噬菌粒

噬菌粒(phagemid)实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有 ColE1 复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。 噬菌体颗粒就是噬菌体

噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒，是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制子，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒，同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一样复制。它兼具丝状噬菌体与质粒载体的优点。噬菌粒具有以下令人瞩目的特征：1.双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征；2.免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤；3.由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。

噬菌粒（phagemid）实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体，是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体，具有ColEI复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒，以及丝状体噬菌体的间隔区。此间隔区含噬菌体DNA合成的起始与终止及噬菌体颗粒形态发生所必需的全部顺式作用序列。含噬菌粒的细菌被噬菌体感染后，启动滚环复制产生单链DNA（ssDNA）并进行包装。克隆于这些载体内的外源DNA区段可以像质粒一样用常规方法进行增殖，而带有这种质粒的细菌被M13（或f1）丝状噬菌体感染后，在病毒的基因影响下，质粒的复制方式发生改变。基因的产物与质粒所携带的基因间隔区相互作用，启动滚环复制，产生质粒DNA一条链的拷贝，最终包装在子代噬菌体颗粒中。pUC118和pUC119是功能比较完善的噬菌粒载体，对外源DNA片段的大小不敏感，并且保留了pUC质粒在克隆操作方面的优点，噬菌体质粒在寄主细胞内以质粒形式存在，复制产生双链DNA。当用辅助噬菌体M13感染宿主细胞后，噬菌体质粒的复制就转变成如同M13噬菌体一样的滚环复制，产生单链DNA并被包装噬菌体粒子，以出芽方式释放至胞外。噬菌体质粒载体在应用上具有许多优点：①载体本身分子小，约为3000bp，便于分离和操作；②克隆外源DNA容量较M13噬菌体载体大，可克隆10kb外源DNA片段；③可用于制备单链或双链DNA，克隆和表达外源基因。