细胞

（1）用显微镜观察“人的口腔上皮细胞”的实验步骤可概括为：①擦，用纱布擦载玻片、盖玻片②滴，用滴管在载玻片中央滴一滴生理盐水、③刮，用消毒的牙签在口腔上面刮几下、④涂在载玻片上涂匀、⑤盖，用镊子盖上盖玻片、⑥染色．所以，观察“人的口腔上。

在取口腔上皮细胞时正确的步骤是用消毒牙签在洁净的口腔内侧壁上轻轻刮几下，口腔的上下壁上分别有上颌骨和下颌骨的撑托，较硬没有弹性，取的时候易损伤口腔壁，而侧壁上则没有，外面是腮部，较软有弹性，方便易取．故答案为：√

用洁净的纱布将载玻片，盖玻片擦拭干净

上皮细胞不染色看不清楚的,或者用牙签去细胞的时候没下“狠手”,没取到细胞,或者细胞太少.再者就是显微镜的质量一般般,这事不赖你.

因为多数是口腔上皮的角质细胞，部分是中底层细胞，后者很少，容易忽视。如果改良实验方法，使用细胞悬浮法+巴氏染色技术，你就会发现活的细胞了。

一般呈圆形，不过还有不规则的

口腔上皮细胞属于上皮组织（epithelial tissue）由密集排列的上皮细胞和极少量细胞间质构成的动物的基本组织。 上皮细胞是位于皮肤或腔道表层的细胞。 口腔上皮细胞是一种上皮细胞。人的口腔上皮细胞是扁平、多边形的，形状不很规则。 人的口腔顶壁前部为硬腭，后部为软腭，两侧壁为颊部。口腔各壁都有黏膜覆盖。口腔上皮细胞主要分布在口腔两侧颊部。主要由细胞核与细胞质构成，表面有细胞膜。一般彼此相联成膜片状，被覆在机体体表。由内、中、外三个胚层分化形成。但主要来自外胚层和内胚层。结构①细胞间紧密结合，细胞外有一层细胞衣细胞衣就是组成细胞膜的糖蛋白外露的糖链，具有较强的粘着作用，细胞间隙中的钙离子，和细胞间特殊的细胞间连接对细胞的粘合也有重要作用。 　②明显的极性，细胞的两端在结构上和功能上有差别，一端表面朝向体表或体内管、腔、囊的腔面，叫游离面；与游离而相对的另一端，叫基底面。分布在不同部位的上皮组织的细胞游离面，常有不同的特化结构与其特定的功能相适应。如肠上皮有密集的微绒毛扩大了吸收面；呼吸道上皮有能摆动的纤毛，可以排出侵入的灰尘等异物。基底面一般借一层基膜与其深层的结缔组织相连。有些上皮细胞的基底面，还具有扩大细胞基底表面积的胞膜内褶或加强与基膜连接的结构。 　③一般没有血管，其营养由深层结缔组织中的毛细血管透过基膜供应。基膜在血液与上皮组织的物质交换中起着有选择性的分子筛作用。 　④上皮组织内神经末梢的分布较丰富，因此感觉较灵敏。例如，皮肤的表皮和支气管上皮就如此。特征在上皮的垂直切面上，细胞形状不一。紧靠基膜的一层基底细胞为矮柱状，为具有增殖分化能力的干细胞，部分子细胞向浅层移动。基底层以上是数层多边形细胞，再上为几层梭形或扁平细胞。仅靠近表面几层细胞为扁平状，基底层细胞能不断分裂增生，以补充表层衰老或损伤脱落的细胞。复层扁平上皮深层的结缔组织内有丰富的毛细血管，有利于复层扁平上皮的营养。口腔上皮上皮的再生能力较强。而有两种性质不同的再生，即生理性再生和病理性再生。

这就是，包括细胞膜、质、核。

洋葱跟口腔细胞外部结构的区别是前者有细胞壁后者没有，共同点是都有细胞膜；两者的细胞核、内质网、高尔基体、核糖体、线粒体都一样，不同的是洋葱表皮细胞还有液泡。两者都不具有叶绿体，只有叶子细胞有

线粒体普遍存在于动植物细胞中，它是有氧呼吸的主要场所，观察线粒体用口腔上皮细胞，是由于口腔上皮容易取材，其次是含线粒体多，所以通常用口腔上皮细胞

看情况来说：1.如果细胞会快速贴壁，且消化较难，建议不要用离心管培养细胞；2.如果细胞贴壁慢，或者不易贴壁，可以短期培养；3.还有一种专门在离心管里培养细胞的方法，但是那个需要特定的细胞。希望对您有所帮助。

这没什么道理可言，研究结果证实这个比重正好能分离单个核细胞。

物理方法，单核细胞会贴壁，而淋巴细胞不会

分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。分离各种细胞器的方法1、分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2一3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。2、密度梯度离心，用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。

细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到：（一）、差速离心在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。（二）、密度梯度离心用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种（图2-23）。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；2）PH中性或易调为中性；3）浓度大时渗透压不大；4）对细胞无毒。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

答案是差速离心法研究细胞内各种细胞器的组成成分和功能,需要将这些细胞器分离出来,常用的方法是差速离心法.差速离心法是将细胞膜破坏后,形成由各种细胞器和细胞中其他物质组成的匀浆;将匀浆放入离心管,用高速离心机在不同的转速下进行离心,利用不同的离心速度所产生的不同离心力,就能将各种细胞器分离开。ps：密度离心法应用于dna半保留复制验证实验中轻链带(离心管上部),杂合链带(位置居中)和重链带(最靠近离心管底部)在氯化铯溶液中的位置定位.祝楼主新年快乐，新的一年，合家欢乐，幸福美满！！！

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min 的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。1、差速离心差速离心（differential centrifugation）是指在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器（图1）。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3 次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。2、密度梯度离心密度梯度离心（density gradient centrifugation）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种（图2）。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；2）PH 中性或易调为中性；3）浓度大时渗透压不大；4）对细胞无毒。2.1 速度沉降速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种降方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。2.2 等密度沉降等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和是够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不能太平缓。再者，这种方法所需要的力场通常比速率沉降法大10~100 倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。大细胞比小细胞更易受高离心力的损伤，而且停留在等密度介质中的细胞比处在移动中的细胞受到更大的损伤。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖（Ficoll)-泛影葡胺（Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，_W水性高，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。方法：1、在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。2、取肝素抗凝静脉血与等量Hank"s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。3、离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank"s液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带（如下图），单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外，还含有血小板。4、用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入5倍以上体积的Hank"s液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。5、末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。

因为肝细胞匀浆只是部分肝细胞膜破了，而核膜是没有破的，因此上清中都是水和蛋白，而细胞核及里面的核酸在沉淀里面。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖（Ficoll)-泛影葡胺（Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，犌W水性高，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。方法：1、在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。2、取肝素抗凝静脉血与等量Hank"s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。3、离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank"s液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带（如下图），单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外，还含有血小板。4、用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入5倍以上体积的Hank"s液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。5、末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法，此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。因为细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，由于核糖体的质量最小，所以需要的转速最快，处在离心管最上方。扩展资料：分离细胞器的方法：一、差速离心法在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。二、密度梯度离心法用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求是能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；PH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

分离各种细胞器用了差速离心法而DNA那个用了密度梯度离心法。密度梯度离心 又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法； 原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。 差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。

根据不同细胞器的密度不同。http://www.chem17.com/article/show/16081.html细胞离心技术离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。 （一）、差速离心（differential centrifugation） 在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。 在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。 由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。 差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀 （二）、密度梯度离心（density gradient centrifugation） 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；2）PH中性或易调为中性；3）浓度大时渗透压不大；4）对细胞无毒。 A等速度沉降，B等密度沉降 1、速度沉降 速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种降方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。 生物颗粒（细胞或细器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。 2、等密度沉降 等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒。 细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和是够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。 等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不能太平缓。再者，这种方法所需要的力场通常比速率沉降法大10~100倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。大细胞比小细胞更易受高离心力的损伤，而且停留在等密度介质中的细胞比处在移动中的细胞受到更大的损伤。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。http://www.bioon.com/biology/cellular/167879.shtml

单细胞生物

使用超速离心机。超速离心机是一种离心机，其转速可以高达几万转每分钟，可以产生高离心力，适用于分离某些较小的细胞器，如线粒体、溶酶体、内质网等。在超速离心机中，需要使用高速离心离心管或超速离心离心管，这些离心管可以在高速离心下保持稳定，不会破裂或漏液。超速离心机通常还配备了冷却系统，可以在离心过程中降低离心管的温度，避免样品因高温而受到破坏。

亚细胞器的分离需要用超速离心机。细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为，转速为10～25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/mi。

差速离心法，密度梯度离心法。利用超速离心机对细胞组分进行分级分离的常用方法有：差速离心法，密度梯度离心法。细胞分离所属现代词，指的是活细胞繁殖其种类的过程，是一个细胞分裂为两个细胞的过程。

正常情况下人体内是不应该有DNA连接酶的。但是……如果人体感染了某种携带有指导合成DNA连接酶的病毒，而这种病毒又是一种荣源性病毒（即可与人体细胞和平相处）的话，人体细胞内是有可能合成DNA连接酶的……

人体内是存在DNA连接酶的。因为人的DNA在复制时，由于半保留复制，DNA两个链不是一样合成的，一个前导链，一个滞后链，前导链一口气从头合成到头，滞后链要先合成冈崎片段，然后就要用到DNA连接酶把冈崎片段连接起来，才能成为一条完整的链。希望可以帮到你~~

为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢?这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关。DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错，因此，用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除，提高了DNA复制的准确性。RNA引物形成后，由DNA聚合酶Ⅲ催化将第一个脱氧核苷酸按碱基互补原则加在RNA引物3"-OH端而进入DNA链的延伸阶段。

这个是由DNA聚合酶的特性来决定的。DNA聚合酶的功能是将脱氧核苷酸不断的添加到DNA链上的，但是，我们知道，DNA是有极性的，一端是含有裸露羟基的3"-OH端，另一端是含有裸露磷酸基团的5"-P端。而目前所有的DNA聚合酶只能将脱氧核苷酸添加在3"-OH端。那么，矛盾就出来了，在最开始合成DNA时，从哪儿来的3"-OH端呢？为了解决这个矛盾，所以选取了先合成一一很短的RNA链，再将脱氧核苷酸添加到RNA的3"-OH端。之所以选取RNA是因为RNA聚合酶添加核苷酸是没有3"-OH端要求的。补充：在以上我们知道，最初合成的时候是先合成一段RNA，那么，这一段RNA后面的DNA只能往后面去合成，而被RNA所占去的这一段DNA是无法完成复制的，就是说这一段DNA复制的时候会“被丢失”的，此过程是不可逆转的，一旦丢失了就没了。不过，所幸的是，在DNA的两端往往有较长的一段DNA是无意义的，称作端粒，它的作用就是“被丢失”防止有作用的DNA“被丢失”。目前一发现，少数细胞有修复端粒的相关酶，叫端粒合成酶，但是，一般的体细胞是不具备，只有囊胚期细胞、生殖细胞以及某些微生物才具备。谢谢！

DNA复制起始阶段DNA聚合酶需要借助RNA引物后的3‘-OH来将 dNTP连接到先导链上，然后激活复制。而PCR只是一种单纯的扩增技术，DNA和RNA均满足条件。

细胞内DNA复制的引物与PCR引物有何区别【相同点】：　　1. 都以DNA为模板　　2. 都以四种dNTP为底物　　3. 都要DNA聚合酶　　4．都需要Mg2+　　5. 都需要解开双链为2条单链　　6. 都沿着5‘-3"方向聚合【不同点】：　　1. PCR是DNA复制的体外扩增技术　　2. 体内DNA复制半不连续复制，体外PCR连续复制，不产生冈崎片段。　　3. 体内DNA复制是8种酶和蛋白共同参与（dnaB，引物酶，rep蛋白，SSB蛋白，DNA旋转酶，DNA聚合酶3，DNA聚合酶1，连接酶），体内DNA复制的聚合酶在高温时会变性，PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶）。　　4. 生物体内DNA复制需要生物体自身的复制，PCR需要经过高温变性，低温退火和中温延伸过程，要经历三十次循环使特定DNA片段放大数百万倍。　　5. DNA复制需要校对以保证忠实性，PCR不需要校对。　　6. 引物不同：体内DNA复制需要RNA，而且体内引物要除去，PCR需要两个人工合成的DNA引物，不需要切除。　　7. PCR对DNA模板要求不高，纯度要求不严格，用量很低，但是引物的设计十分重要，决定了PCR扩增片段的大小和特异性。

DNA复制起始阶段DNA聚合酶需要借助RNA引物后的3‘-OH来将dNTP连接到先导链上，然后激活复制。而PCR只是一种单纯的扩增技术，DNA和RNA均满足条件。

大哥们，你们读博士的啊，我只是要个高中生的答案

【答案】：B 原核细胞中启动子解旋不需要ATP水解，但是真核细胞中启动子区的解旋需要基本转录因子TFIIH的催化，这一过程需要水解ATP提供能量

【答案】：正确原核细胞与真核细胞都是以小亚单位首先与mRNA起始密码子AUG上游的序列结合，在AUG处开始合成蛋白质的，因此两种机制是相似的，但又不是完全相同的。

真核细胞由原核而来，原核现在还是一个谜呢，有待你去发现喽

真核复制： （1)DNA解旋,由DNA解旋酶和DNA拓扑异构酶催化王成； （2）合成RNA引物，由引物酶催化形成，并使RNA引物与DNA复制子按碱基配对原则相结合。 （3）在DNA聚合酶的帮助下，各种碱基在RNA引物上添加DNA碱基，合成的是前导链。 （4）滞后链的合成，形成岗其片段 （5）核酸酶切除引物RNA，连接酶和DNA聚合酶1连接和填补空隙。 （6）由拓扑异构酶将DNA子链冲洗螺旋话，形成最终的DNA分子； 原核的比较复杂，有3种形式的复制，滚环复制，θ环复制，不对称复制。 （1）滚环复制：如大肠杆菌，其DNA为环状的，不同与真核的线状，所以采用这种方式。其是先再环状的DNA上打开一个缺口，但只是打开一条链，另一条链不打开，然后打开缺口的链逐渐与没有打开的链相分离，与此同时，新的碱基不段的补充，待到一条链分离的时候，另一条链已经合成了。 （2）θ环复制，跟上面有点类似，不过是打开两条链，双向进行，形成θ状。 （3）不对称复制，出现在线粒体，叶绿体或者特殊核酸的微生物上的，因为有些线粒体是单链或者成双链与单练之间的特殊结构，过其复制很复杂，主要是通过添加碱形成的，一般没有什么规律。

1. “DNA的复制过程极为复杂，是生物体内高分子的聚合过程。其基本过程是以……为原料，DNA聚合酶催化的酶促反应。” “DNA复制的高效率和高度忠实性，是由于许多酶与蛋白质参与了复制过程。” “目前认为，在真核生物的细胞中至少有5种DNA聚合酶，即DNA聚合酶α、β、γ、δ和ε。各种DNA聚合酶都有5"→3"核酸外切酶的活性。” “催化RNA引物合成的酶称为引物酶，实际上它是一种特殊的RNA聚合酶。” “解链酶是解开DNA双链的梅，利用ATP能量使碱基对间的氢键断裂，打开DNA双链，形成单股DNA链。 “DNA拓扑异构酶起松弛DNA超螺旋结构的作用，是既能水解又能合成磷酸二酯键的酶，分为Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型切割DNA单链，不需ATP，Ⅱ型切割DNA双链，需ATP提供能量。” “RNA的合成需要多种成分参与，包括DNA模板，四种三磷酸核糖核苷、RNA聚合酶、某些蛋白质因子及必要的无机离子等。” 根据以上引用的原文，可以看出，细胞核中DNA的复制和RNA得转录等活动需要酶的参与，大部分的酶的活动需要ATP供能，极少部分不需ATP供能。2. 组织细胞的功能活动需要能量供应，这种能量由线粒体转化生成的ATP提供。细胞核进行DNA复制和RNA转录时所需的能量由ATP提供，这些ATP在线粒体生成后，经核孔进入细胞核参与细胞核生理活动。3. 腺嘌呤（A）：C5H5N5；鸟嘌呤（G）：C5H5N5O；胞嘧啶（C）：C4H5N3O；尿嘧啶（U）：C4H4N2O2；胸腺嘧啶（T）：C5H6N2O2。

核骨架（又称为核基质），为真核细胞核内的网络结构，是指除核被膜、染色质、核纤层及核仁以外的核内网架体系。它的一个功能就是为DNA的复制提供支架：DNA是以复制环的形式锚定在核骨架上的，核骨架上有DNA复制所需要的酶，如：DNA聚合酶α、DNA引物酶、DNA拓扑异构酶II等。DNA的自主复制序列（ARS）也是结合在核骨架上。

细胞内DNA复制的引物与PCR引物有何区别【相同点】：　　1. 都以DNA为模板　　2. 都以四种dNTP为底物　　3. 都要DNA聚合酶　　4．都需要Mg2+　　5. 都需要解开双链为2条单链　　6. 都沿着5‘-3"方向聚合【不同点】：　　1. PCR是DNA复制的体外扩增技术　　2. 体内DNA复制半不连续复制，体外PCR连续复制，不产生冈崎片段。　　3. 体内DNA复制是8种酶和蛋白共同参与（dnaB，引物酶，rep蛋白，SSB蛋白，DNA旋转酶，DNA聚合酶3，DNA聚合酶1，连接酶），体内DNA复制的聚合酶在高温时会变性，PCR需要耐热的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶）。　　4. 生物体内DNA复制需要生物体自身的复制，PCR需要经过高温变性，低温退火和中温延伸过程，要经历三十次循环使特定DNA片段放大数百万倍。　　5. DNA复制需要校对以保证忠实性，PCR不需要校对。　　6. 引物不同：体内DNA复制需要RNA，而且体内引物要除去，PCR需要两个人工合成的DNA引物，不需要切除。　　7. PCR对DNA模板要求不高，纯度要求不严格，用量很低，但是引物的设计十分重要，决定了PCR扩增片段的大小和特异性。

DNA聚合酶 解旋酶解旋酶： 把两条螺旋的双链解开DNA的复制是一个边解旋复制的过程。复制开始时，DNA分子首先利用细胞提供的能量，在解旋酶的作用下，把两条螺旋的双链解开，这个过程叫解旋。然后，以解开的每一段母链为模板，以周围环境中的四种脱氧核苷酸为原料，按照碱基配对互补配对原则，在DNA聚合酶的作用下，各自合成与母链互补的一段子链，随着解旋酶过程的进行，新合成的子链也不断地延伸，同时，每条子链与其母链盘绕成双螺旋结构，从而各形成一个新的DNA分子。这样，复制结束后，一个DNA分子，通过细胞分裂分配到两个子细胞中去

DNA复制时候需要这种酶，而DNA复制是在细胞核进行的。这种酶位于细胞的细胞核。

在所有能分裂、分泌和产生蛋白类物质的细胞（在人体内除了成熟的红细胞外，几乎都能合成）中均能合成。因为蛋白质的合成需基因的表达，而在基因表达合成mRNA时就需解旋酶的解旋；同样，在DNA的复制时，也要解旋酶解旋后才能完成。

在细胞的核糖体上合成的并且解旋酶通过核孔进入细胞核。

因为破坏细胞膜才能复制。就是一条DNA链在复制是相互分离,然后其他碱基按照分开的一条链进行复制,因为是按照半条DNA链复制的,所以叫半保留复制。半保留复制是：dna在进行复制的时候链间氢键断裂，双链解旋分开，每条链作为模板在其上合成互补链，经过一系列酶（dna聚合酶、解旋酶、链接酶等）的作用生成两个新的dna分子。子代dna分子其中的一条链来自亲代dna，另一条链是新合成的，这种方式称半保留复制。半保留复制的意义：遗传稳定性的分子机制。

一般是提取目的基因，连接到克隆载体，导入受体细胞进行扩增，提取携带目的基因的克隆载体，再将目的基因转接到表达载体，导入受体细胞进行基因表达，这么个大致过程。如果直接连接的表达载体，导入受体细胞再分离目的基因也是如通过测序为了验证目的基因序列的正确性等一些操作。

基因组文库的构建的定义：某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体储存于某一受体菌的群体中，这个群体就称为该生物基因组的文库。 目的：a）分离有用的目的 基因b）保存某种生物的全部基因所以是为了储存

将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术.课题设计.获得F1代小鼠.利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；7、EGE技术（基于Crisprcas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术；4;Cas9mRNA；5；2，利用PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定.得到嵌合鼠.小鼠受精卵原核注射sgRNA/.按照课题设计，完成打靶载体设计和构建;2，基因敲除/，用G418筛选转染后的胚胎干细胞.体外转录sgRNA/。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，得到阳性克隆;敲入效率高，速度快;敲入，可实现多基因，最快2个月即可得到F0代阳性鼠.进一步通过PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，在生命科学;6.设计构建打靶载体；3.获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；3.设计构建识别靶序列的sgRNA，其实不然；4、利用EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠的流程1，5个月得到F1F1代杂合子小鼠、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用、基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程.将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中。基于胚胎干细胞的基因打靶技术？一，并获得F1阳性杂合子小鼠，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆，EGE技术（基于Crisprcas9技术）系统构建简单：1；5。虽然EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，而且其周期长工作量大，订购课题BAC菌.设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；8;Cas9mRNA和打靶载体，并植入到假孕小鼠的子宫内；6。二、多物种基因敲除/

【答案】：B阳性杂交瘤细胞的克隆化（单个细胞培养）方法包括有限稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选仪、软琼脂平板法。

【答案】：B阳性杂交瘤细胞的克隆化（单个细胞培养）方法包括有限稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选仪、软琼脂平板法。其中实验室最常用的是有限稀释法。

克隆技术的应用克隆技术已展示出广阔的应用前景,概括起来大致有以下四个方面：（1）培育优良畜种和生产实验动物；（2）生产转基因动物；（3）生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法；（4）复制濒危的动物物种,保存和传播动物物种资源.以下就生产转基因动物和胚胎干细胞作简要说明. 转基因动物研究是动物生物工程领域中最诱人和最有发展前景的课题之一,转基因动物可作为医用器官移植的供体、作为生物反应器,以及用于家畜遗传改良、创建疾病实验模型等.但目前转基因动物的实际应用并不多,除单一基因修饰的转基因小鼠医学模型较早得到应用外,转基因动物乳腺生物反应器生产药物蛋白的研究时间较长,已进行了10多年,但目前在全世界范围内仅有2例药品进入3期临床试验,6个药品进入2期临床试验；而其农艺性状发生改良、可资畜牧生产应用的转基因家畜品系至今没有诞生.转基因动物制作效率低、定点整合困难所导致的成本过高和调控失灵,以及转基因动物有性繁殖后代遗传性状出现分离、难以保持始祖的优良胜状,是制约当今转基因动物实用化进程的主要原因. 体细胞克隆的成功为转基因动物生产掀起一场新的革命,动物体细胞克隆技术为迅速放大转基因动物所产生的种质创新效果提供了技术可能.采用简便的体细胞转染技术实施目标基因的转移,可以避免家畜生殖细胞来源困难和低效率.同时,采用转基因体细胞系,可以在实验室条件下进行转基因整合预检和性别预选.在核移植前,先把目的外源基因和标记基因（如LagZ基因和新霉素抗生基因）的融合基因导入培养的体细胞中,再通过标记基因的表现来筛选转基因阳性细胞及其克隆,然后把此阳性细胞的核移植到去核卵母细胞中,最后生产出的动物在理论上应是100％的阳性转基因动物.采用此法,Schnieke等（Bio Report,1997）已成功获得6只转基因绵羊,其中3只带有人凝血因子IX基因和标记基因（新霉素抗性基因）,3只带有标记基因,目的外源基因整合率高达50％.Cibelli（Science,1997）同样利用核移植法获得3头转基因牛,证实了该法的有效性.由此可以看出,当今动物克隆技术最重要的应用方向之一,就是高附加值转基因克隆动物的研究开发. 胚胎干细胞（ES）是具有形成所有成年细胞类型潜力的全能干细胞.科学家们一直试图诱导各种干细胞定向分化为特定的组织类型,来替代那些受损的体内组织,比如把产生胰岛素的细胞植入糖尿病患者体内.科学家们已经能够使猪ES细胞转变为跳动的心肌细胞,使人ES细胞生成神经细胞和间充质细胞和使小鼠ES细胞分化为内胚层细胞.这些结果为细胞和组织替代疗法开辟了道路.目前,科学家已成功分离到人ES细胞（Thomson等1998,Science）,而体细胞克隆技术为生产患者自身的ES细胞提供了可能.把患者体细胞移植到去核卵母细胞中形成重组胚,把重组胚体外培养到囊胚,然后从囊胚内分离出ES细胞,获得的ES细胞使之定向分化为所需的特定细胞类型(如神经细胞,肌肉细胞和血细胞）,用于替代疗法.这种核移植法的最终目的是用于干细胞治疗,而非得到克隆个体,科学家们称之为“治疗克隆”. 克隆技术在基础研究中的应用也是很有意义的,它为研究配子和胚胎发生,细胞和组织分化,基因表达调控,核质互作等机理提供了工具. 就医学界而言,现今全世界有成千上万的人因为失去自身的器官而十分痛苦,克隆技术对于这些人来说,无疑是一大福音.试想,一个从小失明的人能在成年后重见光明,一个因交通事故失去双手的人能重新“长”出一双手来……如果克隆的研究获得成功,白血病、帕金森病②、心脏病和癌症等疾病患者带来生的希望.而且这种治疗方法会最大程度地减少副作用的产生. 克隆技术的发展对生物学界也是有很大益处的.目前人类对自然界的各种生物乃至人类本身的了解还是十分有限的.如果能运用先进的克隆技术对某些生物进行研究,那么将大大提高研究的效率,从而加快生物界乃至人类社会发展的进程. 刀,可以用来杀人,也可以用来救人,关键看它掌握在什么人手中.“科学是一柄双刃剑”,善良的人们可以利用它来为人类服务,为人类造福,而邪恶的人们却能用它来危害人类的生存.任何科学技术的发展,都有利有弊,只要人类正确运用克隆技术,那么它一定会有益于人类.如果我们只看到它的弊端,而畏缩不前,那么人类社会就不会有发展,也不会有进步.我们不能因噎废食,因为那样只能使人类固步自封,这就是我们想看到的结果吗?我坚信,只要能正确对待克隆技术,那么人类一定会从中受益匪浅.

在单克隆抗体中，为何需要多次检测细胞阳性，检测阳性，就是能产生特定抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

胞培养动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，生长，增殖。1丶选材：动物胚胎或幼龄动物的器官或组织。2丶细胞分离：使器官组织分离成单个细胞，常用方法，物理：剪刀剪碎，化学法：胰蛋白酶，胶原蛋白酶3丶制作细胞悬浮液，方法：加培养液。形成细胞悬浮液4丶培养细胞株，原代培养，传代培养5丶形成细胞系，传代培养，遗传物质的改变。2细胞融合方法：物理法，电刺激，振动，离心。化学法，聚乙二醇（PEG）强烈的吸水性，有凝聚蛋白质的作用。病毒法，紫外线照射后灭活仙台病毒，丧失了感染活性，保留了融合活性原理：细胞膜的流动性。用途及意义：制备单克隆抗体。3克隆抗体单克隆：由一个细胞通过有丝分裂形成一个细胞群。单克隆抗体：由一个浆细胞通过有丝分裂形成一个细胞群，这个细胞群可以产生特异性抗体。4原理利用了免疫，细胞融合，动物细胞培养等原理。B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。5材料效应B细胞（只有效应B淋巴细胞才能产生出特异性的抗体）骨髓瘤细胞（能无限增殖）6过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。3）细胞融合的关键:1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。6）细胞的冻存与复苏7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。

　　G418的选择细胞原理：　　由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。　　由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。在筛选之前，一定要确定细胞对这一批G418的最佳筛选浓度。尽管如此，特性明确的细胞系G418的最佳用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的最佳用量。　　由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。　　加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞寥寥无几。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。　　为了尽量减少阴性克隆的死亡给阳性克隆造成的不利影响以及增加阳性克隆的得率，可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆。加药后，在高倍镜下，阳性克隆和阴性克隆很容易辨认，在阳性克隆下用记号笔做个标记。然后刮除阴性克隆，消化阳性克隆后继续筛选培养；或者用套环套住阳性克隆，在套环内加胰蛋白酶或EDTA消化，把消化液吸到另外一个新的孔中培养。最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选。　　一般经过4周左右的筛选，得到的阳性克隆都比较稳定。但是外源基因如果没有整合到基因组中的话，目的基因还是很容易丢失的。但是外源基因整合到基因组中的概率太小了，而且是随机整合，会导致表达的目的蛋白的量产生很大差异。随着培养时间的延续，那些丢失了外源基因的细胞和很少表达目的基因的细胞会占据优势，强表达目的蛋白的细胞会越来越少。这样再次筛选是必不可少的。只有经过2次以上的筛选之后才能找到那种我们想要的强分泌目的蛋白的，遗传稳定的细胞克隆。　　G418（Geneticin,遗传霉素） 是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

你好我能回答你的问题、基因工程中的重组质粒如果导入到植物细胞内，首先是重组质粒，还是植物细胞。所以有DNA存在的地方就是导入的地方,DNA存在于细胞核，线粒体，叶绿体、、、但是重组质粒的导入要使细胞表达，所以重组质粒导入到细胞核中了。对于这个问题书上有明确的解释，你可以查阅课本。希望我的回答能让你满意！希望你能采纳！谢谢！

这个问题要具体问题具体分析，真核细胞和原核细胞的表达过程完全不一样，若是在原核细胞中，质粒可以单独存在复制和表达，也可以整合到基因组中得到表达，在整合到基因组中是一个随即的过程，可能会由强启动子引导高表达，也可能不表达。如果未表达，则在细胞分裂时被DNA酶降解掉。在真核细胞中，质粒一般不能直接表达，但是如果选用的质粒载体上是含有转座子元件的，则有可能随即整合至基因组中，通过积阴德表达而共表达。

A、重组质粒的形成是在细胞外完成的，A错误； B、基因工程常用的载体包括质粒、噬菌体和动植物病毒，B错误； C、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料，C正确； D、目的基因进入受体细胞不一定能成功表达，D错误． 故选：C．

在大肠杆菌等细菌中以质粒形式存在，分为严谨型和松弛型两种，严谨型质粒随细胞染色体复制而复制，松弛型质粒在染色体复制停止后可以继续进行自我复制。分子生物学实验在真核细胞中导入重组质粒通常分为随机插入和定向打靶，随机插入是将质粒上的基因信息随机插入整合到宿主染色体组上，表达情况未知，是否能够稳定遗传未知；定向打靶是通过目的基因两端特异性序列将目的基因定向插入到染色体已知位置，能够随宿主细胞染色体组稳定遗传。有什么问题可以追问。

一种是和普通质粒一样游离存在于受体细胞的细胞质内另外一种是插入受体细胞基因组，以前病毒形式存在。

受体是细菌的话，是导入到细胞质即可。动植物细胞需进入细胞核重组质粒能自我复制，随细胞分离而分离，具随机性

科研人员采用新一代测序技术对CHO-K1细胞系进行测序、组装，其基因组大小约为2.45Gb；后结合转录组测序数据，在CHO-K1基因组中共预测了2.4万多个基因，并进一步对预测的基因进行了功能注释。

一种是和普通质粒一样游离存在于受体细胞的细胞质内另外一种是插入受体细胞基因组，以前病毒形式存在。

基因组大小（sizeofgenome）是指单倍体细胞核中的所含的DNA的总量。在可以进行基因组测序之前，生物学家是用质量来衡量不同生物之间基因组的大小。通常使用的单位为pg（10e-12），这个值简称为C-value。通过简单的换算就可以知道大概的碱基的数量。不过，对于已经测序的基因组，直接数数就可以了，如vihole所述。不过对于目前测序的基因组还是很少，估计在1千左右，而现存物种按照最保守的估计也有200万种（Ref1），因此C-value在估计基因含量和生物复杂度方面还是有非常大的应用潜力。关于动物的基因组含量可以在Animalgenomesize网站查到：Ref1：/releases/2003/05/030526103731.htm

你问的这个问题比较难回答, 将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接,然后引入寄主细胞,再筛选获得重组的克隆,按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类. cDNA克隆是以mRNA为原材料,经体外反转录合成互补的DNA(cDNA),再与载体DNA分子连接引入寄主细胞.每一cDNA反映一种mRNA的结构,cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布.特点是： ①有些生物,如RNA病毒没有DNA,只能用cDNA克隆； ②cDNA克隆易筛选,因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆,而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息； ③cDNA能在细菌中表达.cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息,只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息. 1.方法： (1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA. (2)载体DNA的选择： ①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1-200千碱基对(kb).在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备.质粒DNA可通过转化引入寄主菌.在细胞中有两种状态,一是“紧密型”；二是“松驰型”.此外还应具有分子量小,易转化,有一至多个选择标记的特点.质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段,适用于构建原核生物基因文库,cDNA库和次级克隆. ②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链,长约49kb,约含50个基因,其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的,分布在噬菌体DNA两端.中间是非必需区,进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子.λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库. M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌,但不裂解寄主菌.M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主制复,制备方法同质粒.寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体,又能方便地制备单链DNA,用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交. ③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子.是噬菌体－质粒混合物.此类载体分子容量大,可携带45kb的外源DNA片段.也能象一般质粒一样携带小片段DNA,直接转化寄主菌.这类载体常被用来构建高等生物基因文库. (3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一,方法有：①粘性末端连接,DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端,用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端.在连接酶的作用下可恢复原样,有些限制性内切酶虽然识别不同顺序,却能产生相同末端.②平头末端连接,用物理方法制备的DNA往往是平头末端,有些酶也可产生平头末端.平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来,但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接.④人工接头分子连接,在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段,经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端. 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率.以λ或Cos质粒为载体时,形成线性多连体DNA分子,载体与DNA片段的比率高些为佳.以质粒为载体时,形成环状分子,比率常为1∶1. (4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大,转化困难.②转导,病毒类侵染宿主菌的过程称为转导,一般转导的效率比转化高.

克隆是英语单词clone的音译，clone源于希腊文klon，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如杆插和嫁接。 如今，克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。克隆也可以理解为复制、拷贝，就是从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基因与原型完全相同。 1997年 2月，绵羊“多利”诞生的消息披露，立即引起全世界的关注，这头由英国生物学家通过克隆技术培育的克隆绵羊，意味着人类可以利用动物身上的一个体细胞，产生出与这个动物完全相同的生命体，打破了千古不变的自然规律。 克隆一词是由clone音译而来，在音译名出现以前曾有一个意译名--无性繁殖系，指由单一细胞或共同祖先经有丝分裂得到的细胞群体或有机群体。 我们通过细胞培养可以得到一个细胞克隆。在微生物实验时，通过倒平皿，我们可以得到一个个的菌落，这些菌落其实就是细菌的克隆。可见克隆原来是个名词，指一群细胞或一群个体。随着分子生物学的发展，出现了核移植与基因工程之类的操作。核移植操作可以得到重建细胞，重建细胞可以繁殖成一个无性系；基因工程操作可以将某一被选定的基因拼接到质粒的复制子上，随着复制子的复制也能得到DNA分子的无性系。于是，有人就把这类操作称作克隆，即将clone一词由名词转化成动词，并将核移植称为 nuclear cloning（核克隆），通过基因工程得到DNA分子的无性系称为molecular cloning（分子克隆）。在这里克隆是一种实现无性繁殖（asexual reproduction）的操作，是一种显微操作或分子生物学操作，而不是一般意义上的无性繁殖（或无性繁殖操作）。这也许正是克隆一词能够存在而不被无性繁殖替代的原因。 多利羊又称克隆羊，其实是用核克隆技术产生的羊。有人说，只有多利羊才是真正的克隆羊，其他报导，如克隆猪、克隆牛等，由于它们是由胚胎细胞发育而成的，而胚胎细胞是有性繁殖产生的，所以，不是真正意义上的克隆。这是一种误解，是由于对有性过程在时间上把握不准所造成的。有性过程到受精卵、即合子形成时即告结束，合子分裂一旦开始即与有性过程无关了。如果说分裂后的胚胎细胞是有性繁殖产生的，那么，体细胞追究下去也是有性繁殖产生的。但事实上它们都是由合子经有丝分裂逐渐产生的。这就是说，有性繁殖实际上是经过一次有性过程和许多次无性过程，最后产生一个成活的后代而实现的。从胚胎中取出一个细胞使之发育成一个个体，这显然应属于无性繁殖。所以，从这个意义上讲，杜里舒是克隆技术（细胞克隆技术）的创始人，他的将两分裂球时期的细胞分开，使之发育成两个海胆的实验，是最早的克隆实验。而人类的同卵双生双胞胎，就是经天然细胞克隆化产生的。而克隆猪、克隆牛，如果是经核移植育成的，则不管供核细胞是来自早期胚胎细胞，还是已分化细胞，均属于真正意义上的克隆技术，而且是比杜里舒的水平高得多的克隆技术。 这里顺便提一下，因为中文词不能从词形上看出词性，所以，"细胞克隆"一词既可看成名词，又可看成动词。作为名词，细胞克隆指细胞的一个无性繁殖系。作为动词，它与核克隆、分子克隆对应，指用细胞去无性繁殖。为了与前者区别，作者建议该意思可用"细胞克隆化"或"细胞克隆技术"来表达。应用细胞克隆技术，可将细胞克隆成一个无性繁殖的细胞群体，如细胞培养中得到的克隆；也可使克隆后的细胞分化、发育成一个无性繁殖的个体，如杜里舒得到的海胆，某些研究者得到的克隆猪、克隆牛等。 多利羊与其它克隆动物的区别不在于是不是无性繁殖，而在于供核细胞的分化程度。早期胚胎细胞基本上是未分化细胞，即使是成形胚胎的已分化细胞，其细胞分化程度也远低于成年个体的已特化细胞。能将已特化细胞克隆成一个成活的个体，从理论上讲这是一次重大突破。这说明，已特化细胞的遗传结构即使发生了变化，这种变化也不是不可逆的，至少特化至乳腺上皮细胞时还是如此。至于神经细胞、脑细胞的特化是不是不可逆的，也可用核移植的方法检验。不过可以预料，克隆神经细胞，难度肯定要高于乳腺上皮细胞。 话说到这里你一定能理解，为什么说克隆不是复制的同义词了。提起复制，我们最熟悉的就是用复印机复印文件，通过复印得到的复制品与原件是完全一样的。DNA的复制结果就是如此，所以复制用于DNA的合成是一个非常确切的术语。而克隆则是一个过程，克隆产生的个体还需进行胚胎发育和胎后发育，克隆个体与原本之间有一段年龄差异。由于发育过程既受基因主宰又受环境调控，而克隆与其原本尽管基因相同，所处环境却绝不会相同，所以，克隆与其原本是不可能像复制品与原件那样完全一样的。再者，如果克隆个体是由核移植产生的，那么，由于重建细胞的细胞质并非来自原本，而我们知道细胞质中也有遗传物质，它们必然会对个体产生影响，所以，更不能把克隆个体看成是原本的复制品。 克隆个体可以看成是原本的再生，但不是原本的复活。因为：i.克隆个体和原本可以同时存在，ii.尽管从遗传结构上看克隆个体和原本是姐妹（兄弟）关系，但从年龄上看它们却是亲子关系。无性繁殖的生物仍然有"代"的概念，克隆个体也应有"代"的概念。而且，克隆个体的代间界限也是很容易划分的。由原本的体细胞产生的克隆个体是第1代，克隆个体成为成体后从其体细胞再克隆，即可得到第2代克隆个体。理论上讲，正如无性繁殖可以一代接一代地传下去一样，克隆个体的代数也是无止境的。只不过克隆不是自然进行的繁殖，而是人为操作，是否有必要一代代克隆下去值得怀疑。如果没有理论或实际上的意义，可能不会有人愿意做多代克隆的工作。

分子克隆的受体细胞只要有哪两类一个典型的基因克隆实验,主要有以下操作和结果：（1）包括有目的基因在内的DNA片断插入另一个DNA分子（克隆载体,通常是环状的）,形成重组DNA分子.（2）重组DNA分子通过转化或其他类似的方法被导入受体细胞.大肠杆菌是使用较多的受体细胞.（3）在受体细胞中,克隆载体指导重组DNA分子复制,产生许多完全相同的拷贝.（4）当受体细胞分裂时,重组DNA分子的拷贝进入子细胞,克隆载体的复制将在子细胞中继续.（5）大量分裂的受体细胞形成克隆：一个细胞群体,其中每个细胞都含有许多重组DNA分子的拷贝.

你问的这个问题比较难回答，以下希望对你有帮助 将DNA片段(或基因)与载体DNA分子共价连接，然后引入寄主细胞，再筛选获得重组的克隆，按克隆的目的可分为DNA和cDNA克隆两类。 cDNA克隆是以mRNA为原材料，经体外反转录合成互补的DNA(cDNA)，再与载体DNA分子连接引入寄主细胞。每一cDNA反映一种mRNA的结构，cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布。特点是：①有些生物，如RNA病毒没有DNA，只能用cDNA克隆；②cDNA克隆易筛选，因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆，而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息；③cDNA能在细菌中表达。cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息，只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息。1.方法：(1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。(2)载体DNA的选择：①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松驰型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段，适用于构建原核生物基因文库，cDNA库和次级克隆。②噬菌体DNA：常用的λ噬菌体的DNA是双链，长约49kb，约含50个基因，其中50%的基因对噬菌体的生长和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌体DNA两端。中间是非必需区，进行改造后组建一系列具有不同特点的载体分子。λ载体系统最适用于构建真核生物基因文库和cDNA库。 M13噬菌体是一种独特的载体系统，它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌，但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子，象质粒一样自主制复，制备方法同质粒。寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体，又能方便地制备单链DNA，用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。③拷斯(Cos)质粒：是一类带有噬菌体DNA粘性末端顺序的质粒DNA分子。是噬菌体－质粒混合物。此类载体分子容量大，可携带45kb的外源DNA片段。也能象一般质粒一样携带小片段DNA，直接转化寄主菌。这类载体常被用来构建高等生物基因文库。(3)DNA片段与载体连接：DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有：①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。②平头末端连接，用物理方法制备的DNA往往是平头末端，有些酶也可产生平头末端。平头DNA片段可在某些DNA连接酶作用下连接起来，但连接效率不如粘性末端高；③同聚寡核苷酸末端连接。④人工接头分子连接，在平头DNA片段末端加上一段人工合成的、具有某一限制性内切酶识别位点的寡核苷酸片段，经限制性内切酶作用后就会产生粘性末端。 连接反应需注意载体DNA与DNA片段的比率。以λ或Cos质粒为载体时，形成线性多连体DNA分子，载体与DNA片段的比率高些为佳。以质粒为载体时，形成环状分子，比率常为1∶1。(4)引入寄主细胞：常用两种方法：①转化或转染，方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上，待DNA被吸收后铺在平板培养基上，再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子，通常重组分子的转化效率比非重组DNA低，原因是连接效率不高，有许多DNA分子无转化能力，而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大，转化困难。②转导，病毒类侵染宿主菌的过程称为转导，一般转导的效率比转化高。

【答案】：A所谓克隆就是来自同一始祖的相同拷贝的集合，获取同一拷贝的过程称为克隆化，亦称为无性繁殖。从遗传学上讲，分子克隆专指DNA克隆。

标记基因确实可以检测是否进入受体cell，但是有时可能不能表达，其次验证目的基因表达需要检验RNA只能用基因探针！

郭晓东等 研究表明转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对间充质干细胞(MSCs)增殖、向成软骨方向定向分化等生物学行为的影响；TGF-β1促进MSCs增殖并调控其向成软骨方向定向分化、抑制多种炎性介质生物学活性以保护关节软骨。

植物激素通过调控基因的表达而实现其作用。作用的分子机制可能是:植物激素与受体结合,通过信号传递,激活反式作用因子并作用于激素调控基因的顺式作用区,调节基因的转录和翻译。

因为原核生物转录的产所是在细胞质基质，核糖体也存在于细胞质基质，所以可以同时进行，而真核生物转录的产所是在细胞核，而翻译的场所是在细胞质基质，因此必须先转录得到mRNA后，mRNA通过核孔到达细胞质基质之后再进行翻译。转录（Transcription）是遗传信息从DNA流向RNA的过程。即以双链DNA中的确定的一条链（模板链用于转录，编码链不用于转录）为模板，以ATP、CTP、GTP、UTP四种核苷三磷酸为原料，在RNA聚合酶催化下合成RNA的过程。翻译是蛋白质生物合成（基因表达中的一部分，基因表达还包括转录）过程中的第二步（转录为第一步），翻译是根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由DNA通过转录而生成）中“碱基的排列顺序”（核苷酸序列）解码，并生成对应的特定氨基酸序列的过程。扩展资料：转录时，细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA，通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比，转录有很多相同或相似之处，亦有其自己的特点。转录中，一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说，以特定的DNA片段作为模板，以DNA依赖的RNA合成酶作为催化剂，合成前体mRNA。在体内，转录是基因表达的第一阶段，并且是基因调节的主要阶段。转录可产生DNA复制的引物，在反转录病毒感染中也起到重要作用。转录仅以DNA的一条链作为模板。被选为模板的单链叫模板链，又称信息链、无义链；另一条单链叫非模板链，又称编码链，有义链。DNA上的转录区域称为转录单位（transcription unit）。参考资料：百度百科——转录参考资料：百度百科——翻译

基因对细胞周期是怎样调控的细胞周期进程的实现有赖于各级调控因子对细胞周期精确而严密的调控,这些调控因子的核心是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin Dependent Kinase ,CDK)CDK的正性调控因子—细胞周期蛋白(Cyclin)CDK的负性调控因子—细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂(CKI)MPF (M-phase promoting factor ,M 期促发因子)：是M期细胞中的一些可诱导间期细胞提前进入分裂期的因子,它遍存于所有真核生物的M 期细胞中.MPF的组成部分是：催化亚基CDK：量保持恒定,受Cyclin调节调节亚基Cyclin：在细胞周期的不同时相中周期性地积累与分解