载体的‘载’念三声还是四声

噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒，是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制子，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒，同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。它兼具丝状噬菌体与质粒载体的优点。噬菌粒具有以下令人瞩目的特征：1.双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征；2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤；3.由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。

噬菌粒(phagemid)实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有 ColE1 复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。 噬菌体颗粒就是噬菌体

没有与宿主细胞的染色体整合。噬菌粒（phagemid）是带有丝状噬菌体复制起始点的质粒。展示筛出来的质粒表达不出来是没有与宿主细胞的染色体整合还有一个可能的原因就是死亡的菌体分泌一些降解酶，使得表达检测失败。

【答案】：M13噬菌体载体是基于大肠杆菌M13丝状噬菌体基因组构建的载体，在M13噬菌体基因组基因间隔区中插入β-半乳糖苷酶N端一小段编码序列(内插入若干限制性内切酶的单一切点)及其调控序列。M13载体一般只能克隆300～400bp的外源DNA片段，常用于制备单链DNA探针、定位诱变模板，也可用于噬菌体展示。噬菌质粒是噬菌体M13的基因间隔区(内含有M13的复制起点)插入到细菌质粒载体中构建而成的质粒。噬菌粒在大肠杆菌细胞内以质粒的复制起点进行复制，产生双链DNA。当含噬菌粒的大肠杆菌被辅助噬菌体感染后，在辅助噬菌体基因产物作用下，噬菌粒基因间隔区特定位点被切开，然后以M13的复制起点进行复制，产生单链DNA，并利用辅助噬菌体提供的装配蛋白和外壳蛋白装配成重组噬菌体颗粒，释放至胞外。噬菌质粒载体本身分子小，约为3kb，便于分离和操作；可克隆10kb的外源DNA片段，克隆能力强于M13噬菌体载体。

虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区，能够合成单链DNA，但是它没有M13的功能基因，没有M13基因2的产物存在，所以不能合成单链DNA。而辅助噬菌体具有M13的所有功能基因，但是IG区是缺陷的，辅助噬菌体本身的DNA不能进行单链复制，于是就可以为噬菌粒提供基因2产物和包装蛋白。辅助噬菌体必需具备如下条件：(1)助噬菌体的DNA IG区必需失去功能，其本身的DNA不会被包装到成熟的噬菌体颗粒中；（2）由于辅助噬菌体的IG区失活，其本身的基因不能表达，要使辅助噬菌体的所有功能基因都能进行表达，必须在辅助噬菌体的基因组中导人新的复制起点；(3)辅助噬菌体的基因组中具有选择标记，便于识别和收集一定数量的辅助噬菌体。

在基因工程中最常用的载体是质粒，此外还有噬菌体、动植物病毒等。

载体连接体系是指将不同载体上的基因进行组合，以实现功能的编程。它是合成生物学和纳米技术领域的重要研究方向之一。在设计载体连接体系时，载体与片段的最佳比例应根据具体的应用需求来确定。这是因为不同的应用场景需要不同的载体和片段，不同的载体和片段也会对连接的比例产生不同的影响。举例来说，如果要构建一种病毒治疗系统，可以选择载体为病毒，将治疗相关的片段连接在其基因组中。在这种情况下，病毒的DNA/RNA构成了大部分载体体积，而治疗相关的片段则只需要占载体基因组的一小部分，因此载体与片段的比例应该是载体占多数，片段占少数。另一方面，如果要实现一种基因编辑系统，可以选择载体为质粒，将编码CRISPR-Cas9系统的片段连接在其上。在这种情况下，CRISPR-Cas9相关片段是实现基因编辑的关键，占据了载体基因组的大部分，因此载体与片段的比例应该是片段占多数，载体占少数。

有用。虱螨一喷净特性：本品为菊科植物除虫菊干燥花絮的有效成分提炼而成的天然产品，本品品质温和，可有效杀灭体外成虫、幼虫及虫卵，所以有用。虱螨目是最初的虱螨目和噬菌粒目，通常被称为虱螨或虱子。

载体:1、科学技术上指某些能传递能量或运载其他物质的物质。如工业上用来传递热能的介质，为增加催化剂有效表面，使催化剂附着的浮石、硅胶等都是载体。2、泛指能够承载其他事物的事物。如语言文字是信息的载体。BOY,对于你单指化学中的载体,我想应该是单纯地指待存在催化剂的反应条件以及反应场所吧(主要还是指反应场所吧).虽然化学催化剂效率远不及生物中的酶,但有异曲同工的性质,酶的活性和温度,湿度,空间等等等各种因素有关. 另外,主要还是生物中的载体比较广泛哈,在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和细菌病毒和动植物病毒。 　　运载体　　在基因操作过程中使用运载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。现在所用的运载体主要有两类：一类是细菌细胞质的质粒，它是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。另一类运载体是噬菌体或某些病毒等。现在人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体DNA等也有可能成为运载体。　　作为运载体必须具有四个条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入；③ 含有复制起始位点，能够独立复制；④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。中学阶段的主要要了解和掌握的载体就是质粒载体，噬菌体载体以及病毒,其他的都不需要了解哈~~BOY

材料和方法1.1 材料1.1.1 细胞及菌株 HAb18为分泌抗人肝癌mAb的鼠杂交瘤细胞株，由陈志南建株〔4〕；正常肝细胞株QZG引自中国科学院上海细胞库。pCANTAB 5E克隆及表达载体，为Pharmacia公司产品。1.1.2 试剂 反转录系统为Promega公司产品；PCR引物： heavy chain primer 1和2(Pharmacia公司产品)，分别为重链5′端和3′端引物；light chain primer mix： 为10种轻链5′端和3′端引物的混合物，用来扩增鼠Ig VL基因；linker primer mix，为带有Linker序列(Gly4Ser)3的重链3′端和轻链5′端的引物，用来将VH，VL拼接成ScFv基因；RS primer mix，为带有SfiI位点的重链5′端引物和带有NotI位点的轻链3′端引物的混合物，用来扩增ScFv基因片段并引入酶切位点。引物A，D分别为重链5′端引物(含EcoRI酶切位点)及轻链3′端引物(含SalI酶切位点)〔5〕。A，D引物的序列如下:引物A VH-1（正向）:5′ GTGAATTCATGCAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGG 3′EcoRⅠ引物D VL-2（反向）:5′ CAGTCGACTTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCC 3′SalⅠ1.2 方法1.2.1 总RNA提取、cDNA第1链合成及VH和VL基因的扩增 取对数生长期的HAb18细胞，用异硫氰酸胍变性法，提取细胞总RNA。参照Promega公司反转录系统的产品说明书，反转录合成cDNA第1链。将cDNA第1链合成反应物分为两份，分别加入VH和VL引物各2 μl进行PCR。1.2.2 ScFv基因的组装 回收的VH和VL基因片段与linker primer mix等摩尔混合，加入dNTP至终浓度为2.5 mmol/L，Taq DNA聚合酶5u，进行7次PCR循环(94℃ 1 min，63℃ 4 min)。将VH和VL基因拼接为ScFv基因。在上述反应体系中，加入RS primer mix，再进行30次PCR循环，可在ScFv基因的两端分别加入SfiI和NotI酶切位点。1.2.3 ScFv基因的克隆和筛选 上述加端PCR产物经1.8% 琼脂糖凝胶电泳，玻璃乳回收后，用SfiI和NotI消化，并与以此两种酶双酶切的pCANTAB 5E噬菌粒DNA连接，转化E.coli HB2151，在SOBAG（含100 mg/L氨苄青霉素和2%葡萄糖的SOB培养基）琼脂板上筛选转化菌。从转化板上挑取单个菌落，用2×YTAG（含100 mg/L氨苄青霉素和2% 葡萄糖的2×YT培养液）于30℃培养过夜，以碱裂解法小量提取噬菌粒DNA，以引物A，D进行PCR扩增出ScFv基因片段，并克隆入pUC19载体。1.2.4 ScFv核苷酸序列的测定 以美国PE317-A型自动序列分析仪进行序列测定。1.2.5 可溶性ScFv基因的分泌型表达 将含ScFv基因的重组噬菌粒菌种接种于5 ml LB 培养基，过夜培养。加至50 ml SBAG(含100 mg/L氨苄青霉素和2%葡萄糖的SB培养液)中，30℃振荡培养1 h，5 000 r/min离心15 min，弃上清。将沉淀重悬于50 ml SBAI(含100 mg/L氨苄青霉素和1 mmol/L IPTG的SB培养液)中，37℃诱导3 h，离心同上。取沉淀悬于5 ml新配制的溶菌酶（1 g/L），20% (w/v)蔗糖，30 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)及 1 mmol/L EDTA (pH8.0) 溶液中，冰浴10 min，4℃以12000r/min离心5 min，上清即为外周质部分。将其冷冻干燥后，贮于-20℃。临用时以0.01 mol/L PBS溶解至500 μl。1.2.6 ScFv基因可溶性表达产物的鉴定 采用SDS-PAGE及Western blot(二抗为鼠抗-E-tag抗体)进行鉴定。1.2.8 流式细胞仪分析ScFv的活性 收集培养的肝癌细胞SMMC 7721，正常肝细胞QZG及胃癌细胞SCG 7901，用10%FCS RPMI1640调整细胞浓度至5×106/L~1×107/L。每管加入40 μl细胞悬液，100 μl ScFv表达产物，再加入50 μl 1∶20灭活正常兔血清（用DPBS稀释），于4℃作用30 min，洗涤2次，以800 r/min离心5 min，弃上清。加入抗E-tag抗体8 μl(2.5 g/L)，4℃作用30 min，洗涤2次，弃上清。加入50 μl FITC标记的羊抗鼠抗体，充分振摇，4℃作用30 min，洗涤2次，加入500 μl固定液，以流式细胞仪进行分析。同时设正常肝细胞、胃癌细胞为阴性对照组，肝癌细胞加亲本抗体Hab18为阳性对照组。2 结 果2.1 VH和VL基因的PCR扩增及ScFv基因的拼接 VH和VL基因测序结果显示，VH为363 bp，VL为342 bp，与预期的VH和VL基因片段大小相符。将VH和VL基因用linker连接成ScFv基因（其中linker为45 bp）。以此为模板加入RS primer mix进行PCR扩增，所获扩增产物的大小约为730 bp，表明VH，VL及linker primer mix的浓度配合准确，并引入了SfiI和NotI酶切位点（图1，见第Ⅳ页）。2.2 ScFv基因的克隆 将ScFv基因克隆入pCANTAB 5E中，连接物转化E.Coli HB2151。在SOBAG固体培养基上筛选转化的菌落。然后随机挑选8个菌落，小量制备噬菌粒DNA，以Sfi I 和NotI双酶切鉴定。若含有外源插段者，应切出约730 bp大小的片段。结果表明，8个克隆均含插段。2.3 ScFv基因的序列测定 如图2所示，ScFv基因全长为726 bp，包括预期的VH，VL基因和linker序列。VH基因序列处于linker的上游，VL基因序列处于linker的下游。2.4 可溶性ScFv蛋白的鉴定 可溶性ScFv-E-tag融合蛋白，预期的Mr为29 000。E-tag可作为蛋白标签，通过鼠抗E-tag抗体来检测ScFv基因的表达。将阳性克隆以1 mmol/L IPTG诱导3 h，对IPTG诱导和未诱导的菌体进行裂解，经SDS-PAGE后，在(Mr为29 000处多出1条明显的新生蛋白带，与预计的ScFv-E-tag融合蛋白的大小Mr为29 000)相符（图3，见第Ⅳ页）。同时做与图3相同的SDS-PAGE并进行Western blot，在Mr为29 000处有显色条带，即为能与抗E-tag抗体特异性结合的可溶性ScFv蛋白（图4，见第Ⅳ页）。2.5 可溶性ScFv蛋白与肝癌细胞的结合活性 以可溶性 ScFv蛋白为一抗，抗E-tag抗体为二抗，FITC-抗鼠IgG为三抗，用流式细胞仪测定荧光标记细胞的阳性率(图5，见第Ⅳ页)。肝癌细胞组： 无关抗体(抗-CD3)为1.6%，亲本抗体为97.5%，ScFv 为30.9%；正常肝细胞+ScFv蛋白为2.6%，胃癌细胞+ScFv蛋白 为4.1%。表明可溶性ScFv蛋白能与肝癌细胞特异地结合，而不与正常肝细胞和胃癌细胞结合。荧光显微镜观察，可溶性ScFv蛋白与肝癌细胞的膜抗原相结合，在细胞膜上可见颗粒状的荧光(结果未显示)。3 讨 论 随着Ig基因结构与功能研究的不断深入，基因工程新技术的不断涌现和成熟，基因工程抗体的研究取得了很大进展。现获得的各种基因工程抗体已基本克服了鼠源性mAb的缺点，及制备人源性抗体的困难，使之在基础医学研究和临床疾病的诊断、治疗和预防等领域，特别是肿瘤的治疗中，得到了极为广泛地应用，有的已进入Ⅲ期临床应用。运用基因工程重组技术，将鼠源性抗体恒定区和可变区的框架区以人源性相应抗体片段取代，可降低抗体的免疫原性，有效地减轻免疫排斥反应〔6〕。利用基因突变技术改变抗体的某些结构，则可提高抗体的亲和力，延长其半衰期〔7〕。另外，还可将抗体基因与其它功能性基因相连接，赋予抗体新的功能。 近年发展起来的抗体库克隆技术，可无需进行细胞融合制备杂交瘤，甚至无需进行免疫，即可直接从基因水平上，获得所需的针对相应抗原的抗体。制备基因工程抗体的关键，是获得抗体可变区基因，拼接成单链抗体基因，并表达出有生物学活性的产物。 本文从分泌抗肝癌mAb的杂交瘤细胞(HAb18)中，用RT-PCR，克隆出抗体可变区基因，其关键是PCR引物的设计。大多数研究者设计合成的引物，通常是针对V区FR1 5′端（或信号肽）的保守序列和J基因3′端序列（或恒定区基因序列）而设计的，特异性不够强，不能有效地扩增某些目的基因。Pharmacia公司噬菌体呈现系统中的混合引物，系针对鼠Ig基因不同家族的序列而设计的。从理论上讲，适用于所有类型的Ig，每种可变区基因都可获得扩增，对全套抗体库的构建非常重要。 本研究所用pCANTAB 5E是Pharmacia公司的产品，含有氨苄青霉素抗性基因，plac启动子和M13噬菌体基因间隔区片段，在多克隆位点与gⅢ编码区之间，有1个c-myc tag序列和琥珀终止码TAG，IPTG可诱导外源基因的表达。在不含有琥珀抑制基因的菌株（如HB2151）中，E-tag后的终止码被识别，多肽链的翻译终止于此，从而可生成具有生物学活性带有13肽E-tag的可溶性ScFv蛋白，释放于细菌周质中。E-tag为源于人c-myc基因的一段序列，对ScFv基因的结构和活性均无影响，可作为可溶性ScFv蛋白的标签，用抗E-tag抗体来检测ScFv基因的表达并纯化其产物。我们用含有ScFv基因的重组噬菌粒载体转化大肠杆菌HB2151，经IPTG诱导获得可溶性表达产物。用抗E-tag抗体做Western blot证实，表达产物为ScFv-E-tag融合蛋白。流式细胞仪分析表明，此ScFv融合蛋白可与肝癌细胞结合，荧光标记细胞的阳性率为30.9%，而不与正常肝细胞及胃癌细胞相结合，表明此ScFv蛋白具有肝癌结合的特异性。参考文献1 顾方舟，陈妙兰，陆如山等. 肝癌研究概况与展望. 北京： 中国协和医科大学，北京医科大学联合出版社，1993: 1-32 Hoston JS，Levinson D，Mudgett HM et al. Protein engineering of antibody binding sites: recovery of specific activity in an anti-digoxin single-chain Fv analogue produced in E.coli. Proc Natl Acad Sci USA，1988；85: 5879-58833 Kroesen BJ，Wellenberg GJ，Bakker A et al. The role of apoptosis in bispecific antibody-mediated T cell cytotoxicity. Br J Cancer，1996 ；73(6): 721-7274 陈志南，刘彦仿，杨继震等. 抗人肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原的免疫组化定位研究. 单克隆抗体通讯，1989；5(2)： 33-365 杨安钢，吉昌华，韩 骅等. 抗人CD8单抗κ轻链可变区基因的克隆和序列测定. 生物化学与生物物理进展，1992；19（4）： 286-2886 Man SC，Jeanne BK，Bednarik EJ. Humanized anti-Lewis Y antibodies: in vitro properties and pharmacokinetics in rhesus monkeys. Cancer Research，1996；56: 1118-11257 Mats O，Henrik O，Michael M et al. Light chain shuffling of a high affinity antibody results in a drift in epitope recognition. Mol Immunol，1996；33(1): 47-56(收稿 1998-03-03 修回 1998-03-26)

构建基因组文库的步骤A 分离基因组DNA；B 用超声波或限制酶等进行基因组DNA部分或完全降解；C 将降解物进行分级得到所需大小DNA片段；D 将DNA片段与载体连接(一般用λ噬菌体载体)；E 将重组体导入宿主细胞；F 最后筛选鉴定重组子克隆。建立基因组文库的方法2—λ噬菌体基因组文库 可插入较大片段，最大可达23kb建立基因组文库的其他方法：cosmid基因组文库 YAC基因组文库 BAC基因组文库基因文库的质量标准：重组克隆的总数不宜过大， 以减轻筛选工作的压力；载体的装载量最好大于基因的长度， 避免基因被分隔克隆；克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域, 以利克隆排序；克隆片段易于从载体分子上完整卸下,重组克隆能稳定保存、扩增、筛选建立cDNA文库的基本步骤 (1)隔离总RNA和净化mRNA (2)合成的双链互补脱氧核糖核酸适合插入一个克隆载体(3)克隆cDNA合适的向量(4)转移到合适的宿主细胞的重组载体(5)筛查阳性克隆cDNA克隆的策略(1)自身引导的第二链合成+同聚物加尾（2）cDNA克隆方法的改进。尾随第一链寡核苷酸（DC）允许使用寡核苷酸引物（ DG）将要开展的第二链（3）cDNA的定向克隆从基因文库中筛选分离目的基因克隆(1)制备核酸探针进行杂交筛选(2) 制备抗体进行免疫杂交筛选(3)根据生物大分子间的相互作用筛选目的基因(4)利用PCR技术筛选目的基因文库(5)利用噬菌体表面展示技术分离目的cDNA克隆：噬菌体展示(phage display)：是在噬菌体表面表达已融合到噬菌体外壳蛋白的重组蛋白或多肽的技术。应用噬菌体展示技术的关键是构建表达性基因文库，这种文库称为噬菌体展示文库(phage display library )。常用的构建噬菌体显示文库的表达载体有两类：丝状噬菌体和以这些噬菌体复制起始序列为基础构建的噬菌粒(phagemid)。mRNA差别显示技术原理：在 mRNA3′端的 poly (A)5"上游的 2个碱基只有 1 2种组合。与此相对应，共可人工合成12种不同的下游引物，用以反转录mRNA 合成cDNA第一条链。这种引物通常称为3"端锚定引物，它由Oligo-d T后面接上两个碱基 (如 5′T1 1 - 1 2 MN3′, M=G、C或 A; N=A、G、C或 T)构成。这样，每一种此类人工合成的寡核苷酸引物，都将能够把总mRNA群体的1/12分子反转录成mRNA-cDNA杂交分子。由此可知，使用5′T1 1 - 1 2 MN3′引物，可以将整个mRNA群体在cDNA水平上，分成大致相等的但序列结构不同的12份亚群体。DDRT-PCR的主要步骤：Ⅰ.从不同发育阶段或不同基因型的细胞群体中分离mRNA，并以3"锚定引物作为反转录的引物，合成第一链cDNA；Ⅱ.用5"随机引物和某个3"端锚定引物对扩增第一链(掺入32P-dNTP)；Ⅲ.用DNA变性测序胶分离扩增产物，X光片曝光后检测差别条带；Ⅳ.回收特异性差别条带；Ⅴ.用同一引物对扩增已回收的DNA条带；Ⅵ.用Northern，Southern及测序法分析所得的条带；Ⅶ.以该DNA片段做探针，筛选全长cDNA或核基因。 DNA插入诱变法分离目的基因DNA插入诱变法主要用于植物目的基因的克隆分离研究。其基本原理是，当一段特定的DNA序列插入到植物基因的内部或其邻近位置时，一般会诱导该基因发生突变形成突变体植株，或者在插入位置产生一个新的基因。 如果该DNA插入序列是已知的，便可用它作为DNA分子探针，从突变体植株的基因组DNA文库中筛选得到突变基因片段。然后利用此突变基因片段制备探针，从野生型植株的基因组DNA文库中克隆出野生型的目的基因。这样，插入的DNA序列相当于在植物基因上贴了一张标签，因此，DNA插入诱变法又叫DNA标签法(DNA tagging)。差别杂交和减法杂交技术分离目的基因差别杂交构建了基因文库后，如没有任何可供选择的探针进行筛选，或没有任何有关目的基因的核苷酸序列信息时，可以考虑用差别杂交法筛选目的基因片段。差别杂交(Differential hybridization)也称为差别筛选(Differential screening)法。特别适用于分离在特定组织中或发育的特定阶段表达的基因以及受生长因子调控的基因，亦可有效地用来分离经特殊处理诱导表达的基因。差别杂交的技术原理：有目的基因能正常表达和不能表达的两个不同的细胞群体。在这种情况下，分别制备两种不同细胞群体的mRNA提取物，其中一个群体含有一定比例的目的基因mRNA ，另一个群体不含有目的基因mRNA。差别杂交的技术原理过程：以这两种总mRNA(或是它们的cDNA拷贝)为探针，分别对由表达目的基因的细胞群体构建的cDNA文库进行筛选。当以目的基因表达的mRNA群体为探针时，所有包含重组体的菌落都呈阳性反应，在X光底片上呈现黑色斑点;而以目的基因不表达的mRNA群体为探针时，除了含有目的基因的菌落外，其余的所有菌落都呈阳性反应，在X光底片上呈现黑色斑点。比较这两种底片并对照原平板，变可以挑选出含有目的基因的菌落，供进一步研究用。差别杂交法的局限性：首先，差别杂交的灵敏度比较低，不适合低丰度mRNA的目的基因的分离。其次，差别杂交需要筛选大量的杂交滤膜，鉴定大量的噬菌斑，是一项十分耗时耗力的工作；第三，差别杂交重复性差。差别杂交涉及文库的滤膜影印，不同滤膜之间的DNA保有量往往不均一，杂交所得的信号强度也会不一致，需要重新进行点杂交，以做进一步的阳性克隆鉴定工作 。mRNA减法杂交基本原理：从表达目的基因的组织中提取mRNA并反转录成为cDNA，然后与无目的基因表达的组织中提取的mRNA做过量杂交，在两种组织中均表达的基因产物形成程cDNA/mRNA双链杂交分子，而特异mRNA反转录的cDNA片段仍然保持单链状态，这种单链cDNA分离出来即为差异表达的序列。基因突变技术分为两大类：位点特异性突变和随机突变。位点特异性突变又分两种类型：一类是通过寡核苷酸介导的基因突变(oligonucleotide-mediated mutagenesis)；第二类是利用PCR,以双链DNA为模板所进行的基因突变。寡核苷酸介导的定点诱变的原理 使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，启动单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成了新合成的DNA子链的组成部分。因此，所产生出来的新链便具有已发生突变的碱基序列。要求所设计的寡核苷酸引物除了所需的突变位点之外，与目的基因编码的区段完全互补。作为诱变剂的寡核苷酸序列，同待诱变的目的基因的互补序列之间，能形成一种稳定的唯一的双链结构。决定双链区段稳定性的主要因素是碱基的组分、核苷酸的错配以及寡核苷酸引物的长度等。寡核苷酸介导的定点诱变的基本步骤(a)将要进行突变的目标基因(或DNA片段)克隆于M13噬菌体载体或噬菌粒载体。(b)从重组的M13或噬菌粒中制备单链DNA。(c)将设计好的寡核苷酸突变引物的5"端用T4多核苷酸激酶进行磷酸化。(d)将上述突变引物与目标基因(单链的DNA模板)进行退火。(e)在存在DNA聚合酶和dNTP的情况下，使退火引物沿单链DNA模板延伸，然后新生链的末端用T4 DNA连接酶连接。(f)转染易感细菌。(g)筛选出带有突变的目标基因的噬菌斑。(h)从突变的重组噬菌体制备单链DNA，通过DNA序列分析确认突变位点的正确性。(i)从重组的M13噬菌体复制型双链DNA中回收突变的目标基因(DNA片段)。(j)将突变了的基因(DNA片段)重组入表达载体进行表达。第五章受体细胞应具备的条件(1)便于重组DNA分子的导入。如易形成感受态，具有较高的转化效率；(2) 能使重组体DNA分子稳定存在于细胞中。如限制性缺陷型； (3) 便于重组体的筛选。如具有与重组体互补的遗传性状； (4) 受体细胞遗传稳定性高，易于扩大培养或发酵生长，能进行高密度培养；对动物细胞要可悬浮培养，对培养基适应性要好；(5)安全性高，无治病性，不会对外界环境造成生物污染：感染与寄生缺陷型；(6)蛋白水解酶少,利于外源蛋白在细胞内的积累。尤其是对枯草芽孢杆菌。(7) 受体细胞的密码子偏倚性要小；(8) 具有较好的翻译后加工机制，便于真核目的基因的高效表达。 ▲糖蛋白不能在E.coli中表达；(9) 在理论研究和生产实践上有较高的应用价值；(10)对于用于基因扩增或基因高效表达的受体要用重组整合缺陷型。第六章克隆基因高表达的相关因素1有效转录开始 关键的一步，并限制外源基因表达的一步！构建表达载体的同时，选择强的和可控制的启动子和相关终止序列。2有效延长和终止转录正确 3 mRNA的稳定性4有效地转录开始5遗传密码子偏向6核糖核酸处理过程7终止密码子8表达载体9重组蛋白Lac 表达系统 以大肠杆菌 lac 操纵子调控机理为基础设计、构建的表达系统具有多顺反子结构，基因排列次序为：启动子（lacP）- 操纵基因（lacO） - 结构基因（lacZ-lacY-lacA）；正调节因子 CAP；负调节因子 lac I Tac 表达系统 tac启动子是由 trp 的 –35 序列和 lacUV5 的 –10 序列拼接而成的杂合启动子。 调控模式与 lacUV5 相似，但 mRNA 转录水平高于 trp 和 lacUV5启动子（P tac = 3 P trp = 11 P lac），因此在要求有较高基因表达水平的情况下，选用 tac 启动子比用 lacUV5 启动子更优越。包涵体蛋白在一定条件下，外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密地聚集在一起，形成无膜的裸露结构，这种结构称为包涵体(inclusion body, inclusive body)。包涵体主要由蛋白质组成，并且大部分为外源基因的表达产物，它们具有正确的氨基酸序列，但构像却是错误的，因而包涵体蛋白一般没有生物学活性。除此之外，包涵体中还含有少量的DNA、RNA和脂多糖等非蛋白分子。包涵体形成的原因主要因为在重组蛋白的表达过程中，缺乏某些蛋白质折叠过程中需要的酶和辅助因子，或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的。此外，还有以下原因：(1)表达量过高。(2) 重组蛋白的氨基酸组成(3)重组蛋白所处的环境：温度、pH(4)缺少真核生物中翻译后修饰所需酶类(5)培养条件不佳酵母基因表达载体的种类 自主复制型质粒载体:含酵母基因组的DNA复制起始区、选择标记和克隆位点等关键元件。较高拷贝数，细胞分裂时不能平均分配到子细胞中。 整合型质粒载体:不含酵母基因组的DNA复制起始区，但含有整合介导区。 着丝粒型质粒载体:在自主复制型质粒载体基础上构建而成，增加了酵母染色体有丝分裂稳定序列元件，可保证平均分配到子细胞中。1-2拷贝/细胞。 酵母人工染色体:以线性双链DNA形式存在于酵母细胞，每个细胞只有单拷贝。

1、概念不同质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外的DNA分子。载体：某些能传递能量或运载其他物质的物质。2、存在不同质粒广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。载体只作为两个物质之间沟通的桥梁。扩展资料：分类1、根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。2、根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。3、根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。参考资料：百度百科-质粒百度百科-载体

那得看是什么的载体膜上用于主动运输的载体全是蛋白质。但是在基因工程上基因的运载体却可以是质粒（一种环状DNA），病毒也可作基因的运载体所以载体不都是蛋白质；如果你指膜上的载体，那就全是蛋白质。

根据信息载体不同分为：芯片卡，磁条卡。载体（Vector） ，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。在实际生活中，胰岛素就可以通过使用载体将已插入胰岛素基因片段的质粒放入大肠杆菌内。经过插入基因片段的质粒就称作载体。该质粒在细菌内可以进行自我复制，并且不会影响到生物原来的活动。载体按功能可分为克隆载体和表达载体。克隆载体是最简单的载体，主要用来克隆和扩增DNA片段。主要有质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、病毒载体。表达载体除具有克隆载体的基本元件外，还具有转录、翻译所必需的DNA元件，如启动子和终止子。为了实现外源基因在不同表达载体中进行复制和表达，基因工程操作中常使用穿梭载体( shuttle vector)。穿梭载体含有两个亲缘关系不同的复制子，能在两种不同的细胞中复制，如既能在原核生物中复制也能在真核生物中复制的载体，不仅具有细菌质粒的复制原点及选择标记基因，还有真核生物的自主复制序列( ARS)以及选择标记性状，具有多克隆位点。

载体与片段的摩尔比例计算：先算出载体和目的基因的浓度，（可以跟mark的亮度对比估算，也能用软件计算），再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比，再算出体积比就行。载体与插入片段比例一般是1:10，通过测定DNA浓度来调整。单酶切片段插入时，载体一定要去磷酸化，载体易自连；双酶切二者比例要适当，比例不对，载体也会自连，因为微生物有自己的修护系统。载体按功能可分为克隆载体和表达载体。克隆载体是最简单的载体，主要用来克隆和扩增DNA片段。主要有质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、病毒载体。表达载体除具有克隆载体的基本元件外，还具有转录、翻译所必需的DNA元件，如启动子和终止子。为了实现外源基因在不同表达载体中进行复制和表达，基因工程操作中常使用穿梭载体( shuttle vector)。

（1）． 质粒文库 质粒是最早用于基因克隆的载体。现已有各种适用于不同工作的如克隆、表达、测序等专用商品质粒。但在构建基因文库上，由于质粒相对较小并只能容纳比自身更小的片段，因此它不能用于构建核基因组文库，通常只用来构建短序列的克隆文库。例如叶绿体DNA分子较小，可以用质粒构建叶绿体DNA文库。质粒载体可用于生物cDNA文库构建。但只适合于高丰度的mRNA。（2）． 噬菌体文库 目前用于基因克隆的噬菌体载体及其衍生载体很多，如单链的M13噬菌体载体、λ噬菌体载体、P1噬菌体载体、噬菌粒(phagemid或phasmid)等。其中使用最多的是入噬菌体。 λ-DNA为双链结构，长49kb。线性分子两端各有一条12个核苷酸的黏性末端称cos位点。分子中有约15kb可去掉的非必要基因区，又称“填充区”， “填充区”两侧的序列含有其增殖所必需的全部基因，称为左、右臂。“填充区”可被外源DNA取代，构成重组体，这是它成为克隆载体的结构基础。由于噬菌体头部包装容量的限制，重组λ-DNA分子大小只能在39—52kb之间。（3）． 黏粒文库 黏粒(cosmid)也称柯斯质粒，是人工构建的由λ噬菌体的COS序列、质粒的复制子序列及抗生素抗性基因序列组合而成的一类特殊的质粒载体。COS序列是DNA包装进噬菌体颗粒所必须的。复制子通常是使用ColEl或pMBl的复制起始位点。黏粒具有λ噬菌体的某些性质，在克隆了大小合适的外源DNA片段并且在体外被包装成噬菌体颗粒后，能高效转导对入噬菌体敏感的大肠杆菌宿主细胞。在宿主细胞内按λ噬菌体方式环化，但不能通过溶菌周期，无法形成子代噬菌体颗粒(因分子中不具入噬菌体全部必要基因)。它也具有质粒载体的主要性质，在宿主细胞内可以像其他质粒一样复制，并与松弛型质粒相同，适量的氯霉素可促进扩增。因具抗生素基因，可以通过抗生素抗性筛选重组子。黏粒载体在构建时也加上了设在插入失活基因内的多克隆位点。黏粒载体的分子较小(2．8—24kb)，但克隆容量很高，对外源DNA长度的要求是30～45 kb，上限几乎是入噬菌体载体容量(23 kb)的2倍，所以黏粒载体在核基因组文库构建上具有相当的优势，可克隆包括3，和5"调控区在内的完整的植物基因。（4）．人工染色体文库 人工染色体载体是利用真核生物染色体或原核生物基因组的功能元件构建的能克隆大于50kbDNA片段的人工载体。其中有的载体既可用于克隆，又能直接转化，是进行基因功能研究的良好载体。近年来陆续发展起来的人工染色体文库有YAC库、BAC库、BIBAC库、PAC库及TAC库。

Aactivation domain 活化结构域adapters 连接物adenine 腺嘌呤adenosine 腺ADP (adenosine diphosphate) 腺二磷酸affinity column 亲和柱AFLP (amplified fragment length polymorphisms) 增值性断片长度多态现象agrobacterium 农杆菌属alanine 丙氨酸allele 等位基因amber mutation 琥珀型突变AMP (adenosine monophosphate) 腺一磷酸ampicillin 氨?青霉素anchor primer 锚状引物annealing 退火annealing temperature 退火温度anticodon 反密码子AP-PCR (arbitrarily primed PCR) 任意引物聚合?链反应arbitrary primer 任意引物ATP (adenosine triphosphate) 腺三磷酸autosome 常染色体Bbaculovirus 杆状病毒base pair 基对base sequence 基顺序beta-galactosidase β-半乳糖?beta-glucuronidase β-葡糖醛酸糖?bioluminescence 生物发光bioremediation 生物降解biotechnology 生物技术blotting 印迹法blue-white selection 蓝白斑筛选blunt end 平(整末)端Ccatalyst 催化剂cDNA library 反向转录DNA库centromere 着丝体centrosome 中心体chemiluminescence 化学发光chiasma 交叉chromomere 染色粒chromoplast 有色体chromosomal aberration 染色体畸变chromosomal duplication 染色体复制chromosomal fibre 染色体牵丝chromosome 染色体chromosome complement 染色体组chromosome map 染色体图chromosome mutation 染色体突变clone 克隆cloning 无性繁殖系化codon 密码子codon degeneracy 密码简并codon usage 密码子选择cohesive end 黏性末端complementary DNA (cDNA) 反向转录DNAcomplementary gene 互补基因consensus sequence 共有序列construct 组成cosmids 黏性质粒crossing over 互换cyclic AMP (cAMP) 环腺酸cytosine 胞嘧啶Ddark band 暗带deamination 脱氨基作用decarboxylation 脱羧基作用degenerate code 简并密码degenerate PCR 退化性聚合?链反应dehydrogenase 脱氢?denaturation 变性deoxyribonucleoside diphospahte 脱氧核糖核一磷酸deoxyribonucleoside monophospahte 脱氧核糖核二磷酸deoxyribonucleoside triphospahte 脱氧核糖核三磷酸deoxyribose 去(脱)氧核糖dicarboxylic acid 二羧酸digoxigenin 洋地黄毒diploid 二倍体DNA (deoxyribonucleic acid) 去(脱)氧核糖核酸DNA binding domain DNA结合性结构域DNA fingerprinting DNA指纹图谱DNA helicase DNA解螺旋?DNA kinase DNA激?DNA ligase DNA连接?DNA polymer DNA聚合物DNA polymerase DNA聚合?double helix 双螺旋double-strand 双链Eelectroporation 电穿孔endonuclease 内切核酸?enhancer 增强子enterokinase 肠激?episome 游离基因ethidium bromide 溴乙锭eukaryotic 真核生物的euploid 整倍体exonuclease 外切核酸?expressed-sequence tags 表达的序列标记片段extron 外含子FF factor F因子FAD (flavine adenine dinucleotide) 黄素腺嘌呤二(双)核酸feedback control 反馈控制feedback inhibition 反馈抑制feedback mechanism 反馈机制first filial (F1) generation 第一子代FISH (fluoresence in situ hybridization) 荧光原位杂交forward mutation 正向突变F-pilus F纤毛functional complementation 功能性互补作用fusion protein 融合蛋白Ggel electrophoresis 凝胶电泳gene 基因gene cloning 基因克隆gene conversion 基因转变gene duplication 基因复制gene flow 基因流动gene gun 基因枪gene interaction 基因相互作用gene locus 基因位点gene mutation 基因突变gene regulation 基因调节gene segregation 基因分离gene therapy 基因治疗geneome 基因组 / 染色体组genetic map 基因图genetic modified foods (GM foods) 基因食物genetics 遗传学genetypic ratio 基因型比 / 基因型比值genome 基因组 / 染色体组genomic library 基因组文库genotype 基因型giant chromosome 巨染色体globulin 球蛋白glucose-6-phosphate dehydrogenase 6-磷酸葡萄糖脱氢?GP (glycerate phosphate) 磷酸甘油酸脂GTP (guanine triphosphate) 鸟三磷酸guanine 鸟嘌呤Hhaploid 单倍体haploid generation 单倍世代heredity 遗传heterochromatin 异染色质Hfr strain 高频重组菌株holoenzyme 全?homologous 同源的housekeeping gene 家务基因hybridization 杂交Iimmunoglobulin 免疫球蛋白in vitro 在体外 / 在试管内in vivio 在体内independent assortment 独立分配induced mutation 诱发性突变induction 诱导initiation codon 起始密码子inosine 次黄insert 插入片段insertional inactivation 插入失活interference 干扰intergenic 基因间的interphase 间期intragenic 基因内的intron 内含子inversion 倒位isocaudarner 同尾酸isoschizomer 同切点?JKkanamycin 卡那毒素klenow fragment 克列诺夫片段Llac operon 乳糖操纵子ligase 连接?ligation 连接作用light band 明带linker 连接体liposome 脂质体locus 位点Mmap distance 图距离map unit 图距单位mature transcript 成熟转录物metaphase 中期methylase 甲基化?methylation 甲基化作用microarray 微列microinjection 微注射missense mutation 错差突变molecular genetics 分子遗传学monoploid 单倍体monosome 单染色体messenger RNA (mRNA) 信使RNAmultiple alleles 复(多)等位基因mutagen 诱变剂mutagenesis 诱变mutant 突变体mutant gene 突变基因mutant strain 突变株mutation 突变mutation rate 突变率muton 突变子NNAD (nicotinamide adenine dinucleotide) 烟醯胺腺嘌呤二核酸NADP (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) 烟醯胺腺嘌呤二核酸磷酸nicking activity 切割活性nonsense codon 无意义密码子nonsense mutation 无意义突变Northern blot Northern印迹法nuclear DNA 核DNAnuclear gene 核基因nuclease 核酸?nucleic acid 核酸nucleoside 核nucleoside triphosphate 核三磷酸nucleotidase 核酸?nucleotide 核酸nucleotide sequence 核酸序列Ooligonucleotide 寡核酸one gene one polypeptide hypothesis 一个基因一种?学说operon 操纵子oxidative decarboxylation 氧化脱羧作用oxidative phosphorylation 氧化磷酸化作用PPCR (polymerase chain reaction) 聚合?链反应peptide ?peptide bond ?键phagemids 噬菌粒phosphorylation 磷酸化作用physical map 物理图谱plasmid 质粒point mutation 点突变poly(A) tail poly(A)尾polymerase 聚合?polyploid 多倍体positional cloning 位置性无性繁殖系化primary transcript 初级转录物primer 引物probe 探针prokaryotic 原核的promoter 启动子protease 蛋白?purine 嘌呤pyrimidine 嘧啶QRrandom segregation 随机分离RAPD (rapid amplified polymorphic DNA) 快速扩增多态DNAreading frame 阅读码框recessive gene 隐性基因recombinant 重组体recombinant DNA technology 重组DNA技术recombination 重组regulator (gene) 调控基因replica 复制物 / 印模replica plating 复制平皿(板)培养法replication 复制replication origin 复制起点reporter gene 报道基因repression 阻遏repressor 阻遏物repressor gene 阻遏基因resistance strain 抗药性菌株restriction 限制作用restriction enzyme 限制性内切?restriction mapping 限制性内切?图谱retrovirus 反转录病毒reverse transcription 反转录作用RFLP (restricted fragment length polymorphisms) 限制性断片长度多态现象ribonucleotide 核糖核酸ribose 核糖ribosomal RNA (rRNA) 核糖体RNAribosome 核糖体RNA (ribonucleic acid) 核糖核酸RNA polymerase I RNA聚合?IRNA polymerase II RNA聚合?IIRNA polymerase III RNA聚合?IIIR-plasmid R质粒 / 抗药性质粒Ssecond filial (F2) generation 第二子代self-ligation 自我连接作用shuttle vectors 穿梭载体sigma factor σ因子single nucleotide polymorphism 单核酸多态性single-stranded DNA 单链DNAsister chromatid 姊妹染色单体sister chromosome 姊妹染色体site-directed mutagenesis 定点诱变somatic cell 体细胞Southern blot Southern印迹法splice 拼接star activity 星号活性stationary phase 静止生长期sticky end 黏性末端stop codon 终止密码子structural gene 结构基因supernatant 上层清液supressor 抑制基因Ttelophase 末期template 模板terminator 终止子tetracycline 四环素thymine 胸腺嘧啶tissue culture 组织培养transcription 转录作用transfer RNA (tRNA) 转移RNAtransformation 转化作用transgene 转基因translation 翻译 / 平移transmembrane 跨膜triplet 三联体triplet code 三联体密码triploid 三倍体UVvector 载体WWestern blot Western印迹法

(1)cDNA文库是指细胞全部mRNA通过逆转录得到cDNA后被克隆的总和。cDNA的组成特点是片段中不含基因的内含子和其他调控序列。cDNA文库构建基本步骤：①制备mRNA：全RNA提取与mRNA的分离提纯；②合成cDNA：oligo dT与mRNA3"端poly(A)杂交作为引物合成第一链，第二链合成是以第一链为模板，DNA聚合酶催化。常用RNase H切割mRNA-cDNA杂合链中的mRNA序列产生的小片段为引物合成第二链的片段，再连接成完整链；③制备载体DNA：由于cDNA分子的长度在0. 5～8kb，常用的质粒载体和噬菌体载体都可以，载体选择根据文库用途确定，如噬菌粒载体具有噬菌体的高效性和质粒载体系统可以利用蓝白斑筛选的便利；④cDNA的分子克隆：cDNA连入载体，转化重组体，扩增；⑤对构建的cDNA文库进行鉴定，测定文库包含的克隆数，评价文库质量。文库是否有价值主要从文库含量和插入片段的大小来评价，所构建文库必须有足够多的克隆数以确保基因组cDNA每一个序列至少有1个拷贝在文库内。(2)cDNA文库同基因组文库的差别主要在于基因组文库(尤其是真核生物的基因组文库)可能包含有非编码序列，含有更丰富的遗传信息。

一样。克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

载体（vector） ，能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质，在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。必备条件　　①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。　基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体

1、性质不同。表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。 2、组成不同。表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

克隆载体（CloningVector）：通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒，噬菌粒，酵母人工染色体。

克隆载体是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒，噬菌粒，酵母人工染色体。对载体的要求：①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。④容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。

①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入。③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失。④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。

表达载体和克隆载体有什么不同?高粉答主4778表达载体和克隆载体的区别：1、性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。克隆载体：克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。2、组成不同表达载体：表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体：常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

克隆载体是能够通过限制性内切酶,将目的DNA片段整合进去,并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA.通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质.将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖.常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体.对载体的要求：①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力.②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好.③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制.这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点.④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作.⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来.

我们先不论中国是否真的能在明年成为又一个“全球第一”，或目前这种快速的奢侈品消费增长对国内经济所带来的影响，但仅从中国在全世界奢侈品消费数一数二的排名就能看出，国人对奢侈品的狂热和巨大的需求。随着国人对奢侈品消费的增加，许多社会学者也站出来批判这种近乎疯狂的消费行为。他们认为，目前大部分国民的收入水平其实并未达到能够消费奢侈品的程度，许多人其实是“打肿脸充胖子”或“未富先奢”。但另一方面，国人对奢侈品的大量购买其实也反映了中国社会的发展趋势。首先，消费奢侈品证明国人的收入确实提高了，即使很多人是以刷信用卡还款的方式来购买奢侈品，但仍然有能力支付其高昂的价格。其次，国人对奢侈品以及奢侈品牌的追求，也反映出全球信息化的同步进程。越来越多的国人开始了解国外的品牌以及品牌所带来的文化，并达到自身品味与文化的提升。既然我们已不能阻止国人对奢侈品的狂热追求与购买欲望，那么如何聪明购买奢侈品，怎么买，在哪里买更合算，就成为了许多奢侈品爱好者的共同话题。“网购”近年来以“方便，低价，快捷”等多种优势，在国内进行的风生水起。奢侈品当然也搭上了网购这趟顺风车，成为在国内最聪明的购买奢侈品方式之一。以下就为您分析为什么在中国奢侈品要网购。价格竞争力“价格高的不一定是奢侈品，但奢侈品的价格一定是高的。”这句话在国内的奢侈品市场得到了进一步的印证。由于关税、奢侈品税和汇率等多重因素的影响，国内的奢侈品价格普遍比欧美市场高出许多，甚至几倍。这也导致许多奢侈品爱好者不得不利用出国的机会大量采购。这时，网购奢侈品的优势就体现了出来。网上商城不用支付高昂的店面费和人工费，许多大型的网上奢侈品商城都是由国外奢侈品厂家直接供货，减少了中间流通环节的费用。从此，消费者不用出国也能以和国外同样的价格购买心爱的奢侈品，还剩了不少机票费。售后服务奢侈品的高价同时也来自于其高品质的售后服务，但这一点并没有在国内奢侈品市场体现。许多在国内专卖店内购买过奢侈品的消费者都曾有过售后服务方面的烦恼。想要对已购买的奢侈品进行维修或清洗，动辄要等几个月甚至半年的时间，大部分还要自掏腰包。近日更有新闻报道称，许多国际一线大牌，像GUCCI，爱马仕、CHANEL、FERRAGAMO等，都尚未在国内设立统一的客服电话。而与之相对应的却是网上奢侈品商城的高质量服务。由于网上商城之间的竞争较大，许多商城都纷纷提高自身的服务水平。像“第五大道奢侈品网（微博）”所提供的“10天退换”、“手表一年保修”“皮具免费专业清洗和保养”等等售后服务都为消费者解决了后顾之忧。网上购物安全性要说网购的缺点，那就要说说网上购物的安全性了。网络的信息纷繁复杂，难免其中会有鱼目混珠的情况，消费者对网购安全性的担忧也可以理解。但随着国人对奢侈品的需求不断增加，以及对网购奢侈品的优点的认识，许多大型正规的网上奢侈品商城也逐渐建立起来。像第五大道奢侈品网、优众、走秀网等等大型奢侈品网站，都已受到消费者的认可并具有一定的知名度。 (本文来源：第五大道奢尚志 )

朋友，你好！ 我是仙剑忠实FS，历代都玩过... 我来解释下吧仙剑奇侠传1平凡的客栈小伙计李逍遥因为机缘巧合结识了女娲族后裔赵灵儿。赵灵儿所居之仙灵岛意外遭人袭击，李逍遥遂担任起护送灵儿往苗疆寻母的重任。 在旅程中，李逍遥先后结识了虽刁蛮却练就一身好武艺的南武林盟主之女林月如，以及聪慧机敏的可爱苗女阿奴。赢得赵灵儿、林月如、阿奴三位姑娘芳心的李逍遥始终信守保护赵灵儿并帮助她寻找母亲的承诺，不畏万难、千里迢迢来到苗疆。 在赵灵儿帮助苗人祈雨解旱、惩奸除恶的过程之中，赵灵儿的身世之谜以及她母亲的下落，也终究水落石出。此时，拜月教主的阴谋摆在众人的眼前，李逍遥、赵灵儿等人却不知这与拜月教主一战，将会铸成一段永恒的悲剧…… 仙剑奇侠传二二代故事开始于一代结束的八年后，当初与李逍遥住在同一个村子的邻居——王小虎，已经是一位十八岁的成熟青年。想当年年纪虽小，却很有孝心，不怕风浪独自上仙灵岛为父求药的事迹一直让大家们津津乐道，个性坚毅刚强，做事执着且有决心，从小视逍遥为偶像，虽然逍遥后来未收小虎为徒，但小虎心中笃定要成为如李逍遥一样的大侠，名满江湖、除魔卫道，是永远不变的目标。 此时的神州大地，因为八年前锁妖塔崩毁，万千妖魔尽出，天下大乱，幸有一位得道高僧千叶禅师出现，广纳门徒成立大慈悲明宗，四处传道布施、救灾救人，与蜀山仙剑派掌门人李逍遥同为正道的两大领袖。另一方面，魔族掌旗使孔璘，也趁机扩展势力，进行一项可怕的阴谋，意图染指人间。 王小虎与三位女主角便是在这样的一个时空背景，交织出一段充满亲情、友情、爱情的传奇故事。在不知不觉中，他们被卷入一连串安排好的阴谋，在千叶禅师的帮助下，对抗可怕的魔头……仙剑奇侠传三三代故事发生在一代的五十年前，那时候，李三思刚刚发出赤子的第一声啼哭；巫后还是襁褓中的婴儿；而剑圣，则还没有拜入蜀山修仙。 事情的起因是从锁妖塔顶端突然坍塌，封印被解除开始的，但是，更深层的因果却要追溯到千年前的神界。 神将军飞蓬与魔尊重楼因为两界的冲突而屡屡交手，一直难分胜负，两人逐渐有惺惺相惜之意。重楼提出要和飞蓬在自己发现的一处新仙界中决斗，一较高下，飞蓬碍于神界天规而犹豫再三，最终经不起重楼的诱惑而答允。 两人势均力敌，比试旷日持久，最终惊动了天庭，天帝派天兵捉拿飞蓬问罪，飞蓬因感知到追兵将至而分心，佩剑被重楼打落人间而落败。 光阴荏苒，飞蓬被神界问罪贬为凡人，经过多次转世成为渝州永安当伙计景天。同时，重楼自魔界窥探人间，偶然发现飞蓬的转世如此卑微平凡，心中动念想要帮助景天。 重楼无意中毁坏了锁妖塔，得到了飞蓬在人间第一世——姜国太子龙阳铸炼的魔剑，并将其送到了景天手中。 景天在得到魔剑的同时，结识了唐门小姐唐雪见，从此改变了自己的生活。开始，景天被卷入唐雪见家族的内部斗争以及唐门和霹雳堂的争斗之中，而后遇到蜀山弃徒徐长卿及其未婚妻紫萱，走上了协助蜀山寻找五灵珠、封印锁妖塔的漫漫征途。一直隐藏在魔剑中的鬼魂化身而出，竟然是景天前世龙阳的妹妹龙葵。 几个人的情爱纠葛，生离死别反复交织纠缠，雪见的离奇身世，紫萱不为人知的秘密，龙葵长久以来的心中愿望……伴随着封印锁妖塔的争斗、人类与妖界生死存亡的争斗，一层层地逐渐揭开，而其实人的欲望，才是所有纷争的本源。 仙剑奇侠传三外传·问情篇问情篇的故事发生在三代的二十年后，以三代中紫萱设计徐长卿的锁妖塔事件为引子而展开；连接前代的人物纷纷登场；蜀山的天道使命与责任也逐渐呈现。 由于未知的原因导致蜀山仙境开始崩坏，地脉门户大开。前往探查的蜀山长老及弟子，被地脉中抵克蜀山仙术的瘴气化去功力，苦战不敌妖众，悉数殒命。掌门徐长卿临危授命，责令自小长在蜀山却一直未被收入门下的少年--南宫煌，携带书信前往绿萝山，求助于掌握蜀山秘宝五灵轮的清冷仙人。清冷仙人遂收南宫煌入绿萝门下，并将五灵轮与之身合，开启地脉入口，疏通五灵，从而使蜀山"否极泰来"、回复混沌状态。地脉之旅就此启程。 同时，随父从军被室韦国王看中选为和亲对象的大力女温慧，为了逃婚，来到和母亲有莫名渊源的蜀山，和无意中救下的乖巧女孩儿王蓬絮一起加入了南宫煌的队伍。在旅程中，他们又结识了身中剧毒的里蜀山少主星璇、勾魂失败滞留人间的鬼差雷元戈。 在错综的因缘和利益关系中，究竟是谁在操纵和主导着蜀山的命运？亲情、友情、爱情的抉择中，什么才是真正的获得？随着交错的阴谋与秘密的解开，南宫煌一行人也认识到自己的人生价值、方向和追求。 仙剑奇侠传四四代故事发生在三代的数百年之前。 从小居住在黄山青鸾峰上、从未下山过的少年云天河，某日遇到一名闯上山来寻找剑仙的少女韩菱纱。两人误打误撞之下闯入云天河父母的神秘墓室，并在无意间令墓室崩塌。 因为害怕父亲的鬼魂前来找自己算帐，又想探察已故父母的过往，再加上对剑仙御剑之术的好奇，云天河跟随韩菱纱下山，踏上寻觅父母过往、求仙问道之路。 机缘巧合之下，云天河、韩菱纱结识了寿阳城的县令千金柳梦璃，并和琼华弟子慕容紫英结为好友。在上天入地的求仙之旅中，云天河渐渐知晓了一件陈年旧事，并由此引出了重重疑云。 自己的父母缘何隐居青鸾峰？父母的墓室中为何会有一层坚冰？ 父亲似乎是一位用剑高手，却为何从不向自己传授高深的武学？ 游戏截图琼华派为修仙不惜一切代价，其背后到底隐藏着怎样的秘密？ 随着那掩埋在岁月风沙之下的沉重往事日渐清晰，重重谜团终将完全解开，而迷途的终点，却又是另一场惊人的灾难与情劫。 仙剑奇侠传五在山寨中长大的姜云凡，原是不知天高地厚的轻狂少年，然而苍木山上，当他踏出山门那刻起，便已踏上命中注定的长旅。温柔大小姐唐雨柔，精灵苗疆女小蛮，神秘贵公子龙幽……邂逅的是宿世因缘，抑或命运作弄？蜀山剑仙，武林世家，妖魔邪异……变幻的是沧桑世事，抑或百态人心？锁妖塔下，神魔之井……掩埋的是前尘过往，抑或汹涌暗流？而当漫长的追寻到达终点，所求为何，所得，又是如何？遗憾，完满……破灭，救赎……诀别，约定……聚散离合，白云苍狗，三尺霜刃，十丈红尘，仙剑奇侠，再续仙缘。仙剑奇侠传五前传翩翩公子夏侯瑾轩，出身武林世家，却不喜江湖事。与卖艺少女 场景设定图(11张)瑕和江湖浪人谢沧行的偶遇，开启了一段不同寻常的旅程。一路奇缘：慧质丽人暮菖兰，世家少主皇甫卓，神秘公子龙溟，蜀山弟子凌波，半魔青年厉岩，苗疆少女结萝……本只为情义踏入江湖，但这趟旅程最终却牵系了整个人界……几经风雨，心中牵绊不改，只盼绿水青山，共一众好友，举杯共饮；风花月夜，与佳人执手，相携一生。---比百度百科更详细的故事梗概... 望LZ采纳，谢谢

我衣服上也有，英文水平有限的我不认识这两个单词

6个。正泰光伏合作开发模式过程繁琐且严谨，要签6个协议合同。浙江正泰新能源开发有限公司是正泰集团旗下从事农村屋顶光伏，居民屋顶光伏，屋顶光伏,新能源示范镇，光伏示范村。

不是哦。两个是不一样的牌子哦。1.浙江正泰电器股份有限公司，正泰集团核心控股公司，成立于1997年，开关插座知名品牌。2.中国电器工业协会质量可信产品，国内领先的低压电器全面解决方案提供商，专业从事配电电器。3.电源电器和电力电子等多种规格的低压电器产品的研发、生产和销售的大型集团公司。

京东店铺运营是一项非常繁琐的工作，新店铺刚开始运营的话可以按照下面的步骤进行规划运营，实现新品破零，家具这个类目的流量还是挺高的，在操作过程中投入有些大。一、运营规划1、店铺的上线及日常管理①、确定店铺的整体风格，做好各个区域的美工工作。②、细化买家须知内容，尽量做到顾客可以自主购物。③、美工负责将待售产品的图片做好处理，编辑配置好相关的文案说明。④、编辑好各个产品的标题，宝贝描述后，核实价格及库存信息后，全部上架。2、营销活动①、首先确定3-5款主打产品，以后历次活动优先考虑这几款产品的报名，以此吸引客户，做好关联销售。②、配合京东的新店铺的推广活动，做好庆开店营销活动，全场折扣，设置VIP折扣价格。③、设置京东快车、京东秒杀等活动，以此引进流量。④、不定期经常性的进行小促销，在节假日可以进行相应活动的大促销。3、售后问题委任有经验的，沟通能力强的客服担任售后工作。同时细化各种售后问题，作为应对方案，比如安抚客户的不满情绪；不同情况对客户的损失如何补偿；快递丢件如何索赔，如何追件；其他相关售后问题的。4、配送及仓库管理①、仓库管理人员就及时核对库存信息，和编辑保持沟通，避免店铺出售状态的产品实际无货情况的出现，缺货产品及时下架。②、发货周期为一天两次；除有活动订单较多的情况外，订单一般要在24小时内发出，京东用户习惯打开就能看到物流变动情况，最迟不超过48小时；如果遇到缺货或其他问题不能及时发货的，及时通知客服，联系客户沟通，做好换货或退款事宜，极力避免缺货没有及时和客户沟通导致客户严重不满的情况的出现。二、阶段运营商城运营分为四个阶段:第一阶段：店铺开展期1、塑造品牌形象(从店铺装修、品牌介绍及殊荣、设计理念、顾客需求上着手，给消费者留下一个深刻的印象)。2、制定独特且适合产品的营销方式，培养顾客粘性。3、制定会员管理机制，培养会员的消费习惯。4、根据每个季度的SKU数进行全年的销售目标分解，目标分解至每季度材质每个类目的数量配比以及金额配比；主推款、促销款，与当季的SKU数配比；PV、UV、转化率、客单价目标分解；广告投入与其他活动资源的配比。5、基础人员的学习及培训(目前主要针对客服、仓储物流和京东直播主播)。6、利用软件记录每天商城的各项数据并进行分析(此项工作须长期持久)(如UV、PV、转化率、跳失率等)。第二阶段：店铺成长期1、制定周期性的推广计划，分阶段的完成目标并分解指标。2、根据店铺PV、UV、转化率、客单价等数据分析店铺可能存在的问题并及时改善，周期性的进行店铺诊断。3、根据店铺销售情况，以及京东同类目销售情况进行分析，适当的调整主推货品，做出自己的爆款。4、成长期的推广以参加商城活动为主，折扣活动，满减活动，团购(站内站外SNS的推广)。5、策划有针对性的活动，商讨后优化方案并执行，引进流量打造爆款。6、根据工作情况，适当扩充团队成员(增加专职推广、文案策划、数据分析、客服美工等)。第三阶段：店铺成熟期1、优化代理品牌、注册自己的商标并重新申请独立京东商城。2、安装管易ERP系统(进销存管理、客服绩效管理、批量打印快递单和发货、财务报表等功能，能日处理1000-2000单)。3、推广以硬广为主，主推单品，结合店铺其他单品进行联带销售。4、品牌形象打造(统一设计包装盒、包装袋、品牌形象小礼品等)。5、规范团队组织结构。6、按照品牌的标准，进行店铺统一规划，最终目标升级成为品牌。第四阶段：店铺稳定期1、分销-建立庞大的分销网络体系，提升品牌的影响力。2、京东外部分销:把品牌逐步覆盖到所有外部网络市场，唯品会、聚尚网、走秀网、麦网、银泰网、邮乐网、V+等购物网站，提升公司整体销量和品牌知名度。3、加大对产品的投入力度，产品质量的提升、研发力量的提升。4、维持团队的稳定性，体现团队核心价值。5、启用独立顶级域名，并建立独立的B2C平台。三、运营工具京东店铺运营是一项艰巨的工作，只凭自己苦干是不行的，还需要京东商家运营工具的帮忙。博士店长是专为京东商家开发的一项实用工具，里面包含了数据查询、数据监控、数据分析、竞争工具、辅助工具等店铺运营辅助工具，为商家运营提供强大的数据支持。1、查询工具查询工具中可根据商品SKU查询商品的详细评价数据、根据商品SKU和关键词查询各端口关键词排名和商品权重详细分析结果，同时将会对商品标题中各个关键词进行详细分析、快车查询根据关键词选择端口和地区，查询商品开快车过程中的详细数据。2、监控工具在日常运营中，自己店铺商品的监控必定少不了，京东博士店长监控数据中，可添加商品在排名监控中，监控商品的排名变化、权重变化；删评监控中商品总留评率和相应时间留评率趋势图，时刻了解该商品在评价方面的变化。商品监控中可添加自己店铺或竞品为监控对象，实时监控商品各项数据变化详情。3、分析工具下拉词分析根据输入词分析其相关关键词、搜索指数、点击率、全网商品数、潜力值、各商品有效销售额等数据，可根据数据分析，制作出自家商品的优质标题。大盘分析掌握关键词下竞品所有数据，销量访客DMP数据一应俱全，留评排名提升实时监控，自动定位动态特殊玩法4、竞争工具坑产计算器输入需要计算的SKU及关键词，查询预期的排名位置可计算商品此时的坑产量与预期坑产量之间的差距，15天内需要完成的有效销售额。四、运营技巧在京东店铺运营时，运用一些小技巧，可以很好的提高业绩或者能够方便工作人员，提高工作效率。1、创意拍摄根据产品特性、产品定位，每款产品拍摄不少于八张照片。包括但不限于街拍棚拍、使用环境拍摄、细节拍摄等照片。2、产品图片处理以及上传图片处理符合京东对图片尺寸、像素、大小的要求，根据产品特性以及用户浏览习惯进行图片处理。上传至京东服务器之后，按产品特性进行分门别类的更新、维护。3、产品文案优化颜色、尺寸、数量等销售属性外，产品描述将延伸至消费者利益点的突出、产品使用人群的生活态度、产品精工细作的流程等多个方面，以提升产品购买转化率、进一步传播品牌文化。4、京东基础排名规则优化优化宝贝描述关键词、上下架时间、橱窗位推荐等。5、关联销售优化每件单品按照质地、颜色、相关搭配、穿着场合、其他同类产品等属性关联10件以上其他产品，以提升其他关联产品的购买。6、商城装修、优化根据品牌定位以及京东用户使用习惯设计商城UI进行商城装修。以月为周期，根据全网以往服装类目销售情况结合上月销售状况以及当月销售策略进行局部调整，包括但不限于促销焦点图、分类导航、关联展示等调整。使热销产品的销量能持续稳定增长。及时发掘其他可能热销的产品或分类，不断打造新的热卖产品。7、产品选择根据全网同类目热销产品特征如款式、价格等因素、季节变化、当季营销策略选择主打产品，通过主打产品的推广以及关联销售长期带动全店销售增长，增加初次进店消费会员的购买信心。8、套餐优化如鞋子和衣服同时购买的形式获得相应折扣。根据商城的当周或当月销售情况，逐步的优化套餐的搭配以及价格，以拉升平均客单价。9、促销方式选择结合京东网平台和其他店铺促销方式出现的频率和买家接受情况，不断选择调整商城促销方式。整店促销主题以月为周期，按周调整单品促销方式，参与平台整合促销。包括但不限于折扣促销、赠品搭配、新品预售、秒杀、限时特价、抽奖、优惠券、满就送、满就减、积分换购、买家秀等。10、促销数据分析根据当期促销活动，提供基于该促销活动的点击量、平均单人购买金额、购买转化率等多方面数据的促销数据、优劣势分析。同时基于本次数据分析、下次促销主题，提供下次相关促销活动的方案。11、商城数据分析按月提供店铺运营数据分析，包括但不限于销量变化、单人购买金额变化、产品热销排行趋势，以及商城在调整中销售数据的变化和原因等。12、协调纠纷遭遇到竞争对手恶意购买和评价、物流等不可控因素、个别专职的不良买家，提前培训客服并和京东网进行协调，最大化保证公司利益。13、推广方式推广方式分为付费和免费的，站内和站外，不管任何推广，一定要清楚为什么去做这个推广，做的目的是什么，并预估ROI，为了这个目的去做并去达到这个目的。五、新店新品破零新店没有老客户，没有爆款，参加不了活动，完全的新店新品，想破零，咋整！当然有办法，但是要注意，所有的方法和技巧都是有适用性的，就比如方法一，如果产品单价太高的话，可能就不太适合，要做相应的调整。方法1：设置赠品买就送！看到这三个字别不屑，先看完再说！在这个方法里面有两个细节：细节1：赠品一定不能用次的东西，最好比准备破零的商品还要吸引人，可以是当下流行的小物件。也就是说，一定要让目标受众，甚至会有一部分人就想得到这个赠品。想想肯德基偶尔就会搞的，买汉堡，加多少钱，赠送一个什么小玩偶，有多少人为了得到小玩偶去买汉堡，然后汉堡不吃的？买椟还珠，差不多就是这意思。细节2：设置一个政策——如果退货，赠品可以不退！这意味着用户购买这个商品仅存的一点疑虑都没有了。不排除有的人得到赠品后，故意申请退货的，要相信，这个世界上还是好人多。这个方法主要是新品新店，如果怕流量不够，想在刚开始的时候就能够把一个款打爆，那就适当开下车引流，只要有足够的流量进来，这种方法对于转化的提升，帮助很大！方法2：亲朋好友好吧，也可以把这种方法当成刷单，只不过是更安全了，刷单都知道，小号的安全性很大程度上决定着刷单的安全性。如果你的东西很不错，客单价也没有多高，比如你的成本就10几块钱，加上物流也不过就20块钱！送出去100个，你的成本是2000！但是作为一个新品新店，你基本就做出一个小爆款了，免费的自然搜索流量，在新品扶持期，会非常不错。用这种方法做起来的，挺多！零食、小饰品等等。没有那么多朋友就朋友介绍朋友呀！方法3：补单新店新品虽然京东都有扶持，可没有品牌影响力和使用经验，很少有消费者会选择购买新店新品，很多商家干预破零就用补单，不过如今京东反作弊系统越来越严，补单风险高，补单也要注意方法呦~

小蛮收起小蛮林月如赵灵儿李逍遥龙幽阿奴酒剑仙丁香兰丁秀兰一贫李忆如韩仲晰重楼云天河韩菱纱柳梦璃慕容紫英龙溟凌波徐长卿紫萱景天唐雪见龙葵龙葵·红星璇王蓬絮红姬凌音谢沧行暮菖兰苏媚彩依小石头结萝月清疏修吾白茉晴桑游越祈越今朝明绣居十方仙剑客栈2这款游戏中每个角色都有特殊技能，那么所有角色的特殊技能都有什么用呢？下面一起来看仙剑客栈2角色技能大全 。仙剑客栈2角色技能大全小蛮逗猫铃：凭着可爱的外表,善良的心地,受众人喜欢;派去余杭镇，跟商人聊天，能多得到一份小礼物。

不能使用的。花呗支持商家名录：　　唯品会、聚美优品、一号店、当当网、亚马逊、银泰网、麦包包、沪江网店、海尔商城、有货、李宁、魅力惠、洋码头、我买网、走秀网、优购网、蜜淘网、北京顺丰优选、国美在线、贝贝网、东方购物、乐蜂网、好乐买、楚楚街、折800、小米网、华为商城、乐视、魅族、OPPO、联想、VIVO、酷派、大疆、饿了么、美团网、百度糯米、拉手网、大众点评、窝窝团、养车点点、途虎养车网、优酷、掌阅ireader、中文起点。

1、按键盘上的“Windows+R”组合键，可以调出“运行”窗口。2、输入gpedit.msc，单击“确定”，可以打开“本地组策略编辑器”。3、在左侧依次打开“计算机配置”、“管理模板”、“Windows组件”、“Windows更新”，双击打开右侧列表中的“配置自动更新”。4、选中“已禁用”，然后单击“确定”。5、如果在禁用的状态下想安装Windows更新，则需要下载并手动安装。

不一样

SASA是深圳喜士登实业有限公司旗下一知名皮具品牌，是一个专营时尚女性皮具的连锁零售品牌。SASA品牌风格一场与色彩的时尚对话简约、色彩、流行，简约、流畅、合理的产品型体裁剪配搭以最新的、缤纷的流行色彩及最新的流行款式，是SASA产品的风格定位及开发方向。SASA大概六七百块钱一个，在国内最大网上鞋城好乐买上面就有卖的。

公司由世界著名的薄膜太阳电池专家杨立友博士担任总经理兼总工程师，周曦博士担任首席科学家，公司还拥有一支包括美国宾州州立大学C.R. Wronski教授和斯坦福大学沈志勋教授在内的技术顾问队伍和管理团队。 公司立足于传统太阳电池及组件生产，瞄准世界先进的第二代太阳电池（薄膜电池）的产业化技术，争取在不久将来成为全球领先的太阳电池企业之一。公司还将依托集团公司强大的市场开拓能力和产品开发能力，打造光伏系统、应用产品和光伏建筑一体化（BIPV）产品生产的集团化、国际化、公众化企业。

医药代表和医院医生打交道，当然可以全身而退了，如果你不想干医药代表，你就不干就好了

正所谓天机不可泄露，自有其道理，循规蹈矩。以前曾有个人告诉说：“倘若哪天你知道的越多看到的越明白，你反而会束手无策”因为出于有些原因，你可能想去改变……但其实你根本改变不了，事情只会以另外一种方式出现和经过……所以泄露天机的人一般都会或多或少受到相对应的惩戒，这也是给能看到的人提个醒……以免更多变数扰乱规则！

我是位男医药代表，也干了一段时间，对于你的问题，我可以肯定回答你，女孩做医药代表非常好。医药代表主要面对的就是医院采购医药的人员，药店老板，诊所医生等，可以想下，这些人基本是男的，不是吗？我刚入行的时候，有个女同事，她干了有6年了，他和我聊的时候就说，医药代表就是男的和女的聊，女的和男的聊，意思也就很明白了，我们所面对的人基本上是男多女少，所以女生有很大的优势，这一点也不可笑，事实就是如此，前期谁都没经验，但是要是干了有一段时间后，女生的能力就锻炼出来了，加上是女生，优势就很明显了。要是不信，让我们假想下，两个都干了3年的医药代表，一男一女，都去找一家医院的院长，当然一般院长男的多，是位男院长接待，男的先找，女的后找，你想下这个院长对待两个人的态度会怎样。接下来就看个人如何把握了。其实不一定女孩一定比男生强，主要看能力，还有毅力。干了一段时间就无师自通了。

通过平安万里通知名商城版块中的链接或者使用万里通联合登录（目前仅1号店提供）去1号店、走秀网、唯品会、新蛋网、蜘蛛网、鲜花礼品网等多家电商进行消费，在订单支付时可以使用万里通积分折抵订单金额； 通过平安万里通热门兑换版块中的链接使用万里通积分兑换淘宝集分宝、天猫积分以及京东京豆； 通过平安万里通知名商城版块中的链接访问带返积分标签的商户，下单且成功支付，即可在订单确认后的一定时间内获得积分返利（各商户的规则不同，具体见各商户详情页面的说明） 通过平安万里通 “花积分”频道进入积分兑换版块，所有的商品都有2种支付方式：全积分或者积分+现金。可以根据所持积分的额度选择适合的支付方式，在下单付款时，积分会自动抵扣。 IOS客户端：请使用苹果设备访问App Store，搜索平安万里通”；安卓设备：请登录万里通官网下载； 万里通手机客户端，致力打造领先的“移动互联网通用积分”奖励平台，为您提供一个全新的移动积分生活APP，吃喝玩乐购，处处享实惠。【主要功能】- 拼人品：每天登录玩两把，最高狂赚3000万积分！- 摇一摇：每天登录摇一摇，每天最高摇25万分（价值500元）；- 积分看电影：每周五大片买1送1，支持80多个城市近500多家影院在线选座购片；- 购物赚积分：淘宝、亚马逊、美团购物最高返10倍积分，下次购物积分直接抵扣现金哦！- 积分抽奖：金条、ipad mini2、星巴克、1积分就能抽！- 团购美食：通过万里通APP购买大众点评美食，首单立减10元；- 特色兑换：积分充话费、积分充油卡、积分换彩票、积分看电影，有积分，无难事；- 积分查询：帐户积分、帐户余额、过期积分提醒，你的消费明明白白；- 机票订购：购机票、返积分！- 分期商城：0利息0手续费0运费，苹果、三星、小米知名数码产品限量抢购

1、发展历史不同正泰：企业初创（1984年）1984年，成立正泰集团前身“乐清县求精开关厂” 。整合发展（1991年～2004年）1991年，建立中美合资正泰电器有限公司，引进国外先进技术和设备。1994年，成立正泰集团，以资金、产品、技术为纽带，开辟集团化与社会化大合作的经营之路。1997年，成立浙江正泰电器股份有限公司，进行股份制改造，向现代企业制度迈进。2004年，成立正泰电气股份有限公司，由低压元器件向高压输配电设备产业发展。施耐德：19世纪1836年：施耐德兄弟接管当时正处于困境的Creusot铸造厂（71），两年后他们成立了Schneider & Cie。1891年：已成为专业武器制造商的施耐德开始进军当时新兴的电力市场，对自身进行了改革创新。20世纪前期1919年：通过欧洲工业和金融联盟（EIFU），施耐德在德国和东欧建立了基地。在随后的几年里，施耐德与当时主要的国际电气集团西屋（Westinghouse）进行结盟，从而拓展了自己的业务范围，使其扩大到发电站、电气设备和电力机车的生产制造。二战后：施耐德逐渐停止武器制造，转向建筑、钢铁和电力行业。为了实现公司业务的多样化以及打开新的市场，施耐德进行了整体的结构重组。2、业务覆盖不同正泰：新能源、能源配售、大数据、能源增值服务、光伏设备、储能等。施耐德：可再生能源、基础设施和能源、工业自动化、智能生活空间、楼宇管理系统、配电产品设备。3、企业文化不同正泰：源远流长的重商文化，浙南在南宋时期形成了以叶适为代表的“永嘉学派”，主张“无功利则道义不存”，注重经世致用，形成了“重商”、“善贾”的传统。沿海城市的开放文化，开放的城市，形成了开放的观念，开放的观念培育了开放的文化。柳市人走南闯北，海纳百川，表现出一种强烈的开放意识。改革前沿的创新文化，柳市人敢于创新，大胆探索，创造了世人瞩目的“温台模式”继而成为“浙江模式”的主体。使创新文化，成为柳市地域和企业文化的一大特色。企业走到哪里，这种文化就会带到哪里。施耐德：在中国，为中国，这是施耐德电气扎根中国发展恒久不变的历史使命。我们不仅见证了中国经济的发展奇迹，更参与中国的每一步成长，相濡以沫，携手共进。施耐德电气创建于1836 年，以钢铁制造业起家，发展至今已成为全球能效管理领域的领导者。一直以来，公司恪守创新、国际化和尽责的发展理念，在时代发展的各个阶段为行业的变革和转型做出了重要贡献。如今，公司的业务遍布全球100多个国家和地区，拥有超过14万名员工，致力帮助客户实现“善用其效，尽享其能”。变革就是使命，施耐德电气坚信，在充满挑战的未来世界中，我们所秉承“善用其效，尽享其能”的绿色理念将开创新的历史，我们不仅是经济发展的动力、更要成为改变工作方式、思维方式和生活方式的新力量。更多收获，更少消耗，是施耐德电气发展的愿景。我们提供产品，更提供智慧。投身中国，助力中国地区建设提质升级，传递绿色能效的理念和价值，与我们共同实现可持续发展的期望。参考资料来源：百度百科-正泰参考资料来源：百度百科-施耐德

仙剑一 李逍遥——蜀山仙剑派第27代掌门、赵灵儿和林月如的丈夫、李忆如的父亲、景天徒弟李三思的儿子、林青儿与巫王的女婿、酒剑仙的徒弟、林家堡的乘龙快婿 赵灵儿——女娲后裔、苗疆公主、李逍遥妻子、李忆如的母亲、林青儿与巫王的女儿、紫萱和林业平的外孙女、仙灵岛的主人 林月如——林家堡大小姐、林天南的女儿、李逍遥第二任妻子、刘晋元的表妹、李忆如的继母 阿奴——白苗少主、南蛮王的女儿、白苗族长、爱慕李逍遥 仙剑二 王小虎——李逍遥同村少年、盛尊武的徒弟、李大娘穿云掌传人、沈欺霜的恋人、爱恋苏媚 沈欺霜——仙霞派弟子、姜婉儿的徒弟、王小虎的恋人 苏媚——狐妖和蛇妖的女儿、爱慕王小虎 李忆如——女娲后裔、李逍遥和赵灵儿的女儿、王小虎的同伴 仙剑三 景天——神将飞蓬和姜国太子龙阳的转世、永安当朝奉、雪见的丈夫、景小楼的父亲、景阳后人、精精的徒弟、李寒空的传人、李三思的师父、渝州首富新安当老板 唐雪见——神女夕瑶以神树果实为心枝叶为体自己为范本所造、花楹的主人、景天的妻子，景小楼的母亲、李三思的师娘、渝州新安当老板娘 花楹——五毒兽，唐家堡传家之宝，热爱主人雪见。 龙葵——女鬼、姜国公主、景天前世龙阳的妹妹、魂魄与魔剑结合、人格分裂蓝红两状态、爱慕景天 紫萱——女娲后裔、林青儿母亲、赵灵儿外祖母、李忆如的曾外祖母、林业平妻子、徐长卿的未婚妻、赤炎和丝缎的恩人 徐长卿——蜀山第23代掌门、紫萱丈夫林业平的转世、紫萱的未婚夫、清微的徒弟、蜀山常字辈弟子 仙剑三外传·问情篇 南宫煌——赤炎和丝缎的儿子、星璇的孪生弟弟、司徒钟和李三思的好友、常纪的养子、清冷的徒弟、迷恋王蓬絮、温慧恋人 温慧——郡主、南宫煌的恋人、相国之女蕙卿的女儿、温策的妹妹 王蓬絮——五毒兽、恋慕南宫煌(前期）、星璇恋人 星璇——赤炎和丝缎的儿子、里蜀山妖界少主、南宫煌的孪生哥哥、燎日的养子、与王蓬絮相恋 雷元戈——鬼差、原室韦族族长、暗恋温慧 仙剑四 云天河——云天青和夙玉的儿子、慕容紫英的好友、玄霄的义弟 韩菱纱——出生于盗墓世家、望舒剑第二代宿体 慕容紫英——大燕皇室遗族、琼华派弟子、宗炼的徒孙、净化魔剑、定居剑冢、九州散人的仙缘 柳梦璃——幻瞑妖界少主、婵幽的女儿、柳世封和阮慈的养女 神魔妖类： 重楼——魔界魔尊、飞蓬的对手、钟情紫萱、仙三BOSS 飞蓬——神界神将、“神魔之井”的看守、龙阳和景天的前世 夕瑶——护守神树的女神、爱慕飞蓬、雪见的原型及创造者 水碧——神界女神官、溪风的恋人 溪风——魔尊重楼的属下、水碧的恋人 邪剑仙——蜀山五长老的邪念聚成 赤炎——狼妖、丝缎的丈夫，星璇和南宫煌的父亲 燎日——里蜀山妖界之主、赤炎的分身、星璇的养父、问情篇BOSS 思堂——猫妖、星璇的助手 孔璘——“魔族”掌旗使、仙二“魔尊”的属下 婵幽——幻瞑妖界之主、柳梦璃的母亲、太清真人的对手 奚仲——幻瞑护将、婵幽的属下、辅佐保护柳梦璃 归邪——幻瞑护将、死于玄霄之手 九天玄女——神界女神、琼华派尊神 衔烛之龙——不周山的守护神兽、照亮西北大荒、把神龙气息交给了云天河 句芒——封神陵守护神将、把神兵后羿射日弓交给了云天河 韩仲晰——仙二“魔尊”之子、阿奴的养子、与李忆如相恋 门派： 蜀山仙剑派 清微——蜀山第22代掌门、徐长卿的师父 苍古——蜀山长老、蜀山代理掌门、清微的师弟、和阳的师兄 净明——蜀山长老、清微的师弟、收押周赤炎 和阳、幽玄——蜀山长老、清微的师弟 清冷——原蜀山弟子、绿萝山掌门、清微的师兄、已成仙 殊明——原蜀山弟子、镇狱明王、清冷的师弟、已成仙 常德——蜀山长老、徐长卿的师兄 常授——蜀山真武长老、徐长卿的师兄、常德的师弟 常浩——蜀山长老、蜀山第24代掌门、徐长卿的师兄 常纪——蜀山常字辈弟子、南宫煌的养父、徐长卿和常浩的师弟 姜清——蜀山常字辈弟子、月柔霞的丈夫、姜婉儿的父亲、司徒钟的太师叔 丝缎——绣坊女、蜀山女弟子、赤炎的妻子、星璇和南宫煌的母亲 独孤宇云（剑圣）——蜀山第26代掌门、酒剑仙的师兄、圣姑的故友、蜀山宁字辈弟子 司徒钟（酒剑仙）——李逍遥的师父、南宫煌的好友、剑圣的师弟、蜀山宁字辈弟子 道臻——蜀山紫衣弟子、为弟弟道闰盗取赤雪流珠丹 昆仑琼华派 道胤真人——琼华第20代掌门、参悟双剑飞升之法 太清真人——琼华第24代掌门、死于婵幽之手 宗炼——琼华铸剑长老、慕容紫英的师公、铸成望舒、羲和两剑 青阳、重光——琼华长老、和宗炼一起冰封玄霄 夙瑶——琼华第25代掌门、太清真人的徒弟、玄霄的师姐、仙四BOSS之一 玄霄——琼华弟子、羲和剑宿体、夙玉恋人、云天青师兄、云天河义兄、太清真人徒弟、仙四BOSS之一 夙玉——琼华弟子、望舒剑第一代宿体、云天河的母亲、云天青的妻子、玄霄的恋人、太清真人徒弟 云天青——琼华弟子、云天河的父亲、夙玉的丈夫、玄霄的师弟、柳梦璃的救命恩人、柳世封的好友 夙莘——琼华弟子、夙瑶的师妹、慕容紫英的师叔 怀朔——琼华弟子、慕容紫英的师侄、爱慕璇玑 璇玑——琼华弟子、怀朔的师妹、慕容紫英的师侄、崇拜紫英 其他： 龙阳——姜国太子、龙葵的兄长、飞蓬转世的第一世、景天的前世 花楹——五毒兽、雪见的宠物 勇气——五毒兽、视救命恩人云天河为老大 林业平——紫萱的丈夫、徐长卿的前世、林青儿的父亲、赵灵儿的外公、李忆如的曾外祖父 林青儿——女娲后裔、巫后、白苗大祭司、紫萱的女儿、赵灵儿的母亲、李忆如的外婆 巫王——黑苗君主、林青儿的丈夫、赵灵儿的父亲、李忆如的外公 圣姑——问情篇与仙一仙二的圣姑、抚养林青儿、独孤宇云的救命恩人 傀儡婆婆——上一代圣姑、服侍女娲族几千年 姥姥姜氏——白苗人、保护抚养赵灵儿、可幻化蛇身 灵月宫主——仙灵岛水月宫的宫主、赵灵儿的师父、名唤阿玟 林天南——林家堡堡主、南武林盟主、林月如的父亲、李忆如的外公 刘晋元——尚书之子、彩依的丈夫和救命恩人、林月如的表哥 彩依——蝴蝶精、刘晋元的妻子 拜月——拜月教主、仙一BOSS 千叶禅师——大明禅宗的禅师、喻南松的师父、仙二BOSS 喻南松——大明禅宗弟子、千叶的徒弟、王小虎的好友 月柔霞——仙二“魔尊”之女、姜清的妻子、姜婉儿的母亲 姜婉儿——仙霞派掌门清柔真人、姜清和月柔霞的女儿、沈欺霜的师父 南蛮王——白苗族长、阿奴的母亲 唐钰——南蛮王的属下、关怀阿奴 李三思——南盗侠、李逍遥的父亲、景天的徒弟、李澜的长子、南宫煌的好友 李大娘——“铁掌飞凤”孙岚、李三思孪生弟弟李三省的妻子、李逍遥的婶婶 李寒空——巴蜀大盗、李逍遥的祖先、精精的主人 精精——猴妖、李寒空“飞龙探云手”的传人、景天的师父 景小楼——景天和雪见的儿子 景逸——渝州永安当管事、景天的父亲 唐坤——唐门第三十一代掌门、雪见的爷爷、收养雪见 唐恒——唐门弟子、南宫煌好友唐念雪的父亲、爱慕雪见 云霆——雷州刺史的儿子、雪见的朋友、雨舒与暮蔼的丈夫 景阳——景天的祖先、礼部尚书景桓的儿子、欠韩菱纱五百两 柳世封——寿阳县令、柳梦璃的养父、云天青的好友、阮慈的丈夫 韩北旷——韩菱纱的伯父、抚养韩菱纱、鬼界摆渡者

女医药代表还是很常见的，在医院也会经常见到，年龄从十八九岁到五十岁的都有。其实女孩做医药代表要比男医药代表有些优势，更容易取得工作进展，因为她们有天然的亲和力，无论是与男大夫沟通还是女大夫沟通，都比男代表更容易一些，这是由于人的防备心里对男女销售员的抗拒程度不同产生的差别。其实各行各业，只要是不限制性别的职业，女性都会比男性更容易取得工作进步。比如女促销员，女服务员，老板娘（是不是没听说过老板爹），空姐（没听过空哥吧），女干部，女经理......仿佛都要比男士更容易取得工作进展！虽然女性的地位越来越重要（好像现在结婚大都是女方市场），但现在还是男权社会，在更多的重要岗位还是以男性为主！女医药代表如果能勤奋工作，提升自身的拜访技巧，比如“门诊拜访技巧”，“开发新科室/医生”，“病房拜访”，“邀约”，“夜访”等等，这方面建议在各大音频听听，医药代表实录，会很有帮助的！再加上向一些前辈代表虚心学习还是很容易取得优秀的业绩的，进而获得丰厚的回报，这样自身的价值也会升值，这对以后选择对象也会很有好处，最起码自己有丰厚的收入，不用看男方的脸色！

网上购物大全1、天猫，便宜是真便宜，但是质量有时候就要看你自己的眼光和运气了。需要经过很长时间的对比和考察，不然很容易买回来觉得跟预想的误差很大的衣服。2、唯品会，从我买的那几次来说，跟网上图片来说倒是差不多的。价钱打折比较凶的牌子的话有时候会比天猫还便宜。只不过，唯品会选择余地不太大，需要你等他更新，而且款式来说很多是前几年旧款或者是销量不太好的款式。3、京东和好乐买，我个人觉得属于一个档次的。价钱来说，还行，有些比天猫和唯品会便宜，有些就贵一些。我曾经在那两个网买过运动包和鞋，感觉还可以。而且我个人觉得那两个网的品种不是特别全，起码和天猫比少了很多，但是号称正品。难题处置网上购物三个比较麻烦的事，一则商品寻找，二则支付，三则维权。1、商品寻找，有人说搜索，但大多数搜索引擎有两个缺点，局限性和趋利性，局限性指只有被搜索引擎抓到的信息才有显示；趋利性指竞价排名，打广告的并不一定就是好的东西，不打广告的你可能点击不到。而且搜索排名可以弄虚作假，难免“中套”。购物寻找官方品牌商品可以浏览官方网店大全网站，需要综合采购可以到大型的网站，规模服务比较到位，但价格不是最低。2、支付，支付直接涉及到资金，所以比较繁琐。应该选择比较通用的方式进行，选择较多的是网银和第三方支付。网银是立即到账的，不宜处理善后事宜，第三方支付较好，在一定时期内款项在未完成交易前在第三方平台，谁也拿不到，比较好处理交易纠纷。第三方支付如支付宝，基本是网络购物全覆盖，通用性强。3、维权，尽量在第三方平台约定时期内尽快处理纠纷。如若卖家不同意退货退款，时间将近时，联系第三方客服，要求延长交付时间。如果没用第三方支付平台，那么向3.15消费电子投诉网申诉。购物网有哪些网站天猫、淘宝、京东、唯品会、优购网、当当、易购网。1、唯品会唯品会信息科技有限公司成立于2008年8月，总部设在广州，旗下网站于同年12月8日上线。唯品会主营业务为互联网在线销售品牌折扣商品，涵盖名品服饰鞋包、美妆、母婴、居家等各大品类。2、淘宝淘宝网是亚太地区较大的网络零售、商圈，由阿里巴巴集团在2003年5月创立。淘宝网是中国深受欢迎的网购零售平台，拥有近5亿的注册用户数，每天有超过6000万的固定访客，同时每天的在线商品数已经超过了8亿件，平均每分钟售出4.8万件商品。3、易购网易购网——比价返现第一站成立于2004年，是中国最早的、规模最大的网上购物垂直社区。为网民提供比较购物、购物返现、导购资讯、网购社区等服务，汇聚了众多成熟、活跃、忠诚、有影响力的网购用户。4、优购网优购网以经营优质、名品鞋类为主，以优质、时尚为网站定位，依托投资方百丽国际的供应链、资金以及品牌优势，并涉足深层次供应链管理，参与货品研发、设计、生产、零售等各个环节，以开放、合作、共赢的经营理念与众多品牌商建立紧密合作，争做中国领先的鞋品、服饰类优质时尚商品网络购物平台。5、当当当当是知名的综合性网上购物商城，由国内著名出版机构科文公司、美国老虎基金、美国IDG集团、卢森堡剑桥集团、亚洲创业投资基金共同投资成立。网上购物名字大全所谓商城，东西都非常丰富，规模都比较大，没有一定的经济实力还真是不容易做到，而出了实体商城，随着电商以及快递的发展，越来越多的网上商城涌现出来，下面就提供一些商城的名字，仅供参考。商城起名方法商城名字起名原则1、体现商城产品或商城宗旨。2、要满足品牌命名的合法、简单易记忆、上口易传播、正面联想、暗示产品属性等。商城起名的切入点1．从满足顾客的角度起名2．从经营自身的角度起名5．从产品服务的角度起名4．从地名产地的角度起名5．从市场目标的角度起名6．从文化内涵的角度起名7．从市场竞争的角度起名8．从动物花草的角度起名9．从富贵气派的角度起名10．从现代时尚的角度起名商城起名禁忌1．商城起名忌用字不吉2．商城起名忌雷同近似3．商城起名忌语意隐晦4．商城起名忌用字多音5．商城起名忌用意不良6．商城起名忌冷僻怪异怎样给商标起名1．商名要有备无患2．商名要与众不同3．商名要名副其实4．商名要一目了然5．商名要不拘一格6．商名要悦耳动听7．商名要亲切美好8．商名要视野有效网络商城名字大全越来越多的企业加入电商大战，比如鞋子品牌百丽开始做自己的网上商城，比如顺丰快递也做了自己的商城，以后估计各大企业开自己的商城是大趋势，下面是一些发展很不错的商城名，仅供参考，希望能启发你的思路。网络商城名字举例京东商城名字由来刘强东透露了公司名称京东商城的来历，京东的京就是来自他初恋女友名字的最后一个字。创业的时候还在一起，就以两个人名字最后一个字命名了。如果有一天京东上市了，我更应该邀请初恋女友来庆功。Tmall中文品牌淘宝商城更名为天猫。天猫正是英文Tmall的谐音。并且Tianmao域名也被淘宝商城购买，有人调侃到，互联网界又多了一个动物，有搜狗、企鹅、搜狐、雅虎、艺龙、凤凰、电驴。商城起名最好以两个字、三个字为主，简短好记，符合中国人的语言习惯，当然也有四个字的网站发展也很不错，比如聚美优品。其他网络商城名字淘宝凡客诚品凡客V+玛萨玛索m18麦网乐淘网名鞋库逛街网麦包包唯品会呼哈网欧莱诺走秀网趣玩网一号店当当网卓越亚马逊网新蛋网中粮我买网红孩子聚美优品开心团购58团购24券美团网窝窝团梦芭莎兰缪玛萨玛索fclub聚尚网DHC官网No5时尚广场太平鸟女装乐蜂网星尚爱你网YOHO！有货久尚网乐淘网名鞋库海淘网顺丰优选库巴网苏宁易购实体商城名字大全北京商城名字举例百盛购物中心百货大楼东安市场北京复兴商城城北京西单赛特商城西单长安商场城乡贸易中心当代商城地安门百货商场贵友商场国华商场蓝岛大厦隆福大厦前门商城大厦赛特购物中心双安商场天桥商场西单商场新东安市场新安商场星座商场燕沙友谊商城其他商城名字克玛商城众鑫商城华冠商城利佳商城宛美商城佳选商城天正商城宏达商城佳惠商城双益商城华冠商城奥林商城三花商城怡家商城宏达商城华瑞商城赛诺商城旺和商城德清商城新华商城荣兴商城海星商城八佳商城银佳商城众旺商城天骄商城环城商城特惠商城汇金商城青松商城必德商城尚熙商城天安商城金蓉商城赛特商城海福商城祥丰商城凤凰商城万杰商城奇龙商城汇星商城美嘉商城祥和商城华瑞商城惠圆商城利亨商城方凡商城荣兴商城奇特商城同心商城海星商城旭日商城三江商城佳和商城兴福兴商城美特好商城多宝利商城乐佳家商城天天顺商城凯尔亮商城美信佳商城新世纪商城喜利家商城广兴隆商城福临门商城万家乐商城倍思乐商城福满多商城家乐福商城永盛成商城新一佳商城新世纪商城万客欢商城家美佳商城乐安居商城天天来商城天天乐商城好客来商城万家隆商城便利思商城金福来商城新世纪商城好再来商城海星星光商城恒盛云平商城百大合家福商城滨江商城诚誉鞋城滨江商厦友谊商场八方商场三利百货新世纪商城人人乐商城心连心商城民生商城百信商城天虹商城星月商城三维商城百惠商城惠民商城东方商城泰富商城步步高商城联华商城利群商城和群商城永泰商城世纪联华商城预防电信网络诈骗如何应对电信诈骗1、即使遇到能够说出自己姓名、住址等个人相关信息的电话、短信也不要轻信，需要通过其他渠道核实；2、特别是冒充公检法进行调查、冒充航空公司进行退改签机票、冒充亲朋好友进行转账、冒充淘宝、商家客服进行退款，此类电话基本为诈骗；3、陌生短信、邮件、社交工具中发来的链接不要轻易点击，陌生应用不要随便安装；4、手机上要安装安全软件，可以有效识别和拦截诈骗电话、诈骗短信，钓鱼拦截，木马程序；5、不轻易将个人信息留在不熟悉或不正规的机构、网站中，网银账号、普通社交账号密码要区分，密码定期修改，谨防信息泄露。防范电信诈骗“三不一要”1、不轻信不要轻信来历不明的电话和手机短信，不管不法分子使用什么甜言蜜语、花言巧语，都不要轻易相信，要及时挂掉电话，不回复手机短信，不给不法分子进一步布设圈套的机会。2、不透露巩固自己的心理防线，不要因贪小利而受不法分子或违法短信的诱惑。无论什么情况，都不向对方透露自己及家人的身份信息、存款、银行卡等情况。如有疑问，可拨打110求助咨询，或向亲戚、朋友、同事核实。3、不转账学习了解银行卡常识，保证自己银行卡内资金安全，绝不向陌生人汇款、转账；公司财务人员和经常有资金往来的人群等，在汇款、转账前，要再三核实对方的账户，不要让不法分子得逞。4、要及时报案万一上当受骗或听到亲戚朋友被骗，请立即向公安机关报案，可直接拨打110，并提供骗子的账号和联系电话等详细情况，以使公安机关开展侦查破案。购物平台哪个正品多正品网购平台：天猫、京东、苏宁易购、唯品会。1、天猫：天猫专业的网上购物平台。天猫是马云淘宝开创的新型B2C。它整合了数千个品牌和制造商，在商家和消费者之间提供全面的解决方案。提供质量有保证的产品、无理由退货的售后服务、购买点报销等优质服务。2、京东：京东网上商城，销售超过数万个品牌、4020万种产品，包括家电、手机、电脑、母婴、服装等大类。京东销售的产品均为正品行货，全国联保，机印发票。3、苏宁易购：苏宁易购集团成立于1990年，是一家实力雄厚的全球企业。旗下拥有苏宁易购广场苏宁云店、苏鲜生、苏宁红孩儿、苏宁超市苏宁汽车超市苏宁易购苏宁小店直营店等。苏宁易购是苏宁易购旗下新一代B2C网购平台，现已涵盖传统家电、家电、日用品等品类。4、唯品会：唯品会信息技术有限公司成立于2008年8月，总部位于广州，同年12月开通网站。唯品会的主营业务是在互联网上销售品牌折扣商品，涵盖名牌服装、鞋包、美妆、母婴、家居等主要品类。唯品会的正品还是有保障的，有各类说明书。

断路器其实就是一种开关装置，这种开关装置能够在规定的时间内承载和开断异常回路条件下的电流，是一种配电环节中十分必要的设备，断路器的分类也是十分广泛的，按断路器的使用范围可以分为高压断路器与低压断路器，我们一般将3kV以上断路器的称为高压电器，断路器的品牌也是十分繁多的，那么今天我们就挑选了一些品牌来为大家做一个具体的介绍。施耐德全球能效管理专家施耐德电气为100多个国家的能源以及基础设施、工业、数据中心以及网络、楼宇与住宅市场提供整体解决方案，其中在能源和基础设施、工业过程控制、楼宇自动化与数据中心与网络等市场处于世界领先的地位，在住宅应用领域也拥有强大市场能力。致力于为客户提供安全、可靠、高效能源，施耐德电气2010年销售额为196亿欧元，拥有110，000多名员工。ABBABB集团位列全球500强企业之一，集团总部在瑞士苏黎世。ABB由两个历史100多年国际性企业瑞典阿西亚公司(ASEA)与瑞士布朗勃法瑞公司(BBCBrownBoveri)在1988年合并而形成的。两公司分别成立于1883年与1891年。ABB是电力与自动化技术领域的领导厂商。ABB技术可帮助电力、公共事业与工业客户提高业绩，同时降低对环境不良影响。ABB集团业务遍布了全球100多个国家，拥有13万名的员工，2010年销售额高达了320亿美元。正泰浙江正泰电器股份有限公司创立于1997年8月，是正泰集团核心的控股公司，也是中国低压电器行业产销量最大的企业。公司专业从事配电电器、控制电器、终端电器、电源电器与电力电子等100多个系列、10000多种规格低压电器产品的研发、生产和销售。公司荣获全国质量管理奖、首届浙江省政府质量奖、首届温州市市长质量奖，并于2010年1月21日在上海证券交易所成功的上市，成为中国第一家以低压电器为主业A股上市公司。在上文中，我们为大家介绍了有关断路器的品牌的一些信息，我们在这篇文章中一共为大家介绍了三个品牌的信息，这三个品牌分别是施耐德、ABB以及正泰，其实这三个品牌相信大家在生活中或多或少也有听说过，这三个品牌算得上是经验比较丰富且质量也值得大家信任的大品牌，如果大家有购买断路器的想法，不妨参考这三个品牌下面的产品，具体细节可以咨询商家。

仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘关于仙剑历史上最大的谜团是什么，我想大家应该都会说，小蛮她爹到底是谁。小蛮娘是忆如，这是肯定的，但是小蛮父亲到底是谁，一直也没个定论。电视剧版仙剑五《云之凡》里会不会揭晓这个谜底呢?云之凡小蛮角色介绍： 小蛮，单机游戏《仙剑奇侠传五》的第二女主角。小蛮是女娲后人，拥有强大的灵力(女娲族拥有至高灵力潜能，在灵力爆发时要高于普通天神级别)。女娲族的直系后裔，李忆如（这个孩子，等于是月如姐姐牺牲性命换来的，我希望月如姐姐在天之灵能继续庇佑这孩子平安长大。"--赵灵儿）之女，由“巫月神教”掌门海棠夫人(阿奴)抚养长大。虽然娇蛮，但心地善良。为了寻回土灵珠和找到情蛊的制作方法而踏上中原;经历种种事件逐渐成长的小蛮，最终担负起女娲后人的责任，以水灵珠为媒运用补天之术帮助魔界祈水，修复夜叉族乃至整个魔界的大地水脉。李忆如去哪了为什么没有出现死了吗? 女娲的后代如果母亲没死的话，女儿就会一直保持婴儿状态。其他女娲后人都可以正常长大，但是长到一定程度会把母亲灵力吸光，她的母亲就会死。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘其实关于忆如的故事，大部分是在09年的仙剑ol里面。不过姚仙当初说过，仙剑ol的故事大家可以当同人看，和电视剧一样处理就好了。小蛮的父亲是谁? 那么小蛮她爹到底是谁?李忆如嫁给了何人，这就成了仙剑史上最大的谜团。先说下小蛮她爹不会是韩仲晰的原因。先推测李忆如年龄。剑OL剧情，李忆如和韩仲晰相遇，李忆如16岁。仙剑五，李逍遥至少58岁，仙剑五前结局时，李逍遥38岁。仙剑一剧情开始，逍遥19岁，结局时，差不多过了一年，赵灵儿怀胎十月，差不多就是一年，逍遥20岁。那么，逍遥大忆如20岁，因此，五前结局，忆如18岁。五前结局，雨柔出生，雨柔大小蛮四岁，雨柔出生四年后，小蛮出生，此时忆如22岁。忆如不可能怀胎6年……除非出现类似紫萱那样封印女儿的特殊情况。然后，如果小蛮的父亲是韩仲晰，由于韩仲晰是魔族，所以小蛮应该 也有魔族血统。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘但是根据仙剑五剧情，主角一行人来到神魔之井大门前面，守门的两位魔将只允许姜云凡和龙幽通过，却不允许小蛮和雨柔通过。可见，小蛮无魔族血统，其父不可能是魔族。结论 ：小蛮之父，忆如的丈夫不是韩仲晰。最后，虽然可以得出结论小蛮的父亲不是韩仲晰，但是也不知道小蛮的父亲到底时谁?唯一能得出结论是忆如22岁才生的小蛮~李忆如，赵灵儿与李逍遥之女。出生后不久，母亲赵灵儿便与水魔兽同归于尽，因此忆如对于母亲一直没有什么印象。在圣姑家的那段日子，由傀儡虫支撑身体的林月如曾照顾过忆如一段日子，因此忆如认林月如为干娘、其父林天南为外公。傀儡虫很快失效，李逍遥便带着忆如回到余杭县，交由婶婶李大娘抚养。为使忆如不再受到伤害、以致重陷女娲族的宿命之中，李逍遥和李大娘将客栈转让给同村的丁家，举家迁往灵儿的故居——仙灵岛，并在岛上设下重重机关，防止外人进入。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘随后李逍遥上了蜀山、继任了蜀山仙剑派掌门之位，因事务繁忙，忆如久久才能见到父亲一面。但还有李大娘的悉心照料，以及父母故友的照顾，忆如健康、快乐的成长，爽朗、单纯、心胸宽广、调皮可爱、好奇心强，既好恶作剧，又好打抱不平，往往令亲友哭笑不得。八岁那年，魔族掌旗使孔璘为让魔尊复活，命手下幻魅画妖假扮灵儿，将李逍遥诱入幻画卷轴。忆如在仙灵岛苦等父亲不得，便随着李逍遥昔日之同村玩伴王小虎踏上往蜀山寻父之旅，由此开始涉足江湖。在镇江“南林北沈”比武大会上结识王小虎有青梅竹马之情的仙霞派弟子沈欺霜，因误闯月凉山与身负父母血仇的苏媚结下了深厚友情，又在碧湖村遇上王小虎少时故友喻南松，一路上还收服了锦八爷、扬枭、蕴儿等御灵。然而忆如和苏媚均不知，八年前错杀苏媚父母的那对男女，正是忆如的父亲李逍遥和干娘林月如。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘忆如和王小虎寻至荆州武林 大会，仍不见李逍遥踪影，会上闻魔器“九转回魂珠”被盗，追踪至邪雾森林，终于发现苏媚狐妖的身份。二人体谅苏媚的苦衷，均不介怀苏媚过往的欺骗，王小虎甚至为维护苏媚力战群雄，幸得开封摩诃禅寺方丈千叶禅师解围，三人结伴继续往蜀山前行。谁知行至半途，在沱江一带遇上带林月如来此寻药的圣姑，得知逍遥已失踪。为找寻逍遥的踪迹，圣姑将灵儿的过往告诉忆如，着她前往玲珑福地取回逍遥藏于此中的天蛇杖，以施展女娲族的回魂仙梦法术。望着仍带余温的天蛇杖，忆如遥思亡母，心伤不已。回到圣姑居所，忆如带苏媚看望仍昏迷着的林月如，苏媚方始惊觉仇人就在眼前，但念及与忆如的友情，终不忍对月如下手，悄悄黯然离去。借着回魂仙梦，忆如终于看到逍遥被画妖诱骗入幻画卷轴的一幕，二人决定前往鬼都请天鬼皇帮忙寻出孔璘。途经彩璃集，遇上仙霞五奇正布阵伏击孔璘，不料双方混战时，忆如跌入阵中，欺霜为救忆如，致使阵法出现破绽，欺霜的四位师姐妹均遭孔璘毒手。安葬好师姐妹，欺霜亦随忆如和小虎上路，欲找孔璘报仇。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘在天鬼皇的协助下，三人终于得到画轴，并得千叶禅师相助，进入画轴欲救出陷入幻境不可自拔的李逍遥。岂料假扮灵儿的画妖见久久不能劝服逍遥启动七星剑阵，便趁机掳走忆如，自己假扮忆如继续亲近逍遥。众人顺利救出逍遥，却不知身边的“忆如”是假的，直至在五华山遇见孔璘方知真相。孔璘挟持忆如进入剑阵，剑阵被触动，逍遥被迫与剑阵搏斗。孔璘以为得逞，放下忆如，自行带着三魔器来到魔尊面前，忆如、小虎、欺霜、苏媚四人虽合力杀死孔璘，但魔尊已吸收了魔器的力量得以复苏，幸而逍遥在紧急关头率剑阵彻底将其消灭，但逍遥也因此耗尽功力。苏媚欲趁机报父母血仇，逍遥得知原委，愧疚不已，坦然受死，然忆如与小虎极力阻止，苏媚不忍伤害友情和爱情，又一次放弃了报仇的机会，独自离去。忆如为治好月如的伤，向千叶借得“九转回魂珠”，欺霜返回仙霞派，而忆如和小虎则陪逍遥往圣姑居所疗 伤。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘不料一波甫平，一波又起。圣姑发现“九转回魂珠”含有剧毒，众人误会是苏媚所为，小虎因此与苏媚决裂。此时天下间妖魔顿起，四处作乱，而逍遥伤势未愈，托忆如、小虎、欺霜上峨眉山请仙霞派掌门清柔真人出面主持大局。忆如和小虎刚至峨眉山便发现仙霞派遇袭，清柔真人言有一强大妖魔将在开封出现，命忆如、小虎、欺霜三人前去查探。临行前，清柔真人为忆如激发了体内潜藏的巨大灵力。三人在开封郊外见到数之不尽的妖魔，只得用隐身术潜入摩诃禅寺，正巧撞见苏媚为“九转回魂珠”被下毒一事找千叶讨公道，众人方知千叶便是清柔真人所言的妖魔。争执间，千叶对失去利用价值的弟子喻南松下毒手，并将众人封入禁咒空间。仙剑云之凡李忆如女儿小蛮的父母亲是谁揭秘苏媚为救小虎和忆如，不惜牺牲自己破解禁咒空间的机关，被打回原型。愤怒的忆如、小虎和欺霜直闯禅寺密道，与千叶决一生死。无奈千叶的力量太过强大，三人连手亦不敌，危急之际，空中传来灵儿的声音和一股力量，破解了千叶的金身，并让三人的功力增强。千叶元气大伤，三人趁势消灭了这一元凶，天下又恢复了和平。之后，林月如在“九转回魂珠”力量的帮助下恢复为常人，而忆如也终于得偿多年的心愿，带着逍遥和月如回到灵儿自幼生长、与逍遥结缘的仙灵岛，一家团聚。长大后的李忆如为寻找因调查魔族余孽行踪不明的李逍遥偷偷离家。李忆如在杭州客栈遇到正在寻找治疗苗疆瘟疫的净魂草的魔尊之子韩仲晰，于是告知韩仲晰静魂草是在乱葬岗中，于是二人便一同前往寻找。在相处过程中，与韩仲晰、司徒御雪结下一段不解之缘。

最近在网上有看到这样一则比较受人关注的事情，那就是有人说这个黑兔走入青龙会在2023年发生，那么这个要怎么说呢?又预言了什么呢?下面就着这个问题一起来分析看看! 黑兔走入青龙这个是推背图里面的一句话，原话是：“黑兔走入青龙穴， 欲尽不尽不可说， 惟有外边根树上，三十年中子孙结。”那么这句话是意思呢?我也不懂啊，所以给大家转载一篇文章大家可以看看，希望大家能看懂了。 推背图43象，黑兔与青龙 大家都知道，《推背图》是中华预言第一奇书，传说它是唐太宗李世民为推算大唐国运，下令当时两位著名的道士李淳风和袁天罡编写的。融合了易学、天文、诗词、谜语、图画为一体。 推背图构建了一个中国和世界历史是按照：“帝制时代—共和时代—大同时代”这一历史观而命定式发展的理论体系。 《推背图》共有六十象，每象以干支为序号，主要包涵：一个卦象、一幅图像、谶语和“颂曰”律诗一首，共四个部分。 预言了从唐开始之后数千年，一直到未来世界大同，即将发生在重大社会历史事件，今天我们来看一下推背图第四十三象： 推背图第四十三象 丙午 谶 曰(这里不写了) 颂 曰 黑兔走入青龙穴 欲尽不尽不可说 惟有外边根树上 三十年中子孙结 金圣叹注解：此象疑前象女子乱国未终此象应鼎卦。鼎，即鼎革。象曰：“木上有火，鼎;君子以正位凝命。”意思是：君子应端正稳重，以完成天赋使命。预示改革会成功。 颂辞讲兔：“黑兔走入青龙穴，欲尽不尽不可说。”于此句解释众说纷纭，究竟说什么得看全局。“黑兔走入青龙穴”有两层意思。1，表示年份，由兔年到龙年。2，走入不是误入，走入是意进入，误入是无意迷入。黑兔吃了豹子胆走入龙穴，意在何为?所以此句揭示黑兔有篡位之意，是自不量力之举。“欲尽不尽不可说”一句表示此兔遭到囚禁，生死不由己，然而拒不交代，因为有不可说的秘密。 谶辞讲君：“主非主(原文为君，避免铭感)，客非客(原文为臣，避免铭感)。”此句讲本来主客有别，然而事实上却颠倒了。主人大权旁落，客人弄权，凌驾于主人之上，胁迫主人;主人无力，反而为客。“始艰危，后克定。”开始之时，挂名主人无实权，政令不通，正道难行，奸人横行，民众怨声载道，遂成危局。后来终于鼓起勇气，击败奸臣贼子，才稳定了朝廷。李淳风用词潜字很讲究，这里用了个“克”字，克比斗更进一层，是以力压倒、制服的意思。 个人见解：同时黑可能代表一个明显的事物，兔子代表生育繁殖速度特别快，走入青龙穴，有明显的侵略迹象。 根据个人见解，只要大家团结一致，鼓起勇气，一定可以让主人(君)重新在自己的家园幸福快乐的生活下去!青龙终究会赶走黑兔!!! 转载文章不代表本站观点，请大家酌情观看。

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