细胞

来那度胺本身是促进t细胞还是抑制t细胞T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的T淋巴细胞亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞（Delayed type hypersensitivityT cells,Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；原始的或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；记忆T细胞（Memory T cell,Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测各淋巴细胞亚群：淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），T淋巴细胞其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类：1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。但暂时没有发现记忆T细胞表面存在非常特异的表面标志物，相信随着研究的深入，人们对记忆T细胞将会有一个更深入的了解。

为了得到更纯的细胞组分通常采用的分离技术是：在均匀密度介质中不同离心力下沉降的细胞器组成不同或在梯度介质中离心后分布于不同密度层。细胞器的分离，一般采用差速离心法,此法是利用细胞各组分质量大小不同,在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器,其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。细胞器（organelle）一般认为是散布在细胞质内具有一定形态和功能的微结构或微器官。但对于“细胞器”这一名词的范围，还存在着某些不同意见。 细胞中的细胞器主要有：线粒体、内质网、中心体、叶绿体，高尔基体、核糖体等。它们组成了细胞的基本结构，使细胞能正常的工作，运转。细胞组分的分离方法:离心,包括差速离心、密度梯度离心、速度沉降、等密 度沉降,流式细胞术分选,层析技术、电泳技术等。细胞组分的分析方法:定性分析法包括组织化学技术、免疫荧光技术、免疫电 镜技术等;定量分析法有分光光度法、流式细胞术等。大分子在细胞内的定性与定位研究方法有:免疫荧光技术、免疫电镜技术和原 位杂交等。生物大分子相互作用的研究技术:荧光漂白恢复技术、酵母双杂交技术、荧光 共振能量转移技术等。

将细胞分离的原理有机械法、化学法、酶消化法、酶消化法、流式细胞术。各有优点和缺点。1、机械法：利用物理外力，如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法，将细胞分离开。优点：操作简单，不使用有毒和致癌物质。缺点：对于细胞脆弱的情况，会造成细胞损伤。2、化学法：利用化学试剂溶解细胞间粘连物和细胞本身的粘附物，让细胞分离开。优点：分离效果好，易于扩大规模。缺点：化学试剂对细胞产生毒性和副作用。3、酶消化法：用特定酶对细胞的胞膜和基质进行消化，使细胞释放出来。优点：可以选择特定的酶，在具有选择性的条件下将目标细胞分离出来。缺点：目标细胞因受到消化酶的损伤而死亡。4、酶消化法：利用离心机对不同密度的细胞进行分离。优点：分离效果好，速度快。缺点：离心需要繁琐的操作，不能完全分离所需的细胞类型。5、流式细胞术：利用流式细胞仪对细胞进行单个分选。优点：技术先进，可快速、准确的分离出目标细胞。缺点：设备价格昂贵，需要专业操作人员。

细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。细胞电泳是指在一定PH 值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动

原代细胞是直接取自活组织 例如活组织检查材料 的细胞，并建立用于体外生长。这些细胞经历了非常少的群体倍增，因此与连续 肿瘤或人工永生化 细胞系相比，它们更能代表它们所衍生组织的主要功能成分，使得原代细胞成为更具代表性的体内模型。 原代细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程，获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一，原代细胞分离的方法有很多种：悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等。 人或动物体内 或胚胎组织 由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3 的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、 羊水、胸水或腹水的悬液材料， 最简单的方法是采用 1000r/min 的低速离心 10 分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁 PBS 洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。 二、实体组织材料的分离方法 对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法 物理裂解 和消化分离法。 一 机械分散法 所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内 用九号针 ，使细胞通过针头压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤 常用注射器钝端 使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的软组织。 二 消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块 或糊状 ，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。 消化分离法的操作步骤 1 剪切把组织块剪碎，呈 1~5mm3 大小的组织块。 2 加液漂洗 将碎组织块在平皿 或三角烧瓶 中用无钙镁 PBS 洗 2-3 次 采用倾斜，自然沉降法 。 3 消化 加入消化液 胰蛋白酶或胶原酶或 EDTA 于 37℃水浴中作用适当时间 中间可轻摇 1~2 次 ，若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。胰蛋白酶消化时间不宜过长。 4 弃去消化液 采用倾斜自然沉降或低速离心法尽量弃去消化液。 5 漂洗 将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入，中止消化反应，采用漂洗法洗 2-3 次后，加入完全培养基。 6 机械分散 采用吸管吹打或振荡法，使细胞充分散开后用纱网或 3~4 层无菌纱布过滤后分瓶培养，若要求不高可采用倾斜自然沉降 5~10 分钟，吸上层细胞悬液进行分瓶培养。 注意事项如下 1 组织块必须漂洗 2-3 次以除去组织中的钙、镁离子和血清对胰蛋白酶和 EDTA 的抑制作用。 2 胰蛋白浓度不宜过高，作用时间不能太长，以避免毒性作用。 3 消化后组织不仅要尽量弃去消化液，以避免毒性产生，而且动作要轻，以避免膨松的细胞随漂洗而丢失 三、酶消化法 1）无菌 确保使用无菌设备、试剂和技术收集和处理组织。使用个人防护设备以避免污染。使用0.22微米的膜无菌过滤所有酶和试剂。 2）切块 用无菌剪刀或手术刀将组织标本切成小块 通常为2×4mm ，然后将小块放入选定的缓冲液、培养基或盐溶液中。 3）加酶 将组织清洗三次以消除多余的血液蛋白，然后加入您选择的酶如胶原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，约0.5 mg/ml～1.5mg/ml的酶。 4）孵育 将组织样本在其最佳温度下孵育，通常在37℃下孵育30～90分钟。定期混合或轻轻摇动标本。 5）洗涤 通过轻轻移液来分散细胞 也称为研磨 ，然后，使用细网过滤细胞悬浮液。让细胞沉淀并滗出多余的含液酶;洗两到三次。含有FBS，BSA或其他抑制剂的洗涤溶液也可用于阻止酶消化。 6）分析 将细胞重悬于正确的培养基或缓冲液中，然后定量测定细胞产量和活力。这是细胞分离过程中的重要步骤，因此您可以评估解离技术的结果。大多数研究人员使用血细胞计数器测定细胞产量，并使用台盼蓝重氮染料测量细胞活力。

细胞分离方法在科学和临床实验室中被广泛推广，用于研究、诊断、或临床应用。大多数这些方法被限制于仅小量细胞。对于从大量非靶细胞分离细胞，磁性细胞分选或密度梯度离心是已经建立的技术。一种特别具有挑战性的分离方法是从全血中分离细胞，例如从全血中分离T细胞。为此，在分离或纯化靶细胞之前必须将红细胞排出。例如通过密度梯度离心可进行红细胞的清除；例如通过多功能抗体、多糖、聚乙烯吡咯烷酮、或聚氧乙烯和随后的离心进行外周血单核细胞(PBMC)样本制备、红细胞裂解、或聚集。在靶细胞分离之前排出红细胞的方法例如被公开于EP2597153A1中。在清除红细胞或另外不期需的细胞之后，需要采用接续的分离靶细胞的工艺步骤。

分类: 教育/科学 >> 科学技术 问题描述: 细胞培养、细胞工程、生物学实验中的细胞分离是什么定义？操作过程如何？ 解析: 体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（an culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。 细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养过程中细胞不再形成组织。发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。 1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织； 1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养； 1907年Harrison培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法； 1910、1912年Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法； 1924年Maximow采用双盖片悬滴培养法； 1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。 Earle等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤细胞的细胞株。至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。 组织培养从二十世纪40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出现了很多革新。 在培养容器方面, 由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来，塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。 在培养基方面，从50年代初，Parke、Eagle等设计出合成培养基后，从纯天然培养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清（促细胞生长物），直至60年代设计出无血清培养基。 首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液，以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank"s在1949年设计了Hank"s氏盐溶液。 在培养技术方法方面，革新进展更为迅猛，Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系。 1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。 1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。 1961年Hayflick首建人二倍体细胞系25种，开辟了应用新方向。 从50年代末开始，组织培养技术应用进入了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。 诱变建立遗传缺陷细胞株、杂交瘤技术制备单抗、发展细胞大量培养技术、利用重组技术构建工程细胞株，已成为生物工程的重要生产手段。 在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L一次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68为培养基，最高活细胞密度超过1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2×107cells/ml；2004年德国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。 在流加悬浮培养工艺方面，美国麻省理工Xie Liangzhi等人2000年报道在2L生物反应器中流加培养杂交瘤细胞，通过营养控制降低氨和乳酸的比生成速率，补充培养基包括营养成分、胎牛血清和痕量金属，最大活细胞密度达到1.7×107cells/mL。 细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法，将生物组织分离为单细胞分散系的过程。 一般动物组织经培养，其细胞会延培养基表面平铺生长，自行达到细胞分离的目的。还可用胶原酶处理分离。 而植物组织培养后会形成愈伤组织，要用化学方法才能获得单个细胞（一般用纤维素酶）。

细胞器的分离：制备某种生物大分子时，往往需要采用细胞中某一部分为材料；或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子，通常破碎细胞后，先分离各组分，以防干扰，这对制备—些高难度和高纯度的生物大分子是必要的，细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。

超速离心技术、显色技术、荧光标记技术、免疫电镜技术、原位杂交技术、放射自显影技术、流式细胞仪、显微分光光度测定技术

⑴CD4 细胞的分离：将一定量的T 细胞悬液通过一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培养洗涤，收获的细胞悬液约含85%的CD4 细胞。⑵CD8 细胞分离：用Tris 缓冲液稀释羊抗鼠IgG（浓度为10μg/m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS 洗净。然后将已标记有抗CD8 单克隆抗体的T 细胞（细胞浓度为1×l07/m1)3m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。 用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。研究表明，以肠道双歧杆菌、乳酸杆菌为代表的有益菌群具有广谱的免疫原性，能刺激负责人体免疫的淋巴细胞分裂繁殖，同时还能调动非特异性免疫系统，去“吃”掉包括病毒、细菌、衣原体等在内的各种可致病的外来微生物，产生多种抗体，提高人体免疫能力。对于健康人来说，不妨“食疗”，多吃些乳酸菌饮料；而健康边缘人群，可以用微生态制剂来调节体内微生态平衡。能提高免疫力的食品 1.灵芝：灵芝可增强人体的免疫力，这是因为灵芝含有抗癌效能的多糖体，此外，还含有丰富的锗元素。锗能加速身体的新陈代谢，延缓细胞的衰老，能通过诱导人体产生干扰素而发挥其抗癌作用； 2.新鲜萝卜：因其含有丰富的干扰素诱导剂而具有免疫作用； 3.人参蜂王浆：能提高机体免疫力及内分泌的调节能力，并含具有防癌作用的蜂乳酸； 4.蘑菇、猴头菇、草菇、黑木耳、银耳、车养、百合等：都有明显增强免疫力的作用； 5.香菇：香菇所含的香菇多糖能增强人体免疫力。

细胞剥离技术的实现原理就是利用比头发丝还细的无针头微针，将医用无菌注射水（生理盐水）直接输送到皮下，通过水动力软性剥离作用，定点、定层、定量，精准、精细、精微在表皮、真皮、及皮下破坏衰老迟缓色素堆积的旧细胞来形成微创面（水液会自动避开毛细血管和神经）。皮肤因微创面而启动自愈系统，在修复皮下微创面的过程中，会产生多种细胞修复因子，各类因子相互协作，促进不同层次的细胞再生（胶原蛋白细胞、网状纤维细胞、弹力纤维细胞）。新生的细胞健康有活力水分玻尿酸（ps：人体是含有玻尿酸）充足，而且新生的胶原纤维和黏性蛋白，也称作细胞与细胞之间的粘合剂，通过疗程（1~2次），不断增加皮下的厚度，从而达皱纹抚平、凹陷饱满、松弛收紧、脱垂提升的效果。这也是细胞剥离技术不开刀，无填充祛皱的原因细胞剥离技术可以解决脸部皮肤的五大问题：1、皱纹（如鱼尾纹、抬头纹、法令纹）2、凹陷（皮肤凹陷，细纹）3、脱垂（苹果肌下垂，皮肤下拉）4、松弛5、疤痕但是细胞剥离技术恢复期长，需要操作三次（每月一次），要三个月的恢复期来让效果达到最佳，比玻尿酸注射之后只需4~7天的恢复时间长很多，虽然玻尿酸也能达到除皱的相同的效果，但无填充、自然、肌肤是再生的的优点也是玻尿酸不能掩盖的，具体如何选择，还是要看小姐妹们自己的选择。

免疫细胞（immunecell）主要是指能识别抗原，产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛泛，主要是T、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单该吞噬细胞系统的细胞。免疫细胞分离技术x0dx0a1、淋巴细胞的分离x0dx0a取肝素抗凝血1m1加Hanks液1m1稀释后，沿管壁徐徐滴流叠加盛有2m1淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合，然后2000r／min水平离心20min，管内分为4层，自上而下依次为血浆，单个核细胞，颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离液与血浆的界面上)，沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。x0dx0a2、T细胞及B细胞的分离x0dx0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B细胞，并用少量的RPMIl640培基洗脱，此细胞悬液含有丰富的B细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少，视分离细胞的多少而定。x0dx0ax0dx0a3、CD4细胞及CD8细胞的分离x0dx0a（1）CD4细胞的分离：将一定量的T细胞悬液通过一根SephDdexC—10柱，然后用少量的RPMll640培养洗涤，收获的细胞悬液约含85％的CD4细胞。x0dx0a（2）CD8细胞分离：用Tris缓冲液稀释羊抗鼠IgG(浓度为10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃过夜，没有包被上的抗体用PBS洗净。然后将已标记有抗CD8单克隆抗体的T细胞(细胞浓度为1×l07／m1)3m1加入上述的平皿内，4℃放置2小时，用PBS轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1PBS吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMIl640培基中备用。CD4细胞亦可用此法分离。x0dx0a4、单核巨噬细胞的分离x0dx0a单核巨噬细胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴细胞则无此特性，借此可将这两类细胞分开，其方法简述如下。将待分离的细胞悬液(如实物动物的腹腔液)加入适当大小的塑料或玻璃平皿内，置于37℃C02温箱内温育1小时，然后用RPMI1640培基轻轻漂洗平皿表面，去除非粘附细胞，再将粘附有细胞的平皿表面用上述培基轻轻洗刷，收集粘附的单核巨噬细胞。如果要获得纯度较高的单核巨噬细胞，可重复上述过程。

一、悬浮细胞的分离方法：利用离心方法对细胞进行分离。二、实体组织材料的细胞分离方法：对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法( 物理裂解)和消化分离法。

细胞剥离是一种新型的医疗美容技术，这与生物细胞分离原理（将组织材料分散制成细胞悬液，从中提取目标细胞）并不相同。剥离的专利技术在于定点收紧皮肤的同时，剥离是通过特制无针头微针将小分子盐水，直接输送到皮下，通过水液的软性剥离能力，把皮肤逐层分开，破坏衰老迟缓的细胞在皮下形成微创面，刺激人体自愈自我修复功能，促使新生细胞分裂，不断产生新的细胞和修复物质（人体细胞都有一定的治愈能力）。完全打开剥离通道后，配合自己的营养素活细胞，再次提供细胞修复，皮肤健康所需的营养素直接传达到真皮层，有效地使皮肤凹陷自然生长，从而达到抚平皱纹，皮肤饱满，使皮肤圆润，不再松弛的效果。细胞剥离在生物学上指的是，生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。相比传统拉皮的切口相当的大，需要剃发并且切头皮，容易在耳后形成非常长的一个连续性的疤痕，并且恢复期比较长，并且剥离范围比较广，会容易出现剥离不精准的情况出现，多余的皮肤会被切除，而小切口提升是精准剥离，微创切口，损伤轻，不切头皮，不剃发，术后几乎不留疤痕，并且手术的痛感也大大减少，恢复期也大大缩短。

就是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离，原理就是细胞膜的流动性和透过性

T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞（Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；处女或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；记忆T细胞（Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测各淋巴细胞亚群：淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），T淋巴细胞其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类：1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。但暂时没有发现记忆T细胞表面存在非常特异的表面标志物，相信随着研究的深入，人们对记忆T细胞将会有一个更深入的了解。

1、淋巴细胞亚群的测定，主要用于了解恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是否处于平衡状态。某种细胞亚群所占百分比过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，但一般情况下对疾病的诊断和鉴别无特异性。 2、CD3+CD4+细胞百分比和绝对数、CD4+细胞/CD8+细胞比值在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者显著下降，常作为该病诊断、病情观察和预后判断的重要指标。但应注意，CD4+细胞数和CD4／CD8比值的降低也见于一些恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、器官移植后发生排斥反应以及应用免疫抑制剂治疗的患者。 3、用于白血病细胞免疫表型分析。在某些白血病，如T系急性淋巴细胞白血病细胞CD2、CD3、CD4、CD5、CD8特异性表达；B系急性淋巴细胞性白血病CD19、CD20、CD24阳性表达；慢性淋巴细胞性白血病细胞多表达CD5、CD19、CD20；毛细胞性白血病患者CD19、CD20、CD22呈阳性；NK细胞白血病细胞80％～90％CD16阳性，≥95%CD56阳性。 4、NK细胞测定的临床意义：NK细胞活性下降见于大多数肿瘤患者，特别是中晚期或伴有转移的癌症患者；某些白血病和白血病前期患者，NK细胞活性随病情进展而逐渐降低，以急性期降低最为明显，缓解期患者的NK细胞活性也仍低于正常健康对照；柯萨奇病毒、心肌炎病毒、流感病毒等感染性疾病NK细胞活性下降；某些细菌性和真菌性感染疾病患者也见NK细胞活性低下；免疫缺陷症Chediak-Higashi综合征患者伴有先天性NK细胞缺陷；重症联合免疫缺陷征患者体内T细胞、B细胞、NK细胞的功能同时缺陷。NK细胞活性增高见于多发性骨髓瘤、肺结核等疾病。

T淋巴细胞又分为辅助性T淋巴细胞（CD3+CD4+）和抑制性/细胞毒性T淋巴细胞（CD3+CD8+）。在正常情况下，各群淋巴细胞的数目和相对比例都在一定的范围内。1. 总T（CD3+）淋巴细胞的绝对计数： 就如白细胞计数一样，该细胞的绝对计数(个/ul)一般也在一定范围内。在一些情况下，如病毒感染、化学和物理因素、免疫系统的衰竭或其它功能紊乱、造血系统异常等疾病时此值可能会有异常。曾有人报道淋巴瘤或肿瘤患者的T淋巴细胞数目较高时（在正常范围内）预后较好。2. 辅助T（CD3（+）CD4（+））细胞的绝对计数和百分比。3. 抑制T（CD3（+）CD8（+））细胞的绝对计数和百分比。 如上图所示，无论是CD3（+）CD4（+）还是CD3（+）CD8（+）细胞，都可以进一步划分为更进一步的亚群。4. CD3(+)细胞中的CD4、CD8双阳性或双阴性细胞： 在淋巴细胞的分化增殖异常时，CD4、CD8双阳性或双阴性细胞的数量和百分比会有相应的升高和降低。5. CD4（+）和CD8（+）细胞的比值----T细胞亚群报告中最为简单和明确的指标： 在淋巴细胞的分化中产生的总T细胞的数量是有限的，加之在病变中主要为辅助T或抑制T的升高或降低，因而CD4（+）和CD8（+）细胞的比值会发生相应的变化，该值就成为一个简单和明确的指标. 常用的正常参考值为1.4～2.5。 若其比值＞2.5表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。 CD4／CD8＜1．4一般被称为“免疫抑制”状态，常见于 （1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于0.5； （2）恶性肿瘤； （3）再生障碍性贫血、白血病； （4）某些病毒感染； （5）自体免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等的活动期。 当CD4（+）/CD8（+）降低到1.0以下时我们习惯称之为“倒置”,是较为明显的异常了。也有一组数据建议此比值的参考范围为0.68--2.47，但觉得过宽，该组样本中很可能包括了一些亚健康状态的个体。

1、淋巴细胞亚群的测定，主要用于了解恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是否处于平衡状态。某种细胞亚群所占百分比过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，但一般情况下对疾病的诊断和鉴别无特异性。2、CD3+CD4+细胞百分比和绝对数、CD4+细胞/CD8+细胞比值在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者显著下降，常作为该病诊断、病情观察和预后判断的重要指标。但应注意，CD4+细胞数和CD4／CD8比值的降低也见于一些恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、器官移植后发生排斥反应以及应用免疫抑制剂治疗的患者。3、用于白血病细胞免疫表型分析。在某些白血病，如T系急性淋巴细胞白血病细胞CD2、CD3、CD4、CD5、CD8特异性表达；B系急性淋巴细胞性白血病CD19、CD20、CD24阳性表达；慢性淋巴细胞性白血病细胞多表达CD5、CD19、CD20；毛细胞性白血病患者CD19、CD20、CD22呈阳性；NK细胞白血病细胞80％～90％CD16阳性，≥95%CD56阳性。4、NK细胞测定的临床意义：NK细胞活性下降见于大多数肿瘤患者，特别是中晚期或伴有转移的癌症患者；某些白血病和白血病前期患者，NK细胞活性随病情进展而逐渐降低，以急性期降低最为明显，缓解期患者的NK细胞活性也仍低于正常健康对照；柯萨奇病毒、心肌炎病毒、流感病毒等感染性疾病NK细胞活性下降；某些细菌性和真菌性感染疾病患者也见NK细胞活性低下；免疫缺陷症Chediak-Higashi综合征患者伴有先天性NK细胞缺陷；重症联合免疫缺陷征患者体内T细胞、B细胞、NK细胞的功能同时缺陷。NK细胞活性增高见于多发性骨髓瘤、肺结核等疾病。

和血常规检查一样，用紫色头盖，EDTA钾盐/钠盐抗凝的采血管就可以了

T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞（Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；处女或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；记忆T细胞（Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测各淋巴细胞亚群：淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），T淋巴细胞其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类：1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。但暂时没有发现记忆T细胞表面存在非常特异的表面标志物，相信随着研究的深入，人们对记忆T细胞将会有一个更深入的了解。

【答案】：D不同淋巴亚群之间特性和表面标志不同，因此可以得到分离。常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志的是簇分化抗原，即CD。

[项目名称]T淋巴细胞亚群测定 [参考值] 免疫荧光法、桥联酶免疫检测法、SPA花环法： CD3+细胞阳性率71．5％±6．2％ CD4+细胞阳性率45．7％±5．3％ CD8+细胞阳性率27．9％±5．0％ CD4／cD8比值为1．66±0．33 流式细胞术： CD3+细胞阳性率61％一85％ CD4+细胞阳性率28％～58％ CD8+细胞阳性率19％一48％ CD4/CD8比值为0．9--2.0 [临床意义]T淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，且对某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等)的辅助诊断，分析发病机制，观察疗效及监测预后有重要意义。 1．CD4淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者。 2．CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫病，如SLE、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。 3．CD4／CD8比值异常：艾滋病患者比值显著降低，多在0．5以下。比值降低的还有：SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等。比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。希望对你能有所帮助。

1、淋巴细胞亚群的测定，主要用于了解恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是否处于平衡状态。某种细胞亚群所占百分比过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，但一般情况下对疾病的诊断和鉴别无特异性。 2、CD3+CD4+细胞百分比和绝对数、CD4+细胞/CD8+细胞比值在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者显著下降，常作为该病诊断、病情观察和预后判断的重要指标。但应注意，CD4+细胞数和CD4／CD8比值的降低也见于一些恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、器官移植后发生排斥反应以及应用免疫抑制剂治疗的患者。 3、用于白血病细胞免疫表型分析。在某些白血病，如T系急性淋巴细胞白血病细胞CD2、CD3、CD4、CD5、CD8特异性表达；B系急性淋巴细胞性白血病CD19、CD20、CD24阳性表达；慢性淋巴细胞性白血病细胞多表达CD5、CD19、CD20；毛细胞性白血病患者CD19、CD20、CD22呈阳性；NK细胞白血病细胞80％～90％CD16阳性，≥95%CD56阳性。 4、NK细胞测定的临床意义：NK细胞活性下降见于大多数肿瘤患者，特别是中晚期或伴有转移的癌症患者；某些白血病和白血病前期患者，NK细胞活性随病情进展而逐渐降低，以急性期降低最为明显，缓解期患者的NK细胞活性也仍低于正常健康对照；柯萨奇病毒、心肌炎病毒、流感病毒等感染性疾病NK细胞活性下降；某些细菌性和真菌性感染疾病患者也见NK细胞活性低下；免疫缺陷症Chediak-Higashi综合征患者伴有先天性NK细胞缺陷；重症联合免疫缺陷征患者体内T细胞、B细胞、NK细胞的功能同时缺陷。NK细胞活性增高见于多发性骨髓瘤、肺结核等疾病。

额...T4、T8比例倒置= =额..去查个艾滋病抗体吧

主要在细胞免疫中发挥作用的CD4+T细胞亚群为Th1。

异常结果：1.CD4淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者。2.CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫病，如SLE、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。3.CD4/CD8比值异常：艾滋病患者比值显著降低，多在0.5以下。比值降低的还有：SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等。比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。　需要检查的人群：有相关疾病患者和免疫力低下者均可检查。

河南省人民医院、郑州大学第一附属医院

　　辅助性t细胞亚群分析报告的淋巴细胞高怎么回事　　T淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，且对某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等)的辅助诊断，分析发病机制，观察疗效及监测预后有重要意义。　　比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。

1、淋巴细胞亚群测定主要用于解恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、重症病毒染、自身免疫病等患者机体免疫功能否处于平衡状态某种细胞亚群所占百比高或低都提示存免疫功能紊乱般情况疾病诊断鉴别特异性 2、CD3+CD4+细胞百比绝数、CD4+细胞/CD8+细胞比值获性免疫缺陷综合症（AIDS）患者显著降作该病诊断、病情观察预判断重要指标应注意CD4+细胞数CD4／CD8比值降低见于些恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、器官移植发排斥反应及应用免疫抑制剂治疗患者 3、用于白血病细胞免疫表型析某些白血病T系中国性淋巴细胞白血病细胞CD2、CD3、CD4、CD5、CD8特异性表达；B系中国性淋巴细胞性白血病CD19、CD20、CD24阳性表达；慢性淋巴细胞性白血病细胞表达CD5、CD19、CD20；毛细胞性白血病患者CD19、CD20、CD22呈阳性；NK细胞白血病细胞80％～90％CD16阳性≥95%CD56阳性 4、NK细胞测定临床意义：NK细胞性降见于数肿瘤患者特别晚期或伴转移癌症患者；某些白血病白血病前期患者NK细胞性随病情进展逐渐降低中国性期降低明显缓解期患者NK细胞性仍低于健康照；柯萨奇病毒、肌炎病毒、流病毒等染性疾病NK细胞性降；某些细菌性真菌性染疾病患者见NK细胞性低；免疫缺陷症Chediak-Higashi综合征患者伴先性NK细胞缺陷；重症联合免疫缺陷征患者体内T细胞、B细胞、NK细胞功能同缺陷NK细胞性增高见于发性骨髓瘤、肺结核等疾

可以解释一些疾病发病机理、对患者的免疫功能和预后做出判断以及指导治疗。这些疾病主要包括：1.病毒感染性疾病；2.肿瘤性疾病；3.自身免疫性疾病；4.器官移植患者；5.其他免疫缺陷或异常的患者。常用的正常参考值为1.4～2.5。 若其比值＞2.5表明细胞免疫功能处于“过度活跃”状态，容易出现自体免疫反应。 CD4／CD8＜1．4一般被称为“免疫抑制”状态，常见于 （1）免疫缺陷病，如艾滋病时的比值常显著小于0.5； （2）恶性肿瘤； （3）再生障碍性贫血、白血病； （4）某些病毒感染； （5）自体免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等的活动期。 当CD4（+）/CD8（+）降低到1.0以下时我们习惯称之为“倒置”,是较为明显的异常了。也有一组数据建议此比值的参考范围为0.68--2.47，但觉得过宽，该组样本中很可能包括了一些亚健康状态的个体。

　　*关于建议到风湿类免疫科就诊..　　成熟的T淋巴细胞表面均可表达CD3分子，而CD4、CD8不能同时表达于成熟的T淋巴细胞表面，故可将成熟的T淋巴细胞分为CD4+T细胞和CD8+T细胞二个亚群。血液中T淋巴细胞亚群的检测是观察机体细胞免疫水平的重要方法，对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要作用。　　【正常参考值】　　CD3 65.3～77.7 %　　CD4 40.4～51.0 %　　CD8 22.9～32.9 %　　CD4/CD8 1.33～1.99 %　　【异常结果分析】　　CD3下降常见于①恶性肿瘤；②自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等；③先天性免疫缺陷病,艾滋病；④接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂。CD3上升则见于慢性活动性肝炎、重症肌无力等。　　CD4／CD8的比值做为免疫调节的一项指标，正常值约1.4～2.0，若其比值＞2.0或＜1.4，表明细胞免疫功能紊乱。CD4／CD8＜1．4常见于①免疫缺陷病，如艾滋病的比值常小于0.5；②恶性肿瘤；③再生障碍性贫血，某些白血病；④某些病毒感染。CD4／CD8＞2.0常见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。　　*对t细胞亚群 红细胞增多的解释　　T细胞是不均一的群体，按其抗原识别受体，可将T细胞分为二大类。一类是TCRαβ、T细胞，另一类是TCRγδ细胞　　TCRαβT细胞也是不均一的群体，根据其表型（phenotype）即其细胞表面的特征性分子的不同，可将成熟T细胞分为二个亚类（subsets）即CD4+T细胞和CD8+细胞。　　根据TCRαβT细胞的功能可将其分为二类。一类为调节性T细胞，可包括辅助性T细胞（helper T lymphocte,TH）和抑制性T细胞（suppressor T lymphocyte,Ts）。另一类为效应性T细胞（effector T cell）,可包括杀伤性T细胞（eytolytie T cell,CTL,或TC）和迟发型超敏性T细胞（delayed type hypersensitivity T lymphoctye,TDTH）。　　T细胞可随血流及淋巴分布于体内各部位，在正常情况下，T细胞在周围组织中的数目是相对稳定的。如在胸导管淋巴液中可占90%，在脾中约占30%，淋巴节中约占75%，末梢血中可占60%～80%。CD4+和CD8+细胞的比例，在周围各组织中大致相同，即CD4+约占60%，CD8+约占30%。CD8+的比值在正常人约为2，若其比值＜1.0或＞2.0可视调节细胞（TH/TS）比例异常，与临床一些疾病相关。可应用抗各种表型抗原的单克隆抗体检测全T细胞的数量及其亚类（（TH/TS）的比值，常有助于疾病的诊断。　　T淋巴细胞是机体免疫细胞中数目最多,作用最重要的功能细胞.T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群是重要的免疫调节细胞.中小强度有规律的运动提高CD4+/CD8+比值,增强机体T淋巴细胞的免疫功能;而大强度、力竭运动则降低CD4+/CD8+比值,减弱T淋巴细胞的免疫功能.　　红细胞增多分为3类疾病,各具特点: 相对性红细胞增多也称假性红细胞增多症,由于腹泻、烧伤、休克等失水,引起血液浓缩,致红细胞相对增多,只要补充液体后便可纠正;所以,这种病因明确,治疗也容易.

T细胞是受到抗原的刺激后才会增殖分化形成效应T细胞，记忆T细胞以及淋巴因子，而淋巴因子作用是加强效应T细胞和B细胞的作用，而当同种抗原再次进入身体，那么记忆T细胞会增值分化成为效应T细胞从而能迅速地裂解靶细胞（注：记忆细胞会增值分化成效应细胞）

T细胞包括未致敏的T细胞、记忆T细胞、辅助T细胞、细胞毒T细胞NK是自然杀伤细胞。这是一种机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。生物学功能一：自然杀伤活性生物学功能二：分泌细胞因子

当然能导出了。有几个方法。如果你用的是BD的Diva软件，在记录所有数据后。在Experiment栏目上点右键，会有一个batchanalysis的选项。点击后，会有几个结果输出选项，包括PDF打印。统计数据输出等等。你可以根据需要选择，并指定文件路径。就可以得到数据了。

提高免疫力德国精神病研究所的睡眠专家发现，中午1点是人在白天一个明显的睡眠高峰。这时睡个短觉，可有效刺激体内淋巴细胞，增强免疫细胞活跃性。

建议检查一下有没有什么病毒感染,如巨细胞病毒、EB病毒、、弓形体等。CD19阳性细胞数升高最多见于各种病毒感染尤其是慢性感染,应根据具体感染的病毒选择性应用抗病毒药物。B淋巴细胞数减少也主要是见于病毒感染,淋巴瘤化疗及美罗华治疗也会引起B淋巴细胞减少。祝早日康复。

简单的概括：1 先在FSC/SSC散点图gate出淋巴细胞2 然后把淋巴细胞显示到柱状图，gate出CD3阳性的（T细胞）3 再把T细胞显示到散点图，横坐标，纵坐标分别为CD4和CD8

最常见的是分析CD4， CD8亚群。先在FSC， SSC散点图上划出淋巴细胞gate。然后在此gate基础上选取T细胞标志染色阳性的细胞群（一般是CD3）。在把CD34阳性的细胞根据CD4 和CD8染色情况形式为散点图，得到CD4+/CD8-, CD4-/CD8+, 以及双阳性的比率。如果还有其他细胞标志的染色，再进一步分析。

你的检查报告是较常用的细胞免疫功能检查，可大致判断患者的细胞免疫功能状态 他的结果都在正常范围，没发现问题，他的症状与这些结果无关 可考虑查一下结核抗体和伤寒的肥达反应 平时要注意保暖！

T细胞亚群：按功能不同，分为辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、调节性T细胞；按所分泌细胞因子类型不同，分为Th1细胞和Th2细胞等

应用CD4和CD8单克隆抗体可将外周淋巴器官或外周血中的T细胞分为CD4 CD8-和CD4-CD8 两个主要的亚群。每个亚群按照某些表面标志和功能又可分为不同的功能亚群。一CD4阳性细胞群⒈　应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，已发现小鼠CD4阳性细胞群是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2，主要区别见表7-6。Th1细胞能合成IL-2、IFN-γ、，LT、IL-3、TNF-α和GM-CSF，但不能合成IL-4、ⅡL-5、IL-6、IL-10和IL-13；而Th2能合成TNF-α、IL-3、GM-CSF、IL-4、IL-5、IL-6、ⅡL-10（细胞因子合成抑制因子，CSIF）和IL-13，不能合成IL-2、IFN-γ和LT。此外Th1和Th2都能分泌三巨噬细胞炎症蛋白和前脑啡肽原。Th1和Th2都能辅助B合成抗体，但辅助的强度和性质不同。体外实验表明，IL-4明显促进B细胞合成和分泌IgE，如使LPS刺激小鼠B细胞合成IgE能力增强10-100倍。少量IFN-γ能完全阴断IL-4对IgE合成的促进作用。Th2分泌IL-4对IgE合成有正调节作用，而Th1分泌IFN-γ则起负调节作用。此外，Th2通过分泌IL-4和IL-5辅助IgA合成，分泌IL-10（CSIF），抑制Th1细胞合成细胞因子，而Th1对IgG1合成则有抑制作用，但辅助其它几种类型Ig的合成。由于Th1和Th2合成淋巴因子的种类不同，因而介导不同的超敏反应。IL-3和IL-4均能促进肥大细胞增殖，且相互有协同作用，IL-5除辅助B细胞合成IgA外，还能刺激骨髓嗜酸性粒细胞的集落形成，因而Th2与速发型超敏反应关系密切。Th1通过产生IFN-γ阻断IgE合成，对速发型超敏反应有抑制作用。Th1与迟发型超敏反应有关，可能与IL-2、IFN-γ等对巨噬细胞活化和促进CTL分化作用有关，此外LT也有直接杀伤靶细胞作用。两群Th克隆均能诱导抗原提呈细胞（APC）表达MHCⅡ类抗原，Th1通过IFN-γ诱导Mφ表达Ia抗原，而Th2通过IL-4对Mφ和B细胞Ia抗原表达起正调节作用。在人类Th1和Th2细胞亚群尚未得到最后证实。从发表资料来看，CD4 CD45RO 前体细胞向Th2效应细胞分化，而IFN-γ则对前体细胞向Th2分化过程起抑制作用，因此IL-4和IFN-γ在决定CD4 CD45RO 前体细胞向Th1或Th2分化过程中起着重要的调节作用。人T细胞经多克隆活化后，在CD4阳性细胞中IL-4mRNA阳性比便不到5%，而60%的CD4 细胞有IFN-γ和IL-2mRNA的转录。⒉抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群　应用CD45RA、CD45RO、CD29和CD31单克隆抗体可将CD4阳性细胞群分为抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群。⑴CD31：发现CD31是一种新的、激活后表达水平不发生明显变化的抑制细胞诱导亚群的表面标记。CD31是一种血小板-内皮细胞胞粘附分子（PECAMgpⅡa），分子量为140kDa，其结构属于免疫球蛋白超家族成员。从外周血新鲜分离的CD4细胞中，CD31McAb主要与CD45RA亚群反应，对B细胞合成IgG辅助作用不明显，对ConA和自身MHC（自身MLR）反应较为敏感；而CD31-的CD4细胞群中，发现有大量辅助B细胞合成IgG的活性和对某些抗原刺激的回忆反应。CD45RA 的CD4细胞大激活后，尽管细胞表面丢失CD45RA，但表面CD31的表达仍不发生明显变化；而CD45RO CD45RA-的CD4细胞激活后不能获得CD31表达。由于CD31在CD4细胞激活后仍不变化，对于鉴别抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群是一种有用的标志。许多粘附分子如CD11a/CD18(LFA-1)LFA-3,CD2和CD29（VLAβ链）主要表达在CD45RO T细胞表面。而CD31则表达在CD45RA CD4细胞表面。抗CD31McAb作用于naiveT细胞能触发其VLA-4介导的粘附作用。内皮细胞表面CD31及其配体与T细胞表面CD31及其配体相互作用很可能触发整合素介导的粘附作用。CD31如何参与CD45RA CD4 T细胞功能以及诱导抑制性T细胞产生还有待进一步研究。⑵CD45：CD45为异构型分子。CD45细胞膜外部多肽链可由A、B和C三种外显子编码。人幼稚T细胞只表达被抗CD45RA识别的CD45A型；记忆T细胞不表达任何A、B、C外显子产物而被抗CD45RO识别。抗CD45RA和抗CD45RO识别的都是休止型细胞，抗CD45RO所识别的记忆T细胞往往也可低水平表达一系列活化表面标记，如CD25、MHCⅡ类抗原、CD54、CD26等，提示这类细胞可能新近被激活过，由此推论记忆T细胞可能是由于持久性抗原或交叉抗原的低剂量、持续刺激得以维持其长时间存活。体外实验观察到细胞活化后见有从CD45RA向CD45RO的单向性转变，这与幼稚T细胞向记忆T细胞分化相平行。⑶自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核细胞等非T细胞在体外培养时能诱导某些自身T细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞的应（autologousmixed　lymphocytereactionAMLR）。这一部分T细胞称为自身反应性T细胞。作为刺激细胞的B细胞和单核细胞主要是通过其细胞表面的MHCⅡ类抗原来刺激自身反应性T细胞，在体外培养时加入抗MHCⅡ类抗原的抗体可阻断AMLR。可能是机体的一种免疫调节机制。二CD8阳性细胞群根据CD28阳性或阴性可将CD8 细胞分为细胞毒性T细胞（CD8 CD28+）和抑制性T细胞（CD8 CD28-）。CD28McAb能与60-80%T细胞发生反应，包括全部CD4细胞和部分CD8细胞。⒈在人类CTL表型为CD3 CD4-8 CD28。小鼠CTL表型为Thy-1 、Lyt-1 、Lyt-2 /Lyt-3。⑴CTL的分化：静止的CTL以前体细胞（precursor）（CTL-P）形式存在，外来抗原进入机体被抗原提呈细胞（APC）加工处理，形成外来抗原与APC自身MHcI类抗原的复合物，被相应CTL克隆细胞膜表面TCR/CD3所识别，抗原刺激信号和APC释放IL-1共同存在的条件下，CTL-p被活化，并表达IL-2R、IL-4R、IL-6R等多种细胞因子受体，在IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等细胞因子诱导下，迅速增殖，并分化为成熟的效应杀伤性T细胞（effectorCTL）。CTL具有识别抗原的特异性，即能杀伤具有特定的外来抗原（如病毒感染靶细胞膜表面的病毒抗原）与自身MHcI类抗原结合的复合物的靶细胞。有关CTL杀伤靶细胞受到MHCI类抗原的限制，从肿瘤组织周围分离获得的CTL称为肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyteTIL）。TIL在体外加IL-2培养后，具有很高的杀伤肿瘤作用，已用于临床的肿瘤治疗。⑵CTL的识别机制：多种粘附分子参与CTL对靶细胞的识别和粘附，主要有：①LFA-1/ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3，可溶性ICAM-1（sICAM-1）可抑制CTL杀伤肿瘤细胞；②CD2/LFA-3（CD58），抗CD2McAb或抗CD58McAb均可抑制CTL效应细胞对靶细胞的杀伤；③CD8/MHcI类抗原的非多态性结构域。⑶CTL的杀伤机制：TCL杀伤靶细胞的机理认为主要通过释放多种的介质和因子介导的。①穿孔素（perforin）：又称成孔蛋白（pore-fomingprotein,PFP）、C9相关蛋白（C9relatedprotein）或溶细胞素（cytolysin），贮存于电子稠密胞浆颗粒（electron-densecytoplasmicgranules），成熟的穿孔素分子由534个氨基酸残基组成，分子量为56-75kDa，IP为6.4，穿孔素分子中央部位170-390之间的氨基酸序列与C9328-560氨酸酸序列约有20%同源性，这个区域与穿孔素和C9的多聚化和以管状形式插入到细胞膜有关。在杀伤相时，CTL细胞脱颗粒，穿孔素从颗粒中释放，在Ca2 存在下，插入靶细胞膜上，并多聚化形成管状的多聚穿孔素（polyperforin），约含12-16个穿孔素分子，分子量可达1000kDa。多聚穿孔素在靶细胞膜上形成穿膜的管状结构，内径平均16nm。这种异常的通道使Na 、水分进入靶细胞内，K 及大分子物质（如蛋白质）从靶细胞内流出，改变细胞渗透压，最终导致细胞溶解。此过程与补体介导的溶细胞过程类似，溶解细胞过程比较迅速。CTL本身可能释放A型硫酸软骨素蛋白聚糖（proteoglycansofchondroitinsulphateAtype）、硫酸软骨素A限制因子（homologousrestrictionfactor,HRF），因此可避免穿孔素对CTL自身细胞的攻击。②丝氨酸酯酶（serineestersse）：活化CTL释放多种丝氨酸酯酶，如CTLA-1（又称CCP1或granzymeB）、CTLA-3（又称H因子或granzymeA），其作用可能类似补体激活过程中的酯酶作用，通过活化穿孔素而促进杀伤作用。⒉Ts和Ts亚群　抑制性T细胞（suppressorTlymphocyteTs）对免疫应答有重要的负调节功能，抑制性T细胞功能的异常，常与T自身免疫性疾病、第I型超敏反应等疾病发生有关。⑴抑制性T细胞的证实：绵羊红细胞（sheepredbloodcellSRBC）对于小鼠是良好的免疫原，合适剂量的SRBC可诱导小鼠产生高效价的抗SRBC抗体。当过高剂量SRBC免疫小鼠时，则抗体合成水平反而明显下降，称为高剂量免疫耐受。动物实验研究发现，将高剂量免疫耐受小鼠脾细胞转移到免疫原剂量刺激的小鼠体内时，则小鼠抗体应答水平明显下降。如高剂量免疫耐受小鼠脾细胞经抗Thy-1和补体处理后再转移到免疫原剂量免疫的小鼠体内，则高剂量免疫耐受小鼠脾细胞的抑制作用消失。实验证明了在高剂量免疫耐受小鼠的脾细胞中存在有抑制作用的T细胞。这种抑制细胞的表型为CD3 CD4-CD8 （小鼠CD8单抗常用Lyt-2）。人的抑制性T细胞表型为CD3 CD4-CD8 CD28-。Ts细胞不仅对B细胞合成和分泌抗体有抑制作用，而且对Th辅助作用、迟发型超敏反应以及Tc介导的细胞毒作用都有负调节作用。⑵Ts细胞的亚群：Ts细胞还可分为Ts1、Ts2和Ts3不同亚群，分别起着诱导抑制、转导抑制和发挥抑制效应的作用。它们之间相互作用的确切机理还不十分清楚，可能是通过释放可溶性介质相互作用的。Ts1（Tsi，抗原特异性抑制性T细胞）分泌TsF1（TsiF，抑制诱导因子）→作用于Ts2（Tst，抑制转导细胞），分泌TsF2（TstF）→作用于Ts3（Tse，抑制效应细胞），分泌Ts3F（TseF），作用于Th细胞，通过对Th的抑制作用，从而对各种免疫功能起负调节作用。Ts细胞群具有高度异质性，除Ts1、Ts2、Ts3亚群外，还有一群反抑制性T细胞亚群（contra-suppressorTcel，Tcsl）。Tcs活化后分泌反抑制性T细胞因子TcsF，直接作用于Th细胞，解除Ts细胞的抑制作用，使Th细胞恢复辅助活性。

T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞（Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；处女或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；记忆T细胞（Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测各淋巴细胞亚群：淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），T淋巴细胞其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类：1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。但暂时没有发现记忆T细胞表面存在非常特异的表面标志物，相信随着研究的深入，人们对记忆T细胞将会有一个更深入的了解。

上一期，跟大家简单介绍了 下单细胞ATAC的背景知识点及其10x ATAC基础数据的获取方式 。接下来就带大家从fragment.csv、singlecell.csv、peaks matrix等数据出发，做单细胞ATAC的亚群分析。 与单细胞转录组类似，单细胞ATAC的分析流程也主要包括细胞质控、peaks标准化及其降维分群、marker基因的鉴定等几个步骤。常用的单细胞ATAC分析流程软件包含 cell-ranger-atac、Signac和ArchR等。 单细胞ATAC的质控点一般包含以下几个方面：样本重复（biological replicates），bulkATAC vs scATAC的相关性、fragment length distribution、per nucleus read-depth、transcription start site (TSS) enrichment、双细胞比例等。 前面提到的样本相关性和fragments的长度分布主要是从整体水平上检查我们的单个样本数据的可靠性。 而要去掉不符合质控的细胞，我们主要从 fragments 数目 和 TSS enrichment score 这两点出发。 U0001f449 fragments 数目：一般指单个细胞（barcode）所属的total fragments数目。这个不同的软件具体的定义不同，比如cell-ranger-atac和Signac指peaks所属区域的fragments 数目，其中singlecell.csv文件中peak_region_fragments列便是指fragments 数目，而ArchR是指全基因组所有的fragments 数（这个跟该软件的分析策略有关，后面会提到）。 备注：fragments 数目&TSS enrichment score的阈值不仅与所用软件具体的计算公式有关（不同的软件具体的参数可能不同），也与自己数据的实际情况有关。比如哺乳动物和植物的单细胞ATAC数据TSS enrichment score就不能用相同的指标cutoff来衡量，一般来说哺乳动物的TSS enrichment score值要整体偏高些。 双细胞预测几乎是所有单细胞测序技术都得考虑的一个问题，从原理来说，我们每个barcode就是一个细胞，但是因为所有的实验技术都不是100%完美的，因此往往会有一个barcode所包裹的油滴进来2个细胞。 对于10x数据来说，即使在使用标准试剂盒时，也可能有超过5%的细胞属于双细胞，这对聚类产生了重大影响。特别是在发育/轨迹分析中十分受影响，因为doublets看起来像是两种细胞类型的混合物，这可能与中间细胞类型或细胞状态混淆。 为了预测哪些“细胞”实际上是双细胞的，ArchR会从我们真实的数据中随机模拟产生混合的“双细胞”数据，这些“双细胞”数据与我们所有细胞一起做降维并UMAP可视化（"双细胞"会投影到UMAP中，并识别它们邻近的细胞），在这个过程中，ArchR会计算每个细胞的Doublet Enrichment，值越大，表示该细胞是双细胞的可能性越大。 与单细胞RNA(scRNA-seq)相比，scATAC-seq数据由于其高维度和稀疏性而更具计算分析挑战性。主要体现在标准化和降维，这两大步骤跟单细胞转录组分析所用的统计学原理完全不同，以下为归纳总结的具体内容，如下表所示： 备注：TF-IDF & LSI都是自然语言常用的统计学方法。 获得peak matrix后，跟基因类似，我们必须对其标准化。因为单细胞ATAC测的是DNA序列，对于二倍体物种来说，同一个位置最多有2套DNA序列，这便是单细胞ATAC peak matrix稀疏性的最大根源（单细胞转录组因测的是RNA，高表达的基因往往有多个转录分子）。因此，从数据实际情况出发，单细胞ATAC采取的是log(TF-IDF)( Term frequency-inverse document frequency) 标准化，简称文档频率法。 所有高维数据的分析都是采取降维的方式从多维到低纬的策略，之后还可以再次降维成2个维度并可视化（比如TSNE和UMAP）。我们对peaks是采取LSI降维的方式。 与单细胞转录组类似，降维后的单细胞ATAC数据也同样可以采取graph-based clustering的分群方法。Graph-based图聚类算法包括两步：首先用降维（PCA或者LSI）的数据构建一个细胞间的k近邻稀疏矩阵，即将一个细胞与其欧式距离上最近的k个细胞聚为一类，然后在此基础上用Louvain算法进行模块优化(Blondel, Guillaume, Lambiotte, & Lefebvre, 2008)，旨在找到图中高度连接的模块。最后通过层次聚类将位于同一区域内没有差异表达基因(B-H adjusted p-value 低于0.05)的cluster进一步融合，重复该过程直到没有clusters可以合并。 备注：Signac和ArchR都是直接调用Seurat包的FindClusters()函数用不同分辨率来分群的。 细胞分群后，我们需要知道每个cluster属于什么细胞类型，也就是细胞命名。我们知道，单细胞转录组主要是依据每个cluster的marker基因来判断细胞类型的。那么 对于单细胞ATAC，是不是也可以定义出每个cluster的特异高表达的基因集呢？ 答案是肯定的，一般来说，我们是通过基因body区域加上一定范围内的上下游区域的整体ATAC信号来计算每个细胞每个基因的genescore值。 1）Signac是通过 GeneActivity() 函数 https://satijalab.org/signac/reference/geneactivit 来实现的，默认参数是基因上游2kb到TES区域。 2）而ArchR是通过 addGeneScoreMatrix() 函数 https://www.archrproject.com/reference/addGeneScoreMatrix.html 来实现的（createArrowFiles函数也会用默认参数得到genescore matrix矩阵），注意其计算原理稍微复杂，ArchR考虑到远端调控元件对基因活性的影响，因此默认的upstream和downstream范围更广。 在ArchR作者的发表文章中，他们测试了50多个不同的基因评分模型，并确定了一类在各种测试条件下表现始终优于其他模型的模型。这个模型类，在ArchR中作为默认实现，有三个主要组件: marker 基因的ATAC信号（genescore值）同样可以在umap展示，也可以用小提琴图（VlnPlot），点状图（DotPlot）展示。与单细胞转录组相比，单细胞ATAC还多了基因区域的track的可视化展示。 单细胞ATAC的亚群分析介绍就到这里，下一篇会给大家介绍单细胞ATAC的高级分析内容，比如motifdeviation、 拟时间分析、 单细胞RNA与单细胞ATAC的整合分析等。 本分享更多是从知识点和分析原理来讲解和归纳总结，具体实现方法和流程脚本可以查看下面参考资料软件的官方文档，里面都写得都很详细清楚。

成熟T细胞定居于外周免疫器官并参与淋巴细胞再循环。T细胞在外周血中占淋巴细胞总数的65%~80%,在完成免疫应答的同时也参与免疫调节。T细胞分类有多种方法，根据所处的活化阶段，可将T细胞分为初始T细胞、效应T细胞、记忆T细胞；根据表达T细胞抗原识别受体（TCR)的类型，可将T细胞分为TCRαβ+T细胞和TCRγδ+T细胞，分别简称αβT细胞和γδT细胞；根据其免疫效应功能，可将T细胞分为辅助性T细胞（helper T cell , TH），细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes, CTL或TC）、调节性T细胞；根据是否表达CD4或CD8分子，T细胞可分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。

CD4/CD8的数值是看一个人的免疫功能是否正常的比值人体的免疫细胞包括T细胞和B细胞。T细胞管细胞免疫。CD4是辅助T细胞表面的一种标记。CD8是抑制性T细胞的一种标记。CD4/CD8增高，表示辅助性T细胞高于抑制性T细胞，说明免疫力好.CD3是所有总T细胞，CD3高表示总T细胞较高。CD4/CD8和CD3都高，是由于辅助性CD4细胞增高，因而总的T细胞也增高。是机体免疫力好的表现。

白细胞、红细胞、血小板、血色素。白细胞亚群常表现为某种类型的白细胞显著持续性增高，随着病情进展，可出现贫血和血小板减少等情况。如果白细胞长时间持续异常，并伴有红细胞、血小板、血色素等多项异常，就要高度重视，警惕是否是白血病的可能。白细胞是一种具有运动力和吞噬功能的细胞，它和人体的免疫系统有着很直接的关系。

这个指标低说明免疫力低下。辅助性t细胞亚群是一类t淋巴细胞的总称，参与机体免疫，比如说人体受病毒侵犯，辅助细胞表面可以识别病毒这种抗原，开始增殖和分化产生抗体抵抗病毒，并且有记忆能力下次病毒再次来袭可以迅速增殖产生抗体。意见建议：建议系统检查一下身体，是否有免疫性的疾病。可以咨询医院风湿免疫科。T细胞亚群是指免疫调节，增高表示患者免疫调节功能紊乱，辅助性T细胞功能增强而抑制性T细胞功能降低，淋巴细胞过度活化。建议定期复查，可口服中药进行巩固治疗，避免复发及淋巴转移。T细胞是一个不均一的细胞群体,分类方法有多种.按细胞表面分化抗原(CD)的不同,可分为CD4+和CD8+两大亚群;按T细胞表面受体(TCR)的不同,可分为αβT细胞γδT细胞;按功能可分为辅助性T细胞(Th 细胞)、抑制性T细胞(Ts细胞)、细胞毒T细胞(CTL或Tc细胞)和迟发型超敏反应T细胞(TDTH细胞);按对抗原应答的不同,分为初始T细胞(naive T cell)、活化的T细胞(activated T cell)和记忆性T细胞(memory T cell);以及区别于传统T细胞的NKT细胞等等。从未接受过抗原刺激的成熟T细胞为初始T细胞，接受抗原刺激而活化，分化为效应T细胞和记忆T细胞。

分为 助T细胞：主要作用于免疫过程中的接触,传导,就是说感应过程（传递抗原簇） 胞毒T细胞：直接具有杀伤力,可以算是我们所说的效应T细胞,具有分泌淋巴因子的作用 抑T细胞：在免疫结束以后,起到调控胞毒细胞凋亡的作用,以免反应过度

形态学相同的一类细胞还要分亚群是还可以坐更细致的分类。比如淀粉样物质是一类形态学相同，化学结构不同的异质性物质。

　　外周血淋巴细胞根据生物学功能和细胞表面抗原表达分为3个群：　　T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK淋巴细胞【自然杀伤细胞（natural killer)，CD3-CD16+和/或CD56+】。　　T细胞又分为辅助T细胞（CD3+CD4+）和抑制T细胞（CD3+CD8+)。

【答案】：E目前临床测定外周血淋巴细胞亚群的常用方法是流式细胞仪检测，针对淋巴细胞各个亚群的细胞表面抗原采用不同的荧光抗体进行标记，可自动处理各种数据。时间分辨荧光免疫测定常用于蛋白质、激素、药物、肿瘤标志物等。荧光偏振免疫测定特别适用于血清或尿液中小分子物质的测定；荧光酶免疫测定常用于激素、肿瘤标志物、心肌损伤标志物和凝血因子等。

如何分析流式细胞仪检测t淋巴细胞亚群结果称为“胸腺依赖性淋巴细胞”胸腺衍生的淋巴细胞，简称为“T细胞”是鸟类和哺乳动物由胸腺衍生的淋巴细胞。分布于胸腺依赖性区外周淋巴组织，并通过淋巴，血液和组织液再循环。为约70％在血液淋巴细胞，更长的寿命帐户。参与细胞的免疫反应，也可能会影响体液免疫。各自不同的免疫应答的功能，T细胞可以被分成几个亚组：①辅助性T细胞;辅助T细胞和B细胞识别抗原的免疫应答; ②抑制性T细胞;抑制细胞免疫和体液免疫功能; ③效应T细胞;参与细胞免疫（DTH），用淋巴细胞活素功能的释放;杀伤T细胞杀伤靶细胞的功能。  B淋巴细胞（囊依赖性淋巴细胞）也称为B细胞。从骨髓的多能干细胞。发展在家禽滑囊内产生，故称为袋依赖性淋巴细胞/髓淋巴细胞称为B细胞依赖性的，是从淋巴骨髓干细胞分化。

不合宜人群：无特殊要求。　检查前禁忌：禁忌暴饮暴食和剧烈运动，宜平静状态，空腹抽血检查。　检查时要求：注意血清标本不被污染，及时送去检测。和听从医生的要求。

题目：Single-Cell RNA-Seq of T Cells in B-ALL Patients Reveals an Exhausted Subset with Remarkable Heterogeneity 发表期刊：Advanced Science(IF:16.806) 发表年份：2021-08-08 背景：功能性T细胞亚群特征是制定免疫治疗策略和预测白血病临床反应的关键。 方法：从健康个体和急性B淋巴细胞白血病 (B-ALL) 患者的外周血中分选出 T 细胞，进行单细胞转录组测序。根据基因表达，无监督聚类将细胞分为13 个 T 细胞亚群。在 B-ALL 患者中发现了健康个体的所有 11 个主要 T 细胞亚群，B-ALL中T细胞显示出更多的免疫通路活化特征。B-ALL中有2个耗竭性T细胞群，其特征是 TIGIT、PDCD1、HLADRA、LAG3 和 CTLA4高表达。值得注意的是，这些耗竭性T细胞群具有显着的异质性，将其并进一步分为 10 个亚群，具有不同的细胞周期阶段、navie状态和 GNLY（编码颗粒溶素）表达模式特征。结合TCR分析，揭示B-ALL 中耗竭性 T 细胞的不同来源，克隆扩增的耗竭性T细胞可能来自CD8+ 效应记忆/终端效应细胞（CD8+ effector memory/terminal effector cells）。 样本：3个B-ALL患者和2名健康对照样本的外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells ,PBMCs) 细胞前处理： 流式分选，其中使用到的流式抗体包括CD45，CD3，CD4和CD8。 细胞过滤标准： more than 800 genes and 2000 UMIs and less than 15% of reads mapped to mitochondrial genes were retained.因为作者主要关注免疫细胞，接着 用CD3D, CD3E, CD3G, CD247 genes 这4个基因的平均表达量作为CD3的平均表达量，如果CD3平均表达值>0.5,则纳入下游分析。此外只保留在至少10个细胞以上有表达值得细胞。最后，总共剩下28842(健康对照样本哟12 699个细胞，B-ALL患者有16143个细胞）进入下游分析。Ex_CD4 和 Ex_CD4_GNLY+、Ex_CD8 和 Ex_CD8_GNLY+、Ex_CD4_cc 和 Ex_CD4_cc_GNLY+，以及 Ex_CD8_cc 和 Ex_CD8_cc_GNLY+ 被 GNLY 表达水平区分开来（Fig 3C）。此外，GSEA比较了四个耗竭性的 GNLY+ 亚群（Ex_CD4_GNLY+、Ex_CD8_GNLY+、Ex_CD4_cc_GNLY+ 和 Ex_CD8_cc_GNLY+）通路富集变化。结果表明， GNLY +的亚群在 TCR 信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性和细胞因子-细胞因子受体相互作用中被激活（Fig S4D）（备注：原图不清晰，所以没放上来）。因此，他们得出结论，T细胞的GNLY 的表达量与其具有更高的细胞毒性能力呈正相关。总的来说，耗竭性T 细胞应被视为一个具有异质性质的“细胞室”，里面由处于不同状态的 T 细胞组成，可能具有不同的生物学功能。克隆扩增的细胞主要处于 G0/G1 期，并高度表达细胞毒性效应分子颗粒酶 B 和 H（GZMB 和 GZMH）、FGFBP2、GNLY、NKG7、KLRD1 和趋化因子 (CCL5)（Fig 4B and C）。 这篇文章的讨论部分我展示一点，其他的大家有兴趣的话可以去看原文。作者他们发现B-ALL中有2群特异性的耗竭性T细胞亚群（CD8_TE 和CD4_TE ），而且耗竭性T细胞亚群不是离散状态，而是包含了不同的状态。有一些耗竭性细胞群体显示出细胞毒性评分较低的navie特征，而其他细胞表现有较高的增殖分数，并且耗竭评分相对较低。已知，naive样的耗竭性T细胞在经过抗检查点治疗后会大量增殖。他们推测这些细胞可能只是在耗竭程序积累期间开始出现增殖特征，而随着时间的推移会逐渐失去了它们的增殖特征。例如在2019年cell的一篇黑色素瘤的文章中(PMID:PMC7253294),可以看到，CD8 T细胞实际上处于高度增殖，克隆和动态分化的阶段，而这种高度增殖能力主要与功能失调程序的初始启动积累有关，而更advanced的功能失调性细胞则失去了这种增殖特征。 总的来说，这篇文献揭示了B-ALL中CD45+CD3+ T细胞在聚类，免疫活性和异质性方面的详细特征，描绘的B-ALL中T细胞的表征将有助于更好地了解基于免疫疗法靶向B-ALL有效性的潜在机制。

这样几个步骤：血细胞用染色，CD45， CD3，CD4和CD8。然后作图：一般来说，第一个图是SSC和CD45，图中右下角那个红色的细胞群就是淋巴细胞然后第二个图就是把这个淋巴细胞再作图，分出CD3阳性和阴性的细胞，阳性的就是T细胞。最后再做一个T细胞的二维散点图，坐标分别是CD4和CD8就可以了。

检测CD4和CD8，应该还要同时染色CD3. 先选中CD3阳性的细胞（T细胞），然后把T细胞在CD4/CD8的散点图上再显示，可以分为四个象限。分别代表CD4阳性，CD8阳性，双阳性，和无染色的。正常情况下，是不应该有双阳性和未染色的，也就是说你的细胞应该只显示在4个象限的其中的两个。其他的两个最多只是一些背景的杂信号。代表T细胞的两个亚群。

理论上是不能的。特异性免疫是有2种情况，一是体液免疫，另一个是细胞免疫。体液免疫主要是B淋巴细胞起作用，它可以分泌抗体，杀死病菌；细胞免疫是发生在病毒已经侵入到了细胞中，此时是需要有感应阶段，反应阶段，效应阶段，需要有B细胞的呈递，效应T细胞与靶细胞融合，使得靶细胞裂解，从而消灭病菌。T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的T淋巴细胞亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；迟发性变态反应T细胞（Delayed type hypersensitivityT cells,Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；

　　您好;CD3下降常见于①恶性肿瘤;②自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等;③先天性免疫缺陷病,艾滋病;④接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂。CD3上升则见于慢性活动性肝炎、重症肌无力等。　　CD4／CD8的比值做为免疫调节的一项指标，正常值约1.4～2.0，若其比值＞2.0或＜1.4，表明细胞免疫功能紊乱。CD4／CD8＜1．4常见于①免疫缺陷病，如艾滋病的比值常小于0.5;②恶性肿瘤;③再生障碍性贫血，某些白血病;④某些病毒感染。CD4／CD8＞2.0常见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等　　静脉血2ml,肝素抗凝，20min内送检。　　成熟的T淋巴细胞表面均可表达CD3分子，而CD4、CD8不能同时表达于成熟的T淋巴细胞表面，故可将成熟的T淋巴细胞分为CD4+T细胞和CD8+T细胞二个亚群。血液中T淋巴细胞亚群的检测是观察机体细胞免疫水平的重要方法，对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要作用。　　【正常参考值】　　CD3 65.3～77.7 %　　CD4 40.4～51.0 %　　CD8 22.9～32.9 %　　CD4/CD8 1.33～1.99 %　　【异常结果分析】　　CD3下降常见于①恶性肿瘤；②自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等；③先天性免疫缺陷病,艾滋病；④接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂。CD3上升则见于慢性活动性肝炎、重症肌无力等。　　CD4／CD8的比值做为免疫调节的一项指标，正常值约1.4～2.0，若其比值＞2.0或＜1.4，表明细胞免疫功能紊乱。CD4／CD8＜1．4常见于①免疫缺陷病，如艾滋病的比值常小于0.5；②恶性肿瘤；③再生障碍性贫血，某些白血病；④某些病毒感染。CD4／CD8＞2.0常见于自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。

CD3 是成熟T 淋巴细胞表面标志；CD4T 细胞是辅助性T淋巴细胞，其主要功能是增强吞噬细胞介导的抗感染作用和增强B细胞介导的体液免疫应答；CD8T细胞是抑制/杀伤性T淋巴细胞，主要功能是特异性直接杀伤靶细胞。机体维持正常的免疫功能状态有赖于T淋巴细胞亚群维持一定的比例，尤其是CD4/CD8比值相对稳定。该值降低是机体免疫功能下降的重要标志。

T细胞亚群的功能可将其分为二类。一类为调节性T细胞，可包括辅助性T细胞（helper T lymphocte，TH）和抑制性T细胞（suppressor T lymphocyte，Ts）。另一类为效应性T细胞（effector T cell），可包括杀伤性T细胞（eytolytie T cell，CTL，或TC）和迟发型超敏性T细胞（delayed type hypersensitivity T lymphoctye，TDTH）。扩展资料：根据功能可将T细胞分为Th、CTL和调节性T细胞（Tr细胞），均为效应细胞。Th细胞可分化为Th1、Th2、Th3三类细胞，分别分泌不同的细胞因子。Th1和Th2在细胞和体液免疫中发挥作用；Th3对免疫应答起负调节作用。CTL细胞可分化为Tc1和Tc2，分泌细胞因子不同，Tc1与Th1相似；Tc2与Th2相似。参考资料来源：百度百科-T细胞亚群

【答案】：T细胞按CD抗原不同，可分为CD4和CD8两大亚群。CD4T细亚群：辅助性T细胞(Th)，具有辅助、促进或诱发免疫应答的功能；迟发变态反应T细胞(TDTH)，参与迟发变态反应。CD8T细胞亚群：细胞毒性T细胞(Tc)，能杀伤靶细胞；抑制性T细胞(Ts)，抑制免疫应答，抑制B细胞产生抗体。

T细胞有四个亚群。（1）Th1细胞为CD4阳性细胞，其主要功能有分泌IL－2（白细胞介素2）、IFN－γ（γ干扰素）和TNF－β（β肿瘤坏死因子）等细胞因子，参与调节细胞免疫，引起炎症反应和迟发型超敏反应。（2）Th2细胞也是CD4阳性细胞，其主要功能是通过分泌IL－4、6、10等细胞因子，介导体液免疫应答。（3）Tc细胞（Tc细胞和Ts细胞都是CD8阳性细胞）被抗原致敏后可特异性杀伤被病毒、胞内寄生菌感染的靶细胞或肿瘤细胞，是细胞免疫重要的效应细胞。（4）Ts细胞通过释放抑制性细胞因子对体液免疫和细胞免疫起负反馈调节。

神经递质属于下列细胞信号分子中的哪一项?（） A.化学信号 B.气体分子 C.光信号 D.电信号 正确答案：A

影响细胞生长分化的因素1、胞外信号分子①近端组织的相互作用：又叫做胚胎诱导，指细胞分泌信号分子旁泌素，影响周围细胞想一定方向分化。如：眼的发生。已知正常情况下，视泡诱导与其接触的外胚层发育为晶状体，实验证明，把视泡移植到其他部位后也能够诱导与之接触的外胚层发育为晶状体。②远距离细胞的相互作用通过激素进行调节，如：蝌蚪变态过程中，会分泌大量甲状腺素和三碘甲状腺原氨酸。2、细胞记忆与决定胞外信号分子作用时间短，单细胞可以储存这些记忆，使细胞向特定方向分化。果蝇的成虫盘移植实验便是一个很好地列子。细胞记忆使得细胞在其形态、结构和功能等分化特征尚未表现出来就已经确定了细胞的分化命运，这就是细胞决定。3、受精卵细胞质的不均一性母体效应：卵母细胞中贮存的mRNA和蛋白质的分布是不均匀的，各种mRNA在细胞中都定位分布，在细胞分裂时mRNA不均一的分配到子细胞中，从而决定细胞分化的命运。4、细胞间的相互作用与位置效应实验证明，改变细胞所处的位置可导致细胞分化方向的改变。此即位置效应5、环境对性别的决定很多爬行动物通过与环境的作用决定其性别。6、染色质变化与基因重排对细胞分化的影响染色质变化主要包括：基因丢失，基因扩增，基因重排，DNA甲基化基因丢失：细胞发育过程中出现染色体数量减少或者某一部分丢失的现象。如蛔虫发育过程基因扩增：细胞内特定基因拷贝数在某一时期大量增加的现象。如卵母细胞rDNA扩增以及双翅目昆虫体细胞内的多线染色体。基因重排：基因与基因间的位置或顺序发生重新排列组合。如B淋巴细胞分化为浆细胞的过程中，它的DNA经过断裂重排的变化，这有利于其利用有限的免疫球蛋白基因表达大量的抗体。DNA甲基化：DNA上某些序列处的胞嘧啶被甲基化而引起基因失活。总之伴随染色质变化，细胞分化也出现变化。7、（补充）数量效应：细胞数量对诱导组织形成是必要的如小鼠胚胎胰腺原基在体外进行组织培养时，可发育成具有功能的胰腺组织，但如果把胰原基切成8小块分别培养，则都不能形成胰腺组织，如果再把分开的小块合起来，又可形成胰腺组织突触延搁2 | 2011-07-1610

一种信号分子只能作用于一种特定的靶细胞，这是错误的。因为信号分子是与靶细胞的特异性受体结合，可能不止一种细胞有特异性受体，如甲状腺激素的受体几乎分布在所有细胞，也就是说几乎所有细胞都是甲状腺激素的靶细胞。

IP3在磷脂酰肌醇途径中，胞外信号分子与其相应的G蛋白偶联受体结合后，激活膜上的Gp蛋白（一种作用于磷脂酰肌醇系统的G蛋白），然后由Gp蛋白激活磷酸酯酶Cβ （phospholipase Cβ，PLC）， 将膜上的4，5-二磷酸脂酰肌醇（phosphatidylinositol biphosphate， PIP2）分解为两个细胞内的第二信使： DAG和IP3，最后通过激活蛋白激酶C（protein kinase C，PKC），引起级联反应，进行细胞的应答。该通路也称IP3、DAG、Ca2+信号通路。

信号分子与受体结合后有几种方式，1：直接传递信息使受体细胞应答并作出反应；2：通过第二信使在细胞内进行信息传递，由细胞核发出最后指令，常见第二信使如G蛋白，磷酸苷类物质等

T细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，由于它在胸腺内分化成熟故称为T细胞。成熟T细胞由胸腺迁出，移居于周围淋巴组织中淋巴节的副皮质区和脾白髓小动脉的周围。不同功能成熟的T细胞均属小淋巴细胞，在形态学上不能区分，但可借其细胞膜表面分子不同加以鉴别（表8-1）。　　在T细胞发育不同阶段以及成熟T细胞在静止期和活化期，其细胞膜分子表达的种类和数量均不相同。这些分子为抗原性不同的糖蛋白。它们与T细胞对抗原的识别、细胞的活化、信息的传递、细胞的增殖和分化以及T细胞的功能表达相关。它们也与T细胞在周围淋巴组织中的定位相关。　　由于这些分子在T细胞表面相当稳定，故可视为T细胞的表面标志，可以用以分离。鉴定不同功能的T细胞。这些分子的单克隆抗体对临床相关疾病的诊断和治疗也具有重要应用价值。表8-1 T细胞主要表面分子名称 生化特性 配体 　　功能 粘附　信号传导 TCR αβ异二聚γδ异二聚体 MHC-肽复合分子 +　 + CD3 五聚体 － －　 + CD4 单体分子 MHCⅡ类分子 +　 + CD8 双体分子 MHCⅠ类分子 +　 + CD28 同二聚体分子 B7/BB1 +　 + CD2（LFA-2） 单体分子 CD58(LFA-3) +　 + CD11α/CD18 （LFA-1） αβ异二聚体分子 CD54 (ICAM-1)(ICAM-2) +　 + CDw49/CD29 (VLA-4、5、6) αβ异二聚体分子 VCAM-1 + 　? CD44）(Pgp-1) 单体分子 ECM +　 + CD45 单体分子 ? ? 　+ 　　（一）T细胞抗原识别受体（TCR）　　1．TCRαβ TCR是T细胞识别蛋白抗原的特异性受体，不同的T细胞克隆其抗原识别受体的分子结构也是不相同的。大多数成熟T细胞（约占95%）的TCR分子是由α和β二条异二聚体肽链组成的TCRαβ分子。二条肽链都由膜外区、穿膜区及胞浆区组成。TCR属于Ig超家族，膜外区可包括可变区（V区）及稳定区（C区）。　　编码人TCRα链和β链基因座分别定位于第14号和7号染色体。α链是由V、J、C基因段编码的肽链。每个基因座又各有不同的等位基因，在T细胞发育分化早期与Ig基因一样经历基因重排、转录和转译成为肽链。TCR的特异性是由α链和β链的V-J及V-D-J基因片段决定的，故二条链基因重排后可形成千万种不同特异性的TCR分子，故可识别环境中多种多样的抗原。在通常情况下，异种蛋白抗原分子必须与细胞表面的自身MHC分子结合才能TCR识别。所以TCR只能识别细胞膜上的MHC分子与抗原分子，这是与B细胞识别原的主要不同特性。　　2．TCRγδ另一种TCR是由γ和δ链组成的TCRγδ分子，它是由γ和δ基因编码的分子。这种TCRγδ细胞多见一胸腺内早期T细胞（CD4-，CD8-，TCRγδ+），而在人周围血成熟T细胞（CD3+，TCRγδ+）中所占的比例甚少，约为1%～10%。在小鼠脾、表皮细胞和肠粘膜上皮细胞中亦可发现γδ+T细胞。对这种新发现的T细胞的生理功能尚不不清楚，但它们可能是具有原始受体的第一防线的防御细胞，与清除表皮及上皮细胞内异物有关，它们可能是具有原始受体的第一防线的防御细胞，与清除表皮及上皮细胞内异物有关。它们可识别高度保守的抗原，如结核杆菌、肠毒素和热休克蛋白等抗原，在人和小鼠均表明它们可识别MHC或MHC样分子。　　（二）CD3分子　　此分子可表达于所有成熟T细胞表面，它是由五条肽链非共价结合组成的复合分子，分别称为γ、δ、ε、ζ和η链。五条肽链均由胞外区、穿膜区和胞浆区组成。γ、δ和ε为单体，ζ和η链其胞外区可由双硫键连接组成为同二聚体ζζ（约占90%）和异二聚体ζη分子（约占10%）。图8-1　TCR识别普通抗原图8-2TCR识别超抗原　　CD3分子可与TCR分子以非共价结合形成一个TCR-CD3复合受体分子，是T细胞识别抗原的主要识别单位。其中TCR是识别异种抗原和自身MHC分子多态性决定族的受体，而CD3分子交不参予抗原识别，它具有稳定TCR结构和传递活化信号的作用。　　（三）CD4和CD8分子　　这二种分子可同时表达于胸腺内早期胸腺细胞，称为双阳性胸腺细胞（CD4+、CD8+,DP）。而在成熟T细胞这二种分子是互相排斥的，只能表达一种分子，故可将成熟T细胞分为二类，即CD4+细胞和CD8+细胞。在外周淋巴组织中CD4+T约占65%，CD8+T约占35%。　　这二种分子同属于Ig超家族，都不具有多样性。其分子结构都由胸外区、穿膜区及胸内区组成。CD4分子为55KD的单体，CD8分子为34KD多肽组成的双体分子。　　这二种分子与抗原识别无关，但可与带有MHC分子的细胞结合，它们是细胞与细胞间相互作用的粘附分子。CD4分子是MHCⅡ类分子的受体，它可与MHCⅡ类分子的非多态区结合。CD8分子可与MHCⅠ类分子的非多态区结合。因此这二种分子具有增强TCR与抗原呈递细胞或靶细胞的亲和性，并有助于激活信号的传递。　　（四）CD28分子　　这种分子可表达于全部CD4+T细胞及50%CD8+细胞。它是80～90KD的由双硫键连接的同源二聚体分子，属Ig基因超家族。　　近年的研究证明T细胞的活化需要双信号，即由TCR-CD3复合分子可提供起始信号或第1信号，还必须有协同刺激信号（costimulatouy signal）或第2信号才能使T细胞活化。在T细胞膜上已发现有多种分子与协同刺激信号产生有关，如CD2、LFA-1、VLA-4及CD28分子等。称这种分子为辅助分子或协同刺激受体分子。　　其中以CD28分子最为重要，已证明它的配体分子存在于B细胞或其它抗原呈递细胞上，命名为B7或BB1分子。它是50KD单体分子的穿膜蛋白，也属Ig基因超家族。B7/BB1分子在静止期B细胞、巨噬细胞或树突状细胞等表达弱，而活化型细胞表达增强。　　（五）CD2分子　　此分子亦称为LFA-2、Len-5或羊红细胞受体等名称。为55KD单体分子，属Ig基因超家族，亦为穿膜糖蛋白分子。可存在于成熟T细胞及胸腺细胞，亦可发现于NK细胞。　　CD2分子是细胞间粘附分子，其配体分子称为白细胞功能相关抗原-3（LFA-3，CD58），为55-70KD糖蛋白分子。可广泛表达于造血细胞和非造血细胞。CD2分子与羊红细胞上LFA-3结合形成花环，称为E-花环，可用鉴定和分离人T细胞。　　CD2也是信号传导分子，可使T细胞活化，它不依赖于TCR途径，是T细胞活化第二途径。特别是在胸腺内早期发育阶段的胸腺细胞尚未表达TCR，此时胸腺细胞的活化与增殖可能是通过CD2分子与胸腺上皮细胞表面的LFA-3分子结合而使之活化。　　（六）极迟活化分子　　极迟活化分子（very late activation,VLA）或称β1粘合素（β1integrins），本族分子具有共同的β链（CD29），计有3种分子即VLA-4、VLA-5和VLA-6分子。它们可表达于静止T细胞上，但活化T细胞有仅数量增多而且对特异配体的亲和力也增强。VLA分子可与细胞外基质（ECM）配体分子相结合，可为T细胞活化提供协同刺激信号。VLA-4还可使淋巴细胞与Peyer小体的高内皮微静脉以及炎症部位的内皮细胞结合，其配体分子称为血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）。　　（七）细胞因子受体　　细胞因子受体（cytokine receptor,CKR）可表达于静止及活化T细胞表面，静止T细胞表面的细胞因子受体亲和力弱，数量少，而活化T细胞表面CKR亲和力高且数量多。　　T细胞表面可有多种细胞因子受体，包括IL-2R、IL-4R、IL-6R及IL-7R等。其中IL-2R由α（P55）及β（P70）链组成，α链为低亲和力，β链为中等亲和力，而αβ异聚体分子则为高亲和力受体。　　（八）CD44及CD45分子　　CD44分子亦称Pgp-1细胞外基质受体Ⅲ或Hermes分子。它可表达于多种细胞，包括T细胞、胸腺细胞、B细胞、粒细胞、巨噬细胞、红细胞、神经细胞、上皮及纤维母细胞等。CD44分子可使淋巴细胞与高内皮微静脉（HEV）结合，移行于血管，组织和淋巴之间，与淋巴细胞再循环密切相关，可视为一种归巢受体（homing receptor,HR）。人记忆T细胞比未受体抗原刺激的天然T细胞可表达高水平CD44分子。　　CD45分子亦称白细胞共同抗原（leukocyte common antigen）包括一组膜糖蛋白，只表达于不成熟和成熟白细胞，可包括T和B细胞、胸腺细胞、单核-巨噬细胞以及中性粒细胞。CD45分子的异构体（isofoums）常限定在某些T细胞表面表达，故称之为CD45R。　　未受抗原刺激的天然T细胞可表达CD45RA，而记忆T细胞可表达CD45RO。另外，CD45R分子胞浆区含有内源性酪氨酸磷酸酶活性，它可能对各种活化途径具有重要调节作用。

激素作为信号分子,调节细胞代谢方式主要有：1.有些激素的受体在细胞膜上，这些激素作用于细胞膜后可以改变细胞膜的通透性。2.有些激素的受体位于细胞核或者细胞质，通过影响基因的表达来影响靶细胞内酶的活性或酶的数量来调节细胞代谢。

CD3、CD4、CD8细胞亚群属于T淋巴细胞亚细胞群，这些数值低说明免疫力较低，应该加强锻炼，增强身体素质，如果较为严重的话，应服用升高白细胞的药物。T淋巴细胞亚群主管细胞免疫，具有抵抗病毒和调节免疫系统功能的作用。其细胞功能取决于T淋巴细胞总值（CD3+）及其亚群（CD4+、CD8+）的相对组成。正常情况下，亚群间互相拮抗达到平衡；当免疫失衡，细胞数及比值发生紊乱，则易引发疾病。CD4+是诱导和辅助，CD8+是抑制和毒杀；CD4+、CD8+的变化并不同步，互为对立和协调；CD3+与CD4+步调基本相同，CD4+/CD8+比值来判断内部是否紊乱。扩展资料正常范围参考值：1、CD3+细胞正常值参考范围：955～2860/μL；2、CD4+细胞正常值参考范围：450～1440/μL；3、CD8+细胞正常值参考范围：320～1250/μL；4、CD4+/CD8+比值正常值参考范围：1.00～2.87。干预手段：当机体免疫力低下、细胞免疫功能受抑制时（如CD3+、CD4+降低，CD4+/CD8+比值降低），适用免疫增强剂以提高免疫功能；当机体免疫反应过强（如CD4+增高、CD8+降低、CD4+CD8+增高），适用免疫抑制剂，抑制机体免疫反应。参考资料来源：百度百科-T淋巴细胞

检测淋巴细胞亚群可以了解患者机体的免疫功能是否处于平衡状态。某种细胞亚群所占百分比过高或过低，都提示存在免疫功能的紊乱。T淋巴细胞亚群在某些临床疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病、病毒感染、恶性肿瘤等均有异常改变。因此，T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生发展、了解疾病的机制、指导临床治疗都有极其重要的意义。目前，最为快速和准确的T细胞亚群的检测方法是流式细胞术荧光标记法，即用抗人T细胞表面分化抗原的单克隆抗体进行免疫荧光标记，通过流式细胞仪检测T淋巴细胞各亚群的百分率或绝对计数。扩展资料：T细胞亚群检测临床上常用来观察的指标：1、CD3＋：成熟T淋巴细胞的标志；2、CD3＋CD4＋CD8－：T辅助／诱导细胞的标志；3、CD3＋CD8＋CD4－：T抑制／杀伤细胞的标志；4、CD25＋：白介素2受体的标的标志，即激活的T淋巴细胞。健康人外周血T淋巴细胞亚群的参考范围为：CD3＋：61％～85％；CD3＋CD4＋CD8－：28％～58％；CD3＋CD8＋CD4－：19％～48％；CD4＋／CD8＋：0.9～2.0。参考资料来源：百度百科--T细胞亚群

T淋巴细胞本身就是一个亚群，隶属于淋巴细胞，淋巴细胞可以分为T细胞、B细胞和NK细胞三个亚群，即“TBNK淋巴细胞亚群”，其中T细胞还可以分为CD4细胞和CD8细胞。T淋巴细胞亚群T淋巴细胞亚群的测定是检测机体细胞免疫功能的重要指标，且对某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、恶性肿瘤、血液病、变态反应性疾病等)的辅助诊断，分析发病机制，观察疗效及监测预后有重要意义。临床意义异常结果：1.CD4淋巴细胞减少：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者。2.CD8淋巴细胞增多：见于自身免疫病，如SLE、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。3.CD4/CD8比值异常：艾滋病患者比值显著降低，多在0.5以下。比值降低的还有：SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等。比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。　需要检查的人群：有相关疾病患者和免疫力低下者均可检查。相关疾病人类T淋巴细胞病毒感染，联合免疫缺陷病，非典，斑秃，慢性肾功能衰竭，皮炎，肿瘤性心包炎。

T细胞有三个亚群：一是辅助性T细胞，它能协助T细胞和B细胞识别抗原；二是抑制性T细胞，它能抑制免疫应答，调节免疫应答的强弱；三是杀伤T细胞，它是直接参与细胞免疫应答的效应细胞。通常提到的T细胞指的是杀伤T细胞。杀伤T细胞可以直接杀伤带有抗原的靶细胞，如病毒感染细胞、突变了的自身细胞、异体细胞等，也就是说，它可杀灭细胞内病毒、抵抗肿瘤及排斥异体移值物，以此维持机体自身稳定。

　　Th细胞是根据功能分类的一个T细胞亚群。据其分泌的细胞因子的不同可分为Th0、Th1、Th2 和Th3 四个亚型。　　Th1细胞主要分泌白细胞介素(interleukin，IL)-2，干扰素(interferon，IFN)-γ，IFN-a，肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-β等，主要介导细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，辅助抗体生成，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的发生，故称为炎症性T细胞，可被视为相当于迟发型超敏反应T细胞(TDTH细胞)。因而，Th1细胞在机体抗胞内病原体感染中发挥重要作用。　　Th2细胞主要分泌IL-4, IL-5, IL-6和IL-10等，主要功能为刺激B细胞增殖并产生免疫球蛋白G(immunoglobulinG，IgG)1和免疫球蛋白E(immunoglobulinE，IgE)抗体，与体液免疫有关。　　少数Th细胞被称为Th3细胞，它除分泌大量的IL-4和IL-10外，主要高表达TGF-β，但是不分泌IL-2和IFN-γ，可以下调抗原递呈细胞(antigenpresenting cells，APC)及Th1细胞的活性，起免疫抑制作用。　　Th1, Th2和Th3细胞均由前体细胞Th0分化而来。未接触抗原的T细胞被称为Th细胞前体(Thcell precursor)，他们通过接触天然免疫细胞摄取的抗原而分化成一种不确定的状态， 称为Th0细胞。Th0细胞既分泌Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ，又分泌Th2型细胞因子IL-4，可在不同信号的刺激下分化为Th1或Th2细胞。Th1和Th2细胞除分泌不同的细胞因子，发挥不同的免疫作用外，他们各自细胞的表面受体也有许多的不同。　　不同的表面受体不仅可以作为分离Th1/Th2细胞的表面标志物，而且直接影响Th1/Th2细胞对一些细胞因子的反应能力，从而调控着Th1/Th2细胞的分化与功能(表1)。趋化因子受体CXCR-3和CCR-5的表达是Th1细胞的标记(优先表达于Th1细胞的分子有b2肾上腺能受体、淋巴细胞激活基因子3、CDW150、CD162、CD49f/CD29等)，而CCR-3，CCR-4，CCR-7和CCR-8只能在Th2细胞表达，CD30也只与Th2细胞有关。Th1细胞持续表达免疫球蛋白黏液素3(T cell immunoglobulin mucin 3，Tim-3)并可能通过半乳凝素类-9(Tim-3-galectin-9)途径抑制Th1细胞介导的免疫反应和诱导外周免疫耐受。

T细胞有四个亚群。（1）Th1细胞为CD4阳性细胞，其主要功能有分泌IL－2（白细胞介素2）、IFN－γ（γ干扰素）和TNF－β（β肿瘤坏死因子）等细胞因子，参与调节细胞免疫，引起炎症反应和迟发型超敏反应。（2）Th2细胞也是CD4阳性细胞，其主要功能是通过分泌IL－4、6、10等细胞因子，介导体液免疫应答。（3）Tc细胞（Tc细胞和Ts细胞都是CD8阳性细胞）被抗原致敏后可特异性杀伤被病毒、胞内寄生菌感染的靶细胞或肿瘤细胞，是细胞免疫重要的效应细胞。（4）Ts细胞通过释放抑制性细胞因子对体液免疫和细胞免疫起负反馈调节。

初始、效应、记忆T细胞从未接受过抗原刺激的成熟T细胞为初始T细胞，接受抗原刺激而活化，分化为效应T细胞和记忆T细胞。αβT细胞和γδT细胞根据表达的TCR类型，T细胞可分为αβ+T即细胞和γδ+T细胞。αβ+T细胞分布广泛，识别抗原具有MHC限制性，抗原识别受体具有多样性，既可分化为辅助性T细胞（Th）也可分化为细胞毒性T细胞（CTL）；γδ+T细胞分布于皮肤粘膜组织，识别抗原无MHC限制性，抗原识别受体缺乏多样性，只识别多种病原体表达的共同抗原，效应细胞为CTL。CD4+和CD8+T细胞αβT细胞又可分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。CD4+T细胞识别MHCⅡ类分子所提呈的外源性抗原肽，活化后主要分化为Th。CD8+T细胞识别MHCⅠ类分子所提呈的内源性抗原肽，活化后主要分化为CTL。Th、CTL和Tr细胞根据功能可将T细胞分为Th、CTL和调节性T细胞（Tr细胞），均为效应细胞。Th细胞可分化为Th1、Th2、Th3三类细胞，分别分泌不同的细胞因子，Th1和Th2在细胞和体液免疫中发挥作用；Th3对免疫应答起负调节作用。CTL细胞可分化为Tc1和Tc2，分泌细胞因子不同，Tc1与Th1相似；Tc2与Th2相似。Tr细胞参与免疫应答的负调节及在自身免疫耐受中发挥作用。

固有淋巴细胞(innatelymphoidcells,ILC)是一群来源于共同淋巴前体(commonlymphoidprogenitor,CLP),具有固有类细胞特征的淋巴细胞。ILC由多种细胞亚群构成,主要包含NK细胞、Th2ILC和RORγt+ILC,参与组织构建、修复和再生,维持组织稳态,参与固有免疫应答,抗致病菌、寄生虫感染。

在一定条件下，细胞外的化学信号能引发细胞的定向移动。这些信号有些时候是底质表面上一些难溶物质，有些时候则是可溶物质。信号分子有很多，可以是肽、代谢产物、细胞壁或是细胞膜的残片，但是作用方式却是一样的，就是与细胞膜表面上的受体结合，启动细胞内信号，完成一系列的反应，去激活或抑制肌动蛋白结合蛋白的活性，最终改变细胞骨架的状态。可溶物质通常不是均匀溶解在溶剂中，而是靠近源的区域浓度高，远离源的区域浓度低，形成所谓的“浓度梯度”。细胞膜上的受体可感受到那些被称为化学趋向吸引物，并且逆着它们的浓度梯度去追根寻源。某些信号分子甚至会影响细胞移行的速度，这些信号分子则被称为化学趋向剂。细胞这种因化学分子改变自己移动的行为，被称为化学趋向性。例如，盘基网柄菌会逆着cAMP浓度梯度的运动。白血球也会受到一些细菌分泌的三肽化学物质f-Met-Leu-Phe（N—甲酰蛋—亮—苯丙氨酸）吸引而往细菌移动，发挥其免疫功能。而在胚胎发生中的神经嵴细胞则并非靠浓度梯度，而是路标物质识别其去向但是细胞外基质中也存在着一些蛋白，如硫酸软骨蛋白多糖会与神经细胞的粘着蛋白起作用，对细胞迁移形成阻滞。它会抑制脊髓损伤患者神经损伤区域新突触的相连与再生。胞外信号种类繁多，但是当它们与细胞膜上受体结合之后，细胞内起作用的途径却只有有限的几种。而与细胞迁移有关的信号传导过程如下：信号分子结合到膜上受体，或者是激活与受体偶联的蛋白质—大G蛋白，或者先是激活受体酪氨酸激酶，再激活下游的小G蛋白Ras。G蛋白是一个很大的家族，包括Rho，Rac，Ras等小家族，它们在细胞中扮演着信号传导开关的角色。当它们与GDP结合时，呈现失活状态。在鸟嘌呤交换因子的帮助下，G蛋白脱离GDP并与GTP结合，进入激活状态。G蛋白的GTP会被GTP酶激活蛋白水解，并释放出其中的能量，让G蛋白行使其功能。就是说，G蛋白通过这一GTP/GDP循环在激活/失活状态中回旋，传递信号。当G蛋白被激活后，它下游的多种分子会被激活。而致癌物质也可以通过这些信号传导通路发挥其负面作用，如强烈致癌物质佛波酯。佛波酯会不可逆地激活细胞的RasGRP3/4，以激活Ras，Ras会再激活蛋白激酶C。后者是调节细胞分裂和分化的酶。它被佛波酯不正常的激活，有可能对癌症的产生起促进作用。研究还发现，佛波酯对黑素瘤细胞转移到肺部有促进作用。而细菌者，如志贺氏菌会在宿主胞膜上打洞，向细胞质注入效应蛋白质，激活宿主Rac和Cdc42，调整细胞的微丝网络，以使自己顺利进入宿主内。aaa细胞骨架有哪两种？细胞骨架的定义分为狭义和广义两种，前者是微丝、微管和中间纤维的总称，它们存在于细胞质内，又被称为“胞质骨架”。后者还包括细胞外基质、核骨架和核纤层。细胞骨架是细胞内运动，细胞器固定，细胞外型维持，信号传导和细胞分裂的物质基础之一。

【答案】：错解析：从时空顺序上来看，现在一般把细胞外信号分子称为第一信使