普通菌液pcr的20 微升体系怎么配。需要dNTP吗？

dNTP是脱氧核苷三磷酸百（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三度磷酸。在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和度上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续知工作提供了能量。储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。相关信息：G和C碱基之间存在三个氢键，但A和T碱基之间仅有两个氢键。A和T之间只有两个形式，因为腺嘌呤碱基的碳2比其附着的氢具有更少的电负性，因此不会在其上产生δ负电荷，这意味着胸腺嘧啶的碳2上的氧不能与其形成氢键。氢。因此，这意味着需要更多的热能来使DNA变性，这比富含AT的DNA更富含GC。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-time PCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸。扩展资料：使用储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

DNA在复制的时候原料是dNTP的原因是：在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续工作提供了能量。dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制，如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的，都知道ATP含有高能磷酸键，dNTPs也含有高能磷酸键，这样就可以在PCR体系中提供能量。

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTPdNTP指三磷酸碱基脱氧核苷酸，指上面任意一种。dNTP"s是它们的复数形式

DNTP 是四种核苷酸，A、U、G、C。的混合物，主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中，需要这几种核苷酸，以碱基互补原则，在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接，从而达到复制模板链的目的。

N代表A U G C，核苷三磷酸。dNTP N代表A T G C 脱氧核苷三磷酸

dNTP代表三磷酸脱氧核苷酸dNMP代表磷酸脱氧核苷酸N可以是A、G嘌呤和C、T嘧啶如dGTP三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸

因为在 DNA 复制过程中，dNTP 的焦磷酸掉下来了，变成了 dNMP，同时和上一个碱基连起来了，发生了复制。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为 DNA 聚合酶继续工作提供了能量。拓展资料：DNA复制从起始序列开始单向或双向进行。合成DNA双螺旋的两条链是反向平行排列的，其中一条链的起始端与另一条链的末尾端平行排列在一起，每一个复制叉只有一条链是按照从尾到头的正确方向指导新链从头到尾方向合成。根据这条指导链，DNA复制持续向前合成复制叉。参考资料：百度百科，DNA复制

荧光特异标记的四种dNTP分别使用以下四种颜色的荧光染料进行标记：dATP（腺嘌呤）- 蓝色荧光dCTP（胞嘧啶）- 绿色荧光dGTP（鸟嘌呤）- 黄色荧光dTTP（胸腺嘧啶）- 红色荧光这种标记方式常用于各种DNA检测、测序和分析技术中，比如PCR、荧光原位杂交（FISH）等。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖） NTP是核苷三磷酸（含核糖） 它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的 N的意思是碱基 比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸

DNTP 是四种核苷酸,A、U、G、C.的混合物,主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中,需要这几种核苷酸,以碱基互补原则,在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接,从而达到复制模板链的目的.

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称是四种

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(三磷酸脱氧核糖核苷酸)的缩写.是dATP,dGTP,dTTP,dCTP的统称,N代表变量指代A、T、G、C、U中的一种. d：deoxy ,“脱氧”的意思.

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

你知道ATP么？A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTPd指的是deoxy 即脱氧。dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP既是复制的原料，又为链延长的过程提供能量。

mg在体系中的浓度一般是1-5mMol/L，dNTPs一般200uMol/L，四种dNTP浓度要相等镁离子是taq酶的辅因子，但浓度太高会产生非特异性扩增dNTPs太多会结合镁离子，所以二者都要适量dNTPs要4度保存

这个问题问得好有模板的DNA和镁离子存在时，在DNA聚合酶的催化下，由游离的3-OH对dNTP的α磷酸发动亲核攻击形成磷酸二酯键，生成DNA，同时释放焦磷酸PPi，焦磷酸水解放能，推动反应向右进行

dTTP（脱氧胸苷三磷酸）。因为胸腺嘧啶是DNA特有的碱基，所以dNTP中的N应该就是T。dTTP是DNA复制的直接前体，在细胞中一般不在其他地方用作供能物质。在人工合成中，一般用来作PCR、DNA测序、DNA标记等。

无明显同源性。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。 dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀 核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接 用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 Mg2+浓度 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。 PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置： 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法， 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。 ②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长 度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 ③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 70℃ 60核苷酸/S/酶分子 55℃ 24核苷酸/S/酶分子 高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。 PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。 循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。 PCR反应特点 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为： ①引物与模板DNA特异正确的结合； ②碱基配对原则； ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。 PCR扩增产物分析 PCR产物是否为特异性扩增 ，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片断都应符合预讦的大小，这是起码条件。 琼脂糖凝胶电泳： 通常应用1～2%的琼脂糖凝胶，供检测用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。 酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的酶切、电泳分离后，获得符合理论的片段，此法既能进行产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能进行变异性研究。 分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法。 Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的灵敏度，还可知其分子量及条带形状，主要用于科研。 斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，观察有无着色斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。 核酸序列分析：是检测PCR产物特异性的最可

楼上说的对，复制过程的起始需要引物合成酶先合成一小段RNA作为引物，底物是NTP。

不要紧，dnTP这种东西，就是脱氧核苷酸嘛，性状还是比较稳定的。

酶最好一直放在-20,现用现取,用完再放回-20.引物分贮液和使用液.贮液放-20 ；其他如果常用放在4就行.不常用可小量分装,每份大概就是你常用的一次的量,用时拿出一管就ok,如果一管量大,一次用不完,剩余又冻回-20,反复进行不就是反复冻融了吗.

一般都需要放在—20.反复融冻就是 拿出来融化了 又放回去，很多次这样，酶会失活、DNA会降解。但我们又要做实验用，就需要常用的酶或引物分装成小管 十几次或者20几次用完。其他放到-80保存。

sanger测序是在测序反应中加入四种正常dNTP底物，同时加入四种带有荧光标记的ddNTP。

DNA连接酶

一分子磷酸，一分子脱氧核糖（五碳糖），一分子碱基合成一分子脱氧核糖核苷酸，然后很多个脱氧核糖核苷酸合成DNA。1、物理性质：DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。2、分子结构：DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3"，5"-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成比例不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。3、分布功能：原核细胞的染色体是一个长DNA分子，但是原核细胞没有真正的细胞核。真核细胞核中有不止一条染色体，每条染色体只含一个DNA分子。不过它们一般都比原核细胞中的DNA分子大而且和蛋白质结合在一起。DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息；策划生物有次序地合成细胞和组织组分的时间和空间；确定生物生命周期自始至终的活性和确定生物的个性。除染色体DNA外，有极少量结构不同的DNA存在于真核细胞的线粒体和叶绿体中。DNA病毒的遗传物质也是DNA。

聚合酶链式反应（PCR）：扩增样品中的DNA量和富集众多DNA分子中的一个特定的DNA序列的一种技术。在该反应中，使用与目的DNA序列互补的寡核苷酸作为引物，进行多轮的DNA合成。其中包括DNA变性，引物退火和在Tap DNA聚合酶催化下的DNA合成。DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年发现 ，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于1976年从温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的。它的特性就在于能耐高温，是一个很理想的酶，但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制，它是于1971年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似PCR前两个周期反应）的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的，Dr. Mullis当年服务于PE公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后，PCR的运用一日千里，相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。 〔PCR原理〕DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。〔PCR步骤〕标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。〔PCR检测〕PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴乙锭）染色凝胶电泳是最最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ,PCR）三步：1 变性：模板DNA加热变性2 退火 引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成杂交链3 延伸 4种dNTP 与 Mg2+ 存在的条件下，DNA合成酶催化以引物为起始点，按5"-3"方向进行延伸。上面三步为一个循环，可使拷贝数到达2*E－6-2*E－7PCR 产物一段双链DNA，是由它的末端引物的5"端决定的。PS:1.首轮扩增，其产物是大小不均一的DNA分子。长度应大于两引物之间的长度。在第二个循环中，如图3，由于5"固定，其产物长度就由等于两引物之间的长度。所以几十个循环后就会产生大量的两引物之间序列。引物设计：1，长度15~30个核苷酸，最多到50个核苷酸左右。（50？为什么？反正太长也没有必要）2, 尽量避免嘌呤和嘧啶堆积的现象。（其实有时很难避免，不是很重要）。3,引物内部不应该形成二级结构，如果引物中有酶切位点时，就会出现引物二聚体。（一般不是很重要）PCR的反应条件1，dNTP浓度过高会加快反映速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。2， 引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。3，TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1％-0.25％总错误率。4， 在90～95度下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94～95度30～60s。时间过长使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破坏增多。5，DNA很快冷却到40～60度使引物和模板结合。引物长度在15～25时退火温度Tm＝4（G＋c）＋（A＋T），一般在45～55度，温度低容易退火但特异性低；温度高，不容易退火但特异性高。退火时间30秒。6，延伸温度一般在70～75度这是TaqDNA聚合酶活性最高（150个／S），当引物在16个碱基以下时可采用缓慢升高温度到70～75度的方法，使在低温下就开始合成。一般<1KB时间1分钟即可。当〈1KB时在较后的循环中延长扩增时间。7循环次数25～30次。无产物时：1，取10ul扩增混合液作模板在进行PCR扩增。2，增加TaqDNA聚合酶浓度3，增加循环次数4，降低退火温度5，加靶DNA量

DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3"-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3"→5""外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用。当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；3、5"→3"外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5"→3"方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5"—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。扩展资料： 1、DNA聚合酶可以在每一个新掺入的核苷酸与模板链之间进行仔细地监测。只有在配对正确的情况下，它才会催化核苷酸之间聚合形成磷酸二酯键。2、即使当DNA聚合酶的监测偶然失误，掺入了错误的核苷酸，它还能通过校读的功能纠正错误。参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶

能量也是由底物dNTP供给的，底物dNTP在延伸是会断裂一个高能磷酸键，

PCR产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,PCR结束后就可以跑电泳或者测OD值都很快的. 另外,计算PCR的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulTE去溶解产物,也可以用50.

dNTPd代表五碳糖是脱氧核糖N代表A,G,C,TT代表3个PCR合成中的原料是dATP,dGTP,dCTP,dTTP，相应的称呼就是脱氧三磷酸____苷

酶一定要放在-20℃保存保存，这是常识，没有任何争议了。Buffer可以反复冻融，推荐-20℃保存，但是4℃保存也没有任何问题。dNTP的保存一定要注意，千万不要听楼上的山寨回答。首先，它需要严格-20℃保存（其通常stock solution是10mM），但是，当dNTP反复冻融约100次以上时，它会逐渐失去活性，无法与模板结合。所以，我建议在使用dNTA前，将其进行分装，从而达到更好的活性效果。

虽然核酸单体是含有一个磷酸，但是合成时原料是含有三个磷酸的，原因是它们是富于能量的化合物，参与合成过程同时能提供大量能量

"反应总体积20微升，加1.0微升dNTP，装有dNTP管上写的10mM"。这不有了吗？不用计算那么精确。加0.5-1都行

PCR (聚合酶链式反应)反应包括三个基本步骤，即：模板DNA的变性、模板DNA与引物的退火复性、引物的延伸。PCR反应体系包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。1、引物引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸 的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3"端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3"端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR 失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子 克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。　　引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。2、酶目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。3、dNTPdNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。dNTP储存液：dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20～200 μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。dNTP使用浓度：在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度(每种dNTP浓度为2μmol/L),能够高度灵敏地(1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。4、模板模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。5、Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。引物是PCR特异性反应的关键，不好的引物严重影响实验的质量，好的引物可以事倍功半;酶的选择一般是看实验的目的，例如克隆长片段，可能就需要高保真的聚合酶;dNTP浓度和Mg2+浓度高了会影响PCR反应特异性。DNA模板中还有蛋白质也会严总影响PCR质量，因此上述5个基本成分质量和浓度必须合理。

[1]聚合作用：在引物RNA"-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3"-OH与5"-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点，则不能与模板配对，无法改变酶的构象而被3"-5"外切酶活性位点所识别并切除之。 　　[2]3"→5"外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3"→5"外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明温度升高使DNA生长链3"末端与模板发生分离的机会更多，因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP，而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制，并继续进行DNA的合成。由此推论，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性很低。相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性比野生型高得多，因此，其DNA复制真实性好，变异率低。可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。 　　[3]5"→3"外切酶活性──切除修复作用：5"→3"外切酶活性就是从5"→3"方向水解DNA生长链前方的DNA链，主要产生5"-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用，方向是5"→3"。每次能切除10个核苷酸，而且DNA的聚合作用能刺激5"→3"外切酶活力达10倍以上。因此，这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5"末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性。 　　[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3"末端焦磷酸解DNA分子。这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链，可以认为是DNA聚合作用的逆反应，而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA 　　[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

广州长隆旅游度假区有什么好玩的地方？哪些景点必去？1、广州长隆野生动物世界推荐理由:湖南卫视亲子真人秀《爸爸去哪儿》第一季大电影和湖南卫视《奇妙的朋友》的拍摄地2、长隆欢乐世界推荐理由:国内首屈一指的主题乐园，各式各样惊险的游乐设施任你玩3、广州长隆旅游度假区推荐理由:整个度假区很适合带孩子游玩，家庭周末出游的上佳选择4、长隆国际大马戏推荐理由:你可以看到各种聪明可爱的动物一秀绝技；身着盛装的外国男女，游行舞动，展示异域风情；还可以看到神奇的魔术表演，惊险的杂技表演等。5、长隆飞鸟乐园6、广州长隆水上乐园推荐理由:长隆水上乐园占地20万平方米，是亚洲最大，世界水上游乐设备最多、最先进的水上乐园。7、垂直过山车站8、亚特兰酒店9、长隆小火车10、超级大摆锤还有158条相关问答，更多广州长隆旅游度假区新奇玩法，点击查看长隆野生动物园景点有哪些 长隆野生动物园旅游攻略长隆野生动物园是全国首批、广州唯一的 5A 级旅游景区。以大规模野生动物种群放养和自驾车观赏为特色。1000 余只珍奇动物；拥有全国首创的自驾车看动物模式；拥有全世界表演阵容最强大的白虎表演等五大动物表演秀。上午9:30-下午17:30，全年开放。整个动物园分为：乘车环球探险、步行猎奇、月亮演艺场3个步骤。乘车探险，环球动物一路可见，乘车环球探险历经30分钟，分别经过“中华山地”、“南美河谷”、“印度森林”、“澳洲灌木林”、“南非沼泽”、“东非草原”等几个区域。沿途可见国宝大熊猫、羚羊、喜马拉雅熊、狡猾的狐狸、非洲雄狮、坦克般庞大的犀牛和河马、可爱的袋鼠等等，一路惊险有加，但又有惊无险。坐在车上，你还能真切闻到动物的气味，恍如已远离城市，置身于野生动物出没的大自然。长隆旅游度假区怎么样长隆旅游度假区，国家级AAAAA景区，占地面积1万亩，是一家集旅游景点 、酒店餐饮、娱乐休闲于一体的大型企业集团，坐落于羊城广州。旗下拥有长隆欢乐世界、长隆国际大马戏、长隆香江野生动物世界、长隆水上乐园、广州鳄鱼公园、长隆酒店、香江酒店、长隆高尔夫练习中心和香江酒家等9家子公司。长隆欢乐世界长隆欢乐世界位于中国首批5A级旅游景区长隆旅游度假区的中心位置，占地面积约2000亩，是长隆集团斥资20亿元人民币倾力打造的集乘骑游乐、特技剧场、巡游表演、生态休闲、特色餐饮、主题商店、综合服务于一体的具国际先进技术和管理水平的超大型世界顶尖主题游乐园。自2006年4月7日正式对外开放以来，接待游客数以百万计，其中单日接待游客5万人之多。长隆欢乐世界拥有游乐设施70余套，是目前国内在设备上投入至多、引进至多的全球大型游乐园。大部分游乐设备均从欧洲原装进口，其设计与技术均保持国际领先水平，其中独有八项亚洲及世界之最，包括：垂直过山车、十环过山车、摩托过山车、飞马家庭过山车、U型滑板、超级水战、特技表演、超级大摆锤以及世界上至先进的四维影院。其中垂直过山车、十环过山车为全球仅有的第二台，而垂直过山车仅单项投资就超过2亿元人民币，由全球著名游乐设备提供商Intamin提供。除游乐项目外，园区内还邀请体现美国牛子力量的北美伐木表演专业队伍加盟。此外，还有来自二十多个国家的200多位演艺精英组成的娱乐大巡游以及《欢乐剧场》的魔术表演等多种节目供游客观看。除以上品牌节目外，园区内还专门为儿童设计的全国至大型室内恒温儿童游乐城，让游客尽情体验一家之欢、亲子之情。长隆欢乐世界作为全球至大型游乐场所，其立足点就是建成世界一流、世界顶尖的旅游王国。长隆欢乐世界将是你释放压力、放飞自我的明智选择！长隆野生动物世界广州长隆野生动物世界，是全世界动物种群最多、最大的野生动物主题公园，园区占地2000多亩，拥有华南地区亚热带雨林大面积原始生态，是目前国内最大的原生态动物园；珍稀濒危动物最多，园区拥有10只大熊猫、22多只树熊（考拉）、150多只白虎等世界各国国宝在内的500多种20,000余只珍奇动物，园区内的珍稀动物物种，以种群的形式生活，使得整个物种得以繁衍生息；拥有全国首创的自驾车看动物模式，自驾园区占地面积近100万平方米；拥有全世界表演阵容最强大的白虎表演等四大动物表演秀。拥有全球顶尖的动态高仿真实景恐龙园。长隆水上乐园广州长隆水上乐园占地面积450亩，是由国际知名公司加拿大白水公司（WHITE WATER）以及世界知名主题乐园设计机构加拿大科力（FORREC）公司联合设计的，全国著名、世界知名的水上乐园。作为世界上至大、至先进、水上游乐项目至多的大型水上乐园，长隆水上乐园几乎所有的设备均由国外原装进口，而且设备中不乏荣获国际大奖的顶尖项目。其超大的游玩空间，顶尖的配套设施、清新舒适的宜人环境以及提供的优质服务，自2007年6月开园以来，一直备受社会各界关注，更是媒体的取景拍摄旅游基地。长隆水上乐园为了让前来游玩的游客有一个完美的体验之旅，适时俱进，全力打造优质服务，除了新增加世界顶级游乐设备外，还对园区的休闲设施、美化装饰及景区管理进行了丰富及补充，以此满足各类游客的需求。同时园内的水处理系统引进的是世界上至先进的臭氧水循环处理系统，使园内用水变得更纯净、更安全和更有保障。为了让中外游客及广大市民在炎热的盛夏有一个全新的玩水体验，长隆水上乐园每年都会进行充分的考虑及策划，致使每个设备带给每位游客的体验均是截然不同的感受。它不仅有带给小朋友童话水世界的"宝贝水城"、"水迷宫"、"小喇叭"、"冰川隧道"等；还有体验亲情之旅、幸福之旅的"漂流河"、"超级造浪池"、"夏威夷水城"、"合家欢滑道"、"离心滑道"以及体验落差、飞花逐浪，增进情感的"超级大喇叭"、"大滑板"、"急驰竞赛"、"垂直极限"、"喷射滑道"、"巨兽碗"等。长隆水上乐园不仅在设备上为游客提供各种尽情游玩，而且还精心准备了丰富的表演盛宴。热辣的沙滩美女、性感的长隆国际比基尼小姐大赛以及热情奔放的桑巴舞女郎、飞行乐队等，在不同时间段与您一起度过、体验长隆水上乐园带来的别样风情盛夏、难忘之旅！2012年4月广州长隆水上乐园新区热浪谷已盛大开放！新区全新引进两大世界级游乐设施——"巨洪峡"和"巨蟒"，巨浪迸发，弯道探险，精彩绝伦。热浪谷占地50亩，与以往众多水上乐园的设计观念不同，热浪谷更注重整体感，设计以夏威夷景观风格为主，突出展现椰林树影的感觉，气势雄伟的夏威夷火山装饰，别具匠心的夏威夷传统茅草屋，还有特色儿童玩水区，势必为长隆水上乐园带来新的惊喜。热浪谷另一特色是在亚洲首次引进户外温水系统，让广大游客在春末秋初同样能享受玩水的乐趣。计划未来更会新增室内恒温水上乐园，维持在全球水上乐园行业最领先地位。新区建成后，全园区面积达450亩。预计新区每小时营运量可达15000人，日接待量达5万人。随着热浪谷投入营运，水上乐园在180天的经营期中，游客的年接待量势必突破230万，成为世界第一的水上乐园。长隆国际大马戏长隆国际大马戏位于全国AAAAA景区广州长隆旅游度假区，拥有全球首创实景式马戏舞台，数千万巨资打造极致奢华的尖端舞美科技，和数亿巨资建造的全世界最大的马戏表演场，能容纳近8000名观众同时观看。全球顶尖的舞台设施和主题节目，自然少不了庞大的国际化演艺团队，拥有来自20多个国家，横跨亚洲、欧洲、美洲、非洲共300余名的马戏精英同台演绎。此外，还有多达40余种500多只珍奇动物与马戏的精英们同台献技。自2000年创立以来，长隆国际大马戏历经十多年的创新发展，一直引领着世界马戏的潮流，成为了世界马戏的标杆，享誉海内外。先后多次被评为"广州最具竞争力的文化品牌"、"羊城夜游首选"、"中国文化名片"。接待游客量过千万。长隆飞鸟乐园（原广州鳄鱼公园）长隆飞鸟乐园（原广州鳄鱼公园）隶属全国首批、广州唯一5A国家级旅游景区长隆旅游度假区，园区坐拥2000余亩苍翠绿地，是广州少有的大型的湿地生态动物公园，拥有各种珍稀湿地鸟类数十种，婀娜多姿。同时，这里还是全球最大的鳄鱼主题公园，拥有鳄鱼总数超过10万条。园内包括多个分区，其中包括鹈鹕湾、仙鹤湾、天鹅湾、钓鳄岛、鳄鱼长廊、爬行动物科普馆等展区集动物观赏、科普教育、生态观光于一体，十大精彩湿地动物表演趣味纷呈、寓教于乐，带给游客前所未有的多层次湿地新体验。广州长隆最全游玩攻略？长隆度假区，坐标于广州市番禺区番禺大道，具体位置在番禺区汉溪大道东与长隆地铁大道交汇处，占地面积约一万余亩，度假区拥有五大景区，每一个景区都各具特色，其中，关于长隆野生动物世界和长隆飞鸟乐园的介绍和游玩攻略，作者近期已发表过文章，游客如有需要，可以翻阅之前的文章，这里不再雷同。还有三大景区分别是长隆水上乐园、长隆欢乐世界和长隆国际马戏大剧院。因为每一个景点占地面积都比较大，整个度假区游玩下来建议三天两夜，其中欢乐世界和野生动物世界二个景点，建议共游玩二天，水上乐园和飞鸟乐园两景点建议游玩一天，大马戏是晚上开始表演的，所以夜间观赏不占用白天时间，然后度假区的夜景也是非常美的，所以第二晚建议夜游长隆度假区，外地游客选择第三晚返程。长隆欢乐世界，类似于深圳的欢乐谷，属于大型的游乐场，最著名的项目是垂直过山车，惊险刺激，有趣好玩，同时配备有三大亲子游乐区和互动小舞台，不仅满足了各种年龄段的需求，而且还强化了欢乐世界园内的主题氛围，尤其是后期增加的三大气模区域，不仅环境舒适，而且体验感极强，游玩乐趣极高。但是需要提醒的是，由于平常景区游客较多，为了安全方面考虑，禁止使用自拍杆。长隆水上乐园，自从开放以来，游客的关注度和参与度是非常高的，尤其是每年的夏季，游客更是络绎不绝，此起彼伏。长隆国际大马戏，舞台精美，并且拥有国际著名的实景式舞台布局，无论是森林还是溪流，不管是山景或者小船，都设计得非常逼真，犹如身临其境的感觉，个人感觉这里的演员都非常的专业，最亮眼的是服装设计华丽，与整个舞台巧妙地融合在一起，许多演员都来自国外，与动物的配合也非常的默契，的确是一场精美的视觉盛宴。长隆野生动物世界和飞鸟乐园，更是整个度假区的重中之重，但是小编近日有写过，可以关注后翻阅之前文章，这两处景点介绍的都非常详细。交通信息及概况：长隆旅游度假区，紧邻地铁三号线和新光快速路，与汉溪大道与南大路相毗邻，长隆地铁大道穿行其间，不远处有宽阔的迎宾路，交通极为便利。长隆国际大马戏与长隆欢乐世界，共处迎宾路长隆度假区内，可乘坐地铁三号线到汉溪长隆站下，步行约两公里即可到达。门票政策及其他信息：通票门票参考价为350元，也可单景点购买。长隆欢乐世界和水上乐园一米（不含）以下儿童是免费的，然后长隆国际大马戏一米（含）至一米五（不含）的儿童是有优惠票的。停车费小车24小时内每次20元，以上价格仅为参考，具体紧急单日披露为重。长隆具体位置在哪长隆欢乐世界位于番禺区迎宾路长隆旅游度假村内。长隆是中国旅游行业的重点集团企业。目前，长隆旗下拥有广州长隆与珠海长隆两大旅游度假区。旗下主题公园有欢乐世界、海洋王国、野生动物世界、水上乐园、飞鸟乐园。长隆集团是国家文化部的“文化产业示范基地”和广东省“科普教育基地”，先后被省、市政府授予“优秀民营企业”、“先进民营企业”、“广东省文明风景旅游区示范点”等系列荣誉称号。拓展资料：1、长隆欢乐世界长隆欢乐世界位于中国首批5A级旅游景区长隆旅游度假区的中心位置，占地面积约2000亩，是长隆集团斥资20亿元人民币倾力打造的集乘骑游乐、特技剧场、巡游表演、生态休闲、特色餐饮、主题商店、综合服务于一体的具国际先进技术和管理水平的超大型世界顶尖主题游乐园。自2006年4月7日正式对外开放以来，接待游客数以百万计，其中单日接待游客5万人之多。2、长隆野生动物世界广州长隆野生动物世界，是全世界动物种群最多、最大的野生动物主题公园，园区占地2000多亩，拥有华南地区亚热带雨林大面积原始生态，是目前国内最大的原生态动物园;3、长隆水上乐园广州长隆水上乐园占地面积450亩，是由国际知名公司加拿大白水公司(WHITE WATER)以及世界知名主题乐园设计机构加拿大科力(FORREC)公司联合设计的，全国著名、世界知名的水上乐园。/4、长隆国际大马戏长隆大马戏长隆国际大马戏位于全国AAAAA景区广州长隆旅游度假区，拥有全球首创实景式马戏舞台，数千万巨资打造极致奢华的尖端舞美科技，和数亿巨资建造的全世界最大的马戏表演场，能容纳近8000名观众同时观看。

2022国庆节广州长隆欢乐世界游玩攻略【开放时间】：10:00-18:00【门票】：全票：250元小童/长者/优待票：175元青少年/学生票：200元大学生票：215元【特惠门票购买入口】：天天周末【预约入口】：点此预约【防疫措施】：长隆对新冠病毒肺炎疫情防控非常重视，每天均有安排卫生消毒，且入园/入住前有限流、预约、错峰、测温、亮码、安全预检、要求佩戴口罩、身份证实名入园/入住、保持1米社交距离等措施，以确保各位有舒适的游玩/入住体验，欢迎大家的到来。因全国各地疫情不断变化，而广州市对应的防疫措施会实时调整。请有计划前来的客人，提前在微信公众号“广州卫健委”和微信小程序“国务院客户端”查阅各地人员进入广州的防疫措施，以便做好行程安排。请来穗人员依照广州市防疫要求，在微信小程序“穗康”进行“来穗申报”。到达本地后，如有接收到本地具体防疫要求，敬请自觉配合。目前进入广州长隆度假区的客人需要核验72小时内核酸阴性证明。【游玩推荐】：8大主题娱乐区!巅峰刺激游乐项目、适合全家游玩的哈比王国等...合各个年龄层的合家欢大型游乐团，将生态环境与异国文化结合!拥有多个大型游乐设备、大型特色表演项目丰富多彩!汇聚欧洲原装进口过山车，挑战你的青春荷尔蒙，唤醒你的冒险细胞。广州长隆欢乐世界简介：从2006年开业至今，长隆欢乐世界完成了巨变——从硬件游乐的1.0时代蜕变成以满足游客主题体验为中心的3.0时代。从2012年全新开放的亚洲室内情景探险项目“森林神庙”到“星际决战”，长隆欢乐世界向世界主题游乐市场交出了一份满意的答卷——“星际决战”项目开放后，长隆欢乐世界游客增幅50%，借此，长隆欢乐世界新区幻影天地的改造同步完成。火箭过山车继垂直过山车、十环过山车、摩托过山车、飞马家庭过山车和U型滑板之后，长隆欢乐世界的“过山车矩阵”又将新增一个“狠角色”——投入巨资引进“火箭过山车”!集垂直过山车、十环过山车、摩托过山车和U型滑板体验于一身，可谓“过山车新典范”垂直过山车逍遥搏击任飞翔，彩虹绘出真体验，让国人不出国门就可享受到全球较尖端的游乐设施，现在就让我们一起尽情去体验全球过山车之王的巅峰感受吧。欢乐小镇2017年1月15日，长隆欢乐世界将推出全新游乐区域“欢乐小镇”，这是马戏主题的开放性游乐小镇，除了别具风格的建筑和园区装饰、随处可见的主题元素，这里是一个能亲身体验乐趣的机动游戏体验区，让您天马行空、梦想成真!十环过山车创造了吉尼斯世界纪录的极限十环过山车，是世界上总长850米内翻滚次数至多的过山车，其翻转总环数超过亚洲任何一台过山车，它会载着你时而迅猛俯冲钻入地洞，时而盘旋上升越上云霄，时而惊险反转、时而急速骤降中心连环旋转更有奇妙的同心惯力。环环相扣紧张刺激，环环不同充满惊喜，如驾御奔腾翻滚的矫龙，心中激起阵阵惊涛骇浪。下一环会有什么呢?总有意想不到的刺激!U型滑板很有特色的U型滑板，是跳楼机与过山车的完美结合，感受时尚的滑板活动，体验动感的生理极限。摩托过山车英勇战将，驾驭高速摩托车，媲美F1赛车，像赛车手一样在车道中飞驰，全程兴奋、过瘾、惊奇。飓风飞椅乘坐神奇飞椅，带你在空中不断高低变幻飞驰。四维影院专题推荐：_广州+全国国庆节活动游玩攻略专题_广州+全国露营攻略专题_广州+全国玩水专题

公元1402年，东亚的大明帝国，经过四年厮杀后，“靖难之役”终于以朱棣攻破南京为标志宣告胜负已定，朱棣称帝，建文帝下落不明。这一年，西亚也在进行着一次决战，自称是成吉思汗后裔的帖木儿，率15万大军，跟土耳其奥斯曼帝国对决。“安卡拉战役”爆发。帖木儿再次把蒙古骑兵的优势发挥到极致，一战定乾坤，俘获了号称“雷神之锤”的奥斯曼苏丹：巴耶塞特一世。帖木儿帝国，成为了横跨中、西亚的新霸主。随即，帖木儿就把目光投向了东方，发誓恢复成吉思汗时代的荣耀，开始着手远攻大明帝国。两年后，公元1404年，帖木儿在首都撒马尔罕，手指着大明帝国使者的鼻子怒喝：“你们的猪可汗（朱棣）叛父害侄，是一个大混蛋！我要去讨伐他！”年底，帖木儿便亲率20万大军，踏上了远征大明的路程！此刻的朱棣，也在对着手下怒吼，要求尽快解决和处理，自山西向山东、河北等地移民的问题。因为经过靖难之役后，这两个地方已是“兵燹屠戮，居民罕有孑遗”，由此“山西洪洞县大槐树”的传说，拉开序幕。公元1405年的一月底，帖木儿大军的前锋，到达了今日的伊犁地区！一时间，东、西亚，两大霸主的决战，似乎马上就要开始了。而此刻的明朝却毫无准备。但就在此刻，两件让人意想不到的事发生了。第一件：帖木儿的老对手，金帐汗国（统治着俄罗斯）的大汗：脱脱迷失，派来了使者，不但奉帖木儿为蒙古老大，还表示效忠。这可让帖木儿大喜非常，因为脱脱迷失，是正宗“黄金家族”后代。而帖木儿到底是不是成吉思汗的后裔，至今都没有定论。第二件：帖木儿的孙子，右路军的统帅，哈里.苏丹，竟然行军和恋爱两不误，喜欢上了一位黑人女仆。这让帖木儿大为恼火却又无可奈何，只能强令：必须在2月下旬，推进到距大明国土400里处的“别失八里”。但可惜，一切也就到此结束，因为帖木儿在2月18日病死了！虽临死前高喊：“不要向敌人示弱，握紧手中的剑。”可惜他一死，远征大明就立刻化成泡影。再说朱棣，直至帖木儿死后一个月，才得到了帖木儿远征的消息，急命甘肃总兵宋晟密切注意。可惜帖木儿已死，两大军事天才，两大霸主之间的决斗就如此，不可思议的在最后一刻，擦肩而过。那么这是帖木儿的幸运，还是朱棣的幸运呢？无论从哪方观察，显然都能得到这样一个结论。明军初期大概率的会败给帖木儿大军，因为毫无防范。除非此刻宋晟能力挽狂澜。但参考此刻的宋晟已年老，所以战胜帖木儿的概率比较低。以当时明军的战力来推算，坚守重要城池，待援助，这个概率应是比较高。但无论能否坚守住，有一条必会随后实现，那就是朱棣必会亲征。所以真正的较量，是随着朱棣亲征才开始。一旦战局进入到此刻，帖木儿就会暴露出诸多问题了。而蒙古骑兵也不会如“安卡拉战役”时，发挥出那么大的作用，朱棣手中，红衣大炮横炸，火枪排射，早就成了对付骑兵的最有效的战术。因此来言，只要战局进入相持阶段，战况必会向着明军有利的方向扭转。一则，朱棣是主场作战，后勤补给比帖木儿强太多。而这正是帖木儿最脆弱的地方。因为在行军途中，帖木儿的后勤情况就是，“又驱牝骆驼数头，如饷乏，则餐其乳以济饥。中途遇大雪，士马僵毙”，这种状况就注定了帖木儿的最优选择，就是速战速胜。其次是以战养战，但也是非常脆弱的。二则，朱棣正是当打之年，才42岁。帖木儿却是65岁了。而朱棣的军事才能也是首屈一指，丝毫不亚于帖木儿，也是身经百战的统帅。三则，朱棣手中的明军主力，刚刚经过了“靖难之役”洗礼，正是战力最强悍之时。所以，除非朱棣出现了重大失误，才会发生“土木堡之变”时的惨状。不过这种概率，可以忽略不算。因此帖木儿随着战局进行，必会被朱棣顶出大明国土。因为他还存在着一个更致命的弱点。他手下20万大军，许多都是被迫胁从而来。这种情况下若帖木儿一直胜利还算罢了。若一旦战败，就立刻形成兵败如山倒的局面了。这点，也是可以预见的。所以，朱棣和帖木儿的这次王者颠覆对决，大概率的会是帖木儿在初期，依靠时间差，给大明造成巨大麻烦。但随着朱棣亲征，便会越来越被动，直至惨败。甚至不排除被朱棣一路尾随追杀而出的雪崩状况，他的帖木儿帝国，也会随之崩溃。结论：显然帖木儿死于途中，应属于他的幸运，保全了一生战无不胜的辉煌纪录。再者言，想依靠20万人马，就灭掉朱棣主政时期的大明，这无论怎么看，都实在是有点笑话的感觉！

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广州长隆旅游度假区是综合性主题旅游度假区，总占地面积1万亩，集旅游景区、酒店餐饮、娱乐休闲于一体，拥有长隆欢乐世界、长隆国际大马戏、长隆野生动物世界、长隆水上乐园、广州鳄鱼公园、长隆酒店、香江酒店、长隆高尔夫练习中心和香江酒家等设施。对于喜欢刺激机动游戏的人来说，去长隆欢乐世界玩一次是一个不错的选择。这个游园里有很多机动项目，他的设计有针对成年人的，也有针对小朋友的，这些游戏有不少还是亚洲乃至世界顶级的。而在刺激的同时整个游园的布置又比较卡通可爱。游园攻略：1.在广州市区乘坐地铁在汉溪长隆地铁站下车，就到达了长隆欢乐世界；2.长隆欢乐世界的门票将近200元，可以通过旅行社订票价格会便宜一些，如果喜欢看马戏表演，也可以选择订欢乐世界和大马戏的套票(价格有优惠)，听说这个在晚上表演的大马戏很不错的；3.最好早上九点就到达长隆欢乐世界门口，因为很可能有很多游人，需要排队进园，同时为了让自己有足够的时间玩每一个项目，早一些到也是一个明智的选择；4.进园的时候在门口记得要取阅游园指南；5.十环过山车和急流冲浪等游戏都是很热门的项目，最好一入园就去排队。急流冲浪需要买雨衣，否则会变得象个落汤鸡似的，我当时去玩的时候雨衣是两元一件，如果买了记得不要太快扔掉了，可能还有热带冒险等游戏需要雨衣。6.带上相机，园内造型很卡通，影下来很好玩。7.长隆欢乐世界附近有天河城的折扣店，和新一佳超市，吃自助餐的四海一家。部分游乐场所、景点介绍：长隆欢乐世界由国际著名的主题乐园设计机构主持总体规划，游乐设备均从欧洲原装进口，其设计与技术保持国际领先水准。并创造了八项亚洲及世界之最：1、垂直过山车被誉为全球最顶尖过山车之王，是长隆欢乐世界2008年春节最新引进的王牌项目，由世界上最知名的过山车制造商Bolliger&Mabillard公司研发制造，是全球最顶尖的过山车和游乐设施。2、十环过山车荣获吉尼斯世界纪录，全世界第二台（仅在英国有一台）、亚洲首次引进，由全球著名游乐设备提供商Intamin公司设计制造，创造了游乐设备环数最多的吉尼斯世界记录。3、摩托过山车是东半球首台，其0到80公里弹射式加速仅需2.8秒，可与F1赛车速度相媲美，并获得世界游乐行业协会年度设计金奖。4、U型滑板是世界最大、亚洲第一台，30多米高的巨型滑板，急速下滑与急速旋转双重体验，是园内最刺激的游乐设备之一。5、超级大摆锤是世界最新最眩的大型机动游乐设备，由德国HUSS公司原厂进口,号称全球最大摆锤最高时速110公里/小时,最大摆幅240度,带您飞上42米高空,天旋地转之间，令人目炫神迷，惊心动魄。6、世界最大水陆空特效剧场——国际特技剧场，现正上演《惊爆危机岛》，由全球顶尖特技导演全程监制，国际著名特技大师倾情上演，结合爆破、枪战、烟火、声光、机动设备、滑水、高空特技等多种尖端特效，出奇不意，精彩绝伦，好莱坞动作大片真实再现。7、亚洲最大的四维影院，现正上演世界最先进立体数码影视技术全新创作的《恐龙天劫》和亚洲首度公映的美国时代华纳四维影院《无敌达菲鸭》，融合9大座椅效果与多项世界顶尖特效，国际一流四维影视班底精心雕琢，长隆独家打造，精彩全球独享。8、号称世界水上游乐之王、老少皆宜的超级水战也是在亚洲首次引进。更多关于2020广州长隆欢乐世界旅游指南，进入：https://www.abcgonglue.com/ask/c24f9c1615732102.html?zd查看更多内容