书上说：Sanger法测序，其中的底物dNTP每个测序体系只要标记一种。 这是不是讲，每个测序体里面除了某一

dNTP是脱氧核苷三磷酸百（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三度磷酸。在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和度上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续知工作提供了能量。储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。相关信息：G和C碱基之间存在三个氢键，但A和T碱基之间仅有两个氢键。A和T之间只有两个形式，因为腺嘌呤碱基的碳2比其附着的氢具有更少的电负性，因此不会在其上产生δ负电荷，这意味着胸腺嘧啶的碳2上的氧不能与其形成氢键。氢。因此，这意味着需要更多的热能来使DNA变性，这比富含AT的DNA更富含GC。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-time PCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸。扩展资料：使用储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

DNA在复制的时候原料是dNTP的原因是：在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续工作提供了能量。dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制，如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的，都知道ATP含有高能磷酸键，dNTPs也含有高能磷酸键，这样就可以在PCR体系中提供能量。

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTPdNTP指三磷酸碱基脱氧核苷酸，指上面任意一种。dNTP"s是它们的复数形式

DNTP 是四种核苷酸，A、U、G、C。的混合物，主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中，需要这几种核苷酸，以碱基互补原则，在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接，从而达到复制模板链的目的。

N代表A U G C，核苷三磷酸。dNTP N代表A T G C 脱氧核苷三磷酸

dNTP代表三磷酸脱氧核苷酸dNMP代表磷酸脱氧核苷酸N可以是A、G嘌呤和C、T嘧啶如dGTP三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸

因为在 DNA 复制过程中，dNTP 的焦磷酸掉下来了，变成了 dNMP，同时和上一个碱基连起来了，发生了复制。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为 DNA 聚合酶继续工作提供了能量。拓展资料：DNA复制从起始序列开始单向或双向进行。合成DNA双螺旋的两条链是反向平行排列的，其中一条链的起始端与另一条链的末尾端平行排列在一起，每一个复制叉只有一条链是按照从尾到头的正确方向指导新链从头到尾方向合成。根据这条指导链，DNA复制持续向前合成复制叉。参考资料：百度百科，DNA复制

荧光特异标记的四种dNTP分别使用以下四种颜色的荧光染料进行标记：dATP（腺嘌呤）- 蓝色荧光dCTP（胞嘧啶）- 绿色荧光dGTP（鸟嘌呤）- 黄色荧光dTTP（胸腺嘧啶）- 红色荧光这种标记方式常用于各种DNA检测、测序和分析技术中，比如PCR、荧光原位杂交（FISH）等。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖） NTP是核苷三磷酸（含核糖） 它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的 N的意思是碱基 比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸

DNTP 是四种核苷酸,A、U、G、C.的混合物,主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中,需要这几种核苷酸,以碱基互补原则,在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接,从而达到复制模板链的目的.

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称是四种

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(三磷酸脱氧核糖核苷酸)的缩写.是dATP,dGTP,dTTP,dCTP的统称,N代表变量指代A、T、G、C、U中的一种. d：deoxy ,“脱氧”的意思.

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

你知道ATP么？A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTPd指的是deoxy 即脱氧。dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP既是复制的原料，又为链延长的过程提供能量。

mg在体系中的浓度一般是1-5mMol/L，dNTPs一般200uMol/L，四种dNTP浓度要相等镁离子是taq酶的辅因子，但浓度太高会产生非特异性扩增dNTPs太多会结合镁离子，所以二者都要适量dNTPs要4度保存

这个问题问得好有模板的DNA和镁离子存在时，在DNA聚合酶的催化下，由游离的3-OH对dNTP的α磷酸发动亲核攻击形成磷酸二酯键，生成DNA，同时释放焦磷酸PPi，焦磷酸水解放能，推动反应向右进行

dTTP（脱氧胸苷三磷酸）。因为胸腺嘧啶是DNA特有的碱基，所以dNTP中的N应该就是T。dTTP是DNA复制的直接前体，在细胞中一般不在其他地方用作供能物质。在人工合成中，一般用来作PCR、DNA测序、DNA标记等。

无明显同源性。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。 dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀 核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接 用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 Mg2+浓度 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。 PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置： 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法， 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。 ②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长 度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 ③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 70℃ 60核苷酸/S/酶分子 55℃ 24核苷酸/S/酶分子 高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。 PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。 循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。 PCR反应特点 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为： ①引物与模板DNA特异正确的结合； ②碱基配对原则； ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。 PCR扩增产物分析 PCR产物是否为特异性扩增 ，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片断都应符合预讦的大小，这是起码条件。 琼脂糖凝胶电泳： 通常应用1～2%的琼脂糖凝胶，供检测用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。 酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的酶切、电泳分离后，获得符合理论的片段，此法既能进行产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能进行变异性研究。 分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法。 Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的灵敏度，还可知其分子量及条带形状，主要用于科研。 斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，观察有无着色斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。 核酸序列分析：是检测PCR产物特异性的最可

楼上说的对，复制过程的起始需要引物合成酶先合成一小段RNA作为引物，底物是NTP。

不要紧，dnTP这种东西，就是脱氧核苷酸嘛，性状还是比较稳定的。

酶最好一直放在-20,现用现取,用完再放回-20.引物分贮液和使用液.贮液放-20 ；其他如果常用放在4就行.不常用可小量分装,每份大概就是你常用的一次的量,用时拿出一管就ok,如果一管量大,一次用不完,剩余又冻回-20,反复进行不就是反复冻融了吗.

一般都需要放在—20.反复融冻就是 拿出来融化了 又放回去，很多次这样，酶会失活、DNA会降解。但我们又要做实验用，就需要常用的酶或引物分装成小管 十几次或者20几次用完。其他放到-80保存。

DNA连接酶

一分子磷酸，一分子脱氧核糖（五碳糖），一分子碱基合成一分子脱氧核糖核苷酸，然后很多个脱氧核糖核苷酸合成DNA。1、物理性质：DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。2、分子结构：DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3"，5"-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成比例不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。3、分布功能：原核细胞的染色体是一个长DNA分子，但是原核细胞没有真正的细胞核。真核细胞核中有不止一条染色体，每条染色体只含一个DNA分子。不过它们一般都比原核细胞中的DNA分子大而且和蛋白质结合在一起。DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息；策划生物有次序地合成细胞和组织组分的时间和空间；确定生物生命周期自始至终的活性和确定生物的个性。除染色体DNA外，有极少量结构不同的DNA存在于真核细胞的线粒体和叶绿体中。DNA病毒的遗传物质也是DNA。

聚合酶链式反应（PCR）：扩增样品中的DNA量和富集众多DNA分子中的一个特定的DNA序列的一种技术。在该反应中，使用与目的DNA序列互补的寡核苷酸作为引物，进行多轮的DNA合成。其中包括DNA变性，引物退火和在Tap DNA聚合酶催化下的DNA合成。DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年发现 ，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于1976年从温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的。它的特性就在于能耐高温，是一个很理想的酶，但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制，它是于1971年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似PCR前两个周期反应）的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的，Dr. Mullis当年服务于PE公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后，PCR的运用一日千里，相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。 〔PCR原理〕DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。〔PCR步骤〕标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。〔PCR检测〕PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴乙锭）染色凝胶电泳是最最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ,PCR）三步：1 变性：模板DNA加热变性2 退火 引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成杂交链3 延伸 4种dNTP 与 Mg2+ 存在的条件下，DNA合成酶催化以引物为起始点，按5"-3"方向进行延伸。上面三步为一个循环，可使拷贝数到达2*E－6-2*E－7PCR 产物一段双链DNA，是由它的末端引物的5"端决定的。PS:1.首轮扩增，其产物是大小不均一的DNA分子。长度应大于两引物之间的长度。在第二个循环中，如图3，由于5"固定，其产物长度就由等于两引物之间的长度。所以几十个循环后就会产生大量的两引物之间序列。引物设计：1，长度15~30个核苷酸，最多到50个核苷酸左右。（50？为什么？反正太长也没有必要）2, 尽量避免嘌呤和嘧啶堆积的现象。（其实有时很难避免，不是很重要）。3,引物内部不应该形成二级结构，如果引物中有酶切位点时，就会出现引物二聚体。（一般不是很重要）PCR的反应条件1，dNTP浓度过高会加快反映速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。2， 引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。3，TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1％-0.25％总错误率。4， 在90～95度下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94～95度30～60s。时间过长使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破坏增多。5，DNA很快冷却到40～60度使引物和模板结合。引物长度在15～25时退火温度Tm＝4（G＋c）＋（A＋T），一般在45～55度，温度低容易退火但特异性低；温度高，不容易退火但特异性高。退火时间30秒。6，延伸温度一般在70～75度这是TaqDNA聚合酶活性最高（150个／S），当引物在16个碱基以下时可采用缓慢升高温度到70～75度的方法，使在低温下就开始合成。一般<1KB时间1分钟即可。当〈1KB时在较后的循环中延长扩增时间。7循环次数25～30次。无产物时：1，取10ul扩增混合液作模板在进行PCR扩增。2，增加TaqDNA聚合酶浓度3，增加循环次数4，降低退火温度5，加靶DNA量

DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3"-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3"→5""外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用。当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；3、5"→3"外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5"→3"方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5"—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。扩展资料： 1、DNA聚合酶可以在每一个新掺入的核苷酸与模板链之间进行仔细地监测。只有在配对正确的情况下，它才会催化核苷酸之间聚合形成磷酸二酯键。2、即使当DNA聚合酶的监测偶然失误，掺入了错误的核苷酸，它还能通过校读的功能纠正错误。参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶

100uL体系：水 85uL ，10*buffer 10uL ，F引物 1uL ，R引物 1uL ，dNTP 1uL ，模板 1uL ，rTaq酶 1uL。按这个100uL体系配成20uL体系就行。

能量也是由底物dNTP供给的，底物dNTP在延伸是会断裂一个高能磷酸键，

PCR产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,PCR结束后就可以跑电泳或者测OD值都很快的. 另外,计算PCR的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulTE去溶解产物,也可以用50.

dNTPd代表五碳糖是脱氧核糖N代表A,G,C,TT代表3个PCR合成中的原料是dATP,dGTP,dCTP,dTTP，相应的称呼就是脱氧三磷酸____苷

酶一定要放在-20℃保存保存，这是常识，没有任何争议了。Buffer可以反复冻融，推荐-20℃保存，但是4℃保存也没有任何问题。dNTP的保存一定要注意，千万不要听楼上的山寨回答。首先，它需要严格-20℃保存（其通常stock solution是10mM），但是，当dNTP反复冻融约100次以上时，它会逐渐失去活性，无法与模板结合。所以，我建议在使用dNTA前，将其进行分装，从而达到更好的活性效果。

虽然核酸单体是含有一个磷酸，但是合成时原料是含有三个磷酸的，原因是它们是富于能量的化合物，参与合成过程同时能提供大量能量

"反应总体积20微升，加1.0微升dNTP，装有dNTP管上写的10mM"。这不有了吗？不用计算那么精确。加0.5-1都行

PCR (聚合酶链式反应)反应包括三个基本步骤，即：模板DNA的变性、模板DNA与引物的退火复性、引物的延伸。PCR反应体系包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。1、引物引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸 的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3"端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3"端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR 失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子 克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。　　引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。2、酶目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。3、dNTPdNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。dNTP储存液：dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20～200 μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。dNTP使用浓度：在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度(每种dNTP浓度为2μmol/L),能够高度灵敏地(1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。4、模板模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。5、Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。引物是PCR特异性反应的关键，不好的引物严重影响实验的质量，好的引物可以事倍功半;酶的选择一般是看实验的目的，例如克隆长片段，可能就需要高保真的聚合酶;dNTP浓度和Mg2+浓度高了会影响PCR反应特异性。DNA模板中还有蛋白质也会严总影响PCR质量，因此上述5个基本成分质量和浓度必须合理。

[1]聚合作用：在引物RNA"-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3"-OH与5"-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点，则不能与模板配对，无法改变酶的构象而被3"-5"外切酶活性位点所识别并切除之。 　　[2]3"→5"外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3"→5"外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明温度升高使DNA生长链3"末端与模板发生分离的机会更多，因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP，而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制，并继续进行DNA的合成。由此推论，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性很低。相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性比野生型高得多，因此，其DNA复制真实性好，变异率低。可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。 　　[3]5"→3"外切酶活性──切除修复作用：5"→3"外切酶活性就是从5"→3"方向水解DNA生长链前方的DNA链，主要产生5"-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用，方向是5"→3"。每次能切除10个核苷酸，而且DNA的聚合作用能刺激5"→3"外切酶活力达10倍以上。因此，这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5"末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性。 　　[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3"末端焦磷酸解DNA分子。这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链，可以认为是DNA聚合作用的逆反应，而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA 　　[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

哲罗鲑(学名：Hucho taimen，又名哲罗鱼，俗名大红鱼)，是一种鲑科哲罗鱼属的冷水性淡水食肉鱼类。身体延长侧扁，体型大，身长在1米以上至2米多，体重可达50公斤(但曾经有发现长达4米，重达90公斤的个体)，口大，连舌上也有牙，牙齿尖锐，个性凶猛，背面棕褐色，体侧银白，并有十字形黑斑，生殖期腹面和鳍橙红色。哲罗鱼为大型肉食性鱼类，主要捕食其他鱼类，以及在依水生活的蛙类、蛇类、鼠类、鸟类等。哲罗鱼为冷水性鱼类，淡水生活，大部分时间生活在水流湍急的溪水中，秋季会游到主流的深处，在较深的水体如大江干流、湖泊中越冬。春季洄游到水流湍急、底多沙砾的支流中掘穴产卵。幼鱼经4-5年才成熟。哲罗鱼主要分布在亚洲北部地区，西至伏尔加河流域及俄罗斯额尔齐斯河流域等、东至伯朝拉河流域、南至黑龙江流域，包括中国东北各大河流，北至勒拿河流域均有发现。该物种的模式产地在图拉河和西伯利亚其他河流。。哲罗鱼近似种有布氏哲罗鱼(H.bleekeri)，俗称“虎嘉鱼”，产于中国四川岷江上游。2007年1月15日，青海省农牧厅水产局的工作人员在测量新近发现的“猫鱼”。近日，在青海省果洛藏族自治州玛柯河林区发现一条川陕哲罗鲑(又名“猫鱼”)。该鱼长114厘米，体重约40公斤，是目前世界上发现的最大的川陕哲罗鲑。据鱼类学家分析，川陕哲罗鲑是第四纪冰川时期由北方扩散而来，冰期结束后停留在海拔较高、水温较低的河流中生存下来，并成为现在的一个独立物种。目前川陕哲罗鲑已被列入国家二级保护动物和中国濒危动物红皮书。此外还有一种巨型哲罗鲑，它是北方一种珍稀的冷水型食肉鱼类，体长数米，体重能达到上百公斤。生性凶猛、机警，长年隐藏在深水中，繁殖季节鱼体呈红褐色，有大红鱼之称。如今已在世界上绝大部分地区灭绝，只有在新疆喀纳斯湖还有少量残存。几千年来，喀纳斯湖区一直流传着一个关于“湖怪”的传说，据说，喀纳斯湖怪硕大无比，出没无常，一口就能吞掉一头小牛犊，还时常在湖边偷袭吞吃牛马。相继有当地居民，旅游者目击这种巨型哲罗鲑的报道，1985年《新疆日报》在一版头条位置刊出一条引人注目的消息：“喀纳斯湖发现巨型大红鱼”。今年九月又有大量目击者声称看到这种体长达十五米的大红鱼。哲罗鲑虽然体型也很大，但并不是最大的鱼类，但是据报道：柬埔寨的鲇鱼主要生活在湄公河流域，它们的体长一般可以长到大约3米、体重可达300多公斤。颁布上述政策前，2005年6月，柬埔寨政府曾组织过放生鲇鱼的爱心活动，当时4条体长大约为1.5米的大鲇鱼被放生到湄公河里。

【别名】 雌性素;人造雌性素;人造女性素;人造求偶素;乙底酚;乙酚;乙烯雌酚 ,乙菧酚【外文名】Diethylstilbestrol 【药理作用】 为人工合成的非甾体雌激素物质，能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用。 主要用于雌激素低下症及激素平衡失调引起的功能性出血、闭经，还可用于死胎引产前，以提高子宫肌层对催产素的敏感性，以及前列腺癌的故息疗法。 【适应症】 用于卵巢功能不全或垂体功能异常引起的各种疾病、闭经、子宫发育不全、功能性子宫出血、绝经期综合征、老年性阴道炎及退乳等。 【用量用法】 1.闭经：口服小剂量可刺激垂体前叶分泌促性腺激素，１日不超过０．２５ｍｇ。 2.用于人工月经周期：每日服０．２５ｍｇ，连服２０日，待月经后再用同法治疗，共３周期。 3.用于月经周期延长及子宫发育不全，每日服０．１～０．２ｍｇ，持续６月，经期停服。 4.治疗功能性子宫出血：每晚服０．５～１ｍｇ，连服２０日。 5.用于绝经期综合征：每日服０．２５ｍｇ，症状控制后改为每日０．１ｍｇ（如同时每日舌下含服甲基睾丸素５～１０ｍｇ，效果好）。 6.退乳：每次服５ｍｇ，１日２～３次，连服３日；或肌注每日１次４ｍｇ，连用３～５日，同时紧束双乳，少进液体。 7.老年性阴道炎：阴道噻药，每晚塞入１～２片（每片０．２ｍｇ），共用７日。 8.配合手术用于前列腺癌：每日６～１０ｍｇ，３次分服，连用２～３个月。 9.用于因子宫发育不良及子宫颈分泌物粘稠所致不育症：以小剂量促使宫颈粘液稀薄，精子易透入，于月经后每日服０．１ｍｇ，共１５日，１疗程为３～６个月。 10.用于稽留流产（怀孕７个月以内死胎，经２个月或２个月以上仍未娩出）：每次服５ｍｇ，１日３次，５～７日为１疗程，停药５日，如无效可重复１疗程。 【注意事项】 1.可有恶心、呕吐、厌食、头痛等不良反应。长期应用可使子宫内膜增生过度而导致子宫出血与子宫肥大。 2.应按指定方法服药，中途停药可导致子宫出血。 3.肝、肾疾病病人及孕妇禁用。 4.癌症病人（除前列腺癌病人）忌用。 5.少数病人有心窝部疼痛。还有性欲增强。 6.乳腺病、子宫内膜炎、出血倾向及更年期滤泡过多期禁用。 7.长期大量应用可诱发生殖系统恶性肿瘤；孕期用药有致胎儿先天缺陷危险，女婴成年后发生阴道腺病或宫颈癌(DES综合征)的危险增加。 【规格】 片剂：每片０．１ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ。 针剂：每支１ｍｇ（１ｍｌ）、２ｍｇ（ 1ml).

分类: 文化/艺术 >> 历史话题 问题描述: 元朝除了四大汗国——钦察汗国（金帐汗国）、察合台汗国、窝阔台汗国和伊儿汗国以外，还有什么汗国？ 解析: 看一看1368年朱元璋建立明朝的时候钦察汗国和伊利汗国的情况吧: 伊利汗国： ……1335年不赛因死后，伊利汗国迅速瓦解，权臣、统将各自拥立傀儡可汗，互相攻杀。1355年，钦察汗国札尼别汗攻入桃里寺，杀操纵朝政的出班后人，伊利汗努失儿完不知所终。在纷乱中，一些地方贵族也乘机独立，形成割据局面。据有报达的蒙古贵族哈散（札剌亦儿氏）于1340年自立为汗。1358年，其子兀洼思汗兼并阿塞拜疆等省地，移都于桃里寺，史称札剌亦儿朝，14世纪末被帖木儿帝国所灭。 钦察汗国: ……从1357年札尼别被杀起，开始了汗国的一系列内讧斗争。1357～1380年间，钦察汗更替了二十多人。六七十年代时，万夫长马买操纵傀儡汗掌握了汗国实权，控制了伏尔加河以西地区。1371年以后，斡罗思各公国乘汗国内讧停止纳贡。1380年，马买远征斡罗思，被以莫斯科为首的斡罗思各公国联军击溃于库里科沃原野。同年，白帐汗脱脱迷失击败马买，控制了钦察汗国的主要疆土，成了钦察汗，从此钦察汗全都出自白帐系。1382年，他攻占莫斯科，迫斡罗思重新纳贡。脱脱迷失是在中亚统治者帖木儿支持下得居汗位的，势力强大后即同帖木儿展开斗争。1389～1395年，经过三次大战，帖木儿击溃了脱脱迷失，占领并破坏了伏尔加地区许多城市，掠夺了克里木等地各城，使汗国的经济从此衰落。 14世纪90年代后期起，白帐汗国那颜也迪古操纵傀儡汗把钦察汗国大部分疆土统一起来。他于1399年打败立陶宛，遏止了立陶宛的扩张。1408年，进攻斡罗思，毁掉了许多城市，但没能攻下莫斯科。1410～1412年内讧时，他丧失权力逃走。由于术赤后王和贵族各有领地，各自掌握军队，加上占有经济发达地区的贵族的实力不断增长，因而，钦察汗不能建立强固的中央集权，孕育着内讧、分裂的因素。蒙古贵族对外不断进行掠夺战争，内部又互相争斗，严重阻碍了社会经济的发展，使汗国走向衰落和瓦解。 15世纪20年代初分裂出了西伯利亚汗国，中叶又分裂出了喀山汗国（1445～1552）、克里木汗国（1443～1783）、阿斯特拉罕汗国(1460～1556)等独立国，钦察汗国只剩下有限疆土，被称为大帐汗国。1480年，大帐汗阿黑麻率军进攻斡罗思，但慑于伊凡三世所率莫斯科军队的强大，从乌格拉河不战而退。1502年，大帐汗国灭亡。

C18H20O2。乙烯雌酚有顺反异构体，反式异构体中两个基团以双键中心形成中心对称。反式乙烯雌酚结构为C18H20O2，是一种人工合成的非甾体雌激素。

世界十大巨型淡水鱼为：巨型淡水黄貂鱼、湄公河巨型鲶鱼、鳄雀鳝、哲罗鲑、暹罗巨鲤、密西西比匙吻鲟、欧洲巨鲶、尼罗河鲈鱼、澳洲淡水鳕鱼、中华鲟。其中中华鲟主要分布在中国长江干流至海河口及其他支流水系，最大个体体长5米，体重可达600千克，最长寿命可达40年，是中国一级重点保护野生动物。湄公河巨型鲶鱼：湄公河巨型鲶鱼是_形目大型淡水鱼类之一，最大的个体长达2.5~3米，重200~300千克，栖息于江河的底层，特别偏爱岩石、砂砾底，有时栖息于水下的洞穴中，主要以水生植物和藻类等为食。哲罗鲑：哲罗鲑属冷水性的淡水食肉鱼类，一般个体在3千克以上，大者可达50千克，身长在1米以上，大部分时间生活在水流湍急的溪水中，是淡水鱼中最凶猛的鱼种之一，游动速度较快，善于追捕猎食鱼类。暹罗巨鲤：暹罗巨鲤是现存鲤科鱼类中个体最大的品种，体长200厘米，最重达120千克，栖息地区为东南亚湄公河流域，生长在东南亚湄公河流域，以珊瑚，水藻，红树林的水果为食。