DNA

用于描述DNA遗传标记系统的个案鉴定能力的术语有：个人识别能力、DP、LR、匹配概率、似然率、有限程度支持、中等程度支持、强有力支持、极强有力支持、STR表型、表型频率P。这些都是公认的鉴定能力术语。

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比，DNA分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性的性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。随着分子生物学技术的发展，现在DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。

（1）可以同时标记S和P，方法是在培养细菌的培养液中，加入含有放射性S和P物质，使细菌细胞内同时含有放射性的S和P，再用这种细菌培养噬菌体，就可以把噬菌体同时用放射性的S和P标记。（2）但在本实验中，不能同时标记。原因是，本实验的结果是检测放射性的存在与否，都标记和都不标记，没有什么区别。（举个例子来说，放射性标记如同是用红色染料来标记，如果将DNA和蛋白质都用标记成红色，那怎么能区分出那是DNA那是蛋白质呢。）

DNA有多个位点的基因型不符合遗传规律是什么意思根据孟德尔遗传的分离和自由组合定律,亲代基因型决定子代基因型,他们之间基因型关系如表1所示.在没有基因突变、分型错误的前提下：①孩子的一对等位基因必定是一个来自父亲,一个来自母亲；②孩子不可能带有双亲均没有的等位基因.这两点是亲权鉴定的基本原理.也就是说,在肯定孩子的某个等位基因为生父基因,而假设父并不带此等位基因时,不能排除他为孩子的生父.对于父系遗传的Y染色体,子代的分型必定与父亲的相同,而且同一父系的所有个体的分型一致；对于母系遗传的线粒体DNA,子代的分型必定与母亲的相同,而且同一母系的所有个体的分型一致.仅根据上述遗传定律假设父与孩子之间在一个遗传标记上不符合遗传规律就可以排除其父子关系,但由于突变等多种原因的存在,一个基因座不符合遗传规律,可能是由突变等原因造成的,而且有文献已报道在真实的家系中存在两个遗传标记的突变,因此一个遗传标记的不符不能否定其亲缘关系［2］.通过分子遗传学分析,在亲权鉴定中,3个以上STR基因座不符合遗传规律时,可排除亲子关系；当1或2个STR基因座不符合遗传规律时,增加检测手段,仍未发现新的不符合遗传规律的遗传标记,且RCP值大于99.99%的,可以肯定亲子关系.

DNA 分子标记大多是以DNA片段电泳谱带形式表现的。依其遗传特性可分为显性和共显性标记2种；依多态性检测手段可分为以Southern杂交技术为核心的分子标记和以PCR技术为核心的分子标记；根据在基因组中出现的频率，又可分为低拷贝序列和重复序列标记。限制性片段多态性RFILP是第—种用于研究的DNA标记。限制性核酸内切酶是一种在特定序列上切割DNA分子的酶，用它处理一个DNA分子时，即产生限制片段。这种序列特异性意味着用一种限制酶处理一种DNA分子总会产生同样的片段。但对于基因组DNA来说，并不总是这样。这是因为有些限制位点具多态性，以两种等位形式存在。一种等位形式有正确的限制位点序列，能被酶切开；另一等位形式的序列有改变，从而该限制位点不能被识别。后者的结果是在核酸内切酶处理后，两个相邻的限制片段仍然连接在一起，从而导致了长度多态性（如图1）。这就是一个RFLP的例子。如同用基因作为标记一样，RFLP在基因组图谱上的位置可以通过追踪其等位基因的遗传而得到。人类基因组中大约有100000个RFLP，但是理所应当的每个RFLP只能有两种等位形式（有或没有这个位点），这就限制了RFLP在人类基因作图上的应用价值，因为一个家庭的所有成员很可能都是某一个RFLP的纯合子。（简单来说，它不能区分纯合子和杂合子）。随机扩增片段长度多态性标记（Random Amplified Polymorphic DNA ，RAPD)RAPD技术是由Williams等首先创立的一种DNA分子标记技术，利用单一的10个碱基寡核苷酸作为引物，对基因组DNA进行PCR扩增。经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA序列多态性。扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism ，AFLP)AFLP是Zeabeau 等（1993）发明的一项技术，它既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性。其基本原理是通过PCR 扩增基因组DNA片段，扩增产物的变性聚丙烯酰胺电泳显示扩增片段长度多态性，其中引物=接头+酶切位点+2～3个核苷酸。AFLP技术分析流程：⑴DNA 模板制备；⑵提取样本DNA 经浓度和质量检测后，一般采用双酶（EcoRI和MSEI或PstI或TaqI）酶切， 在基因组DNA上产生低频和高频切口；⑶选择性扩增酶切片段。酶切后，限制性片段在T4连接酶作用下与特定接头连接，形成带有接头的特异性片段；⑷PCR前扩增，一般用带一个选择性引物进行预扩增，反应条件与常规PCR反应基本一致；⑸利用放射性同位素标记或荧光标记PCR 引物；⑹在Taq聚合酶作用下完成94 ℃变性30s ，65 ℃淬火30s，72 ℃延伸60s，PCR扩增36个循环；⑺PCR产物在含尿素聚丙烯酰胺上电泳；⑻将电泳后的凝胶转移到吸附滤纸上，经干胶仪进行干胶处理；⑼在X光片上感光，数日后冲洗胶片并进行结果分析。AFLP反应起始一般高温复性（一般65 ℃），因此只有那些与3"端严格配对的片段才能得到扩增，选择性很强。实验结果稳定，重复性好，呈典型的孟德尔式遗传，每个AFLP可以获得50～100条谱带信息，多态性强。微卫星（Microsatellite）微卫星是指以几个（1～6 bp) 核苷酸为单位，多次串联重复序列，也称之为简单重复序列（single sequence repeats ，SSR） 、短串联重复序列（short tandem repeats ，STR）或简单序列长度多态性（single sequence length polymorphism ，SSL P）。广泛分布于真核生物基因组中，大约每隔10～50bp就有一个微卫星，由于重复次数和重复程度的不完全而造成每一个位点的多态性。单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）基因组中存在单个的点突变，且数量极大，有些也对产生RFLP，但许多并个能。这是囱为它们所处的序列不能被限制件内切核酸酶所识别。在人类基因组中，据认为有200000个以上的SNP(single nucleotidc polymorphism）位干基因内．而且有更多的SNP位于非基因的DNA中。每个SNP只有两个等位基因，所以这些标记在人类绘制遗传图谱方面又与RFLP同样的缺点：对于一个SNP，很可能—个家族的所有成员都是纯合子。SNP的优点是它数目庞大，而且对SNP分型所用的方法不需凝胶电泳。这非常重要，因为已证明凝胶电泳很难实现自动化，所以使用它的检测方法相对缓慢而且费力。由于SNP以寡核苷酸杂交分析（oligonucleotide hybidization analysis）为基础，故其检测更快速。寡核苷酸是在试管中合成的通常小于50个核苷酸的短单链DNA分子。在适当的条件下，一个寡核苷酸与另一个DNA分子仅在可形成完全的碱基配对结构时才能杂交。如果有一个错配，寡核昔酸上就有一个位置不能形成碱基对。则不能杂交（图1）。因此寡核苷酸杂交能区分一个SNP的两个等位基因。筛选策略包括：DNA芯片（DNA chip）技术DNA芯片是一块面积为2cm平方或更小的硅片，以高密度排列方式携带有许多不同的寡核苷酸。待测DNA用荧光标记后加到芯片的表面。用荧光显微镜观察杂交情况，显示荧光信号的位置即表示该处的寡核苷酸与待测DNA发生了杂交。因此一个实验中可以量化许多SNP。动态等位基因特异的杂交（dynamic allele-specific hybridization,DASH) 在这种技术中，杂交在溶液中进行，比如在96孔微量滴定板的一个孔中进行G荧光标记只能与双链DNA结合，因此只有发生了杂交才能检测到信号。开始，杂交在允许有错配的条件下进行。在这个阶段，无论待测DNA含有哪一种SNP等位基因，寡核苷酸都能与之杂交。由于错配的杂交产物不如完全杂交产物稳定，故在较低温度解链．因此可以通过升高温度来区分等位基因。这样就可以从使杂交依赖性荧光信号消失的温度来判定待测DNA中存在哪一种等位基因。

目前主流的遗传标记为短串联重复序列（STR）。这类标记具有遗传稳定性高、高度多态性、易于复合扩增等优点。另外，单核苷酸多态性（SNP）和插入缺失多态性（Indel）也可应用于法医学DNA分析，但其普及率偏低，没有被广泛使用。

20世纪80年代以来，DNA分子标记技术被广泛用于植物的遗传多样性和遗传关系研究。相对其他标记类型来说，DNA分子标记是一种较为理想的遗传标记类型，其原因包括：（1）核苷酸序列变异一般在选择上是中性的，至少对非编码区域是这样；（2）由于直接检测的是DNA序列，标记本身不存在基因型与环境互作；（3）植物细胞中存在三种基因组类型（核基因组、叶绿体基因组和线粒体基因组），用DNA分子标记可以分别对它们进行分析。目前，DNA分子标记主要可以分为以下几大类，即限制性片段长度多态性、随机扩增多态性DNA、扩增片段长度多态性、微卫星或称为简单序列重复、单核苷酸多态性。每种DNA分子标记均有其内在的优缺点，它们的应用随不同的具体情形而异。在遗传多样性研究方面，应用DNA分子标记技术的报道已不胜枚举。

dna的鉴定不是说像一般人想象的那样有一个明确的结果，而是靠实验数据进行分析的，具体是看遗传的染色体对应点，通常一对一认定只能确定有血亲关系，所以可能出现你所说的其实儿子是父亲的。

目前法医dna分析使用的dna遗传标记主要有：短串联重复序列（STR）、单核苷酸多态（SNP）和微小插入缺失（Indel）三种。其中STR是目前应用最多的标记。

20世纪80年代以来，DNA分子标记技术被广泛用于植物的遗传多样性和遗传关系研究。相对其他标记类型来说，DNA分子标记是一种较为理想的遗传标记类型，其原因包括：（1）核苷酸序列变异一般在选择上是中性的，至少对非编码区域是这样；（2）由于直接检测的是DNA序列，标记本身不存在基因型与环境互作；（3）植物细胞中存在三种基因组类型（核基因组、叶绿体基因组和线粒体基因组），用DNA分子标记可以分别对它们进行分析。目前，DNA分子标记主要可以分为以下几大类，即限制性片段长度多态性、随机扩增多态性DNA、扩增片段长度多态性、微卫星或称为简单序列重复、单核苷酸多态性。每种DNA分子标记均有其内在的优缺点，它们的应用随不同的具体情形而异。在遗传多样性研究方面，应用DNA分子标记技术的报道已不胜枚举。

限制性片段长度多态性　　(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)　　　1974年Grodzicker等创立了限制性片段长度多态性(RFLP)技术，它是一种以DNA—DNA杂交为基础的第一代遗传标记。RFLP基本原理：利用特定的限制性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA，得到大小不等的DNA片段，所产生的DNA数目和各个片段的长度反映了DNA分子上不同酶切位点的分布情况。通过凝胶电泳分析这些片段，就形成不同带，然后与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影，即获得反映个体特异性的RFLP图谱。它所代表的是基因组DNA在限制性内切酶消化后产生片段在长度上差异。由于不同个体的等位基因之间碱基的替换、重排、缺失等变化导致限制内切酶识别和酶切发生改变从而造成基因型间限制性片段长度的差异。

【答案】：遗传标记指能够稳定遗传的、易于识别的等位性基因位点的遗传多态性形式。遗传标记包括形态标记、细胞学标记、生化标记和分子标记等。形态标记是指用肉眼能够直接观察到的一些表型特征，其优点是简单直观，经济方便，容易观察记载。其缺点是形态标记的数量少，可以直接鉴别的形态标记有限，同时许多形态标记还受到环境、生育期、基因的显隐性关系以及基因互作等影响。细胞学标记是指由于染色体数目和结构的变异从而会引起生物的某些表型性状的异常，另外，染色体核型和带型分析同样可以用来测定基因所在的染色体及相对位置，它们都可以作为一个标记来进行遗传和基因定位研究。其优点是能够直接在细胞学水平上观察染色体数目和结构的变化，缺点是细胞学标记需要花费较大的人力和较长的时间来培育，同时很多物种由于染色体数目和结构变异导致其对环境的适应能力较差，如发育不良或育性较差等而难以较好的保存材料。生化标记主要包括贮藏蛋白和同功酶标记，其差异是由决定酶蛋白本身的等位基因的差异造成的，因此同功酶的谱带的差异分析实质上是对编码该蛋白等位基因位点的分析。其优点是共显性标记，其结果是直接反应基因的差异，受环境影响较小，但其具有组织和发育的特异性等条件限制。分子标记能直接反应基因组DNA上的差异，其特点是无表型效应，以DNA形式表现，不受组织、发育和环境条件的影响；共显性标记；数量多至无限；多态性高；中性标记，且标记之间不存在互作等干扰，从而广泛应用于遗传图谱的构建、基因发掘和定位、基因克隆、种质资源与进化以及育种等诸多领域。其缺点需要抽提DNA检测，涉及到仪器设备较多，且费用较高。

个人鉴定800左右，司法鉴定1200左右每人。"准备好一张白纸。从头上拔下毛发(动作要迅速，最好两根一起拔)，用肉眼观察毛发根部是否带有一个半透明的胶囊状物体。取下的头发不能用手去接触毛囊，用a4纸包好放入信封，在信封表面标记上样本所属人的身份和姓名。每人需要15-20根。血痕采集用针轻刺皮肤表面(手指尖、耳垂、脚后跟以及身体表面任何部位)，待血流出时，用准备好的纱布(大小药店均有出售)轻轻擦拭，在其表面留下5-6个如同黄豆大小的血印即可。将其用白纸或则信封包好，不能用塑料袋装。在信封表面标记上样本所属人的身份和姓名。注：采血的人半年之内没输过别人的血两年之内没进行过骨髓移植。口腔粘膜采集从药店购买单头消毒棉签，每人三根。拿起一根棉签伸进口腔在脸颊内侧的肌肉壁上来回刮，让棉头充分湿润，刮拭20下。第二根在另一侧刮拭20下。第三根左右各刮拭10下后拿出。将其用白纸或则信封包好，在信封表面标记上样本所属人的身份和姓名。注：不能用塑料袋装。"

亲子鉴定需要准备的资料如下：(1)被鉴定人的身份证(或工作证)、结婚(离婚)证明、孩子出生证(或户口)等证明身份及其相互关系的证件； (2)如系公检法机关委托的鉴定，出具由法院、检察院、公安部门或律师事务所签发的亲子鉴定委托书，注明父母和孩子的姓名、地址、身份证以及申请原因。被鉴定人要求：(1)被鉴定人应由母-子-可疑父亲或父母-子组成，只要求父子或母子二人鉴定者一般要求说明鉴定理由；(2)成年被鉴定人均应自愿同意鉴定，14岁以上的青少年应适当征求其对鉴定的意见； (3)被鉴定人应了解自己或近亲属有无遗传病史，为鉴定提供参考(有遗传病史的易于基因变异)；(4)被鉴定子女年龄一般在半岁以上为好。

离心管碎裂可能是自己操作不当，也有可以是离心管的质量有问题。管状试样容器，可带密封盖或压盖。所属学科：机械工程（一级学科）；实验室仪器和装置（二级学科）；实验室离心机-实验室离心机零部件及附件（三级学科）。塑料离心管的优点是透明或者是半透明的，它的硬度小，可用穿刺法取出样本。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。

密度带的数量和位置是不会变化的，因为子II代是中带和轻带，且中带在上，轻带在下。当在同等条件下将子II代继续培养时，离心后，带的数量还是2种，即中带和轻带，而且位置不变中带在上，轻带在下。具有放射性强度的是中带，因为中带中含N15，因为含N15的细胞只有2个，培养前和培养后都是2个细胞，所以中带放射强度不变。轻带数量增多，放射性发生变化。

分离各种细胞器用了差速离心法而DNA那个用了密度梯度离心法。密度梯度离心 又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法； 原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。 差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。

质粒DNA的超速离心分离中科院上海生物化学研究所，上海 200031 余兴明 一、简述 近代质粒DNA分离纯化以从大肠杆菌中分离为代表，鉴于大局杆菌（E.coli）在分子生物学研究中的重要地位，从E.coli中分离纯化质控DNA〈Piasmid DNA〉成为近年来超离心技术中一个重要课题。而质粒DNA的快速分离纯化又对超离心设备（超速离心机、转头和附属设备）提出了更高要求。 E.coli是典型的原核细胞生物，由于原核细胞缺乏其核细胞所具有的那种由单位膜组成的可把多种功能组分分隔为专一化的和局部独立区域的内膜系统，因而没有其核细胞所包含的细胞器（核、内质网、高尔基体、线拉体、溶酶体等等）。电镜显微照片显示E.coli有两个可以区别的内部区域一一细胞质和核质，在它们外面围着一层较薄的细胞质膜和很厚的细胞壁，在细胞壁外部附着一些一端游离的鞭毛。质粒DNA位于核区，以细丝状存在，这种细丝状物在多种情况下是极长的环状DNA的一些片断所折叠起来的聚密体。 针对E.coli的显微结构待点，在进行超离心分离纯化质粒DNA之前的预处理顺序是： E.coli→用溶菌酶去细胞壁→用表面活性剂如SDS、Trit X-100等EE细胞膜→用乙酸锅使DNA、RNA及蛋白质大部分沉淀(90%以上)。 沉淀物可以在加入TE缓冲液(10m-MTris-HCL lmMEDTA,pH8.0)后分子筛上住去蛋白,去RNA;也可以用超速离心法去蛋白居,去RNA，去级状DNA或DNA断片。本文将综述后一种方法在近年来的新进展.二、质粒DNA超速离心分离的最新进展 1、 传统的分离方法：数年前，由于受设备条件限制，质粒DNA的分离一般用CsCl平衡等密度离心法，自形成梯度。以10~12ml单管容量为例，用甩平转头分离，36.000rpm×60小时，用角式转头分离45,OOOrpm×36小时，前者包括加减速在内共用去1.3亿转驱动部寿命，后者也要用去1亿转驱动部寿命，这对当时超速离心机总寿命为100~200亿转来看，无疑每次实验费用过高，加上CsCl用量多、价格贵等因素，使这类分离纯化工作成为非常昂贵的实验。 2、新进展：（1）超速垂直管转头的离心分离（钦合金或碳纤维制造的）：从1975年垂直管转头向世后，近年来各主要离心机生产商开发的垂直管转头，单管容量0.2ml到4Oml，最高转速从50,000rpm到120,000rpm,RCFmax可达700,OOOXg，90年代开发的新机型和转头己能够使质粒DNA垂直管离心分离实验做起来得心应手。使用垂直管转头分离纯化质粒DNA的待点是：.·由于沉降距离最短，离心时间最短，高效、低耗：·离心管纵向剖面积远大子横向截面积，离心沉降时纯祥品区带的容量较大，在没有沉淀附着或沉淀附着很紧很密的条件下分离纯度高，样品加载量也较大；流体静压力,不会因静压过高而使生物体颗粒受到损伤.离心管内样品颗粒受到的流体静压为：ω：角速度r：样品颗粒所在位置与旋转中心距离（以厘米计）r1:转头最小离心半径即rmin（厘米），在使用gmax离心时是液面和旋转中心的距离。Pa:起始密度（对预形成梯度时为最小密度,对自形成梯度离心,为离心结束时最小密度）。a：梯皮斜率在超速离心中，P值相当大，一般认为P≤150Okg/cm2,才不致损伤生物体颗粒，垂直管转头（r-r1）很小,相对说P也相当小（102数量级），而对甩平转头，在离心前往往要进行P值校核，过大时，应降低转速。在用垂直管进行质粒DNA分离纯化时，RNA沉淀附在离心管壁部，在减速、梯度方向转换时,质粒DNA区带从沉淀区"擦"过，使DNA中混入少量RNA而影响纯度。在极高转速离心时（如大于80,OOOrpm），由于RNA附着壁部较紧,这种影响较小。 (2)近垂直管转头离心分离：为了消除垂直管转头用于质粒DNA离心在壁部形成的RNA沉淀对已形成的DNA区带的污染，同时也为了改进一般斜角式转头（倾角25·~35·）由于沉降距离较长，因而分离时间也较长的缺点，近几年开发了多种近垂直管转头（即Near VerticalTube Rot时,简称NVT转头或Neo Angle Rotor,小假角转头,简称NT).它们的离心管纵剖面中心轴线与离心机驱动轴线之间夹角在7.5·~10·之间,转速从65,000rpm到120,OOOrpm，RCFmax可达646,000×g单管容量从2ml至13.5ml。NVT（或NT）转头的开发主要是为质粒DNA分离而设计，当然它也适用于线粒体DNA、染色体DNA、RNA及血清脂蛋白的分离·纯化。使用NVT（NT）转头分离纯化质控DNA的特点是:离心所需时间比垂直管转头稍长（增加30%~40%），但比一般斜角式转头短（为同类斜角式转头分离时间的60%~70%）。 虽然因为倾角小而使RNA版离心管外壁下滑分力较小，但在加入表面活性剂(如0.1%~0.001%Trimn X-100）后，RNA沉淀可以较快地滑向离心管底部（即在自形成梯度时,RNA已到达底部），在梯度转换过程中不影响质位DNA纯度；流体静压小，极高速运转时也不会损伤生物体颗粒；离心管纵剖面比一般角式及甩平转头部大，分离纯度高，样品加入量较大。 （3）不连续阶梯梯度分离:质校DNA分离纯化传统方法是采用金管CsCl自形成梯度平衡等密度离心法，离心开始时金管CsCl密度均一，样品均匀分布其中。CsCl自形成梯度的离心时间可以用下式计算：式中N：实际转速(rpm)P:样品（如质粒DNA）在CsCl的浮动密度r:从旋转中心到纯样品带中心的距离（厘米），作为初步结算，对质粒DNA离心，r位置可定在离心管中部，r平均刊点再偏外-10%。（rmax-rmin）。F:取决于梯度材料及溶液初始密度的常系数〈表1〉。S20.w：样品（质粒DNA）在20℃水中沉降系数，可参照有关文献决定。[注]表中TCA为三氯乙酸,TFA为三氟乙酸 用以上公式算出的离心时间和实际离心结果非常接近。从公式可以看出T反比子（N4、r2），显然在CsCi不结晶析出的前提下提高（N4、r2）将会减少离心时间,而增加转速的效果特别明显。但是对于某些较低转速转头（如 65,000rpm以下）CsCl自形成梯度所需时间过长（10小时）以上，因此质粒DNA纯样品区带形成的时间也比较长. 作为对全管初始等密度条件的改进，近几年发展了阶梯形不连续CsCl梯度的平衡等密度离心，即离心管初始梯度分二部分：下部：高密度区（p=1.80-1.81g/cm3），占总容量1/3。上部：低密度区（p=1.46-1.48g/cm），占总容量2/3，实验证明，二阶不连续CsCl梯度可比全管等密度离心所需时间要短得多（以12ml垂直管转头为例，质粒DNA，CsCl梯度55,000rPm，20℃；不连续二阶梯度离心为5.5小时,全管等密度离心为8小时）。二阶不连续梯度离心，样品加在靠离心管底部的高密度区，无论对何种转头，其r很大；而且只存在样品的上浮而不存在低密度区（低离心力口速度区）样品的沉降；在接近DNA浮动 密度区初始密度差较大,自形成梯度，时间较短；由于以上原因缩短了离心时间。（4）超高速多级（转速）分离：很明显，根据T公式提高转速将会加速CsCl梯度的形成，离心时间也会相应缩短。但是，在某温度下的高转速，长时间离心分离对于较高密度的CsCl来说很可能产生局部结晶析出，而局部结品析出不仅会影响梯度，而且会因析出的固态CsCl因损伤离心管壁而造成离心失败或事故.为此,对于质粒DNA离心分离实验，由于新型超速机的可编程序运转的特点。可以从极高转速逐渐向稍低转速推移，每次实验分成很多转速挡，既提高了效率，又保证了实验成功和安全。当然，这类实验是要经过多次摸索，才能形成常用的离心程序，美国Beckman公司和日本Hitact1i ko ki株式会社都在各自的先进的超速机上做了大量实验，并向用户推荐可靠、高效的离心理序[2、31。三、典型的质粒DXA超速离心分离举例1.传统分离举例： 例（1）单管容量为12rnl，最高转速在50,000rpm以下的角式转头，12PA密封管，各厂新型超速机。样品+TE液（配成pH8.0），EB加入量0.2mg/ural，加入CsCl配成全管p=1.57g/ml45,000rpm×36小时，20℃，慢减速或55,000rprn×16小时+40,000rpm×1小时，20oC慢减速-分离结果:管中部稍下形成纯质粒DNA带，中部稍上出现DNA片断带，近底部为RNA沉淀，上浮物为蛋白质。 特点：分离结果较好，但纯样品带较宽，分离时间很长，用去近1亿转驱动部寿命。 例（2）单管容量为5ml，最高转速为65,000rpm的铁吊椅甩平转头，5PA管，样品配置同例（1） 特点：同例（5） （用去0.2亿转驱动部寿命）。36,000rpm×55小时,20℃,或32,000rpm×70小时,20·c。·分离结果及特点：分离结果很理想，质粒DNA带很窄，RNA沉降于离心管球底。但离心时间过长，成本较高（用去1.1亿~1.3亿转驱动部寿命）。2.垂直管转头离心分离： 例（3）日本日立cp100α主机，P100VT转头（700,000×g,8×5ml），5PA密封管，样品及梯度配置同例(1)100,000rpm×1小时50分,20℃,慢减速(7档)。·特点:离心结果与例(1)相似,由于转速极高，壁部RNA沉淀很紧，在降速过程中对DNA污染很少。离心时间很短，高效，低成本(用去0.12亿转驱动部寿命)。例(4)最高转速为50,000rpm的钦垂直管转头，容量8×40ml，40PA密封管，样品配置如例〈1〉50,000rpm×24小时，20℃，慢减速。特点：大容量分离，RNA沉淀对DNA带稍有污染。3.近垂直管转头分离 例（5）Beclunar1NVT90转头XL-90主机，8×5时，5PA密封管，转头最高转速90,OOOrpm，646,000×g。 样品+TE液（配成pH8.0），E·B加入量为0.2mg/mh，TritmX-100加入量为0.01%，加入Cscl配成p=1.55g/ml。78,000rpm×4小时，20℃，慢减速。 特点：由于Triton X-100的作用，RNA沉淀加速滑向离心管底，转头减速过程中对DNA没有污染，分离结果很理想（用去0.2亿转驱动部寿命）。 例（6）日本日立CS12OEX或美Beckman TLX微量超速机，最高转速为120,OOOrpm的NVT（NT）转头，8×2时，2PA密封管，样品及梯度液配置基本同例（5），但CsCL配成p=1.55z/ml,120,000rprnX3小时，20℃，慢减速。4.不连续阶梯梯度分离： 例（7）日本日立SRP83VT转头，80,000rprm，549,000g，8×5时，5PA密封管（日立CPα，β系列机或SC夏系列机），梯度液配置：先配置TE液+Cscl，p=1.47g/时，共3.5ml，先注入5PA密封管。再配置TE液+样品+CsCl配成p=1.81g/mh E.B.0.2mg/ml，共1.5ml用注射器伸入管底缓缓注入使原先的p=1.47液上浮。83,ooorpm×1小时，20℃，慢加速，慢减速，结果同例(3)。 特点：由于使用了二阶不连续梯度,CsCl自形成梯度时间缩短。超高转速，RNA沉淀很紧，对DNA带污染很小，高效，低成本（只用去0.05亿转驱动部寿命）。缺点是样品加入量稍小。 例〈8〉日本日立RP55VF：转头，55,000rpm，293,000×g，12×5时，样品及梯皮液配置同例（7） 55,000rpm×4.5小时，20·c，慢加、减速。结果与例〈7〉相似。5.超高速多级（转速）分离： 例（9）：BeckmanXL-90超速机，NVT-90转头90,000rpm，645,000xg，8×5ml，5.1PA密封管，样品及梯度液配置同例（5）。 多级分离：90,000rpm×l.5小时+87,000rpm×0.25小时+83,000rpm×0.25小时+81,000rpm×0.50小时+80,000rpm×0.50小时，20℃，慢减速。（以上实验亦可在日本目立CP100α或90α主机上做用PlOOVT转头，结果相同）。 特点：结果同例(5)，但时间降为3小时（0.16亿转） 例（10）Hitact1i微量超速CS-120EX或CS-10OEX微量超速机，SlOOAT5角式转头，100,OOOrpm，550,000×g，8×5ml，样品及梯度液配置与例(3)基本同，但样品+TE液配成p=1.55g/ER1。100,ooorpm×4.5小时+98,ooorpm×15分+96.ookpm×30分+94,ooorpm×30分+90,OOOrpm×25分+85.OOOrpmX30分（共7小时），20℃，慢减速。 特点：使用角式转头，微量超速机，在离心力较小的条件下（与大型超速机相比），离心时间较短，RNA沉向管底，分离结果很理想。四、质粒DNA超速离心分离注意事项 1.防止污染 防止脱氢酶污染：脱氢酶能使DNA降解或变性，而它又无处不在（皮肤上，没清洗并没消毒的器具表面……），所以，在质粒DNA分离实验的每一个环节都要注意这一点．有效的办法是器具（离心管、盖、注射器、移液器、盛器等等）的消毒（蒸气消毒或0.1%焦破酸二乙商消毒）。虽然，我们可以加DFP（二异丙基确酸氟）或PMSF（苯用基确院氛）来抑制脱氢酶的降解使用,但主要手段还是清洗和消毒。为防止皮肤上核糖体污染，操作时应戴上手术用手套。 2.防止重金属盐中存在的重金属离子和DNA结合成复合物：CsCl为电离介质，在离心前CsCl应过柱以消除Cs离子，对接触样品的器皿也要清洗，并用去离子水冲洗。 3.样品的加载量 祥品加入量与样品浓度有关，为了提高分辨率，样品加入量应加以控制，合适的加入量应以前人实验作参考。自行试验时，每毫升梯度液样品量约为10μZ~20μg。 4.对于角式、垂直、近垂直转头的自形成梯度平衡等密度分离，可用。0~100Orpm快加速及1,000rprn~0慢减速，阶梯梯度则要求慢加速，慢减速，近代起这机都提供了很好的范例，供用户选择加、减速速率时参考。 5.转头在离心开始时温度应和离心运转时工作温度基本一致（土5·C），转头预冷温度过低（10oC以下）在极高转速，短时间离心时，可能因来不及升温而出现CsCl析出，使实验失败或发生事故。 6.合适的取样方法：质粒DNA超速离心分离加样较简易，离心后取样方法和操作水平将决定回收率和样品纯度。首先，取样环境应和离心工作温度相近（士5℃）；取样时实验台上应无振动源；根据实验室条件相应选择横向穿刺、底部空孔、离心管切割或用梯度仪收集。但无论哪一种方法部必须小心行事。 7.合适的pH值，核酸类佯品在实验全过程中都应保持在pH8.0的TE液中，pH值过高过低也会使DNA变性。 8.离心管及加液量：由于近代质位DNA的超速离心分离使用了非常高的转速，对7可心管材质要求也很高，一般做这类实验的离心管只用一次。最好是用密封管，而且一段以选择PA管为好。离心管存放朔不超过2~3年，使用密封管或有盖薄壁管样品要加满。使用甩平转头液面EE管口2~3毫米以防止弯月面溢液或管口翻卷。

可以，像蔗糖、葡萄糖、菲可、尼克登这些物质都可以通过离心法形成密度梯度。

会。dna提取需要将dna和其他物质分离，需要使用离心机，贝克曼超速离心机可以在更短时间内实现更有效的分离，广泛应用于质粒DNA、亚细胞器以及病毒的分离。

DNA聚合酶是DNA在复制的时候用到的是以一条DNA为模板根据碱基互补配对原则从母链的3"端开始将子链从5‘端延伸到3"端DNA解旋酶顾名思义是解旋用的通过消耗ATP将螺旋的DNA双链分子解开DNA连接酶使用来连接的通过识别两个特定的碱基序列将这两个DNA分子连接形成一个DNA限制性核酸内切酶跟DNA连接酶是反着的通过识别一个DNA分子中的一个特定的碱基序列在这个碱基序列的一个特定位置断开形成两个DNA分子逆转录酶以RNA为模板合成DNA就比如艾滋病病毒在入侵T细胞后就要逆转录然后把DNA接到T细胞的染色体DNA上这几种酶中DNA聚合酶、DNA连接酶、限制酶、逆转录酶是作用在磷酸二酯键的都会根据碱基互补配对原则至于DNA解旋酶则比较好记题做多了就记住了

正常情况下人体内是不应该有DNA连接酶的。但是……如果人体感染了某种携带有指导合成DNA连接酶的病毒，而这种病毒又是一种荣源性病毒（即可与人体细胞和平相处）的话，人体细胞内是有可能合成DNA连接酶的……

DNA连接酶是一种封闭DNA链上缺口的酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5"-P与另一DNA链的3"-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。这种形式的连接过程，对于正常的DNA合成，损伤DNA的修复，以及遗传重组中DNA链的拼接等都是十分必要的。3.2 DNA聚合酶的共同性质是：①以脱氧核苷酸三磷酸为前体催化合成DNA；②需要模板和有引物提供3"－OH；③不能起始合成新的DNA链；④催化脱氧核苷酸三磷酸加到生长中的DNA链的3"-OH末端；⑤催化DNA合成的方向是5"→3"。所有原核和真核的DNA聚合酶都具有相同的合成活性，都可以在3"－OH上加核苷酸使链延伸。分析两种酶的特性不难发现，DNA连接酶的作用在于封闭DNA链上的缺口，而DNA聚合酶主要在模板链和引物的作用下，合成互补链的作用，两者的使用范围不同。

DNA聚合酶的作用是催化DNA的复制,即将原料脱氧核糖核苷酸 通过引物与模板链进行配对,合成新的DNA单链。DNA连接酶则是将两段分开的DNA链通过特定末端连接在一起。拓展资料DNA聚合酶DNA聚合酶（DNA polymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，从将DNA由5"端点开始复制到3"端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。

DNA连接酶与DNA聚合酶有形成方式、模板和用途三个区别：1、形成方式不同DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用，催化原来的dna进行复制，然后将原来的dna和复制以后的dna进行模板配对后，连接聚合在一起，就可以形成新的dna链。2、模板不同DNA连接酶不需要模板，因为DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。用DNA连接酶连接具互补粘性末端的DNA片段或是用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来。DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。DNA聚合酶的结构是三磷酸腺苷。3、用途不同DNA连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。如基因工程中，大肠杆菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。DNA聚合酶在DNA复制中起做用，主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。参考资料：百度百科-DNA连接酶百度百科-DNA聚合酶

（1）E·coli DNA连接酶，来源于大肠杆菌，可用于连接粘性末端；（2）T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率低。（3）热稳定的DNA连接酶（thermostableDNAligase），是从嗜热高温放线菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分离纯化的，一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。

DNA连接酶和聚合酶都是作用在磷酸二酯键,分别把脱氧核甘酸链和单个脱氧核甘酸连接起来,而解旋酶只作用在氢键,使双链解开. 希望可以帮到您!

DNA聚合酶用于DNA复制，连接两条DNA单链行成一条DNA双链，作用于碱基对间的氢键；DNA连接酶用于基因工程，将目的基因连在载体（一般为质粒）上，作用于两脱氧核糖核苷酸间的磷酸二脂键。

DNA连接酶的作用是连接DNA链之间的磷酸二酯键，使其成为一个完整的DNA分子。例如在基因工程中可将运载体与目的基因相连接，形成重组DNA分子。DNA聚合酶的作用是在DNA复制时将单个的脱氧核苷酸连接成脱氧核苷酸长链。

在DNA复制中，连接氢键不需要任何酶。氢键能自动形成。当氢原子与氮原子靠近时，共用的电子对强烈地偏向氮原子一边，使氢原子带有部分正电荷，能再与另一个电负性高而半径较小的原子氮原子结合，形成氢键。

DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用. DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在DNA复制中起做用. DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键. DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来.因此DNA连接酶不需要模板.

DNA连接酶主要应用于基因工程中连接两个粘性末端时使用。DNA连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。 具体请参见：http://baike.baidu.com/view/564099.htm希望能帮助你。^__^

DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5"-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5"-PO4与另一DNA链的3"-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。一般性质：大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子，和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近，这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合，填满双链DNA上的单链间隙后封闭DNA双链上的缺口。这在DNA复制、修复和重组中起着重要的作用，连接酶有缺陷的突变株不能进行DNA复制、修复和重组。噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链，分子量为60KD，其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所抑制。此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。另外，NH4C1可以提高在大肠杆菌DNA连接酶的的催化速率，而对T4DNA连接酶则无效。无论是T4DNA连接酶，还是大肠杆菌DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。

-5"端合成，真核生物中也有对应的酶由于后随链的合成不连续所以每个片段都要有引物在dna合成结束的时候这些引物要被切除因而留下缺口这时又要特定的酶去填补缺口（比如大肠杆菌中的dna聚合酶i）可是填补序列和周围序列间会有缺刻也就是说他们交界处的3"的方向合成dna而dna本身的两条链又是反向分布的所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去（以它为模板的子链生成方向正好是dna聚合酶可以直接提供的）而后随链要盘绕成回环反扭过来才能合成再合成起始的时候dna聚合酶是需要一段rna引物的在原核生物中这一引物是由dnaq(一种酶)在已解旋的单链5"-3"dna的复制事实上是半不连续复制即只有一条链的合成是连续的这听起来很神奇但确实是这样连续合成的链叫做前导链另一条链称为后随链它的合成是不连续的以它为模板的合成需要一段一段地进行所合成的片段叫做冈崎片段产生这一现象的原因在于dna合成酶只能沿5"

DNA连接酶在人体中也有存在，不过并不是用来复制DNA从而进行细胞分裂的，人体细胞分裂所需的酶是DNA聚合酶。人体中的DNA连接酶是用来将入侵人体的外援细菌或病毒的DNA剪碎的，在没有外源细菌或病毒入侵时，DNA连接酶不发挥作用基因工程中的DNA连接酶大多取自于原核生物体内

需要DNA解旋酶和DNA聚合酶， 也需要DNA连接酶的：人体的DNA为两条链。在复制时，双链分开，形成复制叉，像一个方向移动。双链DNA的方向相反。复制叉形成后，一条链的3"端朝向叉口，新复制的链则为5"向3"持续延伸。这点很容易理解。另一条链则是5"端朝向叉口，而新的DNA链只能以这条链的3"端为模板开始复制。所以只能等复制叉张开到一定程度后，露出足够多的模板，才能开始复制。但是这样复制出来的只有一小截。等下一段模板露出后，又复制一小截。这些小片段有个名字，叫冈崎片段。他们需要DNA连接酶连接在一起才能形成新的DNA链。细菌的DNA是环形的，没有冈崎片段。但是也要DNA连接酶把新合成的DNA连接成环形。 另外，还需要RNA引物酶来合成起始引物。

合成酶是合成脱氧核糖核酸的，在生产DNA基本结构的时候用。聚合酶是排列组合脱氧核糖核酸的，在复制的时候用。

从理论上看，DNA连接酶不判断碱基是否互补，是可以连接你说的情况的，但是现实条件下，DNA连接酶要发挥其功能，在2个碱基之间行成磷酸二酯键，是要这2个碱基之间的距离达在酶的活性中心内的。你说的情况下，我理解有2种情况: 1.DNA连接酶需要连接的连接点处的剪辑不配对。例如：ATGC ATGCTACG AACG间断处需要连接。但是由于AA不配对，AC碱基不可能进入DNA连接酶活性中心，所以这个不可能。2。连接点碱基配对，但是整个黏性末端不完全配对。这个情况是可以连接的。

DNA连接酶只能修补DNA双链中有一个小缺口的单链，也就是说，这个缺口的对面，DNA是完整的，不是断裂的。如果两条链在同一个地方断裂就是2条DNA了，这时连接酶没作用，当然，如果DNA上有不止一个小缺口，只要DNA双链还完整，DNA连接酶就可以进行修补。DNA聚合酶在DNA复制中期延长作用，根据另一条链按碱基互补不断延长DNA，而DNA复制中所出现的引物水解后留下的缺口，就由DNA连接酶来修补。RNA聚合酶和DNA聚合酶差不多，就是连接核糖核苷酸形成磷酸二酯键.在DNA复制中(合成引物)和转录中起作用。

需要,需要DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶

您好，（1）E·coliDNA连接酶，来源于大肠杆菌，可用于连接粘性末端；（2）T4DNA连接酶：来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率低。（3）热稳定的DNA连接酶（thermostableDNAligase），是从嗜热高温放线菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分离纯化的，一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。

dna连接酶到底是作用在磷酸二脂键，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5"-PO4与另一DNA链的3"-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。不必咬文嚼字，我们知道DNA连接酶是让DNA末端核苷酸上的游离磷酸基酯化形成磷酸二酯键就可以了。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

DNA连接酶与DNA聚合酶有形成方式、模板和用途三个区别：1、形成方式不同DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用，催化原来的dna进行复制，然后将原来的dna和复制以后的dna进行模板配对后，连接聚合在一起，就可以形成新的dna链。2、模板不同DNA连接酶不需要模板，因为DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。用DNA连接酶连接具互补粘性末端的DNA片段或是用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来。DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链。DNA聚合酶的结构是三磷酸腺苷。3、用途不同DNA连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。如基因工程中，大肠杆菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。DNA聚合酶在DNA复制中起做用，主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。参考资料：百度百科-DNA连接酶百度百科-DNA聚合酶

dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而dna连接酶是在两个dna片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与dna片段之间形成磷酸二酯键dna聚合酶是以一条dna链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的dna链；而dna连接酶是将dna双链上的两个缺口同时连接起来。因此dna连接酶不需要模板二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同

DNA连接酶作用在磷酸二酯键，DNA聚合酶作用在碱基之间的氢键上

DNA聚合酶（DNA polymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，从将DNA由5"端点开始复制到3"端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5"-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。

需要DNA解旋酶和DNA聚合酶，由于复制是是整条链完整的打开完整的合上，不要用的，DNA连接酶是生物工程时，从中间的磷酸二酯键将DNA切成两段，要修补DNA

氢键并不是依靠酶来形成的。碱基互补配对时自然会在碱基间形成氢键。DNA连接酶连接的是DNA片段，催化形成的是磷酸二酯键。所以你提供的说法错了。

DNA连接酶在DNA复制中的作用是（） A.校正作用B.合成引物C.缝合缺口D.切除引物正确答案：C

合成酶氧化还原酶是一类催化氧化还原反应的酶，可分为氧化酶和脱氢酶两类水解酶类催化水解反应异构酶催化各种同分异构体之间的相互转变，即分子集团内部的重新排列合成酶又叫连接酶，是催化有腺苷三磷酸（ATP）参加的合成反应，即由两种物质合成一种新物质的反应

dna连接酶到底是作用在磷酸二脂键，借助atp或nad水解提供的能量催化dna链的5"-po4与另一dna链的3"-oh生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(t4dna连接酶除外)，而且必须是两条紧邻dna链才能被dna连接酶催化成磷酸二酯键。不必咬文嚼字，我们知道dna连接酶是让dna末端核苷酸上的游离磷酸基酯化形成磷酸二酯键就可以了。

网上有两种答案，天涯和百度还有很多地方。各不相同。下面这个比较赞同，但是我还是查查文献问问老师搞清楚了再回答你吧。: ) 请等等。 没有。 1、一般性质：大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子，和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近，这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合，填满双链DNA上的单链间隙后封闭DNA双链上的缺口。这在DNA复制、修复和重组中起着重要的作用，连接酶有缺陷的突变株不能进行DNA复制、修复和重组。 噬菌体T4DNA连接酶分子也是一条多肽链，分子量为60KD，其活性很容易被0.2mol/L的KCl和精胺所抑制。此酶的催化过程需要ATP辅助。T4DNA连接酶可连接DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA和双链DNA粘性末端或平头末端。另外，NH4C1可以提高在大肠杆菌DNA连接酶的的催化速率，而对T4DNA连接酶则无效。无论是T4DNA连接酶，还是大肠杆菌DNA连接酶都不能催化两条游离的DNA链相连接。 2、作用机制：DNA连接酶利用NAD或ATP中的能量催化两个核酸链之间形成磷酸二酯键。反应过程可分三步： (1)NAD 或ATP将其腺苷酰基转移到DNA连接酶的一个赖氨酸残基的ε—氨基上形成共价的酶-腺苷酸中间物，同时释放出烟酰胺单核苷酸(NMN)或焦磷酸。 (2)将酶-腺苷酸中间物上的腺苷酰基再转移到DNA的5"-磷酸基端，形成一个焦磷酰衍生物，即DNA-腺苷酸; (3)这个被激活的5"-磷酰基端可以和DNA的3"-OH端反应合成磷酸二酯键，同时释放出AMP。 DNA连接酶所催化的整个过程是可逆的。酶-腺苷酸中间物可以与NMN或PPi反应生成NDA或ATP及游离酶;DNA-腺苷酸也可以和NMN及游离酶作用重新生成NAD。该逆反应过程可以在AMP存在的情况下使共价闭环超螺旋DNA被连接酶催化，产生有缺口的DNA-腺苷酸，生成松弛的闭环DNA。

DNA连接酶主要应用于基因工程中连接两个粘性末端时使用。DNA连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。 具体请参见：http://baike.baidu.com/view/564099.htm希望能帮助你。^__^

DNA复制的过程经历了解旋（需要DNA解旋酶）、延伸（需要DNA连接酶）、新链的螺旋。因此，该过程需要连接酶的参与。产生这一现象的原因在于，DNA合成酶只能沿5"-3"的方向合成DNA，而DNA本身的两条链又是反向分布的，所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去（以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的）。而后随链要盘绕成回环，反扭过来，才能合成，再合成起始的时候DNA聚合酶是需要一段RNA引物的，在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5"端合成，真核生物中也有对应的酶，由于后随链的合成不连续，所以每个片段都要有引物。在DNA合成结束的时候，这些引物要被切除，因而留下缺口，这时又要特定的酶去填补缺口（比如大肠杆菌中的DNA聚合酶I）可是填补序列和周围序列间会有缺刻，也就是说他们交界处的3"-5"磷酸二脂键是断开的，这时需要DNA连接酶发挥作用，将其连好。所以，后随链上的缺刻多，还真够DNA连接酶忙一阵的，前导链上只有一开始有RNA引物因此，最后也基本只有这个地方会用到连接酶。

DNA复制时半保留复制，复制时两条链同时进行复制，但是每一条新合成的DNA都是从5‘-3"进行，所以有一条链是不连续的，是由形成冈崎片段形成小片段，另一条则是连续合成，所以在合成结束后要将冈崎片段用DNA连接酶连接起来形成完整的DNA双链。所以DNA连接酶是必需的，是连接冈崎片段用的。

1、作用不同DNA聚合酶以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA。DNA 连接酶分为两大类：一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP 的DNA 连接酶，另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD* 的DNA 连接酶。2、连接片段不同DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用，在基因工程中起作用。DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起做用。3、模板不同DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

DNA连接酶的作用就是连接DNA分子。①在DNA复制过程当中，一条链是连续复制的，另一条链则是不连续复制的。首先形成一定大小的冈崎片段，然后再由DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整的DNA分子。②在基因工程当中，也用来将目的基因与载体连接起来，形成重组DNA分子。

相关专题重组DNA技术工具酶 教科书的观点：DNA连接酶无特异性,其催化dna片段末端连接的情况分两种：(1)催化相同或互补的黏性末端连接;(2)催化同一种限制酶切割产生的平末端连接.两种情况下,末端的“拼接”都会形成“回文序列”. 然而,在基因工程的实际操作中,催化DNA片段末端连接的方法是非常灵活的.例如,当目的序列和载体上没有相同的 限制性内切酶 位点可供利用时,而用不同的限制性内切酶切割后的黏性末端不能互补结合,则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端,再用T4DNA连接酶连接,但平末端连接要比黏性末端连接的效率低得多. 由此可见,DNA连接酶可以催化两种不同限制酶切割产生的平末端连接,而两个平末端拼接后,并不是“回文序列”.结论：DNA连接酶催化两个末端连接形成的新序列并不都是“回文序列”.(注：回文序列双链DNA分子中一段旋转对称的核苷酸序列,即以对称轴为轴心旋转180°后呈对称状态,它是大多数限制性内切酶的识别位点.《中国百科大辞典》) 在构建基因表达载体时,最简单的重组方式就是在目的基因DNA的两端用两种不同的限制性酶进行酶切,产生两个不同的黏性末端.再用这两种限制酶对合适的载体进行酶切,也产生两个不同的粘性末端.酶切后的目的基因和载体,由于它们各自的两个末端不同,都不会发生自身环化.

DNA连接酶：DNA连接酶可在两个寡核苷酸之间进行连接反应，同时必须与另一DNA链形成杂交体，相当于连接dsDNA中的缺口，反应在4565摄氏度条件下进行，需要NADsuperscript+superscript的参与。一般用于检测等位基因的变化和PCR扩增中是否引入寡核苷酸。

DNA连接酶在人体中也有存在，不过并不是用来复制DNA从而进行细胞分裂的，人体细胞分裂所需的酶是DNA聚合酶。人体中的DNA连接酶是用来将入侵人体的外援细菌或病毒的DNA剪碎的，在没有外源细菌或病毒入侵时，DNA连接酶不发挥作用基因工程中的DNA连接酶大多取自于原核生物体内

DNA连接酶在人体中也有存在，不过并不是用来复制DNA从而进行细胞分裂的，人体细胞分裂所需的酶是DNA聚合酶。人体中的DNA连接酶是用来将入侵人体的外援细菌或病毒的DNA剪碎的，在没有外源细菌或病毒入侵时，DNA连接酶不发挥作用基因工程中的DNA连接酶大多取自于原核生物体内

1.DNA连接酶没有专一性，只要在一条DNA链的3"末端具有一个游离的羟基(一OH)，而在另一条DNA链的5"末端具有一个磷酸基(一P)的情况下，就能发挥其作用。2.不同黏性末端或者平末端能够用同一种DNA连接酶连接，但不是所有连接酶都可以做到这一点。比如T4噬菌体DNA连接酶，但连接平末端的双链DNA分子的反应速率要比黏性末端连接慢得多，低浓度PEG可提高平末端连接速率；大肠杆菌DNA连接酶只能催化互相匹配黏端的5"突出端与3"突出端的双链DNA之间的连接，不能催化双链DNA片段平末端之间的连接。3.也有一种连接酶可以做到特异性，即热稳定的DNA连接酶。它是一种能够在高温下催化两条寡核苷酸探针发生连接作用的一种核酸酶。使用此种DNA连接酶进行体外连接，便可明显降低形成非特异性连接产物的机率。 具体过程为：将热变性的DNA和与靶重复序列两条链之一互补的寡聚核苷酸在接近熔点的温度下杂交。然后加人热稳定的DNA连接酶共价连接那些没有间隙隔开的寡聚核苦酸。通过变性将连接产物与模板分开，结果产生单链DNA分子的混合物。

区别：DNA聚合酶主要连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起作用。DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用。在基因工程中起作用，同时DNA连接酶在DNA复制中也起作用，比如岗琦片段的连接。扩展资料：DNA聚合酶和DNA连接酶的比较（参考资料来源：《生物化学》第7版 人民卫生出版社）

dna连接酶和dna聚合酶的异同：dna连接酶是在两个dna片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与dna片段之间形成磷酸二酯键；dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的dna片段上，形成磷酸二酯键等。 一、dna连接酶和dna聚合酶的相同点 （1）它们的化学本质都是蛋白质； （2）dna连接酶和dna聚合酶均属于酶，具有酶的基本属性和特点； （3）dna连接酶和dna聚合酶均参与dna的复制、逆转录等过程。 二、dna连接酶和dna聚合酶的不同点 1、形成方式不同 dna连接酶是在两个dna片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与dna片段之间形成磷酸二酯键。dna连接酶都不能催化两条游离的dna链相连接。 dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的dna片段上，形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用，催化原来的dna进行复制，然后将原来的dna和复制以后的dna进行模板配对后，连接聚合在一起，就可以形成新的dna链。 2、模板不同 dna连接酶不需要模板，因为dna连接酶是将dna双链上的两个缺口同时连接起来。用dna连接酶连接具互补粘性末端的dna片段或是用T4dna连接酶直接将平末端的dna片段连接起来。 dna聚合酶是以一条dna链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的dna链。dna聚合酶的结构是三磷酸腺苷。 3、用途不同 dna连接酶主要用于基因工程，将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合，故也称“基因针线”。如基因工程中，大肠杆菌连接酶连接黏性末端，T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。 dna聚合酶在dna复制中起做用，主要是连接dna片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。

DNA的复制事实上是半不连续复制即只有一条链的合成是连续的这听起来很神奇但确实是这样连续合成的链叫做前导链另一条链称为后随链它的合成是不连续的以它为模板的合成需要一段一段地进行所合成的片段叫做冈崎片段产生这一现象的原因在于DNA合成酶只能沿5"-3"的方向合成DNA而DNA本身的两条链又是反向分布的所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去（以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的）而后随链要盘绕成回环反扭过来才能合成再合成起始的时候DNA聚合酶是需要一段RNA引物的在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5"端合成，真核生物中也有对应的酶由于后随链的合成不连续所以每个片段都要有引物在DNA合成结束的时候这些引物要被切除因而留下缺口这时又要特定的酶去填补缺口（比如大肠杆菌中的DNA聚合酶I）可是填补序列和周围序列间会有缺刻也就是说他们交界处的3"-5"磷酸二脂键是断开的这时需要DNA连接酶发挥作用将其连好所以后随链上的缺刻多还真够DNA连接酶忙一阵的前导链上只有一开始有RNA引物因此最后也基本只有这个地方会用到连接酶

不同点在于它们催化的底物或反应不同 DNA聚合酶：在DNA复制时起作用，将多个脱氧核苷酸催化聚合为脱氧核苷酸链（也就是DNA单链），此时形成的化学键是磷酸二酯键。 DNA解旋酶：在DNA复制或转录时起作用，将DNA的双链解开，作用对象是氢键，使氢键断裂 DNA水解酶：在消化道或细胞内起作用，将DNA水解为脱氧核苷酸，作用对象是磷酸二酯键 DNA连接酶：在DNA修饰过程或基因工程中起作用，将两个DNA片段连接起来，此时形成的化学键是磷酸二酯键。

dna聚合酶的作用是催化dna的复制，即将原料脱氧核糖核苷酸通过引物与模板链进行配对，合成新的dna单链。dna连接酶则是将两段分开的dna链通过特定末端连接在一起。希望对你有帮助。

需要dna解旋酶和dna聚合酶，由于复制是是整条链完整的打开完整的合上，不要用的，dna连接酶是生物工程时，从中间的磷酸二酯键将dna切成两段，要修补dna才用的

是这个样子的。dna聚合酶不但有成键活性，还有外切活性，你说的dna聚合酶能将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3"末端的羟基上，形成磷酸二酯键，是正确的，但是，dna聚合酶的工作，只能由一段引物起始，这是必须的。通常，dna聚合酶是个庞大的复合体。他的复制dna的方向是3"末端到5"末端。而2条dna链是方向的，dna聚合酶开始复制，需要引物，一条链的合成是连续的，从3"末端到5"末端，但另一条链方向却和dna聚合酶合成方向相反。因此，另一条链是分段复制的。每一段，称为一个冈崎片段。简单的说，冈崎片与冈崎片之间的磷酸二酯键是不能由dna聚合酶产生，这个磷酸二酯键是dna连接酶完成。dna连接酶不但参与2个冈崎片间的磷酸二酯键形成，也参与dna损伤修复中的磷酸二酯键形成。dna连接酶和dna聚合酶都能在两dna片段之间形成磷酸二酯键，只是过程不一样，效果也不一样。

DNA解旋酶用于双链复制时解开双链DNA限制酶用于切断DNA的磷酸二酯键，形成两个双链DNA连接酶用于将限制酶切断的两个双链重新连起来，形成一条双链

DNA连接酶只能修补DNA双链中有一个小缺口的单链，也就是说，这个缺口的对面，DNA是完整的，不是断裂的。如果两条链在同一个地方断裂就是2条DNA了，这时连接酶没作用，当然，如果DNA上有不止一个小缺口，只要DNA双链还完整，DNA连接酶就可以进行修补。DNA聚合酶在DNA复制中期延长作用，根据另一条链按碱基互补不断延长DNA，而DNA复制中所出现的引物水解后留下的缺口，就由DNA连接酶来修补。RNA聚合酶和DNA聚合酶差不多，就是连接核糖核苷酸形成磷酸二酯键.在DNA复制中(合成引物)和转录中起作用。DNA连接酶：基因工程里，把切开的两段DNA连起来DNA聚合酶：DNA复制时，把单个的 脱氧核苷酸 连到正在合成的DNA链上RNA聚合酶：转录或RNA自我复制时，把核糖核苷酸连接到正在合成的RNA 链上。区别是：连接两段：(DNA1)＝＝＝＝＝ ＝＝＝＝＝＝(DNA2) ↑DNA连接酶把单个连到一段上：(脱氧核苷酸)- --------(DNA新单链) ↑DNA聚合酶把单个连到一段上：(核糖核苷酸)- --------(RNA新单链) ↑RNA聚合酶共同点是：都连接形成 3,5-磷酸二酯键

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

需要的,DNA复制时需要的酶有：DNA聚合酶 、引发酶——催化合成RNA引物、DNA聚合酶、DNA连接酶、拓扑异构酶、解链酶、单链结合蛋白

别听他们乱讲，告诉你，体内复制要用的，如果体外PCR就不用为什么呢，因为体内复制时，由于半保留复制，DNA两个链不是一样合成的，一个前导链，一个滞后链，前导链一口气从头合成到头，滞后链要先合成冈崎片段，然后就要用到DNA连接酶把冈崎片段连接起来，才能成为一条完整的链

选 CDNA连接酶催化的反应是：相邻核苷酸之间磷酸二酯键的形成！A、B：氢键的形成，不需要DNA连接酶！DNA连接酶也没有这个作用！C ：两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接，要形成完整的DNA分子，缝隙之间的2个相邻脱氧核苷酸之间必须要形成磷酸二酯键，所以必须要有DNA连接酶的催化！所以D是错误的！

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

DNA连接酶DNA聚合酶DNA解旋酶作用时期基因工程DNA复制DNA复制作用位置两基因两核苷酸之间两核苷酸之间还有什么问题再问