请问dNTP在PCR中发挥作用的过程是什么?

dNTP是脱氧核苷三磷酸百（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三度磷酸。在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和度上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续知工作提供了能量。储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reverse transcription PCR）、Real-time PCR）中起原料作用。相关信息：G和C碱基之间存在三个氢键，但A和T碱基之间仅有两个氢键。A和T之间只有两个形式，因为腺嘌呤碱基的碳2比其附着的氢具有更少的电负性，因此不会在其上产生δ负电荷，这意味着胸腺嘧啶的碳2上的氧不能与其形成氢键。氢。因此，这意味着需要更多的热能来使DNA变性，这比富含AT的DNA更富含GC。

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA、RNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR、Real-time PCR）中起原料作用。

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中最初的贮存液可稀释到10mol/L分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20200μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖）；NTP是核苷三磷酸（含核糖）。它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的，N的意思是碱基，比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸。扩展资料：使用储存液dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20~200 μmol/L之间。4种dNTP 必须等浓度配合以减少错配误差。使用浓度在PCR反应中,使用低dNTP浓度, 可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl 的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或 10pmol/L 的400bp序列。

DNA在复制的时候原料是dNTP的原因是：在DNA复制过程中，dNTP的一个焦磷酸尾巴掉下来了，变成了所谓的dNMP，同时和上一个碱基连起来了。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为DNA聚合酶继续工作提供了能量。dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。在生物DNA合成中，以及各种PCR（RT-PCR（reversetranscriptionPCR）、Real-timePCR）中起原料作用。

dNTPS作用是能在Taq酶的作用下与模版DNA进行复制，如果直接用脱氧核苷算的话是没有多余的两个磷酸基团的，都知道ATP含有高能磷酸键，dNTPs也含有高能磷酸键，这样就可以在PCR体系中提供能量。

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸dATP三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸dCTPdNTP指三磷酸碱基脱氧核苷酸，指上面任意一种。dNTP"s是它们的复数形式

DNTP 是四种核苷酸，A、U、G、C。的混合物，主要作用在于PCR在第三步延伸的过程中，需要这几种核苷酸，以碱基互补原则，在酶的作用下与你需要扩增的模板链进行连接，从而达到复制模板链的目的。

N代表A U G C，核苷三磷酸。dNTP N代表A T G C 脱氧核苷三磷酸

dNTP代表三磷酸脱氧核苷酸dNMP代表磷酸脱氧核苷酸N可以是A、G嘌呤和C、T嘧啶如dGTP三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGMP磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸

因为在 DNA 复制过程中，dNTP 的焦磷酸掉下来了，变成了 dNMP，同时和上一个碱基连起来了，发生了复制。掉下来的这个焦磷酸分子水解，为 DNA 聚合酶继续工作提供了能量。拓展资料：DNA复制从起始序列开始单向或双向进行。合成DNA双螺旋的两条链是反向平行排列的，其中一条链的起始端与另一条链的末尾端平行排列在一起，每一个复制叉只有一条链是按照从尾到头的正确方向指导新链从头到尾方向合成。根据这条指导链，DNA复制持续向前合成复制叉。参考资料：百度百科，DNA复制

荧光特异标记的四种dNTP分别使用以下四种颜色的荧光染料进行标记：dATP（腺嘌呤）- 蓝色荧光dCTP（胞嘧啶）- 绿色荧光dGTP（鸟嘌呤）- 黄色荧光dTTP（胸腺嘧啶）- 红色荧光这种标记方式常用于各种DNA检测、测序和分析技术中，比如PCR、荧光原位杂交（FISH）等。

dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖） NTP是核苷三磷酸（含核糖） 它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的 N的意思是碱基 比如说dATP就是腺嘌呤脱氧核苷三磷酸

dNTP，deoxy-ribonucleosidetriphosphate（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写。是包括dATP,dGTP,dTTP,dCTP,等在内的统称是四种

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP,deoxy-ribonucleoside triphosphate(三磷酸脱氧核糖核苷酸)的缩写.是dATP,dGTP,dTTP,dCTP的统称,N代表变量指代A、T、G、C、U中的一种. d：deoxy ,“脱氧”的意思.

dNTP,脱氧核糖核苷三磷酸,在生物DNA合成中起原料作用. rNTP,核糖核苷三磷酸,在生物RNA合成中起原料作用. 区别五碳糖不一样,

你知道ATP么？A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTPd指的是deoxy 即脱氧。dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸

高能磷酸键一定是有能量的,dNMP没有这两个高能磷酸键,又要消耗更多的外源能量……别的不说,能量守恒总没错吧……dNTP一定比dNMP能量高,能量高的分子不稳定,容易反应.

dNTP既是复制的原料，又为链延长的过程提供能量。

mg在体系中的浓度一般是1-5mMol/L，dNTPs一般200uMol/L，四种dNTP浓度要相等镁离子是taq酶的辅因子，但浓度太高会产生非特异性扩增dNTPs太多会结合镁离子，所以二者都要适量dNTPs要4度保存

这个问题问得好有模板的DNA和镁离子存在时，在DNA聚合酶的催化下，由游离的3-OH对dNTP的α磷酸发动亲核攻击形成磷酸二酯键，生成DNA，同时释放焦磷酸PPi，焦磷酸水解放能，推动反应向右进行

dTTP（脱氧胸苷三磷酸）。因为胸腺嘧啶是DNA特有的碱基，所以dNTP中的N应该就是T。dTTP是DNA复制的直接前体，在细胞中一般不在其他地方用作供能物质。在人工合成中，一般用来作PCR、DNA测序、DNA标记等。

无明显同源性。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。 dNTP的质量与浓度 dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀 核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接 用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 Mg2+浓度 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。 PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置： 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法， 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性)。 ①变性温度与时间：变性温度低，解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下，93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性，若低于93℃则 需延长时间，但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。 ②退火(复性)温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长 度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内， 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合，提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 ③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 70℃ 60核苷酸/S/酶分子 55℃ 24核苷酸/S/酶分子 高于90℃时， DNA合成几乎不能进行。 PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间，常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。PCR延伸反应的时间，可根据待扩增片段的长度而定，一般1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min是足够 的。3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。 循环次数 循环次数决定PCR扩增程度。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30～40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量亦随之增多。 PCR反应特点 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为： ①引物与模板DNA特异正确的结合； ②碱基配对原则； ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中最小检出率为3个细菌。 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA扩增检测。 PCR扩增产物分析 PCR产物是否为特异性扩增 ，其结果是否准确可靠，必须对其进行严格的分析与鉴定，才能得出正确的结论。PCR产物的分析，可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法。 凝胶电泳分析：PCR产物电泳，EB溴乙锭染色紫外仪下观察，初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致，特别是多重PCR，应用多对引物，其产物片断都应符合预讦的大小，这是起码条件。 琼脂糖凝胶电泳： 通常应用1～2%的琼脂糖凝胶，供检测用。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中，可用于科研及检测分析。 酶切分析：根据PCR产物中限制性内切酶的位点，用相应的酶切、电泳分离后，获得符合理论的片段，此法既能进行产物的鉴定，又能对靶基因分型，还能进行变异性研究。 分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据，也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法。 Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针，与PCR产物杂交。此法既可作特异性鉴定，又可以提高检测PCR产物的灵敏度，还可知其分子量及条带形状，主要用于科研。 斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上，再用内部寡核苷酸探针杂交，观察有无着色斑点，主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析。 核酸序列分析：是检测PCR产物特异性的最可

楼上说的对，复制过程的起始需要引物合成酶先合成一小段RNA作为引物，底物是NTP。

不要紧，dnTP这种东西，就是脱氧核苷酸嘛，性状还是比较稳定的。

酶最好一直放在-20,现用现取,用完再放回-20.引物分贮液和使用液.贮液放-20 ；其他如果常用放在4就行.不常用可小量分装,每份大概就是你常用的一次的量,用时拿出一管就ok,如果一管量大,一次用不完,剩余又冻回-20,反复进行不就是反复冻融了吗.

一般都需要放在—20.反复融冻就是 拿出来融化了 又放回去，很多次这样，酶会失活、DNA会降解。但我们又要做实验用，就需要常用的酶或引物分装成小管 十几次或者20几次用完。其他放到-80保存。

sanger测序是在测序反应中加入四种正常dNTP底物，同时加入四种带有荧光标记的ddNTP。

DNA连接酶

一分子磷酸，一分子脱氧核糖（五碳糖），一分子碱基合成一分子脱氧核糖核苷酸，然后很多个脱氧核糖核苷酸合成DNA。1、物理性质：DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。2、分子结构：DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3"，5"-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫（E.Chargaff）发现不同物种DNA的碱基组成比例不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。3、分布功能：原核细胞的染色体是一个长DNA分子，但是原核细胞没有真正的细胞核。真核细胞核中有不止一条染色体，每条染色体只含一个DNA分子。不过它们一般都比原核细胞中的DNA分子大而且和蛋白质结合在一起。DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息；策划生物有次序地合成细胞和组织组分的时间和空间；确定生物生命周期自始至终的活性和确定生物的个性。除染色体DNA外，有极少量结构不同的DNA存在于真核细胞的线粒体和叶绿体中。DNA病毒的遗传物质也是DNA。

聚合酶链式反应（PCR）：扩增样品中的DNA量和富集众多DNA分子中的一个特定的DNA序列的一种技术。在该反应中，使用与目的DNA序列互补的寡核苷酸作为引物，进行多轮的DNA合成。其中包括DNA变性，引物退火和在Tap DNA聚合酶催化下的DNA合成。DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年发现 ，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于1976年从温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的。它的特性就在于能耐高温，是一个很理想的酶，但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制，它是于1971年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似PCR前两个周期反应）的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由 Dr. Kary B. Mullis发展出的，Dr. Mullis当年服务于PE公司，因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr. Mullis 并于1985年与 Saiki 等人正式表了第一篇相关的论文。此后，PCR的运用一日千里，相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。 〔PCR原理〕DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。〔PCR步骤〕标准的PCR过程分为三步：1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。〔PCR检测〕PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴乙锭）染色凝胶电泳是最最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ,PCR）三步：1 变性：模板DNA加热变性2 退火 引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成杂交链3 延伸 4种dNTP 与 Mg2+ 存在的条件下，DNA合成酶催化以引物为起始点，按5"-3"方向进行延伸。上面三步为一个循环，可使拷贝数到达2*E－6-2*E－7PCR 产物一段双链DNA，是由它的末端引物的5"端决定的。PS:1.首轮扩增，其产物是大小不均一的DNA分子。长度应大于两引物之间的长度。在第二个循环中，如图3，由于5"固定，其产物长度就由等于两引物之间的长度。所以几十个循环后就会产生大量的两引物之间序列。引物设计：1，长度15~30个核苷酸，最多到50个核苷酸左右。（50？为什么？反正太长也没有必要）2, 尽量避免嘌呤和嘧啶堆积的现象。（其实有时很难避免，不是很重要）。3,引物内部不应该形成二级结构，如果引物中有酶切位点时，就会出现引物二聚体。（一般不是很重要）PCR的反应条件1，dNTP浓度过高会加快反映速度，但同时还可以增加碱基的错误掺入率。2， 引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。3，TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增，低则合成产物量减少。TaqDNA聚合酶无校正功能，掺入错误率达2*E-4个核苷酸，一个30个循环的扩增反应0.1％-0.25％总错误率。4， 在90～95度下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94～95度30～60s。时间过长使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破坏增多。5，DNA很快冷却到40～60度使引物和模板结合。引物长度在15～25时退火温度Tm＝4（G＋c）＋（A＋T），一般在45～55度，温度低容易退火但特异性低；温度高，不容易退火但特异性高。退火时间30秒。6，延伸温度一般在70～75度这是TaqDNA聚合酶活性最高（150个／S），当引物在16个碱基以下时可采用缓慢升高温度到70～75度的方法，使在低温下就开始合成。一般<1KB时间1分钟即可。当〈1KB时在较后的循环中延长扩增时间。7循环次数25～30次。无产物时：1，取10ul扩增混合液作模板在进行PCR扩增。2，增加TaqDNA聚合酶浓度3，增加循环次数4，降低退火温度5，加靶DNA量

DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3"-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用；2、3"→5""外切酶活性（校对作用）：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用。当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。以保证复制过程的保真性和准确性；3、5"→3"外切酶活性（切除修复作用）：该活性是从5"→3"方向水解DNA延长链前方的DNA链（即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用），主要产生5"—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。扩展资料： 1、DNA聚合酶可以在每一个新掺入的核苷酸与模板链之间进行仔细地监测。只有在配对正确的情况下，它才会催化核苷酸之间聚合形成磷酸二酯键。2、即使当DNA聚合酶的监测偶然失误，掺入了错误的核苷酸，它还能通过校读的功能纠正错误。参考资料来源：百度百科-DNA聚合酶

100uL体系：水 85uL ，10*buffer 10uL ，F引物 1uL ，R引物 1uL ，dNTP 1uL ，模板 1uL ，rTaq酶 1uL。按这个100uL体系配成20uL体系就行。

能量也是由底物dNTP供给的，底物dNTP在延伸是会断裂一个高能磷酸键，

PCR产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,PCR结束后就可以跑电泳或者测OD值都很快的. 另外,计算PCR的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulTE去溶解产物,也可以用50.

dNTPd代表五碳糖是脱氧核糖N代表A,G,C,TT代表3个PCR合成中的原料是dATP,dGTP,dCTP,dTTP，相应的称呼就是脱氧三磷酸____苷

酶一定要放在-20℃保存保存，这是常识，没有任何争议了。Buffer可以反复冻融，推荐-20℃保存，但是4℃保存也没有任何问题。dNTP的保存一定要注意，千万不要听楼上的山寨回答。首先，它需要严格-20℃保存（其通常stock solution是10mM），但是，当dNTP反复冻融约100次以上时，它会逐渐失去活性，无法与模板结合。所以，我建议在使用dNTA前，将其进行分装，从而达到更好的活性效果。

虽然核酸单体是含有一个磷酸，但是合成时原料是含有三个磷酸的，原因是它们是富于能量的化合物，参与合成过程同时能提供大量能量

"反应总体积20微升，加1.0微升dNTP，装有dNTP管上写的10mM"。这不有了吗？不用计算那么精确。加0.5-1都行

PCR (聚合酶链式反应)反应包括三个基本步骤，即：模板DNA的变性、模板DNA与引物的退火复性、引物的延伸。PCR反应体系包括5种基本成分，依次为：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。1、引物引物是PCR 特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸 的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3"端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3"端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR 失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子 克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。　　引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。2、酶目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。3、dNTPdNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。dNTP储存液：dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱中。dNTP使用浓度在20～200 μmol/L之间。4种dNTP必须等浓度配合以减少错配误差。dNTP使用浓度：在PCR反应中,使用低dNTP浓度,可减少非靶位置启动和延伸时的核苷酸错误掺入。一般可根据靶序列的长度和组成来决定最低dNTP浓度。例如在100μl的反应体系中,4种dNTP的浓度为20μmol/L,可基本满足合成2.6μg DNA或10pmol/L的400bp序列。使用低dNTP浓度(每种dNTP浓度为2μmol/L),能够高度灵敏地(1/107)扩增ras基因点突变的等位基因。4、模板模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀;蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。5、Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。引物是PCR特异性反应的关键，不好的引物严重影响实验的质量，好的引物可以事倍功半;酶的选择一般是看实验的目的，例如克隆长片段，可能就需要高保真的聚合酶;dNTP浓度和Mg2+浓度高了会影响PCR反应特异性。DNA模板中还有蛋白质也会严总影响PCR质量，因此上述5个基本成分质量和浓度必须合理。

[1]聚合作用：在引物RNA"-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3"-OH与5"-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点，则不能与模板配对，无法改变酶的构象而被3"-5"外切酶活性位点所识别并切除之。 　　[2]3"→5"外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3"→5"方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时，由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象，从而被3"→5"外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用，这表明温度升高使DNA生长链3"末端与模板发生分离的机会更多，因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP，而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制，并继续进行DNA的合成。由此推论，3"→5"外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3"→5"外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低，而易发生突变，从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性很低。相反，另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3"→5"外切酶活性比野生型高得多，因此，其DNA复制真实性好，变异率低。可见，3"→5"外切酶活性对DNA复制真实性的维持是十分重要的。 　　[3]5"→3"外切酶活性──切除修复作用：5"→3"外切酶活性就是从5"→3"方向水解DNA生长链前方的DNA链，主要产生5"-脱氧核苷酸。这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用，方向是5"→3"。每次能切除10个核苷酸，而且DNA的聚合作用能刺激5"→3"外切酶活力达10倍以上。因此，这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。对冈崎片段5"末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性。 　　[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3"末端焦磷酸解DNA分子。这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链，可以认为是DNA聚合作用的逆反应，而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA 　　[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

　　[药品名]乙烯雌酚　　[英文名]Diethylstilbestrol　　[别名]乙底酚，乙烯雌酚，人造求偶素，Stilbestro1　　[性状]无色结晶或白色结晶性粉末；几乎无臭。　　[作用与用途]　　①促使女性性器官及副性征正常发育；②促使子宫内膜增生和阴道上皮角化；③减轻妇女更年期或妇科手术后因性腺功能不足而产生的全身性紊乱；④增强子宫收缩，提高子宫对催产素的敏感性；⑤小剂量刺激、而大剂量抑制垂体前叶促性腺激素及催乳激素的分泌；⑥抗雄激素作用。口服吸收良好，经肝缓慢灭活，代谢物从尿和粪便排泄。　　临床用于卵巢功能不全或垂体功能异常引起的各种疾病、闭经、子宫发育不全、功能性子宫出血、绝经期综合征、老年性阴道炎及退奶等。也用于前列腺癌。　　[用法与用量]　　口服，1次O．25。1mg，1日O．25—6mg。　　1．闭经：口服小剂量刺激垂体前叶分泌促性腺激素，1日不超过0．25mg。　　2．用于人工月经周期：每日服0．25mg，连用20天，待月经后再用同法治疗，共3周期。　　3．用于月经周期延长及子宫发育不全：每日服0．1—0．2mg，持续半年，经期停服。　　4．治疗功能性子宫出血：每晚服0．5—1mg，连服20天。　　5．用于绝经期综合征：每日服0．25mg，症状控制后改为每日0．1mg(如同时每日舌下含服甲基睾酮5—10mg，效果更好)。　　6．退奶：每次服5mg，1日2—3次，连服3天，或肌注每日1次4mg，连用3—5天，同时紧束乳房，少进液体。　　7．老年性阴道炎：阴道塞药，每晚塞入1-2片(每片O．2mg)，共用7天。　　8．配合手术用于前列腺癌：每日3mg，3次分服，连用2—3月。维持量每日1mg。　　9．用于因子宫发育不好及子宫颈分泌物粘稠所致不育症；以小剂量促使宫颈粘液稀薄，精子易透入，于月经后每日服O．1mg，共15天，疗程3—6月。　　10．用于稽留流产(怀孕7个月以内死，胎经2个月或以上仍未娩出)：每次服5mg，1日3次，5—7日为一疗程，停药5天，如无效可重复一疗程。　　[注意事项]　　1．长期应用可使子宫内膜增生过度而导致子宫出血与子宫肥大。　　2．应按指定方法服药，中途停药可导致子宫出血。　　3．肝、肾病患者及孕妇禁用。　　[制剂]片剂：每片O．1mg；O．25mg；0．5mg；1mg；2mg。注射液：每支0．5mg(1mt)；1mg(1ml)；2mg(1ml)。　　●去年美国国家卫生研究院发表一项长期研究指出，女性在更年期采用荷尔蒙疗法，会提高罹患乳癌和心脏病的风险后，许多女性大为恐慌，纷纷寻求天然植物性雌激素疗法，希望一举取代荷尔蒙药物，其成效如何，也因而备受关切。　　植物性雌激素广泛存在於植物中，包括牧草、苜宿等都有，最著名的植物性雌激素则首推大豆异黄酮。美国研究发现，西方人乳癌、大肠癌、摄护腺癌等罹患率偏高，有趣的是，在美国的亚裔由於常吃豆腐等豆类制品，这些癌症罹患率向来偏低；进一步研究发现，其中机转和大豆中的异黄酮有关。另外，东方人乳癌罹患率低，也被认为多摄取味增等大豆制品有关。　　大豆异黄酮是一群化合物，具有抗氧化等多重作用，其保健功效也逐渐广为人知。美国食品药物管理局1999年通过大豆食品可标示「有助於预防冠状动脉性心脏病」，甚至指出，每天吃公25公克的大豆蛋白，可以降血脂。而大豆对预防心血管疾病的助益，在临床研究上亦已得到认可。此外，让早期停经妇女补充大豆异黄酮，也证实对预防骨质疏松有正面效果。　　停经妇女最关切的问题仍是：大豆异黄酮等植物性雌激素能否取代荷尔蒙药物，用来改善发热、盗汗等症状？一项研究指出，让停经妇女补充大豆异黄酮，有42％症状获得改善；大豆异黄酮虽是建食品，但在对预防心血管疾病、大肠癌，骨松症等正面效应，均已获证实；以补充大豆异黄酮做为安度更年期良方，优点是它性温和，安全性高、没有明显副作用，但它的作用也较缓慢，因此，不失为可以信赖的辅助疗法。

广州长隆旅游度假区是综合性主题旅游度假区，总占地面积1万亩，集旅游景区、酒店餐饮、娱乐休闲于一体，拥有长隆欢乐世界、长隆国际大马戏、长隆野生动物世界、长隆水上乐园、广州鳄鱼公园、长隆酒店、香江酒店、长隆高尔夫练习中心和香江酒家等设施。 对于喜欢刺激机动游戏的人来说，去长隆欢乐世界玩一次是一个不错的选择。这个游园里有很多机动项目，他的设计有针对成年人的，也有针对小朋友的，这些游戏有不少还是亚洲乃至世界顶级的。而在刺激的同时整个游园的布置又比较卡通可爱。 游园攻略： 1.在广州市区乘坐地铁在汉溪长隆地铁站下车，就到达了长隆欢乐世界； 2.长隆欢乐世界的门票将近200元，可以通过旅行社订票价格会便宜一些，如果喜欢看马戏表演，也可以选择订欢乐世界和大马戏的套票(价格有优惠)，听说这个在晚上表演的大马戏很不错的； 3.最好早上九点就到达长隆欢乐世界门口，因为很可能有很多游人，需要排队进园，同时为了让自己有足够的时间玩每一个项目，早一些到也是一个明智的选择； 4.进园的时候在门口记得要取阅游园指南； 5.十环过山车和急流冲浪等游戏都是很热门的项目，最好一入园就去排队。急流冲浪需要买雨衣，否则会变得象个落汤鸡似的，我当时去玩的时候雨衣是两元一件，如果买了记得不要太快扔掉了，可能还有热带冒险等游戏需要雨衣。 6.带上相机，园内造型很卡通，影下来很好玩。 7.长隆欢乐世界附近有天河城的折扣店，和新一佳超市，吃自助餐的四海一家。 部分游乐场所、景点介绍：长隆欢乐世界由国际著名的主题乐园设计机构主持总体规划，游乐设备均从欧洲原装进口，其设计与技术保持国际领先水准。并创造了八项亚洲及世界之最： 1、垂直过山车被誉为全球最顶尖过山车之王，是长隆欢乐世界2008年春节最新引进的王牌项目，由世界上最知名的过山车制造商Bolliger&Mabillard公司研发制造，是全球最顶尖的过山车和游乐设施。 2、十环过山车荣获吉尼斯世界纪录，全世界第二台（仅在英国有一台）、亚洲首次引进，由全球著名游乐设备提供商Intamin公司设计制造，创造了游乐设备环数最多的吉尼斯世界记录。 3、摩托过山车是东半球首台，其0到80公里弹射式加速仅需2.8秒，可与F1赛车速度相媲美，并获得世界游乐行业协会年度设计金奖。 4、U型滑板是世界最大、亚洲第一台，30多米高的巨型滑板，急速下滑与急速旋转双重体验，是园内最刺激的游乐设备之一。 5、超级大摆锤是世界最新最眩的大型机动游乐设备，由德国HUSS公司原厂进口,号称全球最大摆锤最高时速110公里/小时,最大摆幅240度,带您飞上42米高空,天旋地转之间，令人目炫神迷，惊心动魄。 6、世界最大水陆空特效剧场——国际特技剧场，现正上演《惊爆危机岛》，由全球顶尖特技导演全程监制，国际著名特技大师倾情上演，结合爆破、枪战、烟火、声光、机动设备、滑水、高空特技等多种尖端特效，出奇不意，精彩绝伦，好莱坞动作大片真实再现。 7、亚洲最大的四维影院，现正上演世界最先进立体数码影视技术全新创作的《恐龙天劫》和亚洲首度公映的美国时代华纳四维影院《无敌达菲鸭》，融合9大座椅效果与多项世界顶尖特效，国际一流四维影视班底精心雕琢，长隆独家打造，精彩全球独享。 8、号称世界水上游乐之王、老少皆宜的超级水战也是在亚洲首次引进。 更多关于2020广州长隆欢乐世界旅游指南，进入：https://www.abcgonglue.com/ask/c24f9c1615732102.html?zd查看更多内容

要了解为什么汗国没有进攻欧洲，首先要知道金帐汗国的来历：在成吉思汗死后，蒙古帝国分封给了他的四个嫡子，术赤是长子，但是血缘受到怀疑，因为在铁木真尚未壮大之前，他的夫人同时也是四个嫡子的母亲孛儿帖曾被蔑儿乞部抓走，之后铁木真联合王罕及扎木合三路攻打蔑儿乞数年才将孛儿帖救回，孛儿帖在归途中生了个儿子，铁木真不介意并把他当作自己亲儿子，给他取名术赤(术赤是客人的意思)；那时的蒙古还处在部落氏族社会，财产公有，妻儿的划分并不清楚，因此得到了最西方的土地,在今日俄罗斯的咸海、顿河、伏尔加河一带,称为钦察汗国（因为那时那一带叫做钦察），而欧洲人则称金帐汗国。术赤死时四十九岁，有十四个儿子。长子鄂尔达、次子拔都。鄂尔达自知不及弟弟拔都，所以将继承汗位的权利让给了拔都拔都控制了黑海北岸的海滨土地后，掳获了许多突厥系人民,并编入他的军队，在1230年代后期和1240年代初，他不断攻击伏尔加保加利亚和基辅罗斯的后继国家，结束了这些地区的繁荣景象。拔都率领他的军队持续向西方开拓，在列格尼卡战役和蒂萨河之战之后入侵了波兰和匈牙利。1241年，窝阔台在蒙古本土去世，拔都终止维也纳围城战东归，此后蒙古军队再也没有西进如此之远（那海与一些汗有入侵匈牙利）。1242年拔都在萨莱（今伏尔加河下游阿斯特拉罕附近）定都，正式建立金帐汗国。拔都的弟弟昔班(术赤的第五个儿子)西征立了大功，拔都分给了他一片领地，乌拉尔山以东的鄂毕河与额尔齐斯河之间建立了他自己的营帐，版图最远至哈萨克的阿克托贝，称青帐汗国。拔都的兄长斡儿答让位给拔都，所以拔都将东方锡尔河一带分给哥哥，斡儿答一系建立了白帐汗国。别儿迪别死后，金帐汗绝后，汗位由马麦控制，脱脱迷失后，汗位基本上由白帐汗出任。所以，从上面可以看出，金帐汗国本身地位不稳，不太利于大规模远征，部队也没有成吉思汗时期庞大以及守纪律，并且因为依旧传承老式蒙古部落传统，所以没有太大野心的上级汗王在窝阔台死后没有兴趣继续西进。同时，我们可以从汗国的对外对内政策中看出原因：它的主体民族－俄罗斯人、亚美尼亚人、格鲁吉亚人、切尔克斯人、哥特人、克里米亚希腊人、克里米亚哥特人和其他人，只要他们继续表示敬意，这些附庸国的人永远不会并入汗国。在俄罗斯方面，莫斯科统治者获得征税特权。为了保持控制权，俄罗斯鞑靼军阀经常对其他公国进行惩罚性打击。在另一方面看，古米廖夫说，正是俄罗斯与金帐汗国结盟，才阻止日耳曼人入侵东方。所以，汗国秉持的态度就是你服我就行，是不是我的子民我不在乎，我也没空搭理你们

1.打开一份空白的PowerPoint演示文稿，或打开一份要为其添加背景的已完成的演示文稿。2.若要为一份空白演示文稿中的所有幻灯片添加背景，请指向“视图”菜单上的“母版”，单击“幻灯片母版”，然后在幻灯片母版上执行下列步骤。若要为单张幻灯片添加背景，请只选择一张幻灯片，然后遵循相同的步骤进行操作。3.选择希望用作幻灯片背景的徽标或剪贴画。在“插入”菜单上，指向“图片”，再单击“剪贴画”以从新图片创建背景，或单击“来自文件”以使用文件中的图片。4.选择所需的徽标或剪贴画，并将其插入到演示文稿中。5.在幻灯片上右键单击该徽标或剪贴画，再单击“设置图片格式”。6.在“图片”选项卡上，单击“颜色”框旁边的箭头，单击“冲蚀”（在PowerPoint2000中为“水印”），再单击“确定”7.在徽标或剪贴画仍处于选中状态的情况下，单击鼠标右键，再单击“另存为图片”。将图像保存到所需的位置。从幻灯片中删除原始图像。您将使用刚才准备和保存的透明图像来替换该原始图像。8.在“格式”菜单上，单击“背景”。在“背景”对话框中，单击“背景填充”下的框中的箭头，单击“填充效果”，然后在“图片”选项卡上，单击“选择图片”。9.查找并选择已将其格式设置为透明背景的图片，单击“插入”，单击“确定”，再单击“应用”。透明图像即可作为背景添加到母版幻灯片，并且在您为演示文稿添加的每张新幻灯片上都将显示新背景。如果选择的是单张幻灯片，则背景将添加到所选幻灯片。

太宗窝阔台（1186-1241） 　　1229年即位，在位13年 窝阔台，成吉思汗的第三子，成吉思汗死后，由其四子拖雷监国一年，1229年才由窝阔台即位。1234年，联合宋朝灭掉金国。又攻南宋，1241年，死时年56岁。 窝阔台因为酗酒而突然暴毙。定宗贵由（1206-1248） 1246年即位，在位3年 定宗，名贵由，太宗长子，母乃马真氏。1246年即位，1248年死，时年43岁。贵由即位后沉溺于酒色，从而使身体日益虚弱，他统治的二年中，就常因病而不能亲自料理政务，重大事情只得委付亲信林臣镇海、合答裁决。 公元1248年三月，定宗病卒。宪宗蒙哥（1208-1259） 1251年即位，在位9年 宪宗，姓奇渥温，名蒙哥，成吉思汗的孙子，父拖雷。即位后，一面更改政制，一面继续扩张，1257年占领大理，1259年，蒙哥在攻打四川钓鱼城时，被炮石击伤而死。时年52岁。世祖 圣德神功文武皇帝 薛禅汗 孛儿只斤忽必烈 1264年~1294年 中统。在位三十五年。至元三十一年（公元1294年）病逝。年80岁。成宗 钦明广孝皇帝 完泽笃汗 孛儿只斤铁穆耳 1295年~1307年 （元贞1295年~1297年，大德1297年~1307年）病逝。武宗 仁惠宣孝皇帝 曲律汗 孛儿只斤海山 1308年~1311年 至大。英年病逝。仁宗 圣文钦孝皇帝 普颜笃汗 孛儿只斤爱育黎拔力八达 1312年~1320年 （皇庆1312年~1313年 延祐1314年~1320年）病逝。英宗 睿圣文孝皇帝 格坚汗 孛儿只斤硕德八剌 1321年~1323年 至治无 （泰定帝） 也孙铁木耳孛儿只斤也孙铁木儿 1324年~1328年 泰定无 （天顺帝） 阿里加巴孛儿只斤阿刺吉八 1328年 天顺1323年元英宗、拜住由上都启程返京，途中宿营于上都西南20里南坡店，被铁失等刺杀，史称南坡之变。文宗 圣明元孝皇帝 札牙笃汗 孛儿只斤图帖睦尔 1328年~1329年1329年~1332年 天历1328年~1330年至顺（退位）1330年~1332年（复位）病卒明宗 翼献景孝皇帝 和西拉古图土孛儿只斤和世琜 1329年 被文宗毒死宁宗 冲圣嗣孝皇帝 宜林奇葆孛儿只斤懿璘质班 1332年 至顺 夭折惠宗 顺帝 图干铁木耳孛儿只斤妥欢贴睦尔 1333年~1368年 （至顺1333年 ，元统 1333年~1335年，至元1335年~1340年，至正1341年~1370年）病卒