水中细菌总数的测定

不是。微生物限度检查仪和集菌仪主要都是用作微生物、细菌之类的吸附、检查。只不过微生物是做有菌检测，集菌仪是做无菌检测的，二者并不一样。

都是薄膜过滤法，集菌仪做无菌结果要求无菌，微生物限度的话是可以有菌的，集菌仪上面放反复使用培养器的话是可以做纯化水微生物限度的。微生物限度检测仪比较贵，集菌仪相对便宜，一万多就可以买到了。集菌仪的作用是检验供试品是否含菌的仪器，配套集菌培养器使用。主要用于注射用无菌制剂的无菌检测，包括抗生素类及含有抑菌成份的药品、大输液、水针剂、灭菌医疗器具、无菌注射用水等。集菌仪是集菌培养器的配套使用仪器，通过集菌仪的定向蠕动加压作用，供试品被过滤并在滤器内进行培养，以检验供试品是否含菌。微生物限度检测仪操作步骤1.泵头灭菌2.放置滤膜3.安装过滤杯4.过滤供试品5.取下过滤杯6.转移滤膜

需要用到的。智能集菌仪是一次性使用全封闭集菌培养器的配套使用设施全封闭智能集菌仪是临床体液细菌检测，药品、生物制品等领域无菌检测和微生物限度检测的专用仪器。长沙巴跃仪器主要生产集菌仪，厂家批发

1)取出培育器先检查包装是否完好无损，在无菌室内翻开塑料包装袋。(2)将培育器逐一插放在不锈钢座上。(3)将集菌培育器的弹性软管装入智能集菌仪泵头，要求定位准确，软管走势顺利。(4)翻开待检样品的瓶盖插针孔并消毒之，(若检测安瓿样品，先将安瓿颈部消毒，然后翻开并将安瓿)样品瓶定位。(5)拔去进样双芯针管之护套，插入样品瓶中，敞开集菌仪，施行过滤集菌(应防止双芯针管进气，滤膜被药液浸湿，影响进气)。(6)完结集菌后，若样品含抑菌物质，按药典 规范要求适当用冲洗液清洗，清洗方法与集菌过程相同。(7)消毒培育基瓶插针孔处。(8)摘下顶部空气滤器开口的胶塞，套在培育器底口上，用软管夹子，顺次开闭软管，敞开集菌仪，将培育基泵入指定的培育器内。(9)用夹片夹闭与培育器衔接部的软管，留下5～6cm软管，剪除其余部分，并将开口端插在空气过滤器开口上。(10)别离按规则进行培育。(11)调查培育状况，若需取样别离培育，可将软管消毒，用无菌注。

　　细菌荧光显微镜计数必须用黑色滤膜。　　实验方法　　1 准备工作 卸下集菌仪的滤，统计滤网上小孔总数，为计算菌液浓度做准备。另外，还需对集菌仪中的集菌器进行高压灭菌，以防止过滤过程中引入外源细菌。　　2 细菌收集 取一定浓度的霉菌菌液300～500 ml，装在集菌仪上，集菌仪采用蠕动加压方式对菌液施加一定的压力，使菌液流过孔径为0.45 um的聚碳酸脂膜。采用过滤方法是因为它可以使细菌相对均匀地分布在滤膜上，而选用聚碳酸脂膜是因为这种膜具有良好的透光性，便于用显微镜观察。　　3 染色 集菌后取下滤膜，切下一部分放在载玻片上，进行染色、固定。染色的目的是增大细菌与背景的对比度，便于观察。　　4 显微镜计数与计算 菌液经集菌仪过滤后，细菌在滤膜上的分布见图2、图3，由图可以看出细菌分布具有以下两个特点：一是细菌集中在一个个的圆形区域内，这些圆形区域和挡板的小孔相对应；二是各个圆形区域之间细菌很少。根据膜上细菌分布的这种特点，提出以圆形区域为单位进行计数，统计出圆形区域内细菌的平均个数，从而计算出菌液中细菌总数。具体步骤如下：随机选择10个圆形区域，在油镜下，调节焦距以获得较清晰的图像，统计每个圆形区域内的细菌个数，然后按公式计算出菌液的浓度。

计量器具范围很广，这个仪器算，但是这个仪器也需要检测

根据2015版中国药典1101：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉

全封闭无菌试验过滤培养器怎么用目的 建立健全注射用青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。方法 按中国药典2010年版二部(附录XI H)无菌检查法中的薄膜过滤法进行。1 试验环境与材料1．1 试验环境在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的菌无室中进行。1．2 仪器智能集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)、PY330一次性全封闭集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、生化培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、霉菌培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、生物安全柜(苏州安泰空气技术公司)1．3 试药注射用青霉素钠1．4 试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(V)98 003]。1．5 培养基、稀释液及缓冲液1．5．1 干粉培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。1．5．2 细菌稀释液0．9％ 灭菌氯化钠溶液。1．5．3 冲洗用缓冲液pH7．0氯化钠-蛋白胨缓冲液。2 方法与结果2．1 菌液制备按中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法菌液制备法制备 。2．2 菌落计数取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1分别接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30~C～35"E生化培养箱培养24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1 m1分别接种至改良马丁琼脂培养基中，经23℃ 一28~C霉菌培养箱培养48～72 h，计数。(上述各菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)2．2 方法学验证2．3．1 试验组(样品+阳性) 取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250 ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100 ml，充分振摇，完全排空后循环操作5次，总冲洗量达到500 ml每管。冲洗完毕后在2管中分别注人改良马丁培养基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml。另取一套集菌培养器(三联装)取本品依上述方法过滤并冲洗后，均注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml，将上述6管集菌培养器移至阳性对照室，于含硫乙醇酸盐流体培养基的集菌培养器中，分别接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌茵液、枯草芽孢杆菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，于含改良马丁培养基的集茵培养器中，分别接种白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1 ml，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。2．3．2 阳性对照组取一次性全封闭集菌培养器(三联装)二套，4管中分别注入硫乙醇酸盐流体培养基各100 ml、2管中分别注入改良马丁培养基各100 ml，在阳性对照室内将6种菌液分别接种至相应管内，作为阳性对照，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。2．3．3 阴性对照组取一次性全封闭集菌培养器(二联装)一套，滤过适量缓冲液后分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml，作为阴性对照，按前述规定温度培养14 d，观察结果。2．3．4 样品的无菌检查 取样品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的冲洗量冲洗，加入培养基后，按规定温度培养14 d，逐日观察，若培养14 d均澄清；由此判定供试品符合规定。结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。

杭州泰林生物技术设备有限公司是集科研、开发、生产、销售、服务于一体的省级高新技术企业。并被授予“守合同重信用单位” 、“浙江省科技创新优秀单位” 、“浙江省工商企业信用AAA级”等称号。公司坐落于杭州钱塘江畔的“天堂硅谷”－－－－杭州国家高新技术产业开发区。公司投资兴建的花园式“泰林科技园”,建筑面积12000余平方米。公司已通过ISO9001质量管理体系认证/ISO14001环境管理体系认证，严格按照体系运行管理，实现产品技术标准与品质国际化。公司主营产品有集菌培养器系列、集菌仪系列、无菌隔离系统、负压隔离器、水中总有机碳（TOC）分析仪、药物溶出仪、汽化过氧化氢（VHP）灭菌器、可见异物检测仪、微孔滤膜孔径测定仪、无菌检查专用振荡仪、微生物限度检验仪等一系列高新技术产品。公司注重科技创新，已获国家专利50余项。产品广泛应用于药品、生物制品的制造与检测、疾病预防与控制、环境保护、食品化妆品检测等多个领域。HTY无菌隔离系统、HTY全封闭无菌检测系统、制药用水中总有机碳分析仪等产品技术与方法，已被收载于《中国药典》2005年版，产品已覆盖全国各级食品药品检验所、各大制药企业、药物研究机构等企事业单位，并远销欧洲、非洲、澳洲及东南亚地区。未来，公司继续以技术研发和市场开拓为重心，不断提高企业经营管理水平，强化哑铃型发展运行模式。公司推行“开拓、创新、务实、高效”的企业精神。坚持 “以客户为中心，以创新能力和产品质量构建企业核心竞争力，成为客户第一选择”的质量方针。以危机责任观为第一价值观，不断完善企业文化，不断凝聚精英人才，逐步实现公司专业化、规模化、国际化的战略目标。

肯定是微生物方面，超净工作台，烘箱，培养箱，灭菌锅，水浴锅，集菌仪，电子天平 培养皿 容量瓶 三角烧瓶 烧杯 量筒 移液管 试管等

是否环境影响？你的其它试验是否也常报告出霉菌？如果是，就要考虑环境被霉菌污染了。霉菌很麻烦，一旦环境污染了，如果消毒不彻底，很容易长起来。还是建议先消除实验室影响，把整个微生物室用甲醛或乳酸熏蒸，酒精喷洒擦拭，然后紫外照射。器具和使用的集菌仪也注意彻底灭菌消毒一次。如果消毒几次都还是不行，就只有更换高效过滤器了。

华卫药业座落于太原市高新技术开发园区，地理位置优越、交通便利。目前在职员工206人，其中技术人员51人，占到职工总数的24%。拥有中药提取、小容量注射剂、口服液、软胶囊、冻干粉针五个符合国家GMP标准的生产车间，配备有多效蒸馏水机、纯蒸汽发生器、中药提取系统、精制系统、远红外烘干机、超声波洗瓶机、灭菌烘干机、灌装封口机、高压湿热灭菌器、灯检机、制丸压丸机、冻干机等多台套先进的生产设施设备，以及高效液相色谱仪、薄层色谱扫描仪、紫外-可见分光光度计、尘埃粒子计数器、智能热原测定仪、集菌仪等高精尖检验仪器设备。生产车间的设计生产能力为：中药提取线年处理中药材300吨，小容量注射剂年产9000万支，口服液年产3000万支，软胶囊年产2亿粒，冻干粉针年产500万支。公司目前共有15个注册产品，常年生产的品种有：红花注射液（5ml、10ml、20ml）、红花口服液、复方黄芪益气口服液、参蓝口服液等品种。其中“10ml红花注射液”和“红花口服液”、“复方黄芪益气口服液”、“参蓝口服液”均为全国独家品种。2008年公司实现生产总值3280万元，销售收入3150万元，上缴利税320万元。华卫药业始终贯彻“质量是企业的生命与尊严，质量是生存和发展的基础”的质量方针，严格按照GMP的要求组织生产，把努力实现产品零缺陷和零投诉作为坚持不懈的目标，持续不断地为顾客创造价值，为人类的健康事业做出贡献。

5.7.7 薄膜过滤法：5.7.7.1 本法适用于有抗菌作用或大容量的供试品。5.7.7.2 按集菌使用规程安装好集菌仪。5.7.7.3 取供试品擦拭消毒后，除去塑料盖，插好导管，进行抽滤，滤液从排液管排出。5.7.7.4 同法操作将培养基抽到全封闭式集菌培养器中。5.7.7.5 取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的溶剂作阴性对照。5.7.7.6 阳性对照管应根据供试品特性在接种橱内加入相应对照菌液1ml。（抗细菌药物以金黄色葡萄球菌为对照菌，抗厌氧菌药物以生孢梭菌为对照菌，抗真菌药物以白色念珠菌为对照菌）。5.7.7.7 需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中，真菌培养基管置20-25℃培养箱中各培养7日；阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。

不一样用万用表测试电阻器、电容器、二极管、三极管好坏的方法电阻（R）电阻的故障是实际阻值与标称阻值不符，因此，用万用表欧姆即可测出电阻的好坏。通常电阻的故障是开路（万用表测量电阻值无穷大），电阻短路的故障极为少见。 2、电容（C）电容器的常见故障一般可归为两类，一类是击穿（电容器两极板因某种原因造成短路和漏电（电容器的绝缘电阻小于正常值），另一类是开路（电容器内部引线与极板断开，这时电容器已没有容量）和失效（电容器的容量小于正常值）。电容器漏电和击穿的测量：将万用表拨置×10K档（测量电解电容器时用×1K档），测量时万用表指针首先向R为零的方向摆地去，然后又向R为无穷大的方向退回，待表针稳定以后指示的电阻值就是电容器的绝缘电阻（对于电解电容器这时万用表的黑表笔必须接电解电容器的正极。 实验证明电解电容器的绝缘电阻一般应在几百千欧姆以上，其它电容器的绝缘电阻在几十兆欧姆以上，若绝缘电阻值此小于上述数值，即表明电容器的漏电不宜使用。绝缘电阻越小，漏电越严重，绝缘电阻为零，说明电容器已被击穿。二极管（D）二极管的主要特征：单向导电特性，用万用表×1K档量二极管正向应有一定阻值，而反向为无穷大，如果反向测有阻值，证明二极管已被损环。三极管（Q）三极管由两个PN结组成，根据PN结的单向导电性，可以很容易地将基极判别出来，将万用表拨置×1K欧姆档，然后任置假设三极管的一只脚为基极，将万用表的黑表笔搭上，用红表笔分别接另外两个管脚，如果两次测量的电阻值都较小（正向电阻），且将红笔接在假定为基极的管脚上，黑表笔分别接另外两个管脚，阻值都很大（反向电阻），则假定正确，该脚即为基极。三极管的损坏主要是开路或短路，按此方法可简单地判别三极管是否损坏。平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。万用表在汽车上的电流检测方在汽车上，检测电流的方式有多种，我们在此介绍3种较为常见的检测方法。方法1：利用普通万用表电流挡，串联进入电路，进行测量。　　方法2：用小试灯串联进入电瓶线与电瓶极柱之间，进行检测。　　方法3：利用钳形直流万用表进行检测。这种方法就是不用断开原车线路，将直流祖形万用表的感应夹夹在被测量导线上，进行感应式的检测。方法1的具体操作如下。用普通数字万用表检测电瓶漏电电流时，要把电瓶正极或极卡子拆下，然后将万用表红表笔插到20A插孔中，黑表笔接公共端(COM),再将万用表挡位开关拔到20A电流挡，然后串联进拆开的电瓶极柱和电瓶卡子之间，如图所示是用普通万用表检测电流的示意图。是用试灯检测漏电电流的操作用普通万用表检测电流试灯检测漏电电检测全车用电设备是否存在漏电，最简易的方法是用小试灯串联进电瓶线中进行检测。这种方法在早期没有像数字万用表那样经常使用。使用小试灯串联电瓶极柱与导线中间，根据灯泡的亮度来判断是否存在漏电，这种方法比较建议、但不能明确显示具体的漏电电流是多大，现在已经不再使用。因为万用表的价格已经十分便宜，现在已经改用方法1或方法3来进行检测了。　　第3种方法就是利用直流钳形万用表，进行感应式的检测，如图所示。　　这种方式检测起来较方便，最主要的是断开电路进行检测可能会有以下问题发生。如果是电瓶线被断开，原车的很多参数需要重新设置，增加了检测的工作量。再就是现在的汽车釆用网络化的设计，每一次网络断开后，要想让全车进入休眠状态，需要花几分钟甚至半小时的时间才能完成，是一种很浪费时间的方法。　　2、由于有些插头是多根导线合用一个插头，当我们拔开插头后，会造成相关的电路断路，所以也不方便检测电流。比如散热风扇的插头，一般风扇电机的正负极和调速电阻集中到一个插头上，我们想测量风扇工作电流时，断开了风扇插头，正负极同时断开，无法形成回路，也没有电流流过风扇，无法测量。　　综合以上几种不利因素，一般在现代新型汽车电气维修中，不建议采用传统的断开电路串联进行电流表的方法测量电流，而尽量采用钳形万用表感应式的测量方法。万用表对场效应管的识别和判定场效应晶体管简称场效应管。一般的晶体管是由两种极性的载流子,即多数载流子和反极性的少数载流子参与导电,因此称为双极型晶体管,而FET仅是由多数载流子参与导电,它与双极型相反,也称为单极型晶体管。它属于电压控制型半导体器件，具有输入电阻高(108～109Ω)、噪声小、功耗低、动态范围大、易于集成、没有二次击穿现象、安全工作区域宽等优点，现已成为双极型晶体管和功率晶体管的强大竞争者。　　场效应管的测试　结型场效应管的管脚识别：　　场效应管的栅极相当于晶体管的基极，源极和漏极分别对应于晶体管的发射极和集电极。将置于R×1k档，用两表笔分别测量每两个管脚间的正、反向电阻。当某两个管脚间的正、反向电阻相等，均为数KΩ时，则这两个管脚为漏极D和源极S(可互换)，余下的一个管脚即为栅极G。对于有4个管脚的结型场效应管，另外一极是屏蔽极(使用中接地)。　判定栅极　　用万用表黑表笔碰触管子的一个电极，红表笔分别碰触另外两个电极。若两次测出的阻值都很小，说明均是正向电阻，该管属于N沟道场效应管，黑表笔接的也是栅极。　　制造工艺决定了场效应管的源极和漏极是对称的，可以互换使用，并不影响电路的正常工作，所以不必加以区分。源极与漏极间的电阻约为几千欧。　　注意不能用此法判定绝缘栅型场效应管的栅极。因为这种管子的输入电阻极高，栅源间的极间电容又很小，测量时只要有少量的电荷，就可在极间电容上形成很高的电压，容易将管子损坏。

如果正确激活电子爆破机扫描器，如果这个扫描器正确的，就应该按他里面的要求和里面的需用吧，我们还是先了解

我用的是微生物限度检查以MT01L。是比你说的集菌仪方又便宜。。。 高得泰林啊。和你一样的

浙江泰林生物技术股份有限公司是2002-01-08在浙江省杭州市注册成立的股份有限公司(非上市、自然人投资或控股)，注册地址位于浙江省杭州市滨江区南环路2930号。浙江泰林生物技术股份有限公司的统一社会信用代码/注册号是91330100735254191Q，企业法人叶大林，目前企业处于开业状态。浙江泰林生物技术股份有限公司的经营范围是：生产：孔径测定仪，集菌培养器，隔离系统，集菌仪（除医疗用），微生物限度检验仪，均质器，桶装水取样仪，内镜微生物检测仪，拉曼光谱仪，消毒器械（气态过氧化氢、干雾过氧化氢），总有机碳分析仪，滤膜完整性测试仪，手套完整性测试仪、微生物培养基、菌种等试剂耗材，分析仪器，第二类医疗器械；服务：食品、药品生产检测设备、净化设备、分析仪器、过滤设备、实验检测用品的技术开发、技术咨询、技术服务、成果转让，展览展示服务，成年人的非证书劳动职业技能培训（涉及前置审批的项目除外），物业管理，室内环境净化工程、水处理工程的设计、安装；批发、零售：五金，电器，净化设备，分析仪器，检测设备，过滤设备，塑料制品，化工产品（除危险化学品及易制毒化学品），第二类医疗器械，货物进出口（法律、行政法规禁止的项目除外，法律行政法规限制的项目取得许可后方可经营）；其他无需报经审批的一切合法项目。（依法须经批准的项目，经相关部门批准后方可开展经营活动）。在浙江省，相近经营范围的公司总注册资本为1019531万元，主要资本集中在100-1000万和1000-5000万规模的企业中，共2715家。本省范围内，当前企业的注册资本属于优秀。浙江泰林生物技术股份有限公司对外投资1家公司，具有0处分支机构。通过百度企业信用查看浙江泰林生物技术股份有限公司更多信息和资讯。

　　现代生物技术制药研究及展望　　生物技术药物(biotech drugs)或称生物药物(biopharmaceutics)是集生物学、医学、药学的先进技术为一体，以组合化学、药学基因（功能抗原学、生物信息学等高技术为依托，以分子遗传学、分子生物、生物物理等基础学科的突破为后盾形成的产业。现在，世界生物制药技术的产业化已进入投资收获期，生物技术药品已应用和渗透到医药、保健食品和日化产品等各个领域，尤其在新药研究、开发、生产和改造传统制药工业中得到日益广泛的应用，生物制药产业已成为最活跃、进展最快的产业之一。　　有些学者认为，20世纪的科学技术是以物理学和化学的成就占主导地位，而21世纪的科学技术是以生物学的成就占主导地位。无论这种说法是否得到普遍的认同，生物技术是当今高技术中发展最快的领域似乎是不争的事实。 科学家预测，生命科学到2015年会取得革命性进展。这些进展可以帮助人类解决很多目前无法医治的疾病的治疗问题，彻底消除营养不良，改善食品的生产方式，消除各种污染，延长人类寿命，提高生命质量，为社会安全和刑侦提供新的手段。有些成果还可以帮助人类加速植物和动物的人工进化以及改善生态环境对人类的影响等。产生新的有机生命的研究也会取得进展。　　1.生物制药现状　　目前生物制药主要集中在以下几个方向：　　1 肿瘤 在全世界肿瘤死亡率居首位，美国每年诊断为肿瘤的患者为100万，死于肿瘤者达54.7万。用于肿瘤的治疗费用1020亿美元。肿瘤是多机制的复杂疾病，目前仍用早期诊断、放疗、化疗等综合手段治疗。今后10年抗肿瘤生物药物会急剧增加。如应用基因工程抗体抑制肿瘤，应用导向IL-2受体的融合毒素治疗CTCL肿瘤，应用基因治疗法治疗肿瘤(如应用γ-干扰素基因治疗骨髓瘤)。基质金属蛋白酶抑制剂(TNMPs)可抑制肿瘤血管生长，阻止肿瘤生长与转移。这类抑制剂有可能成为广谱抗肿瘤治疗剂，已有3种化合物进入临床试验。　　2 神经退化性疾病 老年痴呆症、帕金森氏病、脑中风及脊椎外伤的生物技术药物治疗，胰岛素生长因子rhIGF-1已进入Ⅲ期临床。神经生长因子(NGF)和BDNF(脑源神经营养因子)用于治疗末稍神经炎，肌萎缩硬化症，均已进入Ⅲ期临床。　　美国每年有中风患者60万，死于中风的人数达15万。中风症的有效防治药物不多，尤其是可治疗不可逆脑损伤的药物更少，Cerestal已证明对中风患者的脑力能有明显改善和稳定作用，现已进入Ⅲ期临床。Genentech的溶栓活性酶(Activase重组tPA)用于中风患者治疗，可以消除症状30%。　　3 自身免疫性疾病 许多炎症由自身免疫缺陷引起，如哮喘、风湿性关节炎、多发性硬化症、红斑狼疮等。风湿性关节炎患者多于4000万，每年医疗费达上千亿美元，一些制药公司正在积极攻克这类疾病。如 Genentech公司研究一种人源化单克隆抗体免疫球蛋白E用于治疗哮喘，已进入Ⅱ期临床;Cetor′s公司研制一种TNF-α抗体用于治疗风湿性关节炎，有效率达80%。Chiron公司的β-干扰素用于治疗多发性硬化病。还有的公司在应用基因疗法治疗糖尿病，如将胰岛素基因导入患者的皮肤细胞，再将细胞注入人体，使工程细胞产生全程胰岛素供应。　　4 冠心病 美国有100万人死于冠心病，每年治疗费用高于1 170亿美元。今后10年，防治冠心病的药物将是制药工业的重要增长点。Centocor′s Reopro公司应用单克隆抗体治疗冠心病的心绞痛和恢复心脏功能取得成功，这标志着一种新型冠心病治疗药物的延生。　　基因组科学的建立与基因操作技术的日益成熟，使基因治疗与基因测序技术的商业化成为可能，正在达到未来治疗学的新高度。转基因技术用于构造转基因植物和转基因动物，已逐渐进入产业阶段，用转基因绵羊生产蛋白酶抑制剂ATT，用于治疗肺气肿和囊性纤维变性，已进入Ⅱ，Ⅲ期临床。大量的研究成果表明转基因动、植物将成为未来制药工业的另一个重要发展领域。　　2.生物制药展望　　今后10年生物技术将对当代重大疾病治疗剂创造更多的有效药物，并在所有前沿性的医学领域形成新领域。目前热门的药物生物技术如下：　　表1 热门药物生物技术　　疫苗 62 组织纤溶酶原激活剂 4　　基因治疗 28 凝血因子 3　　白介素 11 集落细胞刺激因子 3　　干扰素 10 促红细胞生成素 2　　生长因子 10 SOD 1　　重组可溶性受体 6 其他 56　　反义药物 6 总数 284　　生物学的革命不仅依赖于生物科学和生物技术的自身发展，而且依赖于很多相关领域的技术走向，例如微机电系统、材料科学、图像处理、传感器和信息技术等。尽管生物技术的高速发展使人们难以作出准确的预测，但是基因组图谱、克隆技术、遗传修改技术、生物医学工程、疾病疗法和药物开发方面的进展正在加快。　　除了遗传学之外，生物技术还可以继续改进预防和治疗疾病的疗法。这些新疗法可以封锁病原体进入人体并进行传播的能力，使病原体变得更加脆弱并且使人的免疫功能对新的病原体作出反应。这些方法可以克服病原体对抗生素的耐受性越来越强的不良趋势，对感染形成新的攻势。　　除了解决传统的细菌和病毒问题之外，人们正在开发解决化学不平衡和化学成分积累的新疗法。例如，正在开发之中的抗体可以攻击体内的可卡因，将来可以用于治疗成瘾问题。这种方法不仅有助于改善瘾君子的状况，而且对于解决全球性非法毒品贸易问题具有重大影响。　　各种新技术的出现有助于新药物的开发。计算机模拟和分子图像处理技术(例如原子力显微镜、质量分光仪和扫描探测显微镜)相结合可以继续提高设计具有特定功能特性的分子的能力，成为药物研究和药物设计的得力工具。药物与使用该药物的生物系统相互作用的模拟在理解药效和药物安全方面会成为越来越有用的工具。例如，美国食品药物管理局(FDA)在药物审批的过程中利用Dennis Noble的虚拟心脏模拟系统了解心脏药物的机理和临床试验观测结果的意义。这种方法到2015年可能会成为心脏等系统临床药物试验的主流方法，而复杂系统(例如大脑)的药物临床试验需要对这些系统的功能和生物学进行更为深入的研究。　　到下世纪初生物技术药物的种类数目尚不会超过一般药物的总数，但生物技术制药公司总数将超过前10年的6倍。目前主要生物技术公司多分布在美国，如Amgen,Genetics institute,Genzyme,Genentech和Chiron，还有Biogen也发展较快。1987年尚没有一种重组DNA药物进入世界药品销售额排名前列表，但到1996年已有多种生物工程药物榜上有名。经上市的生物技术药物主要含3大类，即重组治疗蛋白质、重组疫苗和诊断或治疗用的单克隆抗体。　　药物的研究开发成本目前已经高到难以为继的程度，每种药物投放市场前的平均成本大约为6亿美元。这样高的成本会迫使医药工业对技术的进步进行巨大的投资，以增强医药工业的长期生存能力。综合利用遗传图谱、基于表现型的定制药物开发、化学模拟程序和工程程序以及药物试验模拟等技术已经使药物开发从尝试型方法转变为定制型开发，即根据服药群体对药物反应的深入了解会设计、试验和使用新的药物。这种方法还可以挽救过去在临床试验中被少数患者排斥但有可能被多数患者接受的药物。这种方法可以改善成功率、降低试验成本、为适用范围较窄的药物开辟新的市场、使药物更加适合适用对症群体的需要。如果这种技术趋于成熟，可以对制药工业和健康保险业产生重大影响。　　值得注意的是，制药工业的知识产权保护在世界各地是不平衡的。某些地区(例如亚洲)会继续以生产专利过期药物为主，有些地区(如美国和欧洲)除了继续生产低利润的药物外会不断开发新的药物。　　总之，综合多学科的努力，通过新技术的创立可以大大拓宽发明新药的空间，增加发明新药的机遇与速度。因为这些手段可以寻找快速鉴定药物作用的靶，更有效地发现更多新的先导物化学实体，从而为发明新药提供更加广阔的前景。　　仅供参考，请自借鉴　　希望对您有帮助

药品生物测定的发展趋势 作者:吕会成 【关键词】 生物测定；药理；药品 ［摘要］ 生物测定是经典的药品检测专业之一，现代仪器分析的广泛应用，给其带来了极大的挑战和机遇，面对目前的基本状况，阐明了生物测定专业在中药开发、新药研制、药物安全性评价及微生物限度检查方面的应用和发展趋势。 ［关键词］ 生物测定；药理；药品 药品是特殊商品，药品质量直接关系到用药者的安全和疗效。药品检测方法和检测水平随着制药工业的发展不断改进提高。由于现代科学技术的发展，相邻学科之间的相互渗透，分析化学的发展经历了三次巨大的变革，使分析化学发展成为以仪器分析为主的现代分析化学。面对生命科学中复杂的分离分析任务，发展了色谱分析方法。结构分析、价态分析、晶体分析等方面的研究又促进了光谱分析的发展。以计算机应用为主要标志的信息时代的来临，仪器分析迅速发展，为药物检测提供各种非常灵敏、准确而快速的分析方法［1］。生物测定受到了极大的挑战，其发展前景令我们从事药品生物测定工作者所关注。 1 药品生物的特点与业务范围 1.1 药品生物测定的定义与特点 药品生物测定（简称生测）是利用药品（或药品中的有害杂质）对生物（或离体器官及组织）所引起的反应来测定药品的含量或安全性的一种方法。 生测法的优点是测定的结果与医疗要求基本一致，能直接反映药品的效果或毒副作用，这是其他物理学方法或化学方法所不能达到的。因此，目前各国药典仍大都采用这一方法。 生测法的缺点是检验周期长，微生物有生长繁殖过程，动物有生理代谢过程，观察分析时间一般在2~7天，有些试验会更长。影响因素多，有生物差异性，也有系统操作误差和环境条件等造成的影响。用品用具、动物质量、仪器设备都会对结果产生影响［2］。所以，以生测主检的品种在中国药典中逐版减少。 1.2 药品生物测定的业务范围 中国药典是法定的药品标准，它将药品质量控制项目归为四类：性状、鉴别、检查和含量。生测的业务主要涉及到中西药品的检查类和含量类。 其中作为药品安全性检查项目最多，包括：无菌、热原、细菌内毒素、异常毒性、安全试验、急性全身毒性、过敏物质、刺激性、溶血、降压物质、微生物限度等。含量（或效价）测定包括：抗生素微生物检定法，胰岛素、硫酸鱼精蛋白、缩宫素、卵泡刺激素、黄体生成素、升压素等生物检定法。 2 药品生物测定的现状 由于现代化检测仪器的广泛应用，药品生物测定的品种和范围，方法和要求，也发生了很大变化。 2.1 品种和范围的变化 抗生素的含量测定，最初大部分抗生素用微生物法测定含量。随着制药工业发展，提纯方法不断改进，有效组分更加明确，许多品种检测方法不断改为仪器测定和化学测定。例如：2000年版中国药典收载约219个抗生素品种，其中有15个原料药及其制剂从1995年版的化学法和微生物法改为高效液相色谱法（简称HPLC），使该法达到97种，微生物法仅有24个，其中9个品种是新增加的。有人预计本世纪初，HPLC法会发展成为中国药典使用频率最高的一种仪器分析法［3］。规定取消抗生素过期检验，抗生素微生物效价测定的业务工作量更是明显减少。 药品注射剂的热源检查。1942年美国首先将家兔法收入药典，相继世界各国药典均规定用该法。中国药典从1953年开始收载。自1973年以来，鲎试剂被证明是一种检测细菌内毒素（热原）存在的灵敏试剂。用鲎试剂要比家兔试验迅速、经济，所需样品量少，操作过程工作量小，每天可进行许多样品检测。1980年美国药典20版首载“细菌内毒素检查法”，1985年USP21版收载5种注射用水及40种放射性药品。1991年11月执行的USP22版第五增补版公布了185种药品删除家兔法，用细菌内毒素检查法代替。1995年USP23版注射剂的热源项几乎都被细菌内毒素检查法代替［4］。 我国从20世纪70年代开始研究制备鲎试剂，1988年卫生部颁布细菌内毒素检查法，1993年中国药典第二增补本收载该法，但未涉及任何品种，1995年中国药典二部正式收载，并规定了注射用水、氯化钠注射液和二十多种放射性药品并删除热源检查，以内毒素代替。2000年版中国药典进一步扩大到68种。预计2005年版中国药典还要继续增加品种，热源项都将被内毒素代替。动物试验改为生化试验。 2.2 实验动物 生测离不开实验动物，在实验中，为了减少生物差异，提高动物反应敏感性，以最少的动物达到最满意的结果。国家非常重视实验动物，1988年国务院颁布了《实验动物管理条件》，对实验动物的饲管、管理、使用等做出了明确规定，实行达标认证制度，严格管理。按微生物控制程度把实验动物分为四级：普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物和无菌动物［5］。一般动物实验必须达到清洁动物标准，种系清楚，不杂乱，无规定指出的疾病。动物级别越高，饲养管理条件越严，设施投资越大。实验动物是实验研究的活试剂，既要有纯度，也要有数量，背景明确，来源清楚，符合要求才能使用。（随着药品纯度的提高，凡是有准确的化学和物理方法或细胞学方法能取代动物实验，进行药品和生物制品质量检测，应尽量采用，以减少动物的使用。） 2.3 药品生物测定在方法上的改进与变化 为了缩短操作时间，减少实验误差，近年来生测方面也研制并投入使用了部分仪器设备，如：抗生素抑菌圈测定仪、微机热原测温仪、集菌仪、细菌数测定仪等，减轻了工作强度，提高了工作效率，检测结果更加准确可靠。 3 药品生物测定的发展趋势 生测作为经典方法沿用至今，表明它有其他方法不能替代的特点，在药品检验中发挥了重要作用。不少老产品改为其他方法控制质量，也会不断有新产品离不开生测法，我们应当充分发挥它的优点，尽量克服它的不足，开拓新的业务范围。 3.1 微生物限度检查工作量大 为了控制药品染菌限度，1975年美国药典19版首载微生物限度检查，1980年英国药典收载，我国在1990年由卫生部颁布了药品卫生标准及检验方法，1995年版中国药典正式收载［6］。2000年版中国药典按剂型规定了微生物限度标准，执行范围除注射剂和中药饮片外几乎包括中西药的所有制剂和原料。该项检查成为药典品种适用最多的检查项目，占当前地市级药品检验所生测室业务工作量的80%以上。在这项检查中，有大量的业务技术需要我们进一步研究，改进试验条件，使数据准确，探讨快速检测的新方法。药包材的检查，国家药监局已经发布试行标准，业务范围将更加扩大，这是我们进一步做好工作，努力探讨研究的新领域。 3.2 药品生物测定在中药开发中的作用 我国是中药王国，2000年版中国药典一部共收载920种，其中中成药398种。有含量测定的157种，仅占总数的17%，中药成分多，杂质和干扰物质很多。复方制剂，尤其大复方制剂专属性的检出处方中所含药材很困难，有大量的研究工作需要做。中成药中的杂质如重金属、残留农药等达到一定水平会产生毒副作用，影响药物安全性［7］。要让中药制剂打进国际市场，我们在检查类的控制项目和含量类的方法探讨方面有大量工作要做，生物测定可以在毒理、药理方面进行研究、探讨，逐步完善质量控制标准，提高制剂质量发挥更大的作用。 3.3 新药研制开发与安全性评价 新药研制开发是多学科合作的系统工程。在获得一个具有生物活性的化合物后，研究开发组织者要在生物医学领域进行药物评价研究，首先必须组织药理学、毒理学、病理学、兽医学、遗传学、生物化学、药代动力学方面的专家进行合作研究，按药物非临床研究管理规范GLP进行管理。组织药理、毒理（包括一般毒理和特殊毒理）、病理、药代动力学和毒代动力学、药物分析、临床化学、实验动物、生物统计、质量保证等部门有关人员进行讨论，分阶段做出评价［8］。生测在这方面可以参加开发研究或进行技术指导。 综上所述，药品生物测定是药物分析的重要组成部分，是不可缺的检测专业，现代仪器的大量使用，不仅不会影响其发展，而是如虎添翼，让药品生物测定展示出新的前景。 ［参考文献］ 1 倪坤义，田颂九，丁丽霞.21世纪药物分析学的发展趋势.中国药学杂志，2000，35（12）：798

都是薄膜过滤法，集菌仪做无菌结果要求无菌，微生物限度的话是可以有菌的，集菌仪上面放反复使用培养器的话是可以做纯化水微生物限度的。微生物限度检测仪比较贵，集菌仪相对便宜，一万多就可以买到了。集菌仪的作用是检验供试品是否含菌的仪器，配套集菌培养器使用。主要用于注射用无菌制剂的无菌检测，包括抗生素类及含有抑菌成份的药品、大输液、水针剂、灭菌医疗器具、无菌注射用水等。集菌仪是集菌培养器的配套使用仪器，通过集菌仪的定向蠕动加压作用，供试品被过滤并在滤器内进行培养，以检验供试品是否含菌。微生物限度检测仪操作步骤泵头灭菌 2.放置滤膜 3.安装过滤杯4.过滤供试品 5.取下过滤杯 6.转移滤膜

青霉素钠无菌检查的方法验证目的 建立健全注射用青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。方法 按中国药典2010年版二部(附录XI H)无菌检查法中的薄膜过滤法进行。1 试验环境与材料1．1 试验环境在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的菌无室中进行。1．2 仪器智能集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)、PY330一次性全封闭集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、生化培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、霉菌培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、生物安全柜(苏州安泰空气技术公司)1．3 试药注射用青霉素钠1．4 试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(V)98 003]。1．5 培养基、稀释液及缓冲液1．5．1 干粉培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。1．5．2 细菌稀释液0．9％ 灭菌氯化钠溶液。1．5．3 冲洗用缓冲液pH7．0氯化钠-蛋白胨缓冲液。2 方法与结果2．1 菌液制备按中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法菌液制备法制备 。2．2 菌落计数取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1分别接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30~C～35"E生化培养箱培养24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1 m1分别接种至改良马丁琼脂培养基中，经23℃ 一28~C霉菌培养箱培养48～72 h，计数。(上述各菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)2．2 方法学验证2．3．1 试验组(样品+阳性) 取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250 ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100 ml，充分振摇，完全排空后循环操作5次，总冲洗量达到500 ml每管。冲洗完毕后在2管中分别注人改良马丁培养基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml。另取一套集菌培养器(三联装)取本品依上述方法过滤并冲洗后，均注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml，将上述6管集菌培养器移至阳性对照室，于含硫乙醇酸盐流体培养基的集菌培养器中，分别接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌茵液、枯草芽孢杆菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，于含改良马丁培养基的集茵培养器中，分别接种白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1 ml，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。2．3．2 阳性对照组取一次性全封闭集菌培养器(三联装)二套，4管中分别注入硫乙醇酸盐流体培养基各100 ml、2管中分别注入改良马丁培养基各100 ml，在阳性对照室内将6种菌液分别接种至相应管内，作为阳性对照，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。2．3．3 阴性对照组取一次性全封闭集菌培养器(二联装)一套，滤过适量缓冲液后分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml，作为阴性对照，按前述规定温度培养14 d，观察结果。2．3．4 样品的无菌检查 取样品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的冲洗量冲洗，加入培养基后，按规定温度培养14 d，逐日观察，若培养14 d均澄清；由此判定供试品符合规定。结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。

基于滤膜上细菌直接计数法的细菌总数快速检测 【摘要】 细菌总数快速检测在质量监测中具有重要的意义，目前除了经典的平板培养法以外，还有微菌落法、阻抗法等快速检测方法，这些方法或者需要较长的检测时间，或者需要较高的检测成本。本研究提出一种不需要培养而在滤膜上直接计数的细菌总数的快速检测方法，它主要分为过滤、染色、显微镜计数和计算四个步骤。计算细菌总数时，根据细菌在滤膜上的分布特点，对传统公式进行改进，提出按区域计算细菌总数的计算方法，提高了检测精度。研究结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异（t=0.847，P=0.436＞0.05），是一种低成本、快速的细菌总数检测方法。 1 引 言 细菌总数计数的研究已有很多，目前国标规定的方法为平板计数法，该方法是将样品加入琼脂营养基，在37 ℃下培养24～48 h后计数。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法〔1〕、Simplate TM全平器计数法〔2〕、微菌落技术〔3-5〕、纸片法〔6-7〕等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。 本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。 2 材料与方法 2.1 材料 本研究中用的试验材料有集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司），染色剂，生物显微镜（宁波永新光学股份有限公司），聚碳酸脂膜（直径47 mm）。 2.2 实验方法 2.2.1 准备工作 卸下集菌仪的滤网（见图1），统计滤网上小孔总数，为计算菌液浓度做准备。另外，还需对集菌仪中的集菌器进行高压灭菌，以防止过滤过程中引入外源细菌。 2.2.2 细菌收集 取一定浓度的霉菌菌液300～500 ml，装在集菌仪上，集菌仪采用蠕动加压方式对菌液施加一定的压力，使菌液流过孔径为0.45 um的聚碳酸脂膜。采用过滤方法是因为它可以使细菌相对均匀地分布在滤膜上，而选用聚碳酸脂膜是因为这种膜具有良好的透光性，便于用显微镜观察。 2.2.3 染色 集菌后取下滤膜，切下一部分放在载玻片上，进行染色、固定。染色的目的是增大细菌与背景的对比度，便于观察。 2.2.4 显微镜计数与计算 菌液经集菌仪过滤后，细菌在滤膜上的分布见图2、图3，由图可以看出细菌分布具有以下两个特点：一是细菌集中在一个个的圆形区域内，这些圆形区域和挡板的小孔相对应；二是各个圆形区域之间细菌很少。根据膜上细菌分布的这种特点，提出以圆形区域为单位进行计数，统计出圆形区域内细菌的平均个数，从而计算出菌液中细菌总数。具体步骤如下：随机选择10个圆形区域，在油镜下，调节焦距以获得较清晰的图像（见图4），统计每个圆形区域内的细菌个数，然后按公式(1)计算出菌液的浓度。 X=A10×N/V(1)图2 膜上细菌的区域分布 Fig 2 The distributing region of bacteria on the filter(100倍) 图3 膜上细菌的区域间隔 Fig 3 The space among the distributing regions(100倍) 图4 膜上细菌染色后图像 Fig 4 Figure of bacteria after coloration(1 000倍) 式中：X表示待检菌液浓度（CFU/ml） A表示10个圆形区域内细菌总数 N表示滤网上小孔总数 V表示集菌时所用待检菌液体积（ml） 3 结果与讨论 3.1 实验结果 按上述方法计算得到的结果与平板培养法得到的结果见表1。表1 两种方法得到的细菌总数 Table 1 Total bacteria number by two different methods 样本1样本2样本3样本4样本5样本6染色镜检 (cfu/ml）185168157165171166平板培养 (cfu/ml)176155165158183152 对表1中两组数据进行配对t检验，在α=0.05时，双尾检验结果如下：t=0.847，P=0.436＞0.05，说明两种方法得到的结果无显著性差异。 3.2 讨论 3.2.1 计算公式的改进 用集菌仪对样本菌液进行过滤时，由于滤网挡板的作用，使得细菌不是均匀地分布在整个滤膜上，而是集中分布在滤网的小孔处，所以，计算细菌总数时，不能采用公式X=A40×Φ1Φ22/V（其中Φ1，Φ2分别为滤膜直径和视野直径），该公式是微菌落方法检测细菌总数中的常用计算公式。在本实验中，根据细菌分布的特点，提出以圆形区域为单位计算细菌总数的思路，使计算结果更接近真实值，从而提高了检测精度。 3.2.2 细菌大小的影响 细菌大小对本实验的影响主要体现在镜检时，如果细菌太小，显微镜计数时不能将细菌从背景中分辨出来，我们的实验结果显示，不能分辨大肠杆菌和葡萄球菌，而较大的霉菌可以清晰地分辨。 3.2.3 检测时间进一步缩短 细菌总数的经典检测方法是平板培养法，得到的结果精度高，但是它所用时间长，为了缩短检测时间，出现了微菌落法，将检测时间缩短为4 h左右〔3-5〕。本研究不对细菌进行培养，而是在膜上染色后直接用显微镜计数，最大限度地缩短了检测时间，使整个检测时间在1 h左右。 4 结论 本研究用集菌仪将菌液过滤后，取滤膜一部分进行染色、制片，然后在油镜下统计细菌个数。根据细菌在滤膜上的分布特点，提出将圆形区域作为统计单位，得到圆形区域内细菌的平均个数，从而计算出菌液浓度。实验结果表明，按照该方法得到的结果与平板培养法的结果无显著性差异。与平板培养法和微菌落法相比，该方法不需要细菌培养，检测时间只需要1 h左右，明显缩短了检测时间，是一种快速、有效的细菌总数检测方法。

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细菌总数计数的研究已有很多，目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。

细菌总数检测目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显著性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。扩展资料：水中通常存在的细菌大致可分为三类：1、天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。2、土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。3、肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌（伤寒和副伤寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。参考资料来源：百度百科——细菌总数

常规来说，主要设备：无菌室，超净工作台（或者隔离器），集菌仪；微生物限度室，超净工作台（或者隔离器），一般薄膜过滤系统，振摇仪（也可以手动振摇不需要配置，根据企业情况），混合器；阳性室：生物安全柜，混合器。除以上设备外，根据自己企业产品选配相应辅助设备。

取水：取水前让水流一段时间，擦净取水口，用无菌瓶灌装取的水抽虑：用集菌仪或者抽虑设备在超净工作台抽虑，滤膜要无菌的培养：培养滤膜，培养基正确配置灭菌，对照，培养温度，天数一系列做好观察记录：观察滤膜记录数据

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无菌检查的定义中国药典2005年版对无菌检查的定义是：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。由于无菌是一个相对的概念，因此，对无菌检查的结果应该有一个正确的认识－即产品通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下，供试品未发现有微生物污染，并不表示所有的产品都是无菌的。反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认为批产品的微生物污染风险相当高。无菌检查的环境中国药典2005年版对无菌检查环境的规定主要有：无菌检查应该在洁净度为10000级，局部100级的单向流空气区域内或隔离系统内进行无菌检查的全过程，应该遵守无菌操作，避免微生物污染，检查的环境应该能够提供这种保障无菌检查的单向流空气区域、工作台面和环境应该定期验证隔离系统应该按相关技术要求进行验证，内部洁净度应该符合无菌检查的要求洁净室一般应该具备核心操作区、缓冲区、更衣区、阳性对照操作区等区域实验室应该根据洁净室的特点，制订并执行洁净室的使用、维护、验证标准操作规程为避免交叉污染，无菌检查的洁净室宜单独设置，单独使用洁净室的使用在实验开始之前1小时启动风机系统（空调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭观察并确保洁净室的压差物品经物流通道进入洁净室人员正确着装后经人流通道进入洁净室使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。 洁净室的维护系统维护过滤器的清洗更换：每月清洗净化空调系统的新风口和初效空气过滤器；每季度更换净化空调系统的中效过滤器；每年更换单向流区域的高效空气过滤器，并视洁净室验证结果，选择更换其他区域内的高效空气过滤器。 风机系统的维护：每半年检查送风风机和排风风机的各项指标，视情况更换风机涡轮轴承。 空调系统的维护：每年夏、冬两季之初，对空调机组进行维护，重点是压缩机保养、制冷剂补充和远程控制系统验证。 洁净室内压力梯度的维护：每半年调试洁净室内各区域间的压力梯度，确保正压房间对相邻房间有5Pa以上的正压，负压房间对相邻房间有5Pa以上的负压。 无菌检查的设备用于无菌检查的主要仪器设备有：超净工作台、集菌仪、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、隔水式恒温培养箱、生化培养箱、立式冷藏柜和生物显微镜等。上述仪器设备中，温度设备应进行校准或验证，超净工作台和生物安全柜应进行性能确认。校准、验证和确认的频次通常为每年。温度设备的校准：对培养箱、干热灭菌器等温度设备，应进行热分布和热均匀性等指标的检定；对湿热灭菌设备应检定安全阀、压力表等安全装置，同时应采用生物指示剂进行有效性确认。超净工作台和生物安全柜的性能确认：应进行洁净度和微生物数的测定，生物安全柜还应该进行气流流型和压差测定。无菌检查的人员应由具备微生物学专业背景，并经过无菌操作培训的专业人员来从事无菌检查从事无菌检查的专业人员除了应该具备专业技能外，还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风上岗培训应至少包括以下内容无菌操作的基本技能无菌操作环境的使用、维护、验证技能仪器设备的使用和维护、验证技能培养基的配制和质量控制技术不同产品无菌检查的操作技能无菌检查方法验证的技能无菌检查结果判断的能力无菌检查异常结果的分析处理能力阳性对照菌种的使用和生物安全知识详细参考CP药典10版。

3个。薄膜过滤器它是由一个具有蠕动泵头的集菌仪和一套具有3个培养瓶的一次性使用的全封闭集菌培养器构成的过滤系统，非常的实用。

s1207轴承是调心球轴承。根据查询相关资料信息，1207轴承是调心球轴承，1207轴承型号，圆柱孔，开式，标准保持架，轴承1207的规格是35mmx72mmx17mm。用途1207轴承，品牌是NSK，1207轴承主要用于机床电器、触角电位、节流阀、液压压床、植物测定、碟簧、集菌仪器、刮泥机、辐射污染、车用灯类等设备。调心球轴承有圆柱孔和圆锥孔两种结构，保持架的材质有钢板、合成树脂等。其特点是外圈滚道呈球面形，具有自动调心性，可以补偿不同心度和轴挠度造成的误差，但其内、外圈相对倾斜度不得超过3度。

青霉素钠无菌检查的方法验证目的建立健全注射用青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。方法按中国药典2010年版二部(附录XIH)无菌检查法中的薄膜过滤法进行。1试验环境与材料1．1试验环境在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的菌无室中进行。1．2仪器智能集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)、PY330一次性全封闭集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、生化培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、霉菌培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、生物安全柜(苏州安泰空气技术公司)1．3试药注射用青霉素钠1．4试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003l、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(V)98003]。1．5培养基、稀释液及缓冲液1．5．1干粉培养基硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。1．5．2细菌稀释液0．9％灭菌氯化钠溶液。1．5．3冲洗用缓冲液pH7．0氯化钠-蛋白胨缓冲液。2方法与结果2．1菌液制备按中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法菌液制备法制备。2．2菌落计数取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1m1分别接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30~C～35"E生化培养箱培养24～48h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1m1分别接种至改良马丁琼脂培养基中，经23℃一28~C霉菌培养箱培养48～72h，计数。(上述各菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)2．2方法学验证2．3．1试验组(样品+阳性)取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100ml，充分振摇，完全排空后循环操作5次，总冲洗量达到500ml每管。冲洗完毕后在2管中分别注人改良马丁培养基100ml，另1管中注入硫乙醇酸盐流体培养基100ml。另取一套集菌培养器(三联装)取本品依上述方法过滤并冲洗后，均注入硫乙醇酸盐流体培养基100ml，将上述6管集菌培养器移至阳性对照室，于含硫乙醇酸盐流体培养基的集菌培养器中，分别接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌茵液、枯草芽孢杆菌菌液、生孢梭菌菌液各1ml，于含改良马丁培养基的集茵培养器中，分别接种白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1ml，按前述规定温度培养3～5d，观察结果。2．3．2阳性对照组取一次性全封闭集菌培养器(三联装)二套，4管中分别注入硫乙醇酸盐流体培养基各100ml、2管中分别注入改良马丁培养基各100ml，在阳性对照室内将6种菌液分别接种至相应管内，作为阳性对照，按前述规定温度培养3～5d，观察结果。2．3．3阴性对照组取一次性全封闭集菌培养器(二联装)一套，滤过适量缓冲液后分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，作为阴性对照，按前述规定温度培养14d，观察结果。2．3．4样品的无菌检查取样品15支依上述方法同法操作，以500ml／管的冲洗量冲洗，加入培养基后，按规定温度培养14d，逐日观察，若培养14d均澄清；由此判定供试品符合规定。结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。讨论目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。

常规来说，主要设备：无菌室，超净工作台（或者隔离器），集菌仪；微生物限度室，超净工作台（或者隔离器），一般薄膜过滤系统，振摇仪（也可以手动振摇不需要配置，根据情况），混合器；阳性室：生物安全柜，混合器。除以上设备外，根据自己产品选配相应辅助设备。

反射率测定仪使用方法：1、把探头与电控箱连接，同时接上电源，开机预热1520分钟。此时应把探头放在黑色标准板上为佳。2、校零：把探头放在黑色标准板上，调整主机的校正旋钮，使主机数字显示为00．0，允许变动±0．1。3、校正标准值：把探头放在白色标准板上，调整主机的校正旋钮，使主机显示的数值与白色标准板的标定值一致，允许变动±0．1。反复2-3条几次，使主机显示的数值满足校零、校正的要求。（注：标准板值为小数点后两位，校正时，请用户自行四舍五入保留一位小数。）4、测量RB值：把探头移至放有试样的黑色工作陶瓷板上，显示器所显示的数值即为RB值（或参照有关国家标准要求进行）。5、测量Rw值：把探头移至放有试样的白色工作陶瓷板上，显示器所显示的数值即为Rw值（或参照有关国家标准要求进行）。6、计算求得对比率RB/Rw值。反射率测定仪注意事项：1、为保证测量精度，仪器应经常校准，允许偏差为±0.1。2、为克服光电池的光照疲劳现象，在测试的间隙时间内应将探头放在黑色标准板上面。3、试样的制备应严格依照相关的国家标准规定进行。

空军政治部文工团创作演出于上世纪60年代的红色经典大型民族歌剧《江姐》，经过第五次复排后重新亮相国家大剧院。她是一位灵性的女孩，当年，她以全国第一名的成绩被沈阳音乐学院录取。如今，已是空军政治部文工团的青年独唱演员此次《江姐》剧组启用年轻演员，打造年轻阵容。身为80后的伊泓远是年纪最小的第五代江姐的扮演者。2007年年初，团里接到通知要为17大献礼，准备第五次复排江姐。接到通知后，全团动员，为选江姐的角色忙碌起来。当时地方报考参选江姐的有40多人，连空政内部就有10几人竞争江姐这一角色。先是海选、再到10选8、8选5、5选3，最终确立了第五代江姐的名单，伊泓远名列其中。第五代江姐伊泓远透露，当时被选中时，她是团里年纪最小的歌唱演员。入选后伊泓远并无兴奋，只觉得压力很大。对于江姐这样一个众所周知的英雄形象，作为80后的伊泓远，不知自己是否能够真正驾驭这样的角色。伊泓远觉得在外形条件上自己很符合，包括自己的声音条件也是戏剧型的女高音，因此江姐的唱段对于自己来说不成问题。但如何抓住人物真正灵魂，走入人物心理是很大的挑战。伊泓远

普世（适）价值观，顾名思义，就是普遍适用的价值观。它超越民族、种族、国界和信仰，是全人类共同拥有的价值观，是衡量是非善恶的最低尺度，或者说是人类道德的共同底线。具体的说，普世价值观由三个基本要件组成：公平、正义、自由。公平不是指物质财富的绝对平均，他是指竞争机会的均衡和基本人权的对等，简单说就是不能有特权，就是在规则和法律面前人人平等。正义就是事实真相，就是人的行为和事物的最终结果，必须符合逻辑、合乎道德规范。更通俗的说，正义就是善有善报，恶有恶报。澄清事实，还原真相，惩恶扬善，就是维护正义。自由有两层含义，一是指人的基本权利和自由意志；二是指我们每个人，必须要学会约束自己的行为以及承担必要的责任，以便不妨碍他人的自由意志和固有权利，不违背公平正义的大原则。脱离了公平正义，自由是不能成立的；没有公平和自由，正义也无从谈起。因此，公平、正义、自由三者相互依存不可分割，是一个整体性的概念。普世价值观包括但不限于：民主、自由、法治、人权等等。国家有义务捍卫国民与生俱来的权利，如生存的权利、免于恐惧的权利、生育的权利、知的权利、免于匮乏的权利、思想的自由、表达的自由。

徐亚明：女，1954年2月出生，中国国籍，无境外永久居留权，副教授，硕士。1987年起历任浙江财经大学会计理论教研室主任、财务会计系主任、浙江长征职业技术学院会计系主任，并曾担任浙江方正电机股份有限公司独立董事、浙江久立特材科技股份有限公司独立董事、浙江兆丰机电股份公司独立董事，2014年至今任聚光科技（杭州）股份有限公司独立董事，2016年至今任赞宇科技集团股份有限公司独立董事，2019年6月至今任发行人独立董事。

2010年。绿水鬼手表是劳力士的产品，不仅添置了专利三扣锁上链表冠，同时也是世界上第一款防水深度达到100米的腕表。劳力士是瑞士一家老牌手表公司，也是全世界著名手表品牌之一，旗下除了有绿水鬼系列，还有经典名仕型、SKY系列等。绿水鬼手表是劳力士的品牌，同时也是劳力士水鬼系列的经典手表之一，英文名称为RolexSubmariner。劳力士的绿水鬼手表诞生于1953年，同时也是世界上第一款防水深度达到100米的腕表。绿水鬼手表不仅添置了专利三扣锁上链表冠，而且还加强了表盘的密封性，所以才可以潜入这么深的水里。劳力士的绿水鬼手表不仅外观华贵，而且外表的绿色具有十分强的吸引力，同时也是专业潜水员的最佳陪伴。

九农场港东村，位于九农场场部驻地西南方2.5公里处，耕地面积2500亩，淡水养殖面积19.1亩，现有人口530人，党员28名，村队党支部班子成员6名，党支部书记1名。港东生产队与双井村、刘家铺生产队、沿海村、刘庄子生产队、郭庄子村、王庄子生产队、太平庄子村、场部社区、青坨村、城子村、三家子村、桑庄子村、李家房子村相邻。港东生产队附近有曹妃甸湿地景区、蚕沙口天妃宫、蚕沙古戏楼、冀东南堡油田、唐海湿地等旅游景点，有曹妃甸胭脂稻、曹妃甸大米、十里海对虾、曹妃甸湿地蟹、清蒸枸杞虾等特产。

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6.00元吴运铎纪念馆 1.50元延庆县 八达岭长城景区 60.00元水关长城 12.00元 滑道 30.00成吉思汗行宫 10.00元石佛寺 10.00元 迷宫 5.00龙庆峡 20.00元 船票 40.00元龙庆峡腾龙电梯 15.00元龙庆峡百花洞 10.00元龙庆峡观光索道 10.00(单程) 20.00双程龙庆峡神仙院 10.00元龙庆峡滑道 20.00元青龙潭 10.00元康西草原 20.00元 骑马 40.00元滴水壶 15.00元古崖居 30.00元野鸭湖 15.00元妫河漂流 100.00元(自然);80.00元(机动)乌龙峡谷 15.00元珍珠泉 10.00元古木化石群 20.00元齐仙岭 10.00元燕山天池 30.00元仓米古道景区 100.00元八达岭索道 50.00元(双);30.00元(单)松山自然保护区速降 30.00元云龙山景区 15.00元石京龙滑雪场 20.00元灵照寺 5.00元野生动物园 70.00元第十四届冰灯 40.00元怀柔慕田峪长城 20.00元 中华梦石城 15.00元 磁卡票25.00元乡间情趣园 15.00元原始部落 15.00元幽谷神潭 15.00元红螺寺 20.00元 水上游乐园 15.00元神堂峪 15.00元雁栖湖 15.00元响水湖 15.00元红螺湖 5.00元鹿鸣动物游乐园 15.00元中华梦石城 15.00元施必得滑道 55.00元(全程)缆车公司 50.00元(全程)、35.00元(单程)九谷口风景区 15.00元青龙峡 15.00元天华洞 15.00元百泉山风景区 15.00元紫云山风景区 15.00元云蒙山风景区 15.00元小西湖风景区 15.00元鳞龙山风景区 12.00元天池峡谷 20.00元濂泉响谷 15.00元蓝天牧场 8.00元蹦极跳(龙人旅游开发有限公司) 150.00元速降(龙人旅游开发有限公司) 40.00元攀岩(龙人旅游开发有限公司) 30.00元生存岛 15.00元鹅和鸭农庄 10.00元圣发动植物游乐园 100.00元龙潭涧自然风景区 10.00元凤凰山森林旅游风景区 10.00元水族馆(已停业) 8.00元昌平县 九龙游乐园 5.00元 龙宫 24.00元特特乐 20.00元水族馆 18.00元娱乐城 15.00元急流漂流 20.00元虎峪风景区 10.00元十三陵骓臼峪 20.00元虎峪百仙神洞 18.00元原始大世界 10.00元白羊沟风景区 15.00元航空博物馆 34.00元居庸关长城 25.00元 云台 2.00元银山塔林 15.00元神路 12.00元昭陵 30.00元定陵 30.00元长陵 20.00元大羊山 15.00元九仙神洞 10.00元蟒山公园 15.00元门头沟区 潭柘寺 25.00元戒台寺 25.00元灵山 25.00元百花山 20.00元龙门涧 20.00元珍珠湖 10.00元妙峰山 20.00元川底下 15.00元门头沟博物馆 1.00元北京国子监 等级：AA 类型：人文古迹 浏览次数：11 返回景点列表国子监是元、明、清三代的最高学府，也是当时朝廷掌管国学政令的最高官署。北京国子监以“辟雍”为中心，三进院落，中轴两侧的建筑对称整齐，是清代皇帝的讲学之处。明代为青琉璃瓦顶，清代乾隆年间改为黄色琉璃瓦。国子监的教学科目是礼、乐、律、射、御、书、数等。当时谋求仕途发达的文人学士们最大荣耀莫过于毕业于国子监，殿试时考取进士金榜提名并刻名于孔庙。北京国子监始建于元代成宗大德十年（1306年）。依照"左庙右学"的建筑礼制，国子监的位置东邻孔庙。明初，国子监先后改称北平郡学、国子学；后固定使用了国子监的名称。北京的旅游景点很多，对总体的建议是先远后近，先重点后一般，出行易早不易晚。1、去八达岭长城最便宜的乘车方式，是乘地铁等车辆到德胜门下车，乘919路公交汽车直达八达岭长城脚下，普通车每人5元（也走高速路），快车每人10元，五分钟发一辆车，既便宜又快捷。如果你是早六点出发，当你下午一二点从长城回来时，可能会看到九十点出发的旅游车还在去八达岭的高速公路上爬行。2、重要旅游景点的人都比较多，如颐和园、故宫、天坛，有经验的导游会在八点以前将旅游团带进去，十点以后就会人海如潮，见人不见景。3、到北京旅游吃烤鸭是不可不吃的，也可能吃了烤鸭你会后悔一辈子，但总比不吃遗憾一辈子强。卖烤鸭的饭店在北京多如牛毛，但并不是都能代表北京烤鸭，真正能吃正宗北京烤鸭的饭店只有少数几家，最重要的标准是鸭子要在60天内长到5斤8两以上，只有全聚德和便宜(音bianyi)坊等少数几家店可达到此标准。赴京特别建议：颐和园是来京人员必游景点，建议如下：游览颐和园最好是乘332路汽车至东宫门入园。进东宫门参观仁寿殿―昆明湖―玉兰园―乐寿堂―长廊―石舫―苏州街出北宫门，或从石舫乘船到龙王庙游览后后出颐和园南门。但早八点以前入园，因仁寿殿、乐寿堂等景点未开门，可考虑进北宫门出东宫门。喜欢文物的可游览潘家园旧货市场（周末营业）或琉璃厂文化街。游览长城的除如要游览明十三陵，可考虑去八达岭长城（一条路线，但注意水关长城不是八达岭长城），如不去十三陵，可于早7点16分到西直门火车站购景点门票后免费乘火车游览慕田峪长城或金山岭长城，在宣武门东南角（教堂前）也有直达这几处和司马台长城的旅游车。北京旅游建议：D1：颐和园佛香阁景区在维修不让参观，其它景点照常开放、圆明园（因圆明园内的景点比较分散，时间紧的可以不安排），如果带孩子旅游，可以考虑参观北大、清华校园或参观位于北三环路的科技馆。D2：天安门升旗、故宫一些主要景点2005年在维修不让参观，可考虑以后再游览故宫，北海（进故宫前门出后门、进北海前门出后门，即可到什刹海）。D3：什刹海、恭王府（北京保存最好的王府，也曾是和珅的宅院）、郭沫若故居，可以在什刹海银锭桥旁品尝烤肉季和百年老店的爆肚。D4：游览长城，可在下面四处选一处。1、八达岭长城（北京长城中最雄伟的一处）、明十三陵，离汽车站最近，管理最好。登八达岭长城的最便宜的乘车方式，乘地铁等车辆到德胜门下车，乘919路公交汽车直达八达岭长城脚下。2、慕田峪长城（秋色非常美丽，也比较安全）；3、司马台长城，27000里长城中最险的一处，年长者不宜；4、金山岭长城，比较险要，当地人说，爬金山岭长城的外国人比中国人多，从金山岭到司马台一段是登长城的最佳路线，早上7点16分西直门火车站发火车，上火车后最好坐在12至13车厢，否则临下车前还要往前挪。D5：天坛公园因主要景点祈年殿在维修不让参观，可不去该公园、前门大栅栏（在前门还可以享受到多种北京风味饮食），喜爱收藏的可以到潘家园旧货市场或琉璃厂文化街。D6：雍和宫、北京孔庙（内有明清进士题名碑）、国子监（封建社会的最高学府）、王府井大街。吃北京烤鸭，来北京旅游的人常说一句话：“不登长城非好汉，不吃烤鸭遗憾”。其它：香山（从颐和园乘公交车）；大观园（位于宣武区，从西单乘61路汽车直达）。世界公园。中国科技馆位于北三环路。特别提醒：1、住宿：一是最好不要在车站乘出租车或三轮车找旅馆，这样你会多付出近50%的房费，自己找的旅馆也要注意不要有人跟入，否则要与服务员讲明，跟入的人与已无关，在一般情况下最好先定一天房，在周边问清情况后再决定是否续定（据说有一个出租车司机把客人带到饭店后，因客人住了二十多天，司机一次就拿了介绍费二千多元）,参见旅游时尽量自己找旅店。二是一定要砍价，各饭店都可以砍价。2、一日游：北京所有的一日游几乎都是黑车（外地也一样），最好不要参加，游长城：最好的路线是乘地铁到德胜门(3元)如果还要省钱，可乘公交车到德胜门(前门地区乘1路1元），再从德胜门乘919路汽车到八达岭很方便（普通车5元，快车10元）。一定不要参加长城一日游，除了游1、游2路车外，几乎所有一日游都是到水关长城（不是八达岭长城，许多客人游完后也不知道）。市内公园:最好也不要参加一日游，选点都是不贵的公园，不会包括故宫和颐和园，一般都是门票打折较高的公园。到外地旅游或短期工作时，不管是接收或向外打手机，都要交较高的长途或漫游服务费（相当于当地话费的数倍），如果是时间较长，建议在当地购买“神州行”电话卡，这样就可以享受每分钟0.60元的服务。

劳力士绿水鬼报价10万。1、毫无疑问，水鬼一直很受欢迎，绿水鬼更是如此。绿水鬼其实就是劳力士潜航者型系列116610LV-97200绿盘腕表的一个别名，这枚腕表搭载自动机械机芯Cal.3135，表壳为904L不锈钢材质，表径40毫米，防水300米，参考价格70000元。由此可见，绿水鬼溢价的确不少。2、如果说这枚腕表只是因为那一抹绿色而特别招人喜欢，因而价格也水涨船高，其实一点也不为过。毕竟劳力士水鬼的间金（含有部分贵金属材质）表款有的也就10万左右。3、如果觉得绿水鬼行情太高，也可以考虑劳力士的间金款水鬼，比如这枚劳力士潜航者型系列116613LB-97203蓝盘腕表，除了颜色和材质和绿水鬼不同以外，其它配置基本都差不多，其参考价格为100500元。4、在10万左右这个价位，劳力士水鬼可以选择的表款其实还有不少，而且腕表材质也有不少贵金属。主要看个人到底倾向于什么。注意事项：1、绿水鬼卖到10万到底值不值的买，一方面要看个人的喜好程度，即便自己知道还有很多好表，但是唯独喜欢这款，当然也是可以理解的，毕竟开心和满足感也是很重要的；另一方面，还要看对其它表款和品牌的了解情况，钟表的世界其实还很大很大。2、10万左右也可以参考一些顶级大牌（比如江诗丹顿、宝珀、积家、雅克德罗、格拉苏蒂原创等）的手表，而且还有不少颇有质感的正装表。

首先，我想说我最喜欢的是偏绝望系的漫画，不知道是不是合您口味：恶之华，死亡笔记，进击的巨人（这个最近发现有点热血），东京食尸鬼（同上），军鸡（很暴力，很黑暗，很重口），极黑的布伦希尔特，妖精的旋律，三角草的春天（押切莲介的）。说完了黑暗系的，说些治愈系的：三月的狮子（画蜂蜜与四叶草那位老师的新作），高分少女（虽然脸有点怪，但是看多了觉得这就是押切莲介的风格），俺物语（和高分少女一起得奖的），烦恼寺。再说说一个非常喜欢的漫画家——五十岚蓝，《鬼灯家的大姐姐》非常搞笑，更难得的是在后面越来越有深度；其他的短篇作品更多的是对青春的讨论，有一点春上春树早起作品的味道，很喜欢！基本上不看后宫作，只有天降之物非常喜欢。。。最后说说一些色气值很高很欢乐的作品，《源君物语》（虽然作者很抠门，但还是喜欢），《如果这是她家的兴趣》。。。还有一些看完记不起来了。。。老了。。。。

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普适（世）价值：已经存在的，以自由、平等、博爱为基础的，并不具有广泛争议的公共秩序以及风俗习惯。“普世价值”是英文“universal value”的意译，其实译为“普适价值”更为准确。在哲学等人文科学上，普世价值（英语：universal value）泛指那些不分领域，超越宗教、国家、民族，出于人类的良知与理性之价值观念。普世价值与绝对真理是两个不同领域的概念，易被混淆。普世价值包括但不限于：民主、自由、法治、人权等等。国家有义务捍卫国民与生俱来的权利，如生存的权利、免于恐惧的权利、生育的权利、获取知识的权利、免于匮乏的权利、思想的自由、表达的自由。普世价值是总结两次世界大战的成果，是人类文明对自己行为的总结与警醒。主要内容人类应追求长远和短期兼顾的安全、进步、快乐、自由、民主、法治、公正、人权、合法地新建和发展党派团体和宗教组织、合法适度地方自治、高效率和效果、节约、环境保护、适度博爱和互助、合作、善良、仁慈、宽容、和平、讲信用；对话讲逻辑、己所不欲勿施于人、君子爱财取之有道（道德），防止不顾他人和整体利益的极端自私行为。西方社会学者试图用普世价值观保持人类各宗教、组织、国家、地区、意识形态、政治党派之间在道德底线上的统一，以提前避免人类过度分裂、斗争。扩展资料：争议与批判普世价值最基本的争议表现在两个方面；一是是否存在普世价值，其中以道德普遍主义和道德相对主义之争具代表性。第二类争议是哪些该算作普世价值，比如：有人认为丛林法则和自然竞争也应该算作普世价值的一部分，有人认为其为普遍原则、但不是普世价值。宗教界人士则认为神学观点也是普世价值的一个组成部分，有人则认为其为绝对真理（就信仰者而言）、但不是普世价值（相对于民主等非宗教概念而言）。中国大陆学界在普世价值是否存在、普世价值的存在基础及普世价值的内涵这些问题上，尚有争议。2007年纪录片系列《为什么要民主？》中的俄罗斯纪录片《俄国式民主》，探讨苏联解体之后的俄罗斯民主政治会走到什么方向，核心问题是：“民主是普世价值吗？民主只有一种型态吗？人民有权利决定他们自己‘要不要民主"、‘要哪一种民主"吗？”参考资料：百度百科-普世价值

驾车路线：全程约88.0公里起点：赵陵铺镇1.从起点向正北方向出发，行驶80米，左转2.行驶480米，左转进入中华北大街3.沿中华北大街行驶40米，过右侧的北郡A区商务办公楼约320米后，朝中华大街高架路/和平西路方向，直行上匝道4.沿匝道行驶310米，右前方转弯进入中华北大街5.沿中华北大街行驶460米，朝北二环西路方向，稍向右转上匝道6.沿匝道行驶570米，直行进入北二环西路7.沿北二环西路行驶2.6公里，朝和平西路/植物园/新华路/鹿泉市方向，稍向右转上匝道8.沿匝道行驶910米，直行进入西柏坡高速公路9.沿西柏坡高速公路行驶44.6公里，在温塘/S301/高速交警西柏坡大队/高速路政西柏坡大队出口，稍向右转上匝道10.沿匝道行驶920米，直行进入S20211.沿S202行驶600米，直行进入S30112.沿S301行驶3.6公里，进入温塘路13.沿温塘路行驶3.0公里，稍向左转进入S30114.沿S301行驶4.8公里，直行进入小口峪桥15.沿小口峪桥行驶240米，直行进入S30116.沿S301行驶6.3公里，过古月桥，左前方转弯进入商贸南街17.沿商贸南街行驶270米，直行进入X01518.沿X015行驶13.9公里，左前方转弯19.行驶3.9公里，到达终点(在道路右侧)终点：紫云山风景区

的作品首先就是近年来的动漫 从11年魔法少女小圆开始 一共有魔法少女小圆 fate zero psychopass以及还没有完结的翠星之加尔刚蒂亚 除此之外之前还有Phantom -PHANTOM THE ANIMATION- Phantom ～Requiem for the Phantom～（脚本：6,18,25话） 魔法少女まどか★マギカ ブラスレイター 乐园追放（这个是14年才会上映的剧场版） 他在上述作品中大多都是负责脚本啊 故事总纲什么的 不过一些（如psychopass 翠星什么的）都有其他人的参与 但他是负责主要故事构架的其实虚渊玄的很多成功作品都是galgame 毕竟他也是n+社的核心之一Phantom -PHANTOM OF INFERNO-吸血歼鬼ヴェドゴニア鬼哭街浄火の纹章（同人作品）沙耶の呗(沙耶之歌)続杀戮のジャンゴ -地狱の赏金首-[编集] アニメシナリオ担当作品Phantom -PHANTOM THE ANIMATION-（ケイエスエス制作、シナリオ原案）ブラスレイター（ゴンゾニトロプラス共同制作、シリーズ构成）上述这些是他的游戏作品 太麻烦直接复制百科了其中游戏的话建议玩一玩沙耶之歌 鬼哭街

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借赞扬红梅不畏冰霜、昂首怒放，歌颂了革命者们不畏强暴、英勇斗争的革命精神。在歌词上主要是以红梅来象征我们的同志。红梅的生长环境是十分险恶的，用它来象征着我们革命的艰难与不易。