法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封。存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。然后记录数据，估算每一单位的水溶液菌群数量，然后进行大肠杆菌量值的换算。3、平板计数法：用无菌吸管吸取稀释度样品1 mL，该样品与乳糖胆盐发酵类似，然后将其放入无菌培养皿中，再加入温度于 45℃下的 CDLJ JD 显色培养基中10 mL的量，并进行培养皿中溶液均匀混合。可以通过快速转动培养皿的方式，等溶液凝固以后，加入5 mL左右，然后快速摇晃培养基，使其可以均匀覆盖平板表面，等其凝固以后，翻转培养基，在温度37℃中培养24 h左右，然后观察其形态，颜色等变化。除此之外，平行设置两个稀释度培养基，步骤是先稀释样本，通过稀释后，微生物可以分散为单个细胞，然后进行一定环境条件下培养，直到其长成菌落为止，然后进行计算大肠杆菌的数量，通过稀释度和样本数量进行计算。4、免疫磁珠法：该分离技术的主要原理是以磁珠为载体和抗体，进行抗体和磁珠的结合，然后通过磁力技术完成力学的移动，进而分离大肠杆菌。与其他分离细菌的方式相比，这样的方式方法具有一定的优点，该技术可以提升样本中病原性弧菌的检测成功率，并且免疫磁珠技术可以于不同菌种中对不同的微生物进行处理，进而在很大程度上提高检测效率 。5、自动化仪器检测法：主要是运用免疫自动化分析仪，该技术产生并运用于1970年。随着科技的发展和进步，自动化仪器检测技术应用非常广泛，并且操作起来非常方便，可以节约很多时间，其受干扰的程度较小，可以节省人力物力的投入，也可以提高检测的精确度。在现阶段的发展过程中，自动酶的免疫检测体系的应用非常广泛。6、ATP生物发光法：在近些年的发展过程中，生物发光技术应用很广泛，是一种比较快速的检测微生物的技术。在活性细胞中，ATP是其常见的能量代谢产，可以提供细胞生理活动过程中所需的能量。并且，该技术可以在生物体内可以在一定范围内保持一定的含量。食品中的大肠杆菌检测技术可以采用荧光光度的方法，因为生物体发光的原因是有荧光素酶的作用，产生了发光的效果。该物质来源于北美的萤火虫体内，可以催化荧光素的氧化作用，不过，该物质性质不稳定，可以对荧光进行快速分解。另外，该检测技术结果获得过程是非常快的，并且该设备携带方便，十分适用于现场检测。参考资料来源：百度百科-基因工程菌参考资料来源：百度百科-大肠杆菌

多了一项能力或者一项以上功能。。。。。。。因为通过基因工程改造大肠杆菌的基因，即添加基因序列，使添加的基因序列表达，合成之前大肠杆菌没有的蛋白质。。。。

在工程菌的培育过程中选择大肠杆菌作为受体细胞的目的是利用大肠杆菌具有繁殖速度快的优点。例如，将控制合成胰岛素的基因转入大肠杆菌内，使大肠杆菌大量生产胰岛素。

大肠杆菌有不同的菌株，其基因组序列是不同的，你可以用准确的菌株名在NCBI的Genome数据库中搜索，以实验室常用的工程大肠杆菌BL21株为例，其基因组的序列和信息在以下链接中非常详细：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome?Db=genome&Cmd=ShowDetailView&TermToSearch=24757其基因组的序列和图片（包括编码区）在这个链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/253322479?report=graph你可以拷贝全部序列，或者部分序列，编码区连氨基酸对应的密码子都标好了，非常方便。其基因组中各个基因的序列在下面这个链接，要那个基因，就点相应的链接（文件大，需耐心等待）：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/CP001665有什么问题可给我留言。