"rNTP,dNTP"有什么区别

dNTP是脱氧核苷三磷酸百（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三度磷酸。在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和度上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续知工作提供了能量。储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。相关信息：G和C碱基之间存在三个氢键，但A和T碱基之间仅有两个氢键。A和T之间只有两个形式，因为腺嘌呤碱基的碳2比其附着的氢具有更少的电负性，因此不会在其上产生δ负电荷，这意味着胸腺嘧啶的碳2上的氧不能与其形成氢键。氢。因此，这意味着需要更多的热能来使DNA变性，这比富含AT的DNA更富含GC。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-time PCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸。扩展资料：使用储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

DNA在复制的时候原料是dNTP的原因是：在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续工作提供了能量。dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制，如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的，都知道ATP含有高能磷酸键，dNTPs也含有高能磷酸键，这样就可以在PCR体系中提供能量。

三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTPdNTP指三磷酸碱基脱氧核苷酸，指上面任意一种。dNTP"s是它们的复数形式

DNTP 是四种核苷酸，A、U、G、C。的混合物，主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中，需要这几种核苷酸，以碱基互补原则，在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接，从而达到复制模板链的目的。

N代表A U G C，核苷三磷酸。dNTP N代表A T G C 脱氧核苷三磷酸

dNTP代表三磷酸脱氧核苷酸dNMP代表磷酸脱氧核苷酸N可以是A、G嘌呤和C、T嘧啶如dGTP三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸

因为在 DNA 复制过程中，dNTP 的焦磷酸掉下来了，变成了 dNMP，同时和上一个碱基连起来了，发生了复制。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为 DNA 聚合酶继续工作提供了能量。拓展资料：DNA复制从起始序列开始单向或双向进行。合成DNA双螺旋的两条链是反向平行排列的，其中一条链的起始端与另一条链的末尾端平行排列在一起，每一个复制叉只有一条链是按照从尾到头的正确方向指导新链从头到尾方向合成。根据这条指导链，DNA复制持续向前合成复制叉。参考资料：百度百科，DNA复制

荧光特异标记的四种dNTP分别使用以下四种颜色的荧光染料进行标记：dATP（腺嘌呤）- 蓝色荧光dCTP（胞嘧啶）- 绿色荧光dGTP（鸟嘌呤）- 黄色荧光dTTP（胸腺嘧啶）- 红色荧光这种标记方式常用于各种DNA检测、测序和分析技术中，比如PCR、荧光原位杂交（FISH）等。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖） NTP是核苷三磷酸（含核糖） 它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的 N的意思是碱基 比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸

DNTP 是四种核苷酸,A、U、G、C.的混合物,主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中,需要这几种核苷酸,以碱基互补原则,在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接,从而达到复制模板链的目的.

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称是四种

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(三磷酸脱氧核糖核苷酸)的缩写.是dATP,dGTP,dTTP,dCTP的统称,N代表变量指代A、T、G、C、U中的一种. d：deoxy ,“脱氧”的意思.

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

你知道ATP么？A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTPd指的是deoxy 即脱氧。dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP既是复制的原料，又为链延长的过程提供能量。

mg在体系中的浓度一般是1-5mMol/L，dNTPs一般200uMol/L，四种dNTP浓度要相等镁离子是taq酶的辅因子，但浓度太高会产生非特异性扩增dNTPs太多会结合镁离子，所以二者都要适量dNTPs要4度保存

这个问题问得好有模板的DNA和镁离子存在时，在DNA聚合酶的催化下，由游离的3-OH对dNTP的α磷酸发动亲核攻击形成磷酸二酯键，生成DNA，同时释放焦磷酸PPi，焦磷酸水解放能，推动反应向右进行

dTTP（脱氧胸苷三磷酸）。因为胸腺嘧啶是DNA特有的碱基，所以dNTP中的N应该就是T。dTTP是DNA复制的直接前体，在细胞中一般不在其他地方用作供能物质。在人工合成中，一般用来作PCR、DNA测序、DNA标记等。

无明显同源性。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。 dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀 核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接 用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 Mg2+浓度 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。 PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置： 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法， 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。 ②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长 度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 ③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 70℃ 60核苷酸/S/酶分子 55℃ 24核苷酸/S/酶分子 高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。 PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。 循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。 PCR反应特点 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为： ①引物与模板DNA特异正确的结合； ②碱基配对原则； ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。 PCR扩增产物分析 PCR产物是否为特异性扩增 ，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片断都应符合预讦的大小，这是起码条件。 琼脂糖凝胶电泳： 通常应用1～2%的琼脂糖凝胶，供检测用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。 酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的酶切、电泳分离后，获得符合理论的片段，此法既能进行产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能进行变异性研究。 分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法。 Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的灵敏度，还可知其分子量及条带形状，主要用于科研。 斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，观察有无着色斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。 核酸序列分析：是检测PCR产物特异性的最可

楼上说的对，复制过程的起始需要引物合成酶先合成一小段RNA作为引物，底物是NTP。

不要紧，dnTP这种东西，就是脱氧核苷酸嘛，性状还是比较稳定的。

酶最好一直放在-20,现用现取,用完再放回-20.引物分贮液和使用液.贮液放-20 ；其他如果常用放在4就行.不常用可小量分装,每份大概就是你常用的一次的量,用时拿出一管就ok,如果一管量大,一次用不完,剩余又冻回-20,反复进行不就是反复冻融了吗.

一般都需要放在—20.反复融冻就是 拿出来融化了 又放回去，很多次这样，酶会失活、DNA会降解。但我们又要做实验用，就需要常用的酶或引物分装成小管 十几次或者20几次用完。其他放到-80保存。

sanger测序是在测序反应中加入四种正常dNTP底物，同时加入四种带有荧光标记的ddNTP。

DNA连接酶

一分子磷酸，一分子脱氧核糖（五碳糖），一分子碱基合成一分子脱氧核糖核苷酸，然后很多个脱氧核糖核苷酸合成DNA。1、物理性质：DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。2、分子结构：DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3"，5"-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成比例不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。3、分布功能：原核细胞的染色体是一个长DNA分子，但是原核细胞没有真正的细胞核。真核细胞核中有不止一条染色体，每条染色体只含一个DNA分子。不过它们一般都比原核细胞中的DNA分子大而且和蛋白质结合在一起。DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息；策划生物有次序地合成细胞和组织组分的时间和空间；确定生物生命周期自始至终的活性和确定生物的个性。除染色体DNA外，有极少量结构不同的DNA存在于真核细胞的线粒体和叶绿体中。DNA病毒的遗传物质也是DNA。

聚合酶链式反应（PCR）：扩增样品中的DNA量和富集众多DNA分子中的一个特定的DNA序列的一种技术。在该反应中，使用与目的DNA序列互补的寡核苷酸作为引物，进行多轮的DNA合成。其中包括DNA变性，引物退火和在Tap DNA聚合酶催化下的DNA合成。DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年发现 ，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于1976年从温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的。它的特性就在于能耐高温，是一个很理想的酶，但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制，它是于1971年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似PCR前两个周期反应）的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的，Dr. Mullis当年服务于PE公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后，PCR的运用一日千里，相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。 〔PCR原理〕DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。〔PCR步骤〕标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。〔PCR检测〕PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴乙锭）染色凝胶电泳是最最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ,PCR）三步：1 变性：模板DNA加热变性2 退火 引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成杂交链3 延伸 4种dNTP 与 Mg2+ 存在的条件下，DNA合成酶催化以引物为起始点，按5"-3"方向进行延伸。上面三步为一个循环，可使拷贝数到达2*E－6-2*E－7PCR 产物一段双链DNA，是由它的末端引物的5"端决定的。PS:1.首轮扩增，其产物是大小不均一的DNA分子。长度应大于两引物之间的长度。在第二个循环中，如图3，由于5"固定，其产物长度就由等于两引物之间的长度。所以几十个循环后就会产生大量的两引物之间序列。引物设计：1，长度15~30个核苷酸，最多到50个核苷酸左右。（50？为什么？反正太长也没有必要）2, 尽量避免嘌呤和嘧啶堆积的现象。（其实有时很难避免，不是很重要）。3,引物内部不应该形成二级结构，如果引物中有酶切位点时，就会出现引物二聚体。（一般不是很重要）PCR的反应条件1，dNTP浓度过高会加快反映速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。2， 引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。3，TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1％-0.25％总错误率。4， 在90～95度下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94～95度30～60s。时间过长使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破坏增多。5，DNA很快冷却到40～60度使引物和模板结合。引物长度在15～25时退火温度Tm＝4（G＋c）＋（A＋T），一般在45～55度，温度低容易退火但特异性低；温度高，不容易退火但特异性高。退火时间30秒。6，延伸温度一般在70～75度这是TaqDNA聚合酶活性最高（150个／S），当引物在16个碱基以下时可采用缓慢升高温度到70～75度的方法，使在低温下就开始合成。一般<1KB时间1分钟即可。当〈1KB时在较后的循环中延长扩增时间。7循环次数25～30次。无产物时：1，取10ul扩增混合液作模板在进行PCR扩增。2，增加TaqDNA聚合酶浓度3，增加循环次数4，降低退火温度5，加靶DNA量

DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3"-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3"→5""外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用。当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；3、5"→3"外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5"→3"方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5"—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。扩展资料： 1、DNA聚合酶可以在每一个新掺入的核苷酸与模板链之间进行仔细地监测。只有在配对正确的情况下，它才会催化核苷酸之间聚合形成磷酸二酯键。2、即使当DNA聚合酶的监测偶然失误，掺入了错误的核苷酸，它还能通过校读的功能纠正错误。参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶

100uL体系：水 85uL ，10*buffer 10uL ，F引物 1uL ，R引物 1uL ，dNTP 1uL ，模板 1uL ，rTaq酶 1uL。按这个100uL体系配成20uL体系就行。

能量也是由底物dNTP供给的，底物dNTP在延伸是会断裂一个高能磷酸键，

PCR产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,PCR结束后就可以跑电泳或者测OD值都很快的. 另外,计算PCR的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulTE去溶解产物,也可以用50.

dNTPd代表五碳糖是脱氧核糖N代表A,G,C,TT代表3个PCR合成中的原料是dATP,dGTP,dCTP,dTTP，相应的称呼就是脱氧三磷酸____苷

酶一定要放在-20℃保存保存，这是常识，没有任何争议了。Buffer可以反复冻融，推荐-20℃保存，但是4℃保存也没有任何问题。dNTP的保存一定要注意，千万不要听楼上的山寨回答。首先，它需要严格-20℃保存（其通常stock solution是10mM），但是，当dNTP反复冻融约100次以上时，它会逐渐失去活性，无法与模板结合。所以，我建议在使用dNTA前，将其进行分装，从而达到更好的活性效果。

虽然核酸单体是含有一个磷酸，但是合成时原料是含有三个磷酸的，原因是它们是富于能量的化合物，参与合成过程同时能提供大量能量

"反应总体积20微升，加1.0微升dNTP，装有dNTP管上写的10mM"。这不有了吗？不用计算那么精确。加0.5-1都行

PCR (聚合酶链式反应)反应包括三个基本步骤，即：模板DNA的变性、模板DNA与引物的退火复性、引物的延伸。PCR反应体系包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。1、引物引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸 的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3"端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3"端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR 失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子 克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。　　引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。2、酶目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。3、dNTPdNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。dNTP储存液：dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20～200 μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。dNTP使用浓度：在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度(每种dNTP浓度为2μmol/L),能够高度灵敏地(1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。4、模板模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。5、Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。引物是PCR特异性反应的关键，不好的引物严重影响实验的质量，好的引物可以事倍功半;酶的选择一般是看实验的目的，例如克隆长片段，可能就需要高保真的聚合酶;dNTP浓度和Mg2+浓度高了会影响PCR反应特异性。DNA模板中还有蛋白质也会严总影响PCR质量，因此上述5个基本成分质量和浓度必须合理。

[1]聚合作用：在引物RNA"-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3"-OH与5"-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点，则不能与模板配对，无法改变酶的构象而被3"-5"外切酶活性位点所识别并切除之。 　　[2]3"→5"外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3"→5"外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明温度升高使DNA生长链3"末端与模板发生分离的机会更多，因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP，而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制，并继续进行DNA的合成。由此推论，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性很低。相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性比野生型高得多，因此，其DNA复制真实性好，变异率低。可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。 　　[3]5"→3"外切酶活性──切除修复作用：5"→3"外切酶活性就是从5"→3"方向水解DNA生长链前方的DNA链，主要产生5"-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用，方向是5"→3"。每次能切除10个核苷酸，而且DNA的聚合作用能刺激5"→3"外切酶活力达10倍以上。因此，这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5"末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性。 　　[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3"末端焦磷酸解DNA分子。这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链，可以认为是DNA聚合作用的逆反应，而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA 　　[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

王者荣耀S23赛季中路总计作出了四项调整，分别有兵线、清野效率、法术装备、法术防御装备，具体如下：1、兵线调整：增加了对抗路和发育路兵线的移动速度，对抗路和发育路红蓝两方兵线汇聚的时间和中路红蓝两方兵线汇聚的时间将更加接近。通过让清线的时间段更加重叠的方式，将蹭线的情况控制在更合理的程度；2、清野效率提升：通过降低野怪法术防御力来提升法师清野的效率，扩展法师的收入来源；3、法术装备法术攻击属性提升；4、法术防御装备调整，魔女斗篷对法师输出削减效果过强，因此官方下调了魔女斗篷中前期的法术防御能力。王者荣耀S23赛季中路可以玩吗S23赛季中路是可以玩的，无论是工具人还是大法师、法刺，其整体的经济将不再受到影响。 王者之心2点击试玩

钦察帝国：即 钦察汗国（Qipchaq ulisi），（1242年--1502年），又称金帐汗国、克普恰克汗国、术赤兀鲁思，大蒙古帝国的四大汗国之一，以突厥民族为主，13世纪上半叶蒙古人建立的封建国家，因占统治地位的蒙古人人数很少，所以不久当地蒙古完全突厥化。由1242年成吉思汗长子术赤的第二子拔都结束西征建立了东起也儿的石河（额尔齐斯河），西到斡罗思，南起巴尔喀什湖、里海、黑海，北到北极圈附近的辽阔广大的钦察汗国。钦察汗国境内居民成分复杂，社会发展水平不一。明朝推翻元朝的同时，钦察汗国拔都系主要分支被新兴起的白帐汗国所取代， 拔都西征归来后，建都于伏尔加河下游的拔都萨莱城（今俄罗斯阿斯特拉罕附近）。在汗国内，拔都的13个兄弟及其后裔各有世袭封地，拥有军队，形成了隶属于拔都及其后裔的半独立国。汗国建立后保持军政合一的统治组织，万户、千户、百户、十户既是行政单位，又是军队编制单位。拔都的兄长斡儿答及其后裔据有今西西伯利亚、哈萨克斯坦，形成了白帐汗国。拔都的弟弟孛儿只斤·昔班被封与南乌拉尔地区，后建立了青帐汗国（又称蓝帐汗国）。1255年，拔都去世，拔都之弟别儿哥（1257—1266年）在位时，名义上仍对蒙古大汗称藩，实际上汗国已成为独立国。1262年和1265—1266年，别儿哥为了同伊利汗国争夺高加索地区，与埃及建立联盟，由此发展了与埃及的贸易关系，伊斯兰教文化也开始影响钦察汗国。1266年，别儿哥去世，拔都之孙忙哥帖木儿（1266—1280年）嗣位，得到元朝的正式册封。1277年，蒙哥之子昔里吉背叛，劫走防御海都进攻的皇子那木罕，送到与海都联盟的钦察汗国拘留了数年，到1282年脱脱蒙哥嗣位时，那木罕才被放回。脱脱蒙哥和秃剌不花在位时，领有黑海北岸地区的宗王那海操纵了汗国大权。脱脱（1290—1312年）汗即位后，恢复了汗权。1302年，脱脱汗出兵协助元朝攻打察合台后王笃哇、窝阔台后王察八儿，笃哇、察八儿战败，归顺元朝。1308年，元武宗遣使册封脱脱为宁肃王。1313年，脱脱去世，其侄月即伯嗣位，1314年元仁宗遣使册封，予以承认，此后双方经常遣使往来。月即伯汗（1312—1340年）在位时，建立了中央集权，钦察汗国达到了极盛时期，汗国迁都别儿哥萨莱城（今俄罗斯伏尔加格勒附近），与伊利汗国、埃及等国通好，对外贸易兴隆。伊斯兰教在伏尔加河下游广泛传播，此后诸钦察汗都信奉伊斯兰教。随着势力的增强，金帐汗国各万户几乎逐渐演变成为独立王国，形成与汗庭相抗衡的力量。14世纪中叶时，汗国内部又出现了新的争端，万户们互不协调，各自为政，汗庭权力日渐削弱。从札尼别汗（1340—1357年）以后（1357—1380年）24年间共更换了20个汗。1380年，白帕汗脱脱迷失控制了钦察汗国的主要疆土，成了钦察汗国大汗，从此钦察汗全都出自白帐系。14世纪末，金帐汗国呈现衰败局面，花剌子模、克里木、保加尔逐渐从金帐汗国中分裂出去，金帐汗国同时又遭到中亚帖木儿帝国的侵袭。到15世纪时，钦察汗国先后分裂出了西伯利亚汗国、喀山汗国、克里木汗国、阿斯特拉罕汗国等独立国，钦察汗国中央直辖的只剩下有限的疆土，被称为大帐汗国，钦察汗国的正统汗位由大帐汗国继承，但他的实际地位同于其他汗国。1472年，阿合马汗发动了与莫斯科公国的战争，战争以阿合马的战败而告终。1480年，阿合马再次出兵进攻莫斯科公国，强迫其纳贡，由于阿合马的同盟军立陶宛大公未能如期出兵援助，致使阿合马到乌格拉河后撤兵，回到伏尔加河下游时，被诺该帐汗国人杀死，蒙古人对罗斯公国的统治到此结束（统治时间长达238年）。1502年，末代大汗赛克赫阿里被克里米亚汗国击败，钦察汗国灭亡。 钦察汗国从建立之初就分裂成斡儿答家族、拔都家族、昔班家族、莫斡勒家族、脱花帖木儿家族，只是拔都家族实力最大，一般提到钦察汗国，都是拿拔都家族来代表。明朝推翻元朝的同时，钦察汗国拔都系主要分支被新兴起的白帐汗国所取代，而后俄罗斯开始崛起，蒙古人在中、东欧、西、北亚逐渐失去了影响力。16世纪初期，卡马河沿岸和乌拉尔地区被莫斯科公国占领。16世纪50年代，沙皇伊万四世统治时期先后占领了喀山、阿斯特拉罕、克里木三个汗国，金帐汗国领土全部并入莫斯科公国领地。

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乙烯雌酚片说明书 【药品名称】 通用名：乙烯雌酚片 英文名：Diethylsti lbestrol Tablets 汉语拼音：Jixicifen Pian 本品主要成份及其化学名称为：本品主要成份为乙烯雌酚，其化学名称为：（E）-4，4"-（1，2-二乙基，2-亚乙烯基）双苯粉。其结构式为： 分子式为：C18H20O2 分子量：268.36 【性状】本品为白色片 【药理毒理】本品为人工合成的非甾体雌激素。主要作用有：①促使女性器官及副性症正常发育。②促使子宫内膜增生和阴道上皮角化。③增强子宫收缩，提高子宫对催产素的敏感性。④小剂量刺激而大剂量抑制垂体前叶促性腺激素及催乳激素的分泌。⑤抗雄激素作用。 【药代动力学】本品口服效果好，不易被肝破坏，其代谢途径尚不明确。 【适应症】1、补充体内雌激素不足，如萎缩性阴道炎、女性性腺发育不良、绝经期综合症、老年性外阴干枯症及阴道炎、卵巢切除后、原发性卵巢缺损。2、乳腺癌、绝经后及男性晚期乳腺癌、不能进行手术治疗者。3、前列腺癌，不能手术治疗的晚期患者。4、预防产后泌乳、退（或加）乳。 【用法用量】口服①用于补充体内不足，一日0.25-0.5mg（半年-1片），21天后停药一周，周期性服用，一般可用3个周期（自月经第5天开始服药）；②用于乳腺癌，一日15mg（30片），6周内无改善则停药；③用于前列腺癌，开始时一日1-3mg（2-6片），依据病情递增而后递减；维持量一日1mg（2片），连用2-3个月；④预防产后泌乳、退乳，一次5mg（10片），一日3次，连服3天。 【不良反应】1、可有不规则的阴道流血、子宫肥大、尿频或小便疼痛。2、有时可引发血栓症以及心功能不正常。3、有时引起肝功能异常、高脂血症、钠潴留。4、引起消化道恶心、哎吐、厌食症状和头痛、头晕等精神症状。 【禁忌】1、孕妇禁用（可能引起第二代女性阴道腺病及腺癌发生率升高，男性生死道异常及精子异常发生率增加）。2、有血栓性静脉炎和肺栓塞性病史患者禁用。3、与雌激素有关的肿瘤患者及未确诊的阴道不规则流血患者、高血压患者禁用。 【注意事项】1、下列患者慎用：心功能不全、癫痫、糖尿病、肝肾功能障碍、精神抑郁等。2、长期使用应定期检查血血、肝功能、阴道胶落细胞，每年一次宫预防癌刮片。3、诊断干扰：①减低美替拉酮试验。②增加去甲肾上腺素导致的血小板凝集试验。③BSP试验滞留增加。 【孕妇及哺乳期妇女用药】禁用。 【孕妇及哺乳期妇女用药】易引起钠潴留和高血钾症，应慎用。 【药物相互作用】尚不明确。 【规格】0.5mg 【贮藏】遮光，密封保存。 【包装】塑料瓶包装，每瓶100片。 【有效期】二年

1206年，“一代天骄”成吉思汗在统一了蒙古草原后， 建立了“大蒙古国”。 对此，美国 历史 学家杰克·威泽弗德叹道， “数十年间，蒙古军队征服的土地和人民，比罗马人花费四百年征服的还要多。” 然而，这个如日中天的庞大帝国，却如昙花一般短暂。伴随着忽必烈把首都从哈拉和林迁到大都（北京），身为“帝国本部”元朝藩属的“四大汗国”，已经走上了独立发展的道路（ 拓展阅读： 「蒙古大乱斗」忽必烈兄弟之争：帝国大厦轰然倒塌）。 那么问题来了， 同样国力强盛，还与俄罗斯“剪不断理还乱”的金帐汗国，有着什么样的发展史？ 我查了一些资料，接下来跟大家简单聊聊。 1）分封诸子 1225年，成吉思汗划分了四个儿子的封地。根据《世界征服者史》记载，长子术赤的封地 “从海押立和花刺子模地区，伸延撤哈辛及不里阿耳的边境，那个方向尽鞑靼（蒙古）马蹄所及之地”。 简单地说，额尔齐斯河以西和花剌子模以北的广大地区，成为了术赤及其后裔的“基本盘”。 2）横扫钦察草原和南部罗斯 1227年，术赤去世，次子拔都（1209-1256）继承汗位。 1235年，窝阔台在首都哈拉和林召集诸王，共同谋划西征事宜。次年春，四路大军在拔都统帅部集结完毕。至此，传说中的“长子西征”正式拉开了帷幕。 1236年冬，拔都的军队率先撕破了基辅罗斯的东部屏障——保加尔汗国。次年夏，他的军队几乎横扫了整个钦察草原，钦察草原东北部和伏尔加河沿岸的各民族，尽数沦为了他的属民。 在1237年底至1238年间，拔都的军队先后在梁赞战役、弗拉基米尔战役和锡季河战役中取得胜利，兵锋直抵伏尔加河下游。经过短暂调整后，在1239年至1241年间，他们先后取得了基辅战役和加里西亚战役的胜利， 整个南部罗斯被蒙古人收入囊中。 3）进军波兰和匈牙利 1241年春，隶属于拔都统辖， 由察合台之子拜达尔率领的右路军，向波兰发起了进攻。 在克拉克战役和里格尼亚战役中，蒙古军队均取得了压倒性胜利。随后，他们一路南下，进入匈牙利境内，一路攻克了北部的特伦琴、布拉迪斯拉发等城市。 同年4月，由拔都率领的中路军，在赛育河右岸、赛育河与提索河汇合处，与匈牙利军队展开终极决战， 并取得了全面胜利。 根据史料记载，匈牙利方面折损兵力超过了七万之众，身为主将之一的科罗契大主教战死，国王贝拉四世逃之夭夭，首都佩斯特被攻克，国王玉玺也被拔都缴获。 在主力部队攻破佩斯特的同时， 由窝阔台之子合丹率领的左路军 ，从特兰西瓦尼亚出发，在越过山路攻入鲁丹城后，顺利攻占了匈牙利重镇瓦尔丁。 1241年夏，三路大军在赛育河畔汇合休整。 同年12月底，大军越过多瑙河向西扫荡，旨在追击贝拉四世余部。史书记载，一支部队一路打到了奥地利维也纳附近的克洛斯特洛伊堡。 可怜的贝拉四世，先逃到布列斯堡，后又逃往阿古拉牟，接着逃往达尔马提亚，先是据守在斯巴拉多罗，以后转到托拉乌。因为担心被活捉，最后逃到了一个临近陆地的岛屿上。 西征军穷追不舍，长驱直入斯洛文尼亚，沿亚德里亚海经过克罗地亚，一度抵达了他藏身的岛屿对岸。惊魂未定的贝拉四世，甚至打算携家眷和财宝渡海远去。 至此，匈牙利全境尽数沦陷于拔都之手（拓展阅读 ：读书笔记：“赛因汗”拔都，到底有多能打？ ）。 4）尾声 1242年4月，窝阔台驾崩的噩耗传至西征军中 。按照蒙古“基本法”，窝阔台大汗的子侄必须返回首都哈拉和林，参加忽里勒台大会，选举出新的汗位继承人。因此，拔都不得不下令全军东返。 历时七年的长子西征，就此宣告结束， 欧洲人长出了一口气（ 拓展阅读： 「蒙古大乱斗」拔都与贵由之争：蒙古帝国分裂的催化剂）。 1）金帐汗国的建立与拔都分封 1242年，拔都建立金帐汗国。 在巅峰时期，汗国疆域东抵额尔齐斯河西部，西至第聂伯河，南起巴尔喀什湖、里海、黑海，向北临近北极圈，囊括了北高加索及花剌子模北部和锡尔河下游的广大地区， 远比西征之前的封地大得多。 为了便于管理，拔都将伏尔加河地区视为政治中心，在入口处建立了首都萨莱城（今阿斯特拉罕附近）。 伴随着国家局势的日趋稳定，拔都的13个兄弟及其后裔，均享有可世袭的封地和军队。 其中，拔都将咸海东北直至额尔齐斯河及七河以北的广大地区，分封给了长兄斡儿答，这便是史书中的“白帐汗国”（ 拓展阅读： 一文概述：什么是白帐汗国？）。另外，他将咸海以北和以东的地区分封给了弟弟昔班，这便是“蓝帐汗国”。需要指出的是，尽管两个汗国在名义上是金帐汗国的属国， 但享有很大的“自治权”。 2）金帐汗国的“独立” 1257年，在政治斗争中取得胜利的拔都之弟别儿哥（ ？—1267 ），成为了新的金帐汗。值得注意的是，他是金帐汗国 第一个“主动皈依伊斯兰教” 的最高统治者。换言之，他是开启金帐汗国“伊斯兰化”的“奠基人”。 另外， 他与伊尔汗国大汗旭烈兀的关系，一直都不和睦。 在1262年11月至12月期间，两国在高加索边境大打出手，双方互有胜负，皆损失不小。实际上，别儿哥本人正死于征讨伊尔汗国的途中（ 拓展阅读： 作为“兄弟之国”的金帐汗国和伊尔汗国，为什么总是打来打去？）。 别儿哥之后，忙哥帖木儿成为了新的金帐汗。 在他统治时期，金帐汗国在事实上“脱离”了元朝，实现了“独立”。比如，新汗登基之后，无需等待元朝皇帝的批准；官方货币只铸金帐汗的名字，并不篆刻元朝皇帝的名字。另外，金帐汗国也不再“遵从惯例”，向元朝定期交纳贡金了。 3）艰难的夺权之路与国家复苏 在金帐汗国，第二号人物被称为“大别克”。 他不仅享有巨大权力，还是国家军队的最高统帅。随着时间的推移，以“大别克”为首的权臣势力，也日趋膨胀了起来。其中最突出的，莫过于别儿哥的侄孙那海（也译作“诺盖”）。 忙哥帖木儿死后，那海的权势达到了如日中天的地步。 其中，脱脱蒙哥和兀剌不花两位金帐汗，都是他扶持起来的傀儡。因此，彼时的欧洲人将其视为与金帐汗“平起平坐”的显赫人物，埃及人称他为“国王”，罗斯人称他为“沙皇”。 1290年，那海扶持忙哥帖木儿之子脱脱（？—1312）即位。 为表达感谢，脱脱汗甚至将克里米亚半岛赐给了他。不过，伴随着脱脱汗的羽翼渐丰， 二人的矛盾也日益尖锐了起来。 1297年，双方在顿河附近开战，脱脱汗遭遇惨败。值得玩味的是，在脱脱汗退至萨莱城之后，那海并未选择乘胜追击。在今天看来，这给了对方逆风翻盘的机会。 两年后，脱脱汗卷土重来，双方在第聂伯河畔再次展开决战， 脱脱汗取得完胜。 那海的军队遭受了毁灭性打击，他本人也死于乱军之中。 至此，金帐汗重新夺回了国家的最高统治权力。 在脱脱汗统治时期， 金帐汗国的国力有了明显复苏的迹象， 并发动了多次针对罗斯诸国的军事行动。另外，金帐汗国与伊尔汗国以及元朝的关系，也得到了很大程度的修复，脱脱汗本人还被元朝册封为“宁肃王”（ 拓展阅读： 蒙古帝国、金帐汗国与元朝，到底有着什么样的渊源？）。 4）月即别汗的“中兴之路” 1312年，脱脱汗在征讨罗斯的途中去世，国家再次陷入动荡期。 按照蒙古基本法，身为脱脱汗侄子的月即别，原则上并不具备称汗的资格。不过，“受惠”于自身强大的军事实力，月即别“很轻松”地击败并杀死了脱脱汗之于亦勒巴思迷失，顺利登上了大汗宝座，并用极短的时间恢复了国家秩序。 在月即别汗（ 1282—1341 ）的苦心经营下，金帐汗国进入了全盛期。 为了加强中央对国家的有效管理，他将都城从拔都萨莱迁至别儿哥萨莱（伏尔加格勒附近）， “很快，别儿哥萨莱城一跃成为人口超过10万人的大型城市”。 根据史料记载， 月即别汗本人极其重视商业贸易。 因此， “商人一直在国家具有比较特殊的地位”。 随着时间的推移，国家的商品经济不仅有了高速发展，很多饱经战火摧残的城镇也逐渐恢复了元气，以别儿哥萨莱为代表的新兴城镇更是拔地而起，人民生活也日趋安定了下来。不过，金帐汗国与伊尔汗国的外交关系，又开始恶化了起来。 值得注意的是，也正是在他统治时期， 金帐汗国彻底完成了“伊斯兰化”。 就像他写给马木留克（埃及）算端（苏丹）马哈麻的信中所说的那样， “在我的同家（金帐汗国）中，异教徒已经为数不多了” （ 拓展阅读： 一文概述：谁是月即别汗？） 5）金帐汗国的衰落与崩溃 月即别汗去世（1341）后， 继任的札尼别汗几乎摧毁了伊尔汗国 ， “（札尼别汗）征服了这个行省（阿塞拜疆）和大不里士，杀死了当地土著首领出班王室的阿失刺失，将其首级悬于大不里士的清真寺的门上”， 末代伊尔汗努失儿完更是完全不知所踪。不过，札尼别汗的军队， 最终还是被驱逐了出去。 札尼别汗去世后， 金帐汗国的统治风雨飘摇。 在他去世后的24年间，金帐汗国更换了20位大汗，有的只在位几个月甚至几天，“ 骆驼的脖子被拧断了”。 1380年，白帐汗脱脱迷失借助帖木儿的力量（ 拓展阅读： 读书笔记：远在中亚的帖木儿帝国，到底是不是明朝的“小弟”？），在击败了金帐汗国权臣马买之后，并成为了新的金帐汗。 至此，金帐汗从拔都支系转移到了斡儿答支系。 进入15世纪中叶，又分裂出喀山汗国（1438—1552），克里米亚汗国（1443—1783），阿斯特拉罕汗国（1460—1566）、西伯利亚汗国（1460—1598）等独立国家，后世称这个疆域大幅缩水的中央政权为“大帐汗国”。 1502年，末代大汗赛克赫阿里被克里米亚汗国击败，金帐汗国宣告灭亡（拓展阅读 ：读书笔记：蒙古人是如何影响俄罗斯的？ ） 金帐汗国地域庞大， 境内的民族分布更是“五彩缤纷”， 其中囊括了钦察人、保加尔人、花剌子模人以及其他突厥系族群。其中，世居于钦察草原的钦察人，对金帐汗国的语言和文化发展，起了决定性作用。至于人口甚少（约数万人）的“征服民族”蒙古族，在进入14世纪之后，基本完成了“突厥化进程”。 以伏尔加河为界， 在伏尔加河以东地区，主要生活着克普恰克、康里、乃蛮、克烈、弘吉刺、扎刺亦儿等游牧部落。学界普遍认为， 他们是哈萨克族的源流（拓展阅读 ：一文概述：准噶尔与哈萨克的恩怨情仇 ）。 在伏尔加河以西地区，除了克普恰克、阿速等部落之外，还有不少以罗斯人为代表的白种人民族。 值得注意的是，蒙古人尽管横扫了钦察草原和南俄平原， 但当地各部落原有的 社会 组织，基本上被完整地保留了下来。 可以说，各大小部落的首领们，依然享有着与过去同等的权力。不过，为了获得国家的青睐，他们必须定期携带大量物品，向金帐汗“纳贡”。 根据史料记载，这些人在进入大汗牙帐之前， “必须在两堆篝火间走过，（保证）涤除觐见者对大汗的恶念”，“凡有不肯奉行这种仪式者，便当作歹徒处死”。 另外，这些觐见者在进入大汗牙帐之后， “须向汗昂首朝拜….始终要跪在地上”。 因为金帐汗国地域辽阔，因此， 各地的经济形式存在着很大的差异。 金帐汗国在立国初期，战争频繁，耗费甚巨。因此，境内各族人民不仅要向国家提供马匹、武器等战备物资，还要承担名目繁多的苛捐杂税， “（金帐汗国）不仅每年向农民征收粮食税（哈兰），还要向牧民征收1%的牲畜税（哈甫丘乌尔），生活在城市里的商人及手工业者，同样要缴纳数额不菲的税金”。 另外， 成年男性还要“无条件”履行兵役。 1）畜牧经济的发展 在钦察草原，各地的游牧经济都比较发达， “他们（钦察草原的游牧民）有丰富的牲畜——骆驼、牛、绵羊、山羊和马。驮载性畜在他们那儿数量是那样多，我们认为在整个世界上没有比它更多的”。 在金帐汗国，游牧经济的基本单位称为“阿乌勒”。他们驻牧于国家指定的牧场，在致力于提升自己生活品质的同时，还要为封建主们履行各种义务。另外，也有一小部分游牧民，可以在城市里从事贸易活动。 对于游牧民的生活方式，法国教士鲁布鲁克如是记录道： “他们（牧民）做厚毛毡搭起的房子，男人们做弓和箭，准备好（马）笼头，挤马奶，也摇酸马奶，做口袋，把马奶、牛奶装在袋子里保存起来看护着，同时以骆驼驮载它们。他们共同看护绵羊、山羊，挤奶的工作有时是男人们（操作），有时是妇女们（操作）” （ 拓展阅读： 随笔：13世纪欧洲人眼里的蒙古人，到底是什么样的？）。 值得注意的是，鲁布鲁克还 重点提到了草原上的妇女们 ， “妇女们的任务在于管理车辆，留在他们的蒙古包里。采集，挤牛奶，制作各种乳制品，准备好兽皮，缝上它们，用线把兽皮缝在一起。就是说她们把筋脉分成细线，然后编成一根长长的线，用它缝制平底靴子、鞋和其它衣服” （ 拓展阅读： 为什么古代蒙古人没“那么重男轻女”？） 除了从事牧业生产外， 游牧民们还会进行狩猎活动。 其中，金帐汗还会组织汗室的年轻后辈们，定期进行围猎活动。 “如果他们（鞑靼人）想打猎，那么他们就集合很多人，把一个地方包围起来。他们知道，在哪里能够找到野兽，一点一点地互相走近，直到把野兽围拢起来，像一个圆周，这时用箭射死它们”。 坦诚地说，这种围猎活动， 颇有实战演练的味道。 2）农业与商品经济的发展 金帐汗国的农业区，主要分布在 保加尔、克里米亚、北高加索以及花刺子模地区。 游牧民们通常前往这些地区，用自制的毛皮制品换取需要的产品。 “ 通常，和保加尔地区联系的是关于供应者的最好的毛皮，以及很大数量的皮….在金帐汗国国家生活中，保加尔地区的粮食供应者具有更大的意义。很久以来，农业在这里与其他地方比较，水平是高的”。 伴随着畜牧业和农业的发展， 手工业和商业贸易也有了显著的发展。 由于牧业、农业对手工业生产品的大量需求，进一步带动了贸易和交通运输业的发展。根据史料记载，金帐汗国与马木留克（埃及）、中亚、印度、西欧各国乃至元朝，都建立了贸易关系。 随着时间的推移，城市成为了手工业者和商人们的活动中心。其中，以新都别儿哥萨莱为代表的城市，成为了沟通东西方经济和文化交流的重要枢纽（ 拓展阅读： 读书笔记：为什么元朝的“回回人”越来越吃香？）。 3）金帐汗国的货币 和其他国家一样， 金帐汗国也发行了自己的货币 。对此，苏联东方学家巴尔托里德考证后认为， “在蒙古人所建立的各国中，除了元朝（中国本部）以外，都逐渐建立了以银本位为基础的货币制度。其中，大块的称第纳儿，小块的称为第儿罕，一个第纳尔值六个第儿罕。在术赤的后继者的帝国（金帐汗国）中，一个第儿罕的重量规定在三分之一的密特卡，相同的重量也为中亚和波斯所采用”。 有趣的是，金帐汗国 似乎没有发行过刻有传统蒙古文的钱币 （也可能是发行的非常少），反倒是发行了不少印有突厥语诸如“万寿无疆”字样的钱币。 1）“伊斯兰化”的萌芽 实际上，早在别儿哥汗时期，金帐汗国就开启了伊斯兰化进程。鲁布鲁克在游记中指出： “别尔哥在拔都活着的时候，就已经成为伊斯兰教徒了。他的牙帐中不用猪肉。不仅大汗本人。甚至其妻子及近侍人也为伊斯兰教徒。他的每一个妻子和每一个阿米尔都有一位衣麻目和一位木阿津（喊人做礼拜者） 并有教儿童可兰经的学校”。 不过，鲁布鲁克认为， “伊斯兰教的传播仅限于统治上层分子的范围，且仅限于接近宫廷的人们” （ 拓展阅读： 一文概览：藏传佛教是如何“玩死”元朝的？）。 2）全面伊斯兰化的进程 金帐汗国的“全面伊斯兰化”，是在月即别汗统治时期完成的 。对于国家的“伊斯兰化”进程，穆斯林旅行家伊本·白图泰（ 1304—1377 ）记录道： “在汗国的居民中居住着不同的民族：有蒙古人，他们是这个国家的居住者和统治者，他们中的一部分人成了伊斯兰教徒：有阿速人，他们是伊斯兰教徒”，“他在首都别儿哥萨莱城建立了十三座举行礼拜的清真寺，其中有一座是苏菲派的清真寺”。 “在（金帐汗国）国内，还有一帮人没有皈依伊斯兰教。但他（月即别汗）即位后，就让他们在皈依伊斯兰教与战争之间进行选择。他们如果拒绝入教．就发起对他们的战争，将他们击溃后，屠戮、歼灭他们。” 另外，伊本·自图泰还特意提到了月即别汗的“第二哈敦”， “她的名字是凯白克哈敦，我于拜见王后的第二天，去拜见这位哈敦，见她正在坐垫上诵读《古兰经》….我们的诵读者诵经后，她赞赏不已。” 在“全面伊斯兰化”的背景下， 在法官案件审理的过程中，伊斯兰教法典的存在感也与日俱增了起来 。比如在花剌子模地区 ，“花剌子模大长官、月即别汗的姨表兄弟古图卢·杜姆尔习惯于每天把法官召到客厅等候接见，他由法学家和书记们陪同。….凡牵涉到教法的案件均由伊斯兰法官处理；其余的则由那些长官裁判”（ 拓展阅读： 读书笔记：西域人民为什么大多信仰伊斯兰教？）。 众所周知，中世纪的中亚、西亚等地的穆斯林国家，基本都经历了一个辉煌灿烂的伊斯兰文化时期，文化比较发达。因此， 蒙古各政权的统治者，都非常敬重当地的科学家和学者 ，金帐汗国也不例外。 以月即别汗为例， “（他）重视科学，支持学者并在萨莱城筹建了一所宗教学校”。 根据伊本·白图泰的记载： “素丹月即别汗，每周五都来拜访他（伊玛目学者努尔曼丁·花拉子米）。但这位谢赫既不出迎，也不为素丹起立，素丹坐在他面前，以最谦恭的态度向他致敬，向他陈述自己的过失，谢赫则态度威严”。 在这样的大背景下， 金帐汗国的文学艺术，迎来了发展的黄金期。 其中包括了1303年问世的《克普恰克语词典》，1310年由扎斯居孜衣撰写的《史诗舞蹈曲集》等作品。 与文学文化一样，金帐汗国的音乐艺术也有着很大的发展。 1227年，乃曼部落的克尔布哈以“术赤之死”为蓝本，创作了著名乐曲《瘸腿野马》。13世纪的阿塔勒克弹唱家也创作出了以术赤为主人公的音乐作品，还有一些弹唱家创作了关于脱脱迷失和帖木儿之间斗争的诗歌和音乐。 值得一提的是，在哈萨克著名的英雄史诗《四十个勇士之歌》中， 大多数主人公都是金帐汗国时期的显赫人物。 比如《乌拉克与马麦》长诗中的主人公马麦为例： 此君原本是出身于克里米亚地区的封建主，也是末代大汗赛克赫阿里的女婿。据史料记载，他不仅先后入侵过梁赞公国（1373年和1378年）和下诺夫哥罗德公国（1378年），还在1378年8月，派遣大军攻打莫斯科公国， 但在沃查河战役中被对方击败。 心有不甘的 马麦 ，主动与立陶宛和梁赞公国结盟，并在1380年再次调集大军，向莫斯科公国发动了更大规模的进攻。遗憾的是，在库利科沃会战中，他再次被对方击败。在撤退途中，残部被“趁火打劫”的白帐汗脱脱迷失彻底击溃， 本人也在逃亡途中死于非命（拓展阅读 ：一文综述：俄罗斯人的民族性格 ）。 16世纪初期，卡马河沿岸和乌拉尔地区，先后被“后来者居上”的莫斯科公国占领。16世纪50年代，伊凡雷帝先后征服了喀山、阿斯特拉罕、克里米亚三个汗国。至此， 金帐汗国的大部分领土，均成为了莫斯科公国的领地。 不过，不少俄罗斯学者认为，“金帐汗国从未彻底消失，而是以某种方式被后人继承下来了”。 “今天俄罗斯疆域内的（前）喀山汗国、阿斯特拉汗（罕）国、西伯利亚汗国、克里米亚汗国、诺盖汗国、蓝帐汗国、白帐汗国都是‘蒙古系"的政权，这些蒙古贵族后来大都供职于日趋强大的沙皇俄国。”